CC BY
21
Молекулярная эпидемиология клешевого энцефалита в европейской части России и некоторых странах Балтии, Восточной и Юго-Восточной Европы
Р.В. Адельшин1, В.И. Злобин2, С.И. Беликов1, Ю.П. Джиоев3, Т.В. Демина3, М.Х. Газо3, И.В. Козлова3, М.М. Верхозина3, В.И. Вотяков4, Л.П. Титов4, Т.И. Самойлова4, Г.Г. Данчинова3, М.А. Хаснатинов3, И.В. Воронко3, С. Голубович5, М. Тешанович5, Л.С. Приймяги6, В.А. Василенко6
1 ФГУН «Лимнологический институт СО РАН», Иркутск
2 ФГУН «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН», Москва
3 ФГУН «Институт эпидемиологии и микробиологии НЦМЭ ВСНи СО РАМН», Иркутск
4 НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ РБ, Минск
5 Клинический центр Университета, Баня-Лука
6 Институт профилактической медицины, Таллин
Введение
На рубеже XX и XXI веков произошел существенный рост заболеваемости клешевым энцефалитом (КЭ) в России и ряде европейских стран. Для адекватной оценки эпидемиологической ситуации большое значение имеют данные о генетической характеристике штаммов вируса, циркулирующих в различных участках ареала. Нами проведено генетическое ти-пирование и изучено географическое распространение штаммов, принадлежащих разным генотипам, на обширной территории от Уральских гор до стран Балтии, Восточной Европы и Балкан.
Материалы и методы
Вирусы. Исследовали 48 штаммов вируса КЭ, изолированных авторами в европейской части России (30), Беларуси (11), Украине (1), Эстонии (2), Боснии и Герцеговине (4) на протяжении 1956 - 2000 годов (табл. 1). Источники выделения вируса разнообразны: 23 штамма изолированы от клешей Ixodes persulcatus, 11 - от Ixodes ricinus, 2 - от Dermacentor pictus, 2 - от грызунов, 1 - от насекомоядных, 2 - от птиц, 6 - из крови и спинномозговой жидкости (СМЖ) людей, больных КЭ.
Нуклеотидные последовательности фрагмента гена белка Е вируса КЭ длиной 160 н.о. определяли у 25 штаммов. Для филогенетического анализа использовали взятые из компьютерного банка данных GeneBank структуры фрагментов гена Е прототипных штаммов вируса КЭ трех генотипов - генотип 1 Sofjin (X03870), генотип 2 Neudoerfl (U27495), генотип 3 Vasilchenko (AF069066), а также европейских штаммов вируса КЭ 263 (TEU27491), Als1 (AF091007), Iso40 (AF091009), K23 (AF091010), Kem1 (AF091011), Ljub-1 (AF091012), 256 (AF091014), Pan (AF091015), Scharl (AF091017), Rk1424 (AF091017), Stara Ves (AF091018), T-blood (AF091019), ZZ9 (AF091020), lat1 -96 (AJ415565), lat-11686 (AJ319582), lat-8110 (AJ319583), lat-8369 (AJ319584), lat-9793 (AJ319585 ), lat-12718 (AJ319586), lit-262 (AJ414703), вирусов Kiasanur forest disease virus - KFD (X74111), Louping ill virus - LI (X71872), Greek goat encephalitis - GGE (X77732), Omsk hemorrhagic fever virus - OHF (NC005062). Всего филогенетическому анализу подвергли 46 европейских штаммов вируса КЭ. В опытах гибридизации с генотип-специфическими зондами анализировали 29 штаммов, в т.ч. часть штаммов, у которых определяли нуклеотидные последовательности. Для характеристики географического распространения генотипов
Таблица 1.
