CC BY
8
го запаху нафтопродуктiв, тодi як полiефiри на основi ксилiту Л-805 та пропiленглiколю Л-10002 не впливають на цей показник.
3. Вплив Л-564 i Л-805 на ор-ганолептичнi властивостi води супроводжуеться виникненням гiрко-в'язкого присмаку.
4. Ус дослiджуванi речовини виявляють здатнють утворюва-ти пiну.
5. У концентращях до 100,0 мг/л полiефiри не впливають на кольоровють i прозо-рiсть водних розчишв.
6. Результати проведених дослiджень дозволяють реко-мендувати як порогову за орга-нолептичною ознакою шкщли-вост концентрацiю у водi Л-564 i Л-805 на рiвнi 0,3 мг/л, а Л-10002 — 0,1 мг/л ^мггую-чий критерiй — пшоутворення).
Л1ТЕРАТУРА
1. Деревянко Я.Я. Пути снижения негативного влияния окружающей природной среды на здоровье населения / Я.Я. Деревянко, Т.Б. Рахимова // Экология и здоровье человека. Охрана водного и воздушного бассейнов. — Бердянск, 2008. — Т. 1. — С. 3-6.
2. Никула Е.Т. Основные этапы комплексной медико-экологической оценки влияния отрицательных факторов окружающей среды на здоровье населения / Е.Т Никула, М.Ю. Антомонов // Гигиена населенных мест. — 2004. — С. 356-360.
3. Эксплуатация, реконструкция и охрана водных объектов в городе / И.Г. Бойкова [и др.].
— М.: [б.и.], 2008. — 256 с.
4. Луцевич И.Н. Изучение токсичности продуктов трансформации химических веществ в условиях острого опыта // Здоровье населения и окружающая среда. — Саратов: СГУ, 1986. — С. 68-70.
5. Штабский Б.М. О методике исследования и гигиенической оценке стабильности и трансформации вредных веществ в воде в процессе хлорирования / Б.М. Штабский, В.И. Федо-ренко // Гигиена и санитария.
— 1982. — № 5.— С. 64-66.
6. Теоретико-методичш ос-нови еколопчного аналiзу систем водопостачання та водо-вщведення / Ю.Г Бондаренко, Л.1. Бтик, М.М. Олекаенко та ш. — Черкаси: Вертикаль, 2004. — 142 с.
Надiйшла до редакцИ 06.02.2011.
MOLECULAR BIOLOGICAL RESEARCH AND PROJECTING OF GENOTYPE-SPECIFIC EFFICACY OF ROTAVIRUS VACCINE ON THE TERRITORY OF UKRAINE
Dzyublyk I., Obertynska O., Solovyov S., Trokhymenko O.
МОЛЕКУЛЯРНО-Б1ОЛОГ1ЧН1 ДОСЛ1ДЖЕННЯ ТА ПРОГНОЗУВАННЯ ГЕНОТИП-СПЕЦИФ1ЧНО1 ЕФЕКТИВНОСТ1 ПРОТИРОТАВ1РУСНО1 ВАКЦИНИ НА ТЕРИТОРП УКРА1НИ
ocTpi кишковi iнфекцií (ГК1) e од-ыею з найбiльш значущих проблем охорони здоров'я в ycix кра'|'нах CBiTy. Спектр збудникiв, що викликають ГК1, рiзноманiт-ний (патогены та умовно-пато-reHHi бактерií, найпростiшi, а та-кож вiруси). Серед них саме ро-тавiруснiй iнфекцií (РВ1) нале-жить провiдна роль у структурi вiрусних дiарейних захворювань у новонароджених i дiтей вiком до 5 рокiв. Щорiчно в усьому сви тi мiльйони дiтей хворють на тяжку форму ротавiрусно'í дiа-ре!', з яких понад 440 тисяч по-мирають, переважно у кра'нах, що розвиваються [1]. 2006 року лише у кражах бвропейського Союзу було зареестровано 3600 тисяч випадюв ротав^русно[ н фекцп, 87 тисяч гостташзацм, 213 летальних результати [2]. В УкраМ ГК1 вiрусноí етюлоги не-достатньо вивченi у зв'язку з
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ГЕНОТИП-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОРОТАВИРУСНОЙ ВАКЦИНЫ НА ТЕРРИТОРИИ УКРАИНЫ
Дзюблик И.В., Обертинская О.В., Соловьев С.А., Трохименко Е.П.
