Научная статья на тему 'Молекулярно-генетическая характеристика штаммов протейных бактериофагов'

Молекулярно-генетическая характеристика штаммов протейных бактериофагов Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

CC BY
261
69
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
PROTEUS / БАКТЕРИОФАГИ / ГЕНОМ / СЕКВЕНИРОВАНИЕ / ПРАЙМЕРЫ / ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА / BACTERIOPHAGES / GENOME / SEQUENCING / PRIMERS / THERAPEUTIC AGENTS

Аннотация научной статьи по биологическим наукам, автор научной работы — Васильев Дмитрий Аркадьевич, Феоктистова Наталья Александровна, Сульдина Екатерина Владимировна, Мастиленко Андрей Владимирович

В статье представлена молекулярно-генетическая характеристика секвенированного бактериофага Pr 6 УГСХА. Составлена карта линейной ДНК c расшифровкой кодирующих областей генома. В соответствии с известными аналогами были определены продукты экспрессии их генов. Разработана система молекулярно-генетической индикации (с использованием ПЦР) автономных генетических элементов (островков патогенности) в геномах бактериофагов, активных в отношении Proteus ssp. и предполагаемых для применения в качестве терапевтических средств для лечения энтеробактериальных инфекций, вызываемых вышеназванными штаммами бактерий, в ветеринарной медицине. По результатам экспериментальных исследований индикации специфического фрагмента гена RelE культур Proteus spp. с разработанными системами олигонуклеотидов в геноме протейного бактериофага Pr 6 УГСХА локусов патогенности выявлено не было. Полученные данные позволяют рекомендовать бактериофаг Pr 6 УГСХА, специфичный к бактериям видов Proteus mirabilis и Proteus vulgaris, для конструирования терапевтического биопрепарата с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по биологическим наукам , автор научной работы — Васильев Дмитрий Аркадьевич, Феоктистова Наталья Александровна, Сульдина Екатерина Владимировна, Мастиленко Андрей Владимирович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

MOLECULAR-GENETIC CHARACTERISTICS OF STRAINS OF PROTEUS BACTERIOPHAGES

The molecular genetic characteristic of the sequenced bacteriophage Pr-6 UGSKhA is presented in the article. A map of linear DNA has been compiled with the decoding of the genome coding regions. Expression products of their genes have been determined in accordance with known analogs. A system of molecular genetic indication (using PCR) of autonomous genetic elements (islets of pathogenicity) in the genomes of bacteriophages active against Proteus ssp. has been developed and they are supposed to be used as therapeutic agents for the treatment of enterobacterial infections caused by the above strains of bacteria in veterinary medicine. Based on the results of experimental studies of indication of a specific fragment of the RelE gene of Proteus spp. with the developed systems of oligonucleotides in the genome of Proteus bacteriophage Pr-6 UGSKhA, pathogenicity loci were not revealed. The data obtained make it possible to recommend the bacteriophage Pr-6 UGSKhA specific to Proteus mirabilis and Proteus vulgaris bacteria for the construction of a therapeutic biological agent for prevention and treatment of gastrointestinal diseases of young farm animals and poultry

Текст научной работы на тему «Молекулярно-генетическая характеристика штаммов протейных бактериофагов»

УДК 579.62

DOI 10.18286/1816-4501-2018-1-124-129

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММОВ ПРОТЕЙНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ

Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор биологических наук, профессор кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»

Феоктистова Наталья Александровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»

Сульдина Екатерина Владимировна, ассистент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»

Мастиленко Андрей Владимирович, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза» ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ

432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; тел.: 8(8422)55-95-47; e-mail: feokna@yandex.ru

Исследования проводятся при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований, проект «Геномика и биология кандидатных бактериофагов для терапии энтеробактериальных инфекций в ветеринарной медицине» №16-44-732038.

Ключевые слова: Proteus, бактериофаги, геном, секвенирование, праймеры, терапевтические средства.

В статье представлена молекулярно-генетическая характеристика секвенированного бактериофага Pr - 6 УГСХА. Составлена карта линейной ДНК c расшифровкой кодирующих областей генома. В соответствии с известными аналогами были определены продукты экспрессии их генов.