Характеристика штаммов вируса КЭ, вылеленных на территории Европы и использованных в работе
о Название штамма Страна (регион) Год Источник
1 Алебастрово-1 Пермская обл. 1986 Клеши
2 Алебастрово-2 Пермская обл. 1986 Клеши
3 Новые Ляды Пермская обл. 1986 Клеши
4 Залесная Пермская обл. 1986 Клеши
5 Н. Пальники Пермская обл. 1986 Клеши
6 Аобрянка-2 Пермская обл. 1986 Клеши
7 Гайва Пермская обл. 1986 Клеши
8 Нугуш-2 Башкортостан 1986 Клеши
9 Нугуш-3 Башкортостан 1986 Клеши
10 Усень-1 Башкортостан 1986 Клеши
11 Усень-2 Башкортостан 1986 Клеши
12 Иж-2 Удмуртия 1986 Клеши
13 Иж-5 Удмуртия 1986 Клеши
14 Иж-6 Удмуртия 1986 Клеши
15 Удмуртия-2 Удмуртия 1990 Клеши
16 Удмуртия-4 Удмуртия 1990 Клеши
17 Удмуртия-6 Удмуртия 1990 Клеши
18 Удмуртия-8 Удмуртия 1990 Клеши
19 Калуга-1 Калужская обл. 1990 Клеши
20 Чудово-1 Новгородская обл. 1986 Клеши
21 Новгород-1 Новгородская обл. 1986 Клеши
22 Новгород-2 Новгородская обл. 1986 Клеши
23 Старая Русса Новгородская обл. 1986 Клеши
24 Себеж Псковская обл. 1986 Клеши
25 Вологда-2 Вологодская обл. 1990 Клеши
26 Абсеттаров Ленинградская обл. 1951 Больной
27 Сестрорецк-2 Ленинградская обл. 1985 Клеши
28 256 Белоруссия 1966 Клеши
29 911-КЭ Белоруссия 1986 Птицы
30 Ш-КЭ Белоруссия 1979 Больной
31 КА-КЭ Белоруссия 1979 Больной
32 Араж-КЭ Белоруссия 1988 Больной
33 110-КЭ Белоруссия Нет данных Грызуны
34 118-КЭ Белоруссия 1985 Птицы
35 Ул-198-А Белоруссия 1985 Больной
36 1126-КЭ Белоруссия 1986 Клеши
37 2635-КЭ Белоруссия 1987 Грызуны
38 3880-КЭ Белоруссия 1988 Насекомоядные
39 Семекс Украина 1988 Клеши
41 973 Эстония Нет данных Клеши
42 1638 Эстония Нет данных Грызуны
43 Преголя-1 Калининградская обл. 1986 Клеши
44 Преголя-6 Калининградская обл. 1986 Клеши
45 Баня-Лука-3 Босния и Герцеговина 2000 Клеши
46 Баня-Лука-5 Босния и Герцеговина 2000 Клеши
47 Баня-Лука-9 Босния и Герцеговина 2000 Клеши
48 Баня-Лука-25 Босния и Герцеговина 2000 Клеши
вируса КЭ в Европе использовали данные по 126 штаммам вируса КЭ, включая собственные материалы, а также данные СепеВапк и литературы [9, 13].
Выделение РНК штаммов вируса КЭ. Вирус размножали в культуре перевиваемых клеток эмбриона
свиньи СПЭВ, культуральную жидкость центрифугировали для удаления клеточного детрита. Вирусы осаждали полиэтиленгликолем по методике, описанной в книге «Вирусология: методы» (под ред. Б. Мейхи) [1]. Аля выделения РНК осадок вируса лизировали в растворе 4М гуанидинизотиоцианата по методу,
описанному в работе «Single-step method of RNA by acid guanidinum thiocyanate-phenol-chloroform extraction» [12].
Гибридизация РНК штаммов вируса КЭ. Концентрации суммарных РНК штаммов вируса КЭ определяли спектрофотометрически по поглощению при 260/280 нм. Пробы наносили с помощью микроячейки на нитроцеллюлозные фильтры. В качестве контролей использовали штаммы Sofjin (генотип 1), 256 (генотип 2) и «Лесопарк-11» (генотип 3) из коллекции вирусов Института эпидемиологии и микробиологии (Иркутск). Генотип-специфические дезок-сиолигонуклеотидные зонды получены нами ранее на основе анализа гомологии нуклеотидных последовательностей гена белка Е штаммов Sofjin, Neudoerfl, «Лесопарк-11» и ряда других, отнесенных к трем генотипам вируса КЭ [6]. Структуры зондов:
1) SO F (GGCCGTCGGTAGGTGTTCTGAG),
2) NEU (GTCGGAAGGTGTTCCAGA),
3) LES (AGCCGTTGGAAGGTGTTCC ACT).