Острые кишечные инфекции (ОКИ) являются одной из наиболее значимых проблем здравоохранения во всех странах мира, спектр возбудителей которых разнообразен и включает в себя патогенные и условно-патогенные бактерии, простейшие, а также вирусы. Среди них именно ротавирусной инфекции (РВИ) принадлежит ведущая роль в структуре вирусных диарейных заболеваний у новорожденных и детей в возрасте до 5 лет. Целью работы было прогнозирование генотип-специфической эффективности противоротавирусной вакцины, содержащей штамм ротавирусов человека RIX4114 с генотипом G1P[8], на основе молекулярно-биологических исследований циркуляции ротавирусов разных генотипов среди детей с ОКИ в разных регионах Украины. В результате исследования была спрогнозирована ее высокая эффективность при условии использования ее на территории Украины для профилактики тяжелых форм РВИ.
Ключевые слова: ротавирусы, противоротавирусная вакцина, генотипы, эффективность, специфическая профилактика.
© Дзюблик 1.В., Обертинська О.В., Соловйов С.О., Трохименко О.П. СТАТТЯ, 2011.
ДЗЮБЛИК 1.В., ОБЕРТИНСЬКА О.В., СОЛОВЙОВ С.О., ТРОХИМЕНКО О.П.
Нацюнальна медична академiя тслядипломно[ осв™ iм. П.Л. Шупика МОЗ Украши,
м. Кшв
УДК 616.988:578.823.91-084037.615.371:614.47:577.2.001.
5(417)
№ 3 2011 Environment & Health 44
тим, що обстеження пацieнтiв з симптомами гастроентеритiв здмснюеться переважно на на-явнiсть бактерiальних патогенiв з використанням стандартних мiкробiологiчних методiв. У рщ-кiсних випадках цей перелiк до-повнюеться дослiдженням кли нiчного матерiалу прости-ми/швидкими тестами або за-стосовуються комерцiйнi iмуно-ферментнi тест-системи для виявлення антигеыв ротавiрусiв групи А. У результат майже половина випадюв ГК1 (2838146134 щорiчно) залишаються етiологiчно нерозшифрованими i належать до кишкових iнфекцiй невстановленоТ етiологií [3]. Проте нинi вже розроблено мо-лекулярно-бiологiчнi методи виявлення РНК ротавiрусiв у кли ычному матерiалi на основi поли меразноТ ланцюговоТ реакцп зi зворотною транскрип^ею (ЗТ-ПЛР), амплiфiкацieю та подаль-шою детекцieю утворених ам-плiфiкатiв електрофорезом в агарозному гелi або пбридиза-цiйно-флуоресцентною детекци ею у "реальному часГ або за "юнцевою точкою". На Тх основi сконструйовано сучасш висо-кочутливi i високоспецифiчнi мультиплекснi тест-системи для одночасного виявлення гене-тичного матерiалу збудникiв ГК1, зокрема рота-, норо-, астрови русiв у клiнiчних пробах [4]. Разом з тим методи 6/Р-генотипу-вання ротавiрусiв з використан-ням ЗТ-ПЛР почали розробляти та застосовувати як сучасн Чн-струменти" при вивченнi цирку-ляци ротавiрусiв серед людей у рiзних регiонах свiту, що нинi е особливо актуальним у контекст реатзаци програм з вакци-нопрофтактики ротавiрусноТ н фекци у дтей. На часi живу ате-нуйовану протиротавiрусну вакцину зареестровано в УкраМ, а вакцинацiя нею дтей вiд 6 тиж-нiв до 2-х роюв (у закритих дитя-чих закладах для профтактики гастроентеритв, що викликанi ротовiрусом) включена до календаря профТпактичних ще-плень УкраТни, затвердженого наказом МОЗ УкраТни № 765 вщ 09.09.2010 р. (Роздiл 4. Рекомендовав щеплення) [5].