Разработана система молекулярно-генетической индикации (с использованием ПЦР) автономных генетических элементов (островков патогенности) в геномах бактериофагов, активных в отношении Proteus ssp. и предполагаемых для применения в качестве терапевтических средств для лечения энтеробактериальных инфекций, вызываемых вышеназванными штаммами бактерий, в ветеринарной медицине. По результатам экспериментальных исследований индикации специфического фрагмента гена RelE культур Proteus spp. с разработанными системами олигонуклеотидов в геноме протейного бактериофага Pr - 6 УГСХА локусов патогенности выявлено не было. Полученные данные позволяют рекомендовать бактериофаг Pr - 6 УГСХА, специфичный к бактериям видов Proteus mirabilis и Proteus vulgaris, для конструирования терапевтического биопрепарата с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

Введение

Анализ литературных источников свидетельствует о том, что доля бактерий рода Proteus в тонком кишечнике молодняка сельскохозяйственных животных и птицы в хозяйствах, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям, может составлять до пятидесяти процентов [1-3]. Невысокий процент летальности приводит к высоким экономическим затратам, так как снижение живой массы переболевших животных и птицы и понижение иммунного статуса в перспективе приводит к недополучению прироста на 1 кормовую единицу, или 1 рубль инвестиций [4].

Поиск экологически чистых и эффективных терапевтических средств для лечения и профилактики бактериальных инфекций не может исключать применение биопрепаратов на основе специфических бактериофагов [5-9]. Благодаря особенностям своей биологии бактериофаги могут являться мощными агентами горизонтального переноса генов от бактерии к бактерии. Бактери-

офаги, предназначенные для целей фаготерапии и фагопрофилактики инфекционных болезней, должны быть исследованы методами геномики для определения их потенциальной способности к переносу генов бактерий [10]. Основными путями переноса и экспрессии «генов вирулентности» бактериофагами является или лизоген-ная конверсия (в случае, когда геном умеренного фага содержит нежелательные гены), или фаговая трансдукция [11]. Гены, которые могут содержать бактериофаги и появление которых в геноме инфицированных бактерий может вызывать нежелательные явления (к примеру, повышенную вирулентность), можно разделить на несколько групп в соответствии с их продуктами: 1) гены внеклеточных токсинов; 2) гены, продукты которых участвуют в прикреплении и колонизации бактериями поверхностей; 3) гены ферментов, изменяющих серотип бактерий; 4) гены белков, помогающих инвазии бактерий в ткани. Разумеется, что наличие подобных генов в бактериофагах для целей

терапии и профилактики бактериальных заболеваний абсолютно недопустимо. Кроме отсутствия генов вирулентности, фаги должны быть также безусловно литическими (вирулентными) и не вызывать трансдукцию хозяйской ДНК [12-15].

Цель исследований - проведение молеку-лярно-генетических исследований протейных бактериофагов для подтверждения оригинальности, вирулентной природы и отсутствия локусов пато-генности.

Объекты и методы исследований

Из 94 проб из хозяйств, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям, было выделено 8 бактериофагов, специфичных к бактериям рода Proteus. Установлено, что данные бактериофаги характеризовались показателем литической активности в диапазоне от 4,2±0,2х106 до 1,9±0,1х109 БОЕ/мл (по методу A. Gratia) и от 10-5 до 10-8 (по методу Аппельмана), были специфичны в пределах рода, обладали перекрестным лизисом в пределах видов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Совокупный процент лизиса восьми бактериофагов на 42 культурах составил 100 % [16-17].

Анализ изученных биологических свойств бактериофагов Proteus позволил нам выбрать для дальнейших исследований, направленных на изучение молекулярно-генетической характеристики, включающей определение размера фагового генома, бактериофаг Pr - 6 УГСХА. Работа была направлена на определение процента его идентичности с таксономически наиболее близкими бактериофагами, проверку отсутствия в составе ДНК генов, кодирующих токсины, интегразы, ре-прессоры транскрипции, и другие нежелательные локусы [18].