Зонды метили радиоактивной меткой путем введения АТР (у-32Р). Гибридизацию проводили при 42 °С для зонда генотипа 3 и 56 °С - для зондов генотипов 1 и 2 [4, 6]. Регистрацию результатов осуществляли визуально после экспонирования фильтров с рентгеновской пленкой.
Полимеразная цепная реакция (ПНР). Реакцию обратной транскрипции проводили с набором реактивов «Реверта^-100», содержащим случайные гексануклеотиды (фирма «Амплисенс», Москва). Амплификацию проводили с праймерами 5'-GACCAGAGTGATCGAGGCTG-3' (позиции 283 -302 н.о., ген Е) и 5'-AAGACTCCAGTCTGGTCTCC-3' (позиции 772 - 791 н.о., ген Е), с набором реактивов «АмплиСенс-200-1 » (Москва) при следующих условиях: 94 °С - 3 мин, 94 °С - 30 с, 50 °С - 30 с, 72 °С - 30 с - 30 циклов;72 °С -5 мин. Алина амплифицированного фрагмента -405 н.о. В других случаях - с праймерами 5'- GGATCAGAGTGATCGAGGGTG (позиции 1248 -1268, ген Е) и 5'-CAACACTCCAGTCTGGTCTCC (позиции 1758 - 1738, ген Е) - в следующем режиме: денатурация при 94 °С - 60 с, отжиг при 51 °С -80 с, полимеризация при 72 °С - 90 с, всего 35 циклов. В этом случае получали амплифицированный фрагмент длиной 160 н.о.
Определение нуклеотидных последовательностей вирусных АНК проводили по методу, описанному в работе «DNA sequencing with chain-terminating inhibitors» [14], с a-32P при условиях, идентичных ПНР, а также на автоматическом секвена-торе фирмы Applied Biosystems Inc. модели 373A с помощью набора Thermo Sequenase II dye terminator cycle sequensing kit (Amersham Pharmacia Biotech Inc.) при следующих условиях: 94 °С - 30 с, 94 °С - 30 с, 50 °С - 30 с, 60 °С - 4 мин - 30 циклов, 60 °С - 1 мин.
Анализ нуклеотидных последовательностей.
Проводили с помощью программы BioEdit уег.5.0.9. Аля филогенетического анализа использовали пакет программ Тгеесоп уег.1.3Ь. Анализировали нуклеотидные последовательности длиной 160 н.о., кодируюшие фрагмент белка Е в позициях с координатами 190 - 243. Аан-ный фрагмент содержит сайты (позиции 207 и 234), позволяюшие четко дифференцировать генотипы вируса КЭ [5].
Результаты и обсуждение
Нуклеотидные последовательности фрагмента гена Е были определены у 25 штаммов вируса КЭ, изолированных на европейской территории России, а также на Украине, в Белоруссии, Эстонии, Боснии и Герцеговине. На рисунке 1 представлено филогенетическое древо, показываюшее деление этих штаммов, а также ряда штаммов, структуры которых были получены из базы данных GeneBank, на три больших кластера, соответствуюших трем генотипам вируса КЭ.
Как видно, основная часть (46 штаммов) вошла в состав европейского генотипа (генотип 2). В числе штаммов, относяшихся к дальневосточному генотипу (генотип 1), - 7 штаммов, урало-сибирскому (генотип 3) -9 штаммов.
Отмечен высокий уровень генетических различий штаммов, входяших в состав разных генотипов. Если между прототипными штаммами дальневосточного и европейского генотипов Sofjin и Neudoerfl при сравнении полных структур геномов они составили 16,8% [8, 11], а фрагмента гена Е - 16% [5], то при анализе большего числа штаммов были выявлены более высокие уровни различий. По нашим наблюдениям, они в ряде случаев равнялись 20% [7]. Из данных таблицы 2 следует, что среди исследованных штаммов имеются пары (Ш-КЭ и Sofjin, Ш-КЭ и Себеж, Ш-КЭ и Усень-1, Араж-КЭ и Усень-1, КА-КЭ и Усень-1, Ба^а 1ика-3 и Усень-1), различия между которыми достигли 21 - 23%, то есть превысили таковые для некоторых видов -представителей группы вирусов комплекса КЭ (вирусы 1_1 и ОНЕ, с одной стороны, и ряд штаммов вируса КЭ генотипа 2 - с другой).
