Научная статья на тему 'Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на адренергические, холинергические и деполяризующие воздействия'

Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на адренергические, холинергические и деполяризующие воздействия Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
152
48
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Biological Communications
WOS
Scopus
ВАК
RSCI
Ключевые слова
ПОЧЕЧНАЯА РТЕРИЯ / АДРЕНАЛИН / АЦЕТИЛХОЛИН / СЫВОРОТКА КРОВИ / ГИСТИДИН / ТРИПТОФАН / ТИРОЗИН / ЛИЗОФОСФАТИДИЛХОЛИН / ADRENALINE / ACETYLCHOLINE / HISTIDINE / TYROSINE / TRIPTOPHANE / LYSOPHOSPHATIDYLCHOLINE / SERUM BLOOD

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Кашин Роман Юрьевич, Ноздрачев Александр Данилович, Циркин Виктор Иванович

В опытах с 1644 циркулярными полосками почечной артерии коров (ПАК; n = 166) установлено, что наличие функционально активного эндотелия, продуцирующего NO, снижает их тонические ответы на гиперкалиевый (60 мМ KCl) раствор (на 16-40%) и на адреналин (10?6 г/мл; на 16-20%). Эффективность активации a-адренорецепторов (АР) миоцитов ПАК повышают 50и 100-кратные разведениясы воротки крови человека (это объясняется наличием в ней эндогенного сенсибилизатора a-АР, или ЭСААР), а также гистидин, тирозин и триптофан (10?5 г/мл), но снижает лизофосфатидилхолин (ЛФХ, 10?7 ? 10?4 г/мл). Сыворотка крови (1:50-1:104), аминокислоты, милдронат и предуктал восстанавливают эффективность активации a-АР, сниженную ЛФХ (10?6 г/мл). Ацетилхолин (за счет активации эндотелиальных М-холинорецепторов, М-ХР) вызывает релаксирующий эффект на фоне базального тонуса и на фоне тонуса, вызванного гиперкалиевым раствором Кребса или адреналином. Эффективность этой активации, как показали опыты с адреналином, снижает сыворотка крови (в разведениях 1:50-1:104), что объясняется наличием в ней эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР). Делаетсяв ывод о важной роли продуцируемого эндотелием

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Кашин Роман Юрьевич, Ноздрачев Александр Данилович, Циркин Виктор Иванович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

NO и содержащимися в крови эндогенных модуляторов (ЭСААР и ЭБМХР) в регуляции тонической активности гладких мышц ПАК. Библиогр. 36 назв. Ил. 5. Табл. 1. In experiences with 1644 circular strips of cow ren artery (CRA; n = 166) it is established, that presence functionally active endothelium, producing NO, reduces their tonic responses on the hyperpotassium (60 mM KCl) solution (on 16-40 %) and on adrenaline (10?6 g/ml; on 16-20 %). Efficiency of a-adrenergic receptors (АR) activation of CRA miocytes raise 50-and 100-fold dissolution of women serum blood (it is explained presence in serum blood endogenous sensitizer of a-АR, or ESAAR), and also histidine, tirosine and triptophane (10?5 g/ml), but reduce by lysophosphatidylcholine (LPhCh, 10?7 ? 10 ?4 g/ml). Serum blood (1:50-1:10000), amino acids, mildronat and preductal restore efficiency of a-АR activation, reduced by LPhCh (10?6 g/ml). Acetylcholine (due to activation of endothelial М-cholinoreceptors, М-СhR) induced relaxation effect in conditions of basal tone and on the tone caused hyperpotassium solution or adrenaline. Efficiency of this activation as have shown experiences with adrenaline, reduces serum blood (in dissolution 1:50-1:10000), that is explained presence in serum blood endogenous blocker of M-ChR (EBMChR). It is judged the important role NO which produced by endothelium and contained in serum blood of endogenous modulators (ESAAR and EBMChR) in regulation of tonic activity of CRA smooth muscles.

Текст научной работы на тему «Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на адренергические, холинергические и деполяризующие воздействия»

ФИЗИОЛОГИЯ, БИОФИЗИКА, БИОХИМИЯ

УДК 612.118+612.143+612.73+612.89.08

Р. Ю. Кашин, А. Д. Ноздрачев, В. И. Циркин

МОДУЛЯЦИЯ СОКРАТИТЕЛЬНЫХ ОТВЕТОВ ГЛАДКИХ МЫШЦ ПОЧЕЧНОЙ АРТЕРИИ КОРОВЫ НА АДРЕНЕРГИЧЕСКИЕ, ХОЛИНЕРГИЧЕСКИЕ И ДЕПОЛЯРИЗУЮЩИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ

Введение

Известно, что реакция гладких мышц (ГМ) сосудов на вещество может зависеть от состояния эндотелиоцитов, продуцирующих NO [16, 32, 33, 36]. Это доказано и в отношении вазодилатации, вызываемой ацетилхолином [32, 33, 36]. Но вопрос о роли NO в реализации вазоконстрикторного эффекта катехоламинов [7, 34] и гиперкалиевого деполяризующего раствора [27, 29] остается открытым. Установлено, что сыворотка крови (СК) в определенных разведениях (1: 103, 1:500, 1:100, 1:50) повышает или, наоборот, снижает эффективность активации р-адренорецепторов (АР) миоцитов матки, трахеи, коронарных сосудов [2, 12, 17, 18, 19] и миокарда [8, 14]. Это объясняется наличием в СК эндогенного сенсибилизатора р-АР (ЭСБАР) и эндогенного блокатора р-АР (ЭББАР). В опытах с ГМ и миокардом показано, что, подобно СК, р-адреносенсибилизирующую активность проявляют гистидин, тирозин и триптофан [6, 8, 12, 14, 15] и метаболические препараты — милдронат и предуктал [8, 10, 12]; это позволяет рассматривать их в качестве эндогенных и экзогенных сенсибилизаторов р-АР. Сообщается о способности СК повышать [2, 18] или, наоборот, снижать [2] эффективность активации а-АР миоцитов сосудов, что говорит о наличии в крови эндогенного сенсибилизатора а-АР (ЭСААР) и эндогенного блокатора а-АР (ЭБААР). Возникает вопрос — способны ли гистидин, тирозин, триптофан, милдронат и предуктал модулировать эффективность активации а-АР? Известно, что СК (1:500, 1:100, 1:50) снижает эффективность активации М-холинорецепторов (М-ХР) гладких мышц матки, трахеи, желудка [2, 5, 11,

18, 19, 20] и миокарда [9], а в отдельных случаях (1:104, 1:103), наоборот, повышает ее [11]. Это объясняется наличием в крови эндогенного блокатора М-ХР (ЭБМХР) и эндогенного сенсибилизатора М-ХР (ЭСМХР). Однако способность СК модулировать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов не изучалась, хотя это важно для понимания патогенеза артериальной гипертензии. Показано, что образующийся в организме лизофосфатидилхолин (ЛФХ) снижает эффективность активации М-ХР миокарда [3, 9], ГМ желудка [4] и сосудов [30, 33, 36]. Это позволяет рассматривать ЛФХ в качестве компонента ЭБМХР [4, 12, 19, 20]. Модулирует ли ЛФХ эффективность активации а-АР миоцитов сосудов — неясно. Ряд авторов [27, 36] считают, что ЛФХ не влияет на этот процесс. Но в отношении миокарда лягушки и крысы показано [8], что ЛФХ снижает положительный инотропный эффект адреналина, а гистидин,

© Р.Ю.Кашин, А.Д.Ноздрачев, В.И.Циркин, 2010

тирозин, триптофан, милдронат, предуктал и СК восстанавливают его. Учитывая, что вопрос о модуляции трансмембранной передачи сигнала от рецептора к клеточным эффекторам сегодня находятся в центре внимания многих исследователей [13], считали возможным более детально изучить его в отношении гладких мышц почечной артерии коровы (ПАК). Мышцы этого сосуда [2, 21, 22, 24, 26, 31, 35] и особенно почечной артерии коровы [2] не часто становятся предметом физиологических исследований. В то же время эффективность нервных и гуморальных влияний на ГМ почечной артерии могут иметь большое значение для функции почки как органа выделения и регулятора системного кровотока и гомеостаза. С учетом сказанного в работе была поставлена цель — изучить характер сократительных ответов гладких мышц ПАК и на гиперкалиевый раствор Кребса (ГРК), адреналин и ацетилхолин (АХ) в зависимости от функционального состояния эндотелия и наличия в среде потенциальных эндогенных и экзогенных модуляторов хемореактивности (ЛФХ, СК, аминокислот, милдроната и предуктала).

Материалы и методы исследования

В 46 сериях опытов на 1644 циркулярных полосках почечной артерии 166 коров оценивали их сократительную активность (СА) при действии гиперкалиевого раствора Кребса (ГРК, 30-80 мМ КС1), адреналина (10~10 —10~6 г/мл) и АХ (10~9 — 5• 10~5 г/мл) и модулирующее влияние СК (1:104, 1:103, 1:500, 1:100 и 1:50) небеременных женщин (п = 66), ЛФХ (10~8 — 10~4 г/мл), гистидина, тирозина, триптофана, милдроната, предуктала, ницерголина, обзидана, атенолола (все —10~5 г/мл) и ^нитро^-аргинин-метилового эфира ^^АМЕ, 10~4 г/мл). При этом 16 серий из 46 проводили одновременно на полосках группы 1 (с интактным эндотелием от артерий, полученных в пределах двух часов с момента забоя животного) и на полосках группы 2 (с поврежденным эндотелием, из артерий, хранившихся 24 ч при 4° С и у которых перед опытом проводили деэндотелизацию ватным тампоном). В остальных 30 сериях опытов использовали полоски с интактным эндотелием, но взятые в опыт спустя 2-24 ч после забоя животного.

Регистрацию СА полосок вели по методике В. И. Циркина и соавторов [17] при 38°С, постоянной перфузии раствором Кребса со скоростью 0,7 мл/мин, пассивной аэрации рабочей камеры и исходной нагрузке в 500 мг (4,9 мН) на многоканальном «Миоци-тографе», созданном на базе прибора Н-3020, механотрона 6МХ1С, термостатирующе-го устройства и шприцевого дозатора. Во всех сериях началу опытов предшествовал 30-минутный период адаптации полосок, т. е. перфузии раствором Кребса до установления стабильного базального тонуса. Опыты вели по схемам, указанным ниже (длительность этапов, как правило, — 10 мин). Исследование а-адреномодулирующей активности воздействий (серии 9-41) проводили на фоне блокады Р1-АР и Р2-АР обзиданом (10~6 г/мл).

Венозную кровь получали на станции переливания крови у 19-50-летних женщин, которую исследовали спустя 2-4 ч после забора (серии опытов № 12, 21, 23, 24, 45, 46) или через 6 месяцев хранения при -10° С после ее размораживания за 1-2 ч до опытов (серия № 22). СК получали центрифугированием крови (1000 об/мин, 15 мин) и разводили раствором Кребса, содержащим (мМ): ^С1—136; КС1 — 4,7; СаСЬ — 2,52; МяСЪ — 1,2; КН2РО4 — 0,6; ШНСОз — 4,7; СбН^Об — 11 (рН 7,4). Применяли адреналина гидрохлорид (Москва), обзидан (Германия), ницерголин (Оболенск), атенолол (Щёлково), лизофосфатидилхолин (Харьков), аминокислоты (Венгрия), милдронат (Латвия), предуктал (Франция), ацетилхолина хлорид и ^нитро^-аргинин-метиловый

эфир, или L-NAME (США — Бельгия). Результаты исследования обрабатывали параметрическим методом (их представляли в виде средней арифметической и ее ошибки, М±ш); различия оценивали по критерию Стьюдента, считая их достоверными при р < 0,05 [1].

Результаты исследования и их обсуждение

Показано, что независимо от функционального состояния эндотелия циркулярные полоски ПАК не обладают спонтанной СА и имеют низкий базальный тонус (рис. 1).

Рис. 1. Механограммы циркулярных полосок почечной артерии коровы с интактным эндотелием (группа 1, панели А, В и Г) и с поврежденным эндотелием (группа 2, панели Б,

Д-ж)

Панели А и Б демонстрируют влияние ацетилхолина (5 • 10 5 г/мл; АХ-5) на тонус, вызванный гиперкалиевым раствором Кребса (ГРК, 60 мМ КС1); Панели В и Г демонстрируют влияние L-нитро-^аргинин-метилового эфира (10_4 г/мл, L-NAME-4) на тонус, вызванный ГРК (60 мМ КС1; панель В) или адреналином (10_6 г/мл, Адр-6) совместно с обзиданом (10_6 г/мл; Обз-6); Панели Д, Е и Ж демонстрируют а-адреноблокирующее влияние лизофосфатидилхолина (10_6 г/мл, ЛФХ-6) на тонус, вызванный адреналином, и способность 100-кратного разведения сыворотки крови (Сыв-1:100; панель Д), тирозина (10_5 г/мл; Тир-5; панель Е) и милдроната (10_ 5 г/мл; Милд-5; панель Ж) восстанавливать эффективность активации а-адренорецепторов. Горизонтальные линии под механограммами обозначают момент воздействия вещества. Калибровка — на панелях А-Г — 5 мН, 5 мин, на панелях Д, Е и Ж — 10 мН, 10 мин.

Влияние гиперкалиевого раствора Кребса (ГРК) на тонус полосок в зависимости от функционального состояния эндотелия. В серии опытов № 1, проводимой на полосках группы 2 (п = 17) по схеме: раствор Кребса (РК) ^ ГРК (20 мМ КС1) ^ РК ^ ГРК (30 мМ КС1) ^ РК ^ ... ^ ГРК (80 мМ КС1) ^ РК,

показано, что повышение концентрации в среде КС! в диапазоне от 30 до 60 мМ дозозависимо и обратимо повышает тонус (рис. 1, А-В и 2, А). Различия в величине тонуса, вызванного при действии ГРК, содержащего 60, 70 и 80 мМ КС1, были недостоверны (р > 0,1; рис. 2, А). Ответная реакция на ГРК у 100% полосок проявлялась при 60 мМ КС1 и выше. Исходя из этого, в последующих сериях использовали ГРК, содержащий 60 мМ КС1.

Рис. 2. Величина тонуса циркулярных полосок почечной артерии коровы (мН)

Панель А — у полосок группы 2 в зависимости от концентрации КС1 в гиперкалиевом растворе Кребса (10—80 мМ КС1); панель Б — у полосок группы 2 в зависимости от концентрации адреналина (10-9 — 10_6 г/мл; по шкале абсцисс — отрицательный