Для получения полноразмерных нуклео-тидных последовательностей генома бактериофага использовали полногеномное секвенирование ДНК бактериофагов второго поколения (Ion Torrent, Thermo Fisher Scientific, США). Штамм бактериофага был секвенирован трижды. Данные каждого раунда секвенирования были проанализированы методами биоинформатики. Фильтрация качества прочтений (ридов) позволила собрать геном бактериофага с высокой достоверностью.

В исследованиях были использованы библиотеки баз данных GeneBank (США), EMBL (Европейская молекулярно-биологическая библиотека), DDBJ (Японская база данных нуклеотидных последовательностей).

Для оптимизации ПЦР-протокола, в реакциях со штаммами Proteus spp., был использован электрофоретический метод детекции продуктов амплификации.

Результаты исследований

На рис. 1 собранный геном сравнивали с из-

вестными ДНК бактериофагов, депонированных в GenBank NCBI, для определения кодирующих областей геномов.

В результате проведенных исследований была составлена карта линейной ДНК выделенного и селекционированного нами ранее бактериофага Pr - 6 УГСХА. В соответствии с известными аналогами были определены продукты экспрессии их генов. Качественный состав протеинов бактериофага соответствует таковым у аннотированных аналогов, имеет четкие гомологии нуклеотидного и аминокислотного наборов. В структуре протеинов наблюдается закономерность, присущая данным вирусным частицам - наличие структурных и неструктурных компонентов. Также выявлены продукты генов, не имеющие четко определенных функциональных характеристик, так называемые гипотетические белки, имеющие аналогии в аннотированных геномах бактериофагов, активных в отношении изучаемых видов бактерий. В таблице 1 представлен биоинформационный анализ соответствия известных генов с данными секвенирования бактериофага. На основе биоинформационного анализа данных сиквенса было доказано отсутствие локусов патогенности. Однако сама процедура секвенирования достаточно дорогая и трудоемкая, поэтому в данной работе мы поставили себе целью показать возможность использования метода ПЦР для доказательства отсутствия локусов патогенности в геноме бактериофага.

Следующим этапом исследований была разработка систем молекулярно-генетической индикации (с использованием ПЦР - полимерназно-цепной реакции) автономных генетических элементов (островков патогенности) в геномах бактериофагов, активных в отношении Proteus ssp. и предполагаемых для применения в качестве терапевтических средств для лечения энтеробактери-альных инфекций, вызываемых вышеназванными штаммами бактерий, в ветеринарной медицине.

На первом этапе в библиотеке баз данных GeneBank (США), EMBL (Европейская молекуляр-но-биологическая библиотека), DDBJ (Японская база данных нуклеотидных последовательностей) была определена уникальность гена-кандидата и выбран фрагмент, кодирующий ген toxin RelE.

После анализа в библиотеках баз данных GeneBank (США), EMBL (Европейская молекулярно-биологическая библиотека), DDBJ (Японская база данных нуклеотидных последовательностей) нуклеотидных последовательностей всех вышеуказанных генов, они были просканирова-ны системой Blast базы данных GeneBank (США) на предмет совпадения с последовательностями ДНК известных микроорганизмов. Установлено, что данные генетические последовательности яв-

Рис. 1 - Карта линейной ДНК бактериофага Proteus c расшифровкой кодирующих областей ге-

нома

Рис.2 - Варианты праймерных систем для амплификации гена toxin RelE генома фагов, активных в отношении Proteus spp.

ляются уникальными для Proteus phage toxin RelE и не имеют совпадений с другими видами микроорганизмов.

После выбора специфичного гена-кандидата для молекулярно-генетической идентификации «островка патогенности», носителем которого могут быть бактериофаги, активные в отношении Proteus ssp., были определены наиболее консервативные участки выбранных мишеней путем их сравнения у различных штаммов Proteus phage в базе данных GeneBank.