Выявленные при оценке уровней гомологии данные находят свое выражение и при сравнении выведенных аминокислотных последовательностей (рис. 2). Так, белорусский штамм Ш-КЭ, отнесенный к генотипу 2, на участке длиной 53 а.о. отличался от штамма Soffin семью а.о., от штамма \aasilchenko - восемью а.о. Штамм Ба^а 1ика-3, выделенный в Боснии и Герцеговине и отнесенный к генотипу 3, отличался от штаммов Soffin и Neudoerfl пятью а.о. Между тем вирус GGE отличался от штаммов Soffin и Vasilchenko тремя а.о., вирус Н -пятью, вирус ОНУ - пятью а.о. Таким образом, различия между штаммами вируса КЭ на уровне аминокислотных последовательностей фрагмента поверхностного гликопротеина Е в описанных случаях составили от 9,4 до 15%.
Приведенные данные свидетельствуют о сушест-вовании весьма выраженных генетических различий
Рисунок 1.
Филогенетическое лрево европейских штаммов вируса КЭ (фрагмент гена белка Е). Молель Kimura 2p, метол Neighbour-Joining; программа Treecon ver.1.3b
45
34
— Pan
973-3*
Алебастрово* Keml I- 1638* 110-КЭ*
- Lit-262 263
Banja Luka-25* Абсеттаров*
- Ljub-I
— Lat-8369
45
40
82
50
Lat-8110 r- NEUDOERFL Scharl -Als-I
Lat-12718
K23 ZZ9 - Гайва*
i— Iso40
Ш-КЭ*
- КА-КЭ* - 911-КЭ* 256
-Драж-КЭ*
— Lat-9793
• StaraVes
LI-M
55
56
81
97
j-Banja Luka-9*
L Banja Luka-5*
• Banja Luka-3*
■ Семекс*
— Сестрорецк-2*
-Нугуш-2*
37
87
47
58
55
— Преголя-1* Новгород-2*
- Вологда-2*
-ВАСИЛЬЧЕНКО
98
| Lat-11686 I Latl-96
75
r\~ I Ста
46
100
41
54
97
Стара Русса* Усень-1* T-blood
Нугуш-3*
С
СОФЬИН Себеж*
118-КЭ*
• GGE
OHF
KFD
* Штаммы, вылеленные и исслелованные авторами статьи
Генотип 2
Генотип 3
Генотип 1
Таблица 2.
Уровни гомологии фрагмента гена белка Е европейских штаммов вируса КЭ, %
Вирус Генотип Штамм о 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
КЭ 1 SOFJIN 1 *
118-КЭ 2 97 *
Нугуш-3 3 96 97 *
Стара Русса 4 97 98 97 *
Себеж 5 93 93 92 95 *
Усень-1 6 96 97 95 96 91 *
2 NEUDOERFL 7 83 84 84 84 83 81 *
Абсеттаров 8 83 84 84 84 83 81 98 *
Алебастрово 9 83 84 84 84 83 81 98 * *
110-КЭ 10 83 84 84 84 83 81 98 * * *
911-КЭ 11 83 83 83 83 83 81 96 98 98 98 *
Драж-КЭ 12 80 80 81 80 81 78 95 96 96 96 96 *
Ш-КЭ 13 79 80 80 80 79 77 94 94 94 94 95 93 *
Ka-IO 14 81 81 81 81 81 79 96 97 97 97 98 96 94 *
Banja Luka-25 15 83 84 84 84 83 81 98 * * * 98 96 94 97 *
Гайва 16 84 85 85 85 84 82 98 99 99 99 97 95 93 96 99 *
973-3 17 83 84 84 84 83 81 98 * * * 98 96 94 97 * 99 *
1638 18 83 83 84 83 83 81 98 99 99 99 97 96 93 96 99 98 99 *
3 VASILCHENKO 19 86 87 86 86 85 86 85 84 84 84 83 80 80 81 84 85 84 83 *
Нугуш-2 20 83 85 83 83 83 82 86 85 85 85 83 81 81 83 85 86 85 85 92 *
Новгород-2 21 84 85 84 84 84 83 88 87 87 87 85 83 83 85 87 88 87 86 94 98 *
Преголя-1 22 83 85 83 83 83 82 88 86 86 86 85 83 82 84 86 87 86 86 93 97 99 *
Сестрорецк 23 86 87 86 86 86 85 90 88 88 88 86 85 84 86 88 89 88 88 92 96 98 97 *
Семекс 24 82 83 82 82 82 81 89 88 88 88 86 85 83 85 88 88 88 87 93 93 95 95 93 *
Вологда-2 25 83 85 83 83 85 83 88 86 86 86 86 83 82 84 86 87 86 86 96 95 96 96 95 95 *
