CC BY
85
Вестник Челябинского государственного университета. 2013. № 7 (298). Биология. Вып. 2. С. 44-45.
МИКРОБИОЛОГИЯ
Ю. С. Шишкова, Т. В. Становая, Л. Н. Бугрова, Е. Д. Графова, Т. А. Пономарёва
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СОДЕРЖАНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ ВО ВЛАГАЛИЩЕ У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
Даны результаты исследования лактофлоры с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени у женщин с признаками воспалительного процесса во влагалище и у клинически здоровых женщин репродуктивного возраста. Показано, что при клинических проявлениях воспалительного процесса в 39,1 % встречается состояние микрофлоры влагалища, ассоциированное с избыточным содержанием лактобактерий в вагинальном секрете.
Ключевые слова: вагинальный биоценоз, лактобактерии, воспалительные заболевания влагалища.
Введение. Вагинальный биоценоз представляет сложную динамическую систему, находящуюся в каждый отдельный момент времени в равновесном состоянии, обусловленном множеством эндогенных и экзогенных факторов. На сегодняшний день современные молекулярно-генетические методы исследования позволяют получить максимально полное и объективное представление о всех участниках вагинальной биоты [1]. На фоне видового многообразия влагалищной микрофлоры ведущее место в вагинальном микроценозе женщин репродуктивного возраста занимают лактобактерии в количестве 103—108 КОЕ/мл. Традиционно считается, что лактобактерии маловирулентны и редко становятся причиной патологических процессов, осуществляя в основном защитную функцию [3]. Однако имеются публикации, свидетельствующие о возможной этиологической роли лактобактерий в развитии патологических состояний, таких как циолитический вагиноз и вагинальный лактоба-циллёз [6; 9; 10].
Данный факт и определил цель наших исследований — оценить количественное содержание лактобактерий с помощью метода ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени у женщин с признаками воспалительного процесса во влагалище и у клинически здоровых женщин репродуктивного возраста.
Материалы и методы. В исследование были включены 60 женщин в возрасте от 18 до 48 лет. Из них 46 женщин (76,67 %) имели клинические проявления вагинальной инфекции в виде обильных патологических выделений, зуда, жжения в области вульвы. В день исследования у всех женщин забирали отделяемое заднего свода влагали-
ща с помощью стерильной цитощёточки в пробирку типа эппендорф, содержащую 1 мл транспортной среды. Хранение и транспортировку материала проводили согласно действующим нормативным документам [2; 5]. Исследование биоценоза влагалища проводили методом ПЦР-РВ с использованием реагента «Фемофлор» (производитель ООО «НПО ДНК-Технология», РУ ФСР 2009/04663, патент № 2362808 от 13.02.08). Для исследования биоценоза влагалища выделяли ДНК микроорганизмов с использованием набора реагентов «Проба-ГС» (ООО «НПО ДНК-Технология»), а ПЦР-РВ проводили в амплифи-каторе ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология») согласно инструкции производителя. С помощью специального программного обеспечения рассчитывали количество (геном-эквивалентов в 1 мл — гэ/мл) общей бактериальной массы (ОБМ), лактобацилл и каждой группы условно-патогенных микроорганизмов.
Результаты и обсуждение. В результате проведения молекулярно-биологических исследований нами обнаружено, что у всех обследуемых женщин количество лактобактерий во влагалищном отделяемом колебалось в пределах 0—109 гэ/мл.
В соответствии с рекомендациями, данными в методическом пособии для врачей «Исследование биоценоза урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени» [2], состояние нормоценоза влагалища характеризуется абсолютным содержанием лактобактерий от 106 до 108 гэ/мл. На основании этого группа женщин с клиническими проявлениями воспалительного процесса генитального тракта — первая группа (46 женщин) и группа пациенток без
клинических проявлений воспаления — вторая группа (14 женщин) были разделена на 3 подгруппы по абсолютному количеству содержания геном-эквивалентов лактобактерий в вагинальном секрете.
В первую подгруппу вошли результаты исследования женщин, у которых количество лактобактерий в вагинальном отделяемом было менее 106 гэ/мл. Низкое содержание лактобактерий в вагинальном секрете наблюдалось у 7 (15,2 %) женщин первой группы с клиническими проявлениями воспаления влагалища и у 3 (21,4 %) пациенток второй группы без клинических проявлений.