На эти консервативные участки приложением Primer BLAST этой базы данных в режиме online были положены праймеры, отвечающие не-

которым условиям, определенным нами: длина праймеров должна составлять 18-24 пары нукле-отидов, температура плавления праймера должна быть 60-70 °С, размер фланкируемого праймера-ми участка гена должна составлять не менее 100 и не более 1000 п.о.

После определения праймеров, они были выровнены программой Gene Runner Version 3.05, определены димеры, при возможном их некомплементарном связывании с самими собой или попарно. В оконченном варианте праймеры, теоретическая специфичность и фрагменты амплифи-цируемых участков представлены на рисунке 2 и в таблице 2.

Для оптимизации ПЦР-протокола, в реакциях со штаммами Proteus spp., выделенными из образцов патологического материала и объектов санитарного надзора животноводческих и птицеводческих помещений из хозяйств, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям, был использован электрофоретический метод детекции продуктов амплификации. Результаты экспериментальных исследований индикации специфического фрагмента гена RelE культур Proteus spp. с разработанными системами олигонуклеоти-дов представлены на рисунке 3.

В результате проведенных экспериментов в геноме Pr - 6 УГСХА локусов патогенности выявлено не было.

Выводы

В результате проведенных исследований были получены сиквенсовые данные генома бактериофага Pr - 6 УГСХА, была составлена карта линейной ДНК c расшифровкой кодирующих областей генома. В соответствии с известными аналогами были определены продукты экспрессии их генов. Качественный состав протеинов бактериофага соответствует таковым у аннотированных аналогов, имеет четкие гомологии нуклеотидного и аминокислотного наборов. В структуре протеинов наблюдается закономерность, присущая данным вирусным частицам - наличие структурных и неструктурных компонентов. Также выявлены продукты генов, не имеющие четко определенных функциональных характеристик, так называемые гипотетические белки, имеющие аналогии в аннотированных геномах бактериофагов, активных в отношении изучаемых видов бактерий. Разработана система молекулярно-генетической индикации (с использованием ПЦР) автономных генетических элементов (островков патогенности) в геномах бактериофагов, активных в отношении Proteus ssp. и предполагаемых для применения в качестве терапевтических средств для лечения энтеробактериальных инфекций, вызываемых вышеназванными штаммами бактерий, в ветеринарной медицине. Определена уникальность гена-кандидата, и выбран фрагмент, кодирую-

Характеристика праймеров к участкам гена Proteus spp.

Таблица 1

Биоинформационный анализ соответствия известных генов с данными секвениро-вания бактериофага Proteus