Banja Luka-3 26 80 81 81 80 81 79 88 88 88 88 86 88 82 85 88 87 88 87 88 91 93 92 91 92 91 *
Banja Luka-5 27 83 84 83 83 81 82 88 86 86 86 85 83 82 84 86 87 86 86 93 93 95 94 93 93 93 93 *
Banja Luka-9 28 81 82 81 81 80 80 85 84 84 84 82 81 80 81 84 85 84 83 91 91 93 92 91 92 91 90 96 *
огл 29 75 76 75 75 74 75 78 78 78 78 79 76 75 78 78 78 78 78 74 76 77 77 78 76 76 74 77 75 *
ШЭО 30 78 77 77 77 78 75 85 85 85 85 84 82 82 83 85 84 85 84 76 78 80 80 79 80 80 80 80 76 75 *
сов необходима информация о нуклеотидных после- л
а
довательностях. т
С помощью гибридизационных зондов было ти- < пировано 29 европейских штаммов, включая бело- 22 русский штамм 256, являющийся отечественным 22 прототипом западного варианта вируса КЭ. В экспе- 6 риментах использовали некоторые штаммы, у которых определяли нуклеотидные последовательности фрагментов гена белка Е. Результаты генотипирова-ния с помощью секвенирования и гибридизации полностью совпали. Данные гибридизационных тестов представлены в таблице 3. Штаммы европейского генотипа доминировали, их выявлено 14. К урало-сибирскому генотипу отнесено 9 штаммов, к дальневосточному генотипу - 6.
На рисунке 3 представлено географическое распространение штаммов вируса КЭ на территории Европы. Как видно, в странах Западной, Центральной, Северной и Восточной Европы абсолютно преобладал европейский генотип вируса. Лишь в Беларуси обнаружен один штамм дальневосточного, а в Боснии и Герцеговине и на Украине (в западной, Волынской области) - штаммы урало-сибирского генотипа.
среди штаммов вируса КЭ разных генотипов, выходящих за рамки межштаммовых. Как известно, ряд авторов настаивает на существовании двух-трех самостоятельных видов вируса КЭ и, соответственно, разных нозологических форм [2, 3] или высказывает мнение о возможном влиянии природной генетической вариабельности вируса на эффективность лабораторной диагностики и специфической профилактики инфекции [10]. В настоящее время в практике диагностики, вакцино- и серопрофилактики этот фактор не учитывается.
Ранее нами была показана возможность генетического типирования штаммов вируса КЭ с помощью молекулярной гибридизации с генотип-специфическими синтетическими олигонуклеотидными зондами [6]. Этот метод, будучи высокоспецифичным, к тому же обладает некоторыми преимуществами, такими как меньшая стоимость, относительная простота и быстрота по сравнению с методом секвенирования вирусных геномов [4, 15]. Вместе с тем он является скрининговым методом, вполне уместным для изучения молекулярной эпидемиологии, однако для детальной характеристики генетических отличий виру-
Рисунок 2.
Аминокислотные послеловательности фрагмента белка Е европейских штаммов вируса КЭ
SOFJIN SGVDLAQTVILELDKTSEHLPTAWQVHRDWFNDLALPWKHEGAQNWNNAERLV
Nugush-3* N...........................Y........................
Sebezh* .....................................................
118-tbe* .....................................................
Usen-1* .....................................................
St. Russa* .....................................................