Мета роботи полягала у прогнозуванш генотип-специ-фiчноТ ефективностi протиро-тавiрусноТ вакцини, що мютить штам ротавiрусiв людини R1X4114, на основi молеку-лярно-бiологiчних дослiджень циркуляцiТ ротавiрусiв рiзних
ПРОБЛЕМИ САН1ТАРНО1 М1КРОБ1ОЛОГ11 ТА В1РУСОЛОГП =
генотипiв серед дiтей з ГК1 у рiзних perioHax УкраТни.
Матерiали та методи. Bipy-сологiчними та молекулярно-бiологiчними дослiдженнями було охоплено 600 дтей (KnÍHÍ4-ний мaтеpiaл) вiком до 5 роюв з ГК1, якi перебували на л^ваны у педiaтpичних вщдтеннях КиТв-ськоТ дитячоТ клiнiчноТ Ыфекцй ноТ лiкapнi № 2, дитячоТ кшычно'Т лiкapнi м. Киева № 2 (181 дити-на), дитячих вщдшень Кому-нальноТ iнфекцiйноТ' клiнiчноТ' ли кapнi м. Львова (97 д^ей), клiнiч-ноТ лiкapнi м. Уман (99 дiтей), педiaтpичних вiдцiлень обла-сних лiкapень ОдеськоТ (70 ди тей), СумськоТ (l0o дiтей), Хар-кiвськоТ (100 дiтей) областей. 1н-дикaцiю рота-, норо-, астро- та aденовipyсних aнтигенiв у кл^ч-ному мaтеpiaлi здiйснювaли методом iмyнохpомaтогpaфiчного aнaлiзy (1ХА), використовуючи прост/швидю тести CitoTest Rota, CerTest (1спашя), методом iмyно-феpментного aнaлiзy (1ФА) з використанням тест-систем Ridascreen®ELISA (R-bio-pham, Нiмеччинa) та методом мультиплексноТ ЗТ-ПЛР з пбри-дизaцiйно-флyоpесцентною де-текцiею пpодyктiв aмплiфiкaцiТ "за юнцевою точкою" тест-системою АмплiСенс®Rotavirus-EPh (ФГУН ЦНД1 епiдемiологiТ Росспоживнагляду). Генотипу-вання pотaвipyсiв у позитивних пробах здмснювапи за допомо-гою адаптованоТ до практичного застосування методики [P]G ге-нотипування pотaвipyсiв групи А за А.Т. ПодколзЫим [6]. Прогно-зування генотип-специфiчноТ ефективностi вакцини проводили за методом J. Rose [7].