9+fcAnLe. ^utui./j ГШ11 I1 44 990 ЬЦ feari/ii. Н <□<№. S+ IvLiI

feature LDQ№n 9te □ *

ULi« 1 44 SEE 44 SM Up □ H врыта

Iffljdaüis ' LQIün №3 422 20141 [| и rrgulatciy

Ifyputetlcal pnkbi Ei! .. B92 i7f bp □ CDS

hypothetical protein E45 in« 73f Dp ■ -ь CCS

hypothetical potern IMG 1399 ZK bp lj CK

hypothetical prtiteln ]403 1163 901t« U ц CDS

hypothetical prstein Ж В 2393 333 bp П CCS

hypothetical petern 2S3D. - 2794 119 bp a —* СИ

hypothetical prtitdn 3ßS 3E7B EU bp □ -F CCS

омшншндщннпн.,. 3744 h (371 7923 bp CCS

Rho-iMlcpcmltiK 13B3 h 1424 Ubp К rcgüla&ry

НЧН vrfMulm CE74 7ПЕ7 ail bp □ CCS

hypothetical protein nia h 7(33 It9 bP ij -t CCS

DktpmuMytelMjit 714; ► 9139 1999 hp □ -* CCS

Rlw-independent «EIS 9199 41 bs н regulaTory

hypothetical pntitai ЖЗ 19 494 117 bp □ CCS

hypothetical pyi'tfifi 1С E3E 19 193 № D —1 CCS

hypcilwucal p ctelfl 19 »1 11 119 191 bp □ -t CEE

DhA polvnNtias« it B99 13 [91 25SJ bp □ CCS

hypothetical i> лап 13 E9B h 14 23 5 5« hp □ -ь CCS

hypothetical protein 14 339 14 №9 JJ1 hp и —t CK

hypothetical protein 14 4SI 14 [43 lüt^ Ü CCS

hypothetical p prcin 14¡99 h 19 «1 407 tp CCS

hypothetical pretein 13 469 IS 199 219 Ьл В —r CDS

hypothetical pnMi IS 352 19 Ii 9 324 bp Ü -» CCS

hypothetical priitein Ii ИТ 19 339 133 bp 01 -t CCS

hypothetical t> лап Ii 4C'j 19 191 141 bp □ —t COS

nadH Ii 15' 17 131 lü21bp □ I? CCS

LftdoriLZItatt 17E1E 19 03 E 411 bp ■ iUh CCS

pi '1'Г Ll' l phKptU IE: II 15 19 03 E [UM bp □ —» CDS

hypothetical (Л Mein 19 B97 19 4C3 St Shi f 1 CCS

PHk HjUi 11 497 29 42 E 447 bp □ —f CCS

hypothetical pi stein 30314 29 [29 312 bp □ CDS

hypothetical prctein 2D 49 В 29 7(1 7Ы bp □ —* CCS

N-icetyluanrfeiME ptnan... 2C 761 21 299 491 bp D CCS

hcpiUall «плесщг 2 t 439 _ 32 9БЕ ¡991 bp □ ^ CDS

«jfTolDing lutein 32 ОБЕ G 23 №7 ati bp □ —t CDS

iriiJi upiid prmtin 23141 29 033 lllJhP ■ CCS

Till pioeeln 29192 - 29 SIE 739 hp □ -t CDS

Teil proraln 21 932 29 317 2494 hp U CK

jmernd virion piOHlri 29312 39 194 171 bp —f- CK

lyiüiyrii dbMfli n-ewo 29 ВОЗ (j 31 194 2997 hp В CK

irurul ^1ГЮГ| Ml0[lii'i 32 E33 39 "43 9971 bp □ —f CK

uil protim 33 E43 39 E03 !«t(' П CK

^rull icirriilUH Mjbltllt 39 E7B _ 37 293 423 hp □ CK

4ВГО ttr.rfllrUKfii^riT 37 292 .. 39 19 E ESB bp □ f CK

hypothetical protein 39 397 39 [33 :7(bp в CK

hypothetical potein 39 E44 39 913 7rahp Пi CK

MniteHIS Mb рецЫ... 39 923 40 77E 394 hp в "k CK

püuii^e i'imüierc |» ptdii 49 393 40 [33 i2Sbp CK

nktnibniK protata 49 S3 П 40 717 iHbp ■ M CK

hypothetical t> лап 40 B3J 43 [7S [341 hp G CK

hypothetical pnitdji 42 234 43 [IE E73 bp □ -t CK

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

ftlTMfj from кйн r.% J0i7 vJ.it

1*МЙ [iilcradc..

Dry рс4уг£'«и

ВДнкцам

UKlDnuduM

: toil praicb1. tall ir

■ ncrcrini pm...

Таблица 2

toxin RelE генома фагов, активных в отношении

Параметр Характеристика

участок гена toxin RelE

Прямой праймер 5'-3' AGCAAATCAAACTATTGGCTACAGA

Обратный праймер (г) 5'-3' TGCTTTTGGATACGCCATAACT

Расчетная температура плавления прямого праймера 60,0°С

Расчетная температура плавления обратного праймера 59,9°С

Теоретическая специфичность Proteus mirabilis, Proteus vulgaris RelE gene

Длина амплифицируемого участка (п.о.) 215

Рис. 3 - Индикация фрагмента гена RelE:

M - маркер молекулярного веса, 1 - ДНК бактериофага FPr - 13 УГСХА, специфичного в отношении Proteus spp., 2 - положительный контроль