T-blood .....................................................
RK1424 .....................................................
NEUDOERFL ................V....................................
^3 ................V....................................
256 ................V.
Iso40 ................V.
Ljub-I ................V.
Stara Ves ................V.
Scharl ................V.
Als-I ................V.
ZZ9 ................V..............................D.G.
Pan ................V..................................
263 ................V.
Kem1 ................V.
Absettarov* ................V.
973-3* ................V.
Sh-tbe* ................V...L.....L.........A.N........HP.
110-tbe* ................V.................................
911-tbe* ................V.
Drazh-tbe* T.........S.....V.
Ka-tbe* ......H.........V.
Alebastrovo* ................V.
Banja Luka2 5* ................V.
1638* I...............V.
Gaiva* ..............R.V.
VASILCHENKO ................L...........................Q.
Novgorod-2* ................L...........................^
Pregolya-1* ................L...........................^
Semeks* ................L...........................^
Nugush-2* ................L.....................R.....H.
Vologda-2* ................L...........................H.
Banja Luka3* .........MS.....L...........N...............^
Banja Luka5* .........V......L.............................
Banja Luka9* ...Y.....V......L..........C..................
Sestrorezk* ................L.............................
GGE ................A..........................LG.....
LI-M ........I.......A.........................NPH...V.
OHF .........V......A.........................MVG.
* Штаммы, последовательности фрагментов геномов которых определены авторами статьи
В странах Балтии выявлены все три генотипа вируса КЭ. На территории европейской России также установлено распространение трех генотипов, причем четкой привязки того или иного генотипа к определенным районам в настоящее время не просматривается. Однако это не означает, что при более основательном изучении молекулярной эпидемиологии вируса эти данные не будут уточняться и наполняться новым содержанием.
Таким образом, для стран Западной, Центральной, Северной и Восточной Европы наиболее характерна
циркуляция штаммов, относящихся к генотипу 2. Чем восточнее расположены страны, тем больше вероятность обнаружения на их территории штаммов генотипов 1 и 3. Штаммы генотипа 1 выявлены в Латвии, Белоруссии, а генотипа 3 - на Украине, в Эстонии, Латвии, Литве, Боснии и Герцеговине.
Ситуация в России и ряде сопредельных стран нуждается в более детальном изучении. Можно ожидать, что дальнейшие исследования покажут, насколько выраженная природная генетическая вариа-
Таблица 3.
Результаты молекулярной гибрилизации РНК европейских штаммов вируса КЭ с генотип-специфическими зонлами
Гибридизация с зондами
о Название штамма SOF генотип 1 NEU генотип 2 LES генотип 3
1 Алебастрово-1 - + -
2 Алебастрово-2 - + -
3 Новые Ляды + - -
4 Добрянка-2 + - -
5 Залесная + - -
6 Н. Пальники - + -
7 Усень-2 - - +
8 Иж-2 - - +
9 Иж-5 - - +
10 Иж-6 - - +
11 Удмуртия-2 - - +
12 Удмуртия-4 - - +
13 Удмуртия-6 - - +
14 Удмуртия-8 - - +
15 Калуга-1 - + -
16 Чудово-1 + - -
17 Новгород-1 + - -
18 Абсеттаров - + -
19 Преголя-6 - - +
20 КА-КЭ - + -
21 Драж-КЭ - + -
22 Ш-КЭ - + -
23 911-КЭ - + -
24 118-КЭ + - -
25 Ул-198-А - + -
26 1126-КЭ - + -
27 2635-КЭ - + -
28 3880-КЭ - + -
Контроли Софьин + - -
256 - + -
Лесопарк-11 - - +
Незараженная культура
клеток СПЭВ - - -
бельность вируса КЭ на эндемичной территории Российской Федерации важна с точки зрения использования вакцин, специфических иммуноглобулинов и диагностических тест-систем, приготовленных на основе штаммов, принадлежащих разным генотипам. Выводы
1. На территории Европейской России обнаружена циркуляция трех генотипов вируса КЭ. Сравнительный анализ географического распространения генотипов вируса КЭ показал преимущественное распространение генотипа 2 в Западной, Центральной и отчасти восточной Европе.