Результати та обговорення. Було показано, що вipyси-збyд-ники гострих дiapейних Ыфекцм в^грають пpовiднy роль у струк-iypi ГК1 у дтей молодшого вiкy в УкраТн i виявляються у 44,9% клн нiчних проб фекaлiй, вiдiбpaних у зимовий перюд. Серед них но-ро- i pотaвipyси вiдповiдно ста-
новили 18,6% i 17,1% випадюв, а Тхня питома вага у CTpyioypi вн русних гaстpоентеpитiв станови-ла 42% i 37% вщповщно, тому цi вipyси можна розглядати як основы етюлопчы агенти ГК1 у дiтей на територп УкраТни. Разом з цим юльюсть позитивних знaхiдок ас-тро- та aденовipyсiв мала стати-стично бтьш низький piвень зна-чyщостi (p<0,001). Асоцiйовaнi iнфекцiТ' були визнaченi у 6,5% дiтей (вiдноснa густина асощацп pотaвipyси/ноpовipyси станови-ла 35,1%, pотaвipyси/aстpовipy-си — 21,6%, ноpовipyси/aстpовi-руси — 10,8%, pотaвipyси/aде-новipyси — 16,2%, aденовipy-си/ноpовipyси — 10,8%). Питома вага практично вах збудниюв вн русних iнфекцiй, за винятком aденовipyсiв, була в 1,5-2,5 рази вищою у пiвденно-зaхiднiй ча-стин краТни. За дослiджений перюд у стpyктypi ГК1 вipyсноТ' етю-логiТ' у piзних мiстaх УкраТни рота-вipyси становили у Львовi 51%, в Одесi — 42%, у Чеpнiговi та Сумах — 15%, у Хapковi — 30%, у Киевi — 20%. Пщтверджено зи-мово-весняну сезоннiсть ротавн русноТ Ыфекцп, оскiльки макси-мальну кiлькiсть випaдкiв РВ1 було виявлено у дп"ей у ачы та лютому. У вковм гpyпi дiтей до 3 роюв середня частота виявлення pотaвipyсiв була найбтьшою i становила 70,1 ± 4,0%.
Враховуючи значну небезпеку РВ1, особливо для дiтей перших роюв життя, у багатьох краТнах, у тому чист i в УкраТ'ы, впроваджу-еться специфiчнa профтактика РВ1, проте цiлковитa вiдсyтнiсть будь-якоТ iнфоpмaцiТ' щодо гено-типiв циркулюючих pотaвipyсiв серед хворих на ГК1 унеможли-влюе впровадження вaкцинaцiТ та попередження зростаючого числа спaлaхiв РВ1. У pезyльтaтi генотипування вiдiбpaних 210 позитивних зразюв у 176 випадках (83,8%) було виявлено Р-ге-нотипи, у 182 випадках — G-ге-нотипи pотaвipyсiв (86,6%). У 3,3% зразюв не було виявлено
45 Environment & Health № 3 2011
P-генотип, у 4,3% — G-генотип, у 5,7% випадюв не виявлялися обидва генотипи. У дослщжений перюд було виявлено циркуля-цю чотирьох основних генотипiв РВ групи А: G1P[8], G4P[8], G3P[8], G2P[4]. Слiд зазначити, що у Киев^, Львовi, Одес та Хар-ковi бiльшiсть випадкiв РВ1 (по-над 70%) була викликана ротавн русом групи А з генотипом G1P[8]. У Сумах домiнував генотип g4p[8]. В Одесi в окремих випадках було виявлено ротавн
Використовуючи данi щодо циркуляцiï трьох тдгруп штамiв poTaBipyciB за гомолопею до вакцинного штаму як знaчущi ваги, у MicTi Киевi та Одесьюй облacтi за методом [7] на осно-Bi одержаних результат було розраховано прогнозну гено-тип-специф^чну ефективнicть протиротaвiруcноï вакцини проти ГК1, спричинених ротави русами, з тяжюстю за шкалою Vesikari <11 та >11 бaлiв. Розра-хунок проводили за формулою:
За даними л^ератури вщо-мо, що наведена методика прогнозування специфiчноï ефективностi вакцини була пе-ревiрена з використанням да-них фази II ïï ктшчних дослщ-жень у Фiнляндiï [7]. Викори-стовуючи данi щодо поширен-ня генотипiв ротавiрусiв серед д^ей у групi дослiдження, було оцЫено очiкувану ефективнiсть вакцини на рiвнi 0,859. Водно-час, за даними кшшчних спо-стережень, фактична ефектив-
Поенаефективтанъвактти = У , .....-
1 —^итюлтпееног гомологи ■
Ï
Частка групи
Гено ja un - спещфгчш ефекпшвньсть вакцини ripontu тнкш1впевноï гомолога
руси генотипу G9P[8]. Загальну картину циркуляци ротaвiруciв рiзних генотипiв представлено на рисунку 1.