щий ген toxin RelE. Характеристика праймеров к участкам гена toxin RelE генома фагов, активных в отношении Proteus spp.: прямой праймер (f) 5'-3' - AGCAAATCAAACTATTGGCTACAGA; обратный праймер (r) 5'-3' - TGCTTTTGGATACGCCATAACT; расчетная температура плавления прямого праймера - 60,0 "С; расчетная температура плавления обратного праймера - 59,9 "С; теоретическая специфичность - Proteus mirabilis, Proteus vulgaris RelE gene; длина амплифицируемого участка (п.о.) - 215. По результатам экспериментальных исследований индикации специфического фрагмента гена RelE культур Proteus spp. с разработанными системами олигонуклеотидов в геноме протейного бактериофага Pr - 6 УГСХА локусов патогенности выявлено не было.

Полученные данные позволяют рекомендовать бактериофаг Pr - 6 УГСХА, специфичный к бактериям видов Proteus mirabilis и Proteus vulgaris, для конструирования терапевтического биопрепарата с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных и птицы

Библиографический список

1. Сравнительная возрастная динамика становления микробоценоза слепой кишки кур и перепелов I М.В Каминськая, О.М. Стефанышин, Г.И. Нечай, Н.И. Борецкая, С.В. Гураль, И.Н. Попык, Н.И. Цепко, В.В. Литвин II Бюлопя тварин. - 2014. - Т. 16, № 4. - С. 50-58.

2. Золотухин, С.Н. Малоизученные энтеро-бактерии и их роль в патологии животных I С.Н.

Золотухин. - Ульяновск: Копиринг, 2004. - 130 с.

3. Шмидт, Г.О. Биологические свойства микроорганизмов, выделенных из толстого кишечника перепелов в норме и при дисбактериозе / Г.О. Шмидт, Г.О. Плешакова // Ветеринарная патология. - 2012. - Т. 39, № 1. - С. 61-63.

4. Состояние кишечного микробиоценоза телят при острых кишечных расстройствах / А.В. Куразеева, В.А. Коноплёв, Л.А. Лаврушина, И.С. Шульга // Вестник Красноярского государственного аграрного университета. - 2015. - № 12. - С. 173-177

5. Золотухин, Сергей Николаевич. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: дисс. ...д-ра биологических наук: 03.00.07, 03.00.23 / С. Н. Золотухин. - Ульяновск, 2007. - 341с.

6. Использование бактериофагов для борьбы с колибактериозом и кампилобактериозом в птицеводстве [Электронный ресурс]/ А.А. Зимин, Ф.В. Кочетков, С.И. Кононенко [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета - 2016. - №123. - С. 421 - 432. - IDA [article ID]: 1231609029. - Режим доступа: http://ej.kubagro. ru/2016/09/pdf/29.pdf.

7. Golkar, Z. Bacteriophage therapy: a potential solution for the antibiotic resistance crisis / Z. Golkar, O. Bagasra, D.G. Pace // J. Infect. Dev. Ctries. - 2014. -Т. 8, № 2. - P. 129-36.

8. Асланов, Батырбек Исмелович. Эпидемиологическая оценка бактериофагов как факторов эволюции госпитальных штаммов и средств борьбы с внутрибольничными инфекциями: дисс. .д-ра медицинских наук: 14.02.02 / Б.И. Асланов. - Санкт-Петербург, 2016. - 226с.

9. Красильников, И.В. Роль бактериофагов в терапии бактериальных инфекций / И.В. Красиль-ников // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности. Материалы Третьей научно-практической конференции с международным участием. - Москва, 2016. - С. 74-75.

10. Kutter, E. Bacteriophages: biology and applications / Е. Kutter, А. Sulakvelidze. - Boca Raton, FL : CRC Press, 2005. - 510 p.

11. Bacteriophages. Methods and Protocols, Volume 3 / Martha R.J. Clokie, A. M. Kropinski, R. Lavi-gne. - Humana Press, 2018. - 311 p.

12. Borysowski, J. Phage Therapy: Current Research and Application / J. Borysowski, R. Miedzybro-zki, A. Gorsi (Eds.). - Warsaw, 2014. - 378 p.