2. Отмечен высокий уровень генетических различий между штаммами вируса КЭ, что может влиять на лабораторную диагностику и специфическую профилактику КЭ.
3. Для более полной генетической характеристики природных популяций вируса КЭ в ряде эндемичных территорий Европы исследования необходимо существенно расширить.
Авторы выражают благодарность Институту вирусологии Венского университета и научной школе для молодых ученых (грант НШ-2195.2003.4), при поддержке которых выполнена данная работа.
Genetic Epidemiology of Tick-borne Encephalitis in the European part of Russia,
Baltic States, Eastern and South-Eastern Europe
Adelshin P.V., Zlobin V.I., Belikov S.I. et al.
Tick-borne encephalitis morbidity rate has grown significantly in Russia and other European countries at the edge of 20 - 21 centuries. Verifying genetic characteristics of circulating virus strains is necessary for understanding the epidemiological situation correctly. The research group studied geographical spread and genetic types of different virus strains at the large territory from Ural Mountains to Baltic States, Eastern Europe and Balkan Mountains.
Рисунок 3.
Географическое распространение штаммов вируса КЭ трех генотипов на территории Европы
О Генотип 1
□ Генотип 2
Д Генотип 3
Босния и Герцеговина
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Литература
Вирусология: методы / Под ред. Б. Мейхи. - М.: Мир. -1988. - 344 с.
Вотяков В.И., Протас И.И., Жданов В.М. Западный клещевой энцефалит. - Минск: Беларусь, 1978. - 255 с. Вотяков В.И., Злобин В.И., Мишаева Н.П. Клещевые энцефалиты Евразии. - Новосибирск: Наука, 2002. - 438 с. Добрикова Е.Ю., Плетнев А.Г., Шаманин В.А. Обнаружение вируса клещевого энцефалита в крови людей и в индивидуальных клещах методом молекулярной гибидизации нуклеиновых кислот // Вопр. вирусол. 1986. <6. С. 739 - 742. Злобин В.И., Демина Т.В., Мамаев Л.В. и др. Анализ генетической вариабельности штаммов вируса клещевого энцефалита по первичной структуре гена белка оболочки Е // Вопр. вирусол. 2001. <1. С. 13 - 16.
Злобин В.И., Газо М.Х., Беликов С.И. и др. Молекулярные зонды для генетического типирования вируса клещевого энцефалита // Вопр. вирусол. 2001. <2. С. 43 - 47. Злобин В.И., Беликов С.И., Джиоев Ю.П. и др. Молекулярная эпидемиология клещевого энцефалита. - Иркутск: РИО ВСНЦ СО РАМН, 2003. - 272 с.
Плетнев А.Г., Ямщиков В.Ф., Блинов В.М. Нуклеотидная последовательность генома и полная аминокислотная последовательность полипротеина вируса клещевого энцефалита // Биоорг. химия. 1989. Т. 15. <11. С. 1504 - 1521.
9. Погодина В.В. Мониторинг популяций вируса клещевого энцефалита и этиологической структуры заболеваемости за 60-летний период // Вопр. вирусол. 2005. <3. С. 7 - 13.
10. Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Карань Л.С. и др. Мониторинг популяции вируса клещевого энцефалита в европейских и азиатских регионах России. Практические аспекты проблемы // Биопрепараты. 2004. <2 (14). С. 7 - 13.
11. Сафронов П.В., Нетесов С.В., Микрюкова Т.П. и др. Нуклеотидная последовательность генов и полная аминокислотная последовательность белков вируса клещевого энцефалита штамма 205 // Мол. генет. микробиол. вирусол. 1991. <4. С. 23 - 29.
12. Chomtzynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA by acid guanidinum thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. V. 162. P. 156 - 159.
13. Hugland M., Vene S., Forsgren M. et al. Characterization of Human Tick-borne Encephalitis Virus From Sweden // J. Med. Virol. 2003. V. 71. P. 610 - 621.
14. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1977. V. 74. <12. P. 5463 - 5467.
15. Shamanin V.A., Pletnev A.G., Rubin S.G., Zlobin V.I. Differentiation of strains of tick-borne encephalitis virus by means of RNA-DNA hybridization // J. Gen. Virol. 1990. V. 71. P. 1505 - 1515.