Результати молекулярно-ге-нетичного дослщження цирку-ляцiï ротaвiруciв серед насе-лення Укрaïни були згруповаш у кожному випадку за гомолоп-ею до вакцинного штаму рота-вiруciв RIX4114 з генотипом G1P[8], визначено частку кож-ноï групи серед уах позитивних знахщок (рис. 2).
Цi пiдгрупи вщповщають рiз-ним ступеням гомологiï з вак-цинним штамом G1P[8]: ств-падають за G- та P-генотипа-ми, cпiвпaдaють тiльки за G-або P-генотипом та не ствпа-дають за жодним з генотитв.
У формулi викориcтaнi попе-редньо розрахован частки групи штaмiв певноï гомологiï в ш-тервaлi [0,1] (рис. 2) та л^ера-турнi дaнi щодо генотип-спе-цифiчноï ефективноcтi вакцини проти штaмiв ротaвiруciв пев-ноï гомологiï, отримaнi пщ час клiнiчних доcлiджень вакцини в 11 латиноамериканських кра'|-нах та Фшляндп [8, 9].
При розрахунках прогнозо-вана ефективнicть вакцини для Укра'ши була встановлена на рiвнi — 0,814 проти ротави русного гастроентериту з тяжюстю за шкалою Vesikari <11 бaлiв, 0,812 — проти тяжкого ротaвiруcного гастроентериту з тяжкicтю за шкалою Vesikari >11 бaлiв (табл.).
Рисунок 1
Спгввгдношення G-, P-генотипiв poTaBipyciB групи А, видiлених на територп' УкраТни у 2006-2009 роках у дгтей з гострою дгареею у зразках фекалгй (N = 210)
I
нють вакцини у цм групi стано-вила 0,86 (95% довiрчий штер-вал: 0,63-0,96), що пщтвер-джуе aдеквaтнicть використа-но'|' методики [9].
Висновки Вперше було показано, що ротaвiруcи групи А з генотипами G1P[8], G4P[8], G3P[8], G2P[4] е основними етюлопч-ними агентами виникнення ви русних гастроентеритв у дiтей вiком до трьох роюв в Укра'|'ш, пк cпорaдичноï захворювано-cтi на яю припадав на ачень-лютий. На оcновi молекулярно-бiологiчних доcлiджень штaмiв ротaвiруciв в Укрaïнi спрогно-зовано високу ефективнють живоï aтенуйовaноï протирота-вiруcноï вакцини на оcновi штаму RIX4114 з генотипом G1P[8] за умови ïï використан-ня на територп Укрaïни для профiлaктики тяжких форм РВ1. Застосований метод прогнозування може бути корисним при прийнятт стратепчних рiшень щодо масового використання протиротaвiруcноï вакцини у масштабах уае'| крaïни.
Л1ТЕРАТУРА
1. Rotavirus and severe childhood diarrhea / U.D. Pa-rashar, C.J. Gibson, J.S. Bresse, R.I. Glass // Emerg. Infect. Dis. — 2006. — № 12. — P. 304-306.
2. Soriano-Gabarro M. Burden of rotavirus desease in European union countries / M. Soriano-Ga-barro, J. Mrucowicz, T. Vesicari et al. // Pediatric Infect. Dis. — 2006. — Vol. 25. — P. 7-11.
3. Кракович А.В. Епщемюло-пчна характеристика ротав^ русно'| шфекци та шляхи удос-коналення епщемюлопчного нагляду: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.02.02 / А.В. Кракович. — К., 2006. — 24 с.
4. Разработка методик детекции возбудителей острых
№ 3 2011 Environment & Health 46
MOLECULAR BIOLOGICAL RESEARCH AND PROJECTING OF GENOTYPE-SPECIFIC EFFICACY OF ROTAVIRUS VACCINE ON THE TERRITORY OF UKRAINE
Dzyublyk I., Obertynska O., Solovyov S., Trokhymenko O.