13. Knoll, B.M. Antibacterial bioagents based on principles of bacteriophage biology: an overview / В.М. Knoll, Е. Mylonakis E. // Clin. Infect. Dis. - 2014. -

SI

SEIS es »1

Si

p Ü Ш IS Hi H ■ i

ca s!

Т. 58, № 4. - Р. 528-34.

14. Поиск новых генетических детерминант Streptococcus dysgalactiae subspecies equisimilis / А.В. Дмитриев, А.М. Киселев, А.Г. Киреева [и др.] // Медицинский академический журнал. - 2016. -Т. 16, № 2. - С. 42-50.

15. Распространение генов комплекса immune evasion cluster и других факторов вирулентности у Staphylococcus aureus / В. В. Гостев, А.Е. Гончаров, М.А. Грачева, С.В. Сидоренко // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2013. - Т. 15, № 4. - С.270-278.

16. Феоктистова, Н.А. Выделение бактериофагов рода Proteus и подбор параметров культи-

вирования / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 2 (38). - С. 90-106.

17. Феоктистова, Н.А. Изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 3 (39). - С. 99-105.

18. Structure of the Proteus vulgaris HigB-(HigA)2-HigB toxin-antitoxin complex / М.А. Schureck, Т. Maehigashi, S.J. Miles, J. Marquez, S.E. Cho, R. Erdman, C.M. Dunham // J. Biol. Chem. - 2014. - V. 289 (2). - Р. 1060-1070.

MOLECULAR-GENETIC CHARACTERISTICS OF STRAINS OF PROTEUS BACTERIOPHAGES

Vasilyev D.A., Feoktistova N.A., Suldina E.V.

Mastilenko A.V.

FSBEI HE Ulyanovsk SAU 432017, Ulyanovsk, Novyy Venets Boulevard, 1; 8 (8422) 55-95-47 e-mail: feokna@yandex.ru

Key words: Proteus, bacteriophages, genome, sequencing, primers, therapeutic agents

The molecular genetic characteristic of the sequenced bacteriophage Pr-6 UGSKhA is presented in the article. A map of linear DNA has been compiled with the decoding of the genome coding regions. Expression products of their genes have been determined in accordance with known analogs. A system of molecular genetic indication (using PCR) of autonomous genetic elements (islets of pathogenicity) in the genomes of bacteriophages active against Proteus ssp. has been developed and they are supposed to be used as therapeutic agents for the treatment of enterobacterial infections caused by the above strains of bacteria in veterinary medicine. Based on the results of experimental studies of indication of a specific fragment of the RelE gene of Proteus spp. with the developed systems of oligonucleotides in the genome of Proteus bacteriophage Pr-6 UGSKhA, pathogenicity loci were not revealed. The data obtained make it possible to recommend the bacteriophage Pr-6 UGSKhA specific to Proteus mirabilis and Proteus vulgaris bacteria for the construction of a therapeutic biological agent for prevention and treatment of gastrointestinal diseases of young farm animals and poultry.

Bibliography

1. Comparative age dynamics of formation of blind gut microbiocenosis of chickens and quails / M.V. Kaminskaya, O.M. Stefanyshin, G.I. Nechay, N.I. Boretskaya, S.V Gural, I.N. Popyk, N.I. Tsepko, V.V. Litvin // Biology of animals. - 2014. - V. 16, № 4. - P. 50-58.

2. Zolotukhin, S.N. Little studied enterobacteria and their role in the pathology of animals / S.N. Zolotukhin. - Ulyanovsk: Copyring, 2004. -130 p.

3. Schmidt, G.O. Biological properties of microorganisms isolated from the large intestine of quails in normal and in case of dysbacteriosis / G.O. Schmidt, G.O. Pleshakova // Veterinary pathology. - 2012. - V. 39, № 1. - P. 61-63.