Во вторую подгруппу вошли результаты исследования женщин, у которых количество лактобактерий было от 106 до 108 гэ/мл. Нормальное содержание лактобактерий в вагинальном секрете наблюдалось у 21 (45,7 %) женщины первой группы с клиническими проявлениями воспаления влагалища и у 10 (71,4 %) пациенток второй группы без клинических проявлений.
В третью подгруппу вошли результаты исследования женщин, у которых количество лактобактерий было более 108 гэ/мл. Содержание лактобактерий в вагинальном секрете выше нормативных показателей наблюдалось у 18 (39,1 %) женщин первой группы с клиническими проявлениями воспаления влагалища и у 1 (7,1 %) пациентки второй группы без клинических проявлений.
Выводы. Полученные данные позволяют заключить, что при клинических проявлениях воспалительного процесса в 15,2 % случаев встречаются состояния со снижением количества лактобактерий, а в 39,1 % — состояние микрофлоры влагалища, ассоциированное с избыточным содержанием лактобактерий в вагинальном секрете, при этом в отсутствие воспалительных проявлений такое состояние встречается лишь в 7,1 % случаев.
Заключение. Возможно, что избыточный рост лактобактерий характерен для начальной стадии дисбиоза влагалища, который всегда сопровождает воспалительный процесс. Не исключено, что лактобактерии могут быть причиной воспалительного процесса, вероятно, за счёт изменения своих физиологических свойств. Это открывает перспективы для дальнейших исследований видовой принадлежности лактобактерий, их биологических особенностей при воспалительных процессах в урогенитальном тракте женщин, а также изучения взаимодействия лактофлоры с фак-
торами местной противоинфекционной защиты репродуктивной системы женщин [4; 7; 8].
Список литературы
1. Анкирская, А. С. Неспецифические вагиниты // Медицина для всех. 2000. Т. 2, № 17. С. 34-36.
2. Фемофлор: исследование биоценоза урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени : метод. пособие для врачей / НПФ «ДНК-технология». М., 2011.
3. Бойцов, А. Г Адгезия лактобактерий к клеткам вагинального и буккального эпителия / А. Г Бойцов, С. В. Рищук, Ю. Ю. Ильясов, Т. А. Гречанинова // Вестн. С.-Петерб. мед. акад. им. И. И. Мечникова. 2004. № 4 (5). С. 191-193.
4. Ворошилина, Е. С. Полиморфизм генов системы цитокинов и видовой состав вагинальных лактобактерий у женщин репродуктивного возраста с сохранной нормофлорой / Е. С. Вороши-лина, А. Г. Сергеев, Л. В. Тумбинская // Урал. мед. журн. Лаборатор. диагностика. 2011. № 3 (81). С. 60-61.
5. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории : метод. указания : утв. гл. санитар. врачом РФ 23.12.2005 № 4.2.2039-05.
6. Батыршина, С. В. Острая язва вульвы Лип-шютца — Чапина: рациональная диагностика и терапия / С. В. Батыршина, Е. И. Юнусова, Е. И Халевина // Практ. медицина. 2011. № 2 (11). С. 27-29.
7. Шишкова, Ю. С. Роль нейтрофилов в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек : автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Челябинск, 2010.
8. Долгушин, И. И. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов / И. И. Долгушин, Ю. С. Андреева,
A. Ю. Савочкина. М. : Изд-во РАМН, 2009.
9. Horowitz, B. J. Vaginal lactobacillosis /
B. J. Horowitz, P. A. Mardh, E. Nagy, E. L. Rank // Am. J. Obstet. Gynecol. 1994. № 170 (3).
10. Korenek, P. Differentiation of the vaginoses — bacterial vaginosis, lactobacillosis, and cytolytic vaginosis [Электронный ресурс] / P. Korenek, R. Britt, C. Hawkins // The Internet J. of Advanced Nursing Practice. 2003. Vol. 6, № 1. URL: http://www. ispub.com/journal/the-internet-journal-of-advanced-nursing-practice/volume-6-number-1/differentiation-of-the-vaginoses-bacterial-vaginosis-lactobacillosis-and-cytolytic-vaginosis.html#sthash.oqiE5jpI.dpuf