Acute intestinal infections (AII) are one of the most significant health problems around the world, which spectrum of pathogens is diverse and include pathogenic and opportunistic bacteria, protozoa and viruses. Among them rotavirus infection (RVI) has a leading role in the structure of viral diarrhea in infants and children under 5
years old. The aim of the study was the projecting of the genotype-specific efficacy of rotavirus vaccine with strain of human rotavirus RIX4114 genotype G1P[8], based on molecular biological studies of different genotypes of rotavirus circulating among children with acute intestinal infections in different regions of Ukraine. The study predicted its high efficiency under the condition of its use on the territory of Ukraine for the prevention of severe forms of RVI.
Keywords: rotavirus, rotavirus vaccine, genotypes, efficiency, specific prevention.
кишечных инфекций на основе мультиплексной ПЦР с гибри-дизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации "по конечной точке" / А.Т. Подколзин, Н.Ю. Абрамы-
чева, Е.Б. Фенске и др. // Генодиагностика инфекционных болезней: матер. Рос. науч.-практ. конф. — Новосибирск, 2005. — С. 216-221.
5. Про порядок проведення
Рисунок 2
Частки груп циркулюючих штамiв poTaBipyciB вщповщно до гомологи вакцинному штаму RIX4114 з генотипом G1P[8]
Група шгалш, яш. гошлтапчьаза сбот.та G- та Р-генттожми
Грута иггамй, яы. гсшопогшш з a G- аБэ Р-геютипом
Група игшше, шдне маю те гомологе за oSoMaG- таР-
i Частка групи штам1в певноИ гомологи
0,33
o,si
Очкувана ефективнють протиротавiрусно'l' вакцини
профгпактичних щеплень в Укра-|"н1 та контроль якост й o6iry ме-дичних iмунобiологiчних препа-ра^в: наказ МОЗ УкраТни № 765.
6. Адаптированная к практическому применению методика [P]G генотипирования рота-вирусов группы А / А.Т. Подколзин, Е.Б. Фенске, Н.Ю. Абра-мычева и др. // Молекулярная диагностика. — 2007: сб. тр. VI Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. — М., 2007. — Т. 3. — С. 284-286.
7. Rose J. Simulating the impacts of mass vaccination with live attenuated human rotavirus vaccine in a developing country: Thesis/dissertation for the Doctor of Philosophy degree / J. Rose. — Case Western Reserve University. — January, 2010.
8. Evaluation of safety, immu-nogenicity and efficacy of an attenuated rotavirus vaccine, RIX4414: A randomized, placebo-controlled trial in Latin American infants / B. Salinas, Schael I. Perez, A.C. Linhares et al. // Pe-diatr. Infect. Dis. J. — 2005. — Vol. 24, № 9. — P. 807-816.
9. Efficacy of RIX4414 live attenuated human rotavirus vaccine in Finnish infants / T. Vesikari, A. Karvonen, L. Puustinen et al. // Pediatr. Infect. Dis. J. — 2004. — Vol. 23, № 10. — P. 937-943.
Над1йшла до редакци 18.03.2011.
Таблиця
на територп УкраТни
Антигены бтки, гомолопчн1 бткам вакцинного штаму G1P[8] Поширення генотип1в на територп УкраТни Генотип-специф1чна ефективнють вакцини проти ротав1русного гастроентериту [8] Результат
Тяжкють за шкалою Vesikari <11 бaлiв Тяжкють за шкалою Vesikari >11 бaлiв Тяжкють за шкалою Vesikari <11 бaлiв Тяжкють за шкалою Vesikari >11 бaлiв
Гомолопчн1 за G- та P-генотипами 0,33 0,918 0,908 0,303 0,3
Гомолопчн1 за G- або P-генотипом 0,51 0,873 0,869 0,445 0,44
Не мають гомологи за G- та P-генотипами 0,16 0,410 0,454 0,066 0,072
Сумарна ефективнють 0,814 0,812
47 Environment & Health № 3 2011