4. The state of intestinal microbiocenosis of calves in case of acute intestinal disorders / A.V. Kurazeeva, V.A. Konoplev, L.A. Lavrushina, I.S. Shulga // Vestnik of Krasnoyarsk State Agrarian University. - 2015. - № 12. - P. 173-177

5. Zolotukhin, Sergey Nikolaevich. Elaboration and development of schemes for application of diagnostic biological compounds on the basis of isolated and studied bacteriophages of enterobacteria: dissertation of Doctor of Biological Sciences: 03.00.07, 03.00.23 / S.N. Zolotukhin. - Ulyanovsk, 2007. - 341p.

6. Usage of bacteriophages for controlling colibacteriosis and campylobacteriosis in poultry farming [Electronic resource] / A.A. Zimin, F.V. Kochetkov, S.I. Kononenko [et alt] // Polythematic network electronic scientific journal of Kuban State Agrarian University - 2016. - №123. - P. 421 - 432. - IDA [article ID]: 1231609029. - Access mode: http://ej.kubagro.ru/2016/09/pdf/29.pdf.

7. Golkar, Z. Bacteriophage therapy: a potential solution for the antibiotic resistance crisis / Z. Golkar, O. Bagasra, D.G. Pace // J. Infect. Dev. Ctries. - 2014.

- 8, № 2. - P. 129-36.

8. Aslanov, Batyrbek Ismelovich. Epidemiological assessment of bacteriophages as factors of hospital strain evolution of and means of combating nosocomial infections: dissertation of Doctor of Medicine: 14.02.02 / B.I. Aslanov. - St. Petersburg, 2016. - 226p.

9. Krasilnikov, I.V. The role of bacteriophages in the therapy of bacterial infections / I.V. Krasilnikov // Bacteriophages: theoretical and practical aspects of application in medicine, veterinary medicine and food industry. Materials of the third scientific and practical conference with international participation. -Moscow, 2016. - P. 74-75.

10. Kutter, E. Bacteriophages: biology and applications / E. Kutter, A. Sulakvelidze. - Boca Raton, FL: CRC Press, 2005. - 510 p.

11. Bacteriophages. Methods and Protocols, Volume 3 /Martha R.J. Clokie, A. M. Kropinski, R. Lavigne. - Humana Press, 2018. - 311 p.

12. Borysowski, J. Phage Therapy: Current Research and Application /J. Borysowski, R. Miedzybrozki, A. Gorsi (Eds.). - Warsaw, 2014. - 378 p.

13. Knoll, B.M. Antibacterial bioagents based on principles of bacteriophage biology: an overview / B.M. Knoll, E. Mylonakis E. // Clin. Infect. Dis. - 2014.

- T. 58, № 4. - P. 528-34.

14. Search for new genetic determinants of Streptococcus dysgalactiae subspecies equisimilis/A.V. Dmitriev, A.M. Kiselev, A.G. Kireeva [et al.] // Medical academic journal. - 2016. - V. 16, №. 2. - P. 42-50.

15. Expansion of immune evasion cluster genes and other virulence factors of Staphylococcus aureus / V.V. Gostev, A.E. Goncharov, M.A. Gracheva, S.V Sidorenko //Clinical microbiology and antimicrobial chemotherapy. - 2013. - V.15, № 4. - P.270-278.

16. Feoktistova, N.A. Isolation of bacteriophages of Proteus genus and selection of cultivation parameters / N.A. Feoktistova, D.A. Vasiyev, S.N. Zolotukhin // Vestnik of Ulyanovsk State Agricultural Academy. - 2017. - № 2 (38). - P. 90-106.

17. Feoktistova, N.A. Study of biological properties of bacteriophages of Proteus genus / N.A. Feoktistova, D.A. Vasilyev, S.N. Zolotukhin // Vestnik of Ulyanovsk State Agricultural Academy. - 2017. - №3 (39). - P. 99-105.

18. Structure of the Proteus vulgaris HigB-(HigA)2-HigB toxin-antitoxin complex/M.A. Schureck, T. Maehigashi, S.J. Miles, J. Marquez, S. E. Cho, R. Erdman, C.M. Dunham //J. Biol. Chem. - 2014. - V. 289 (2). - P. 1060-1070.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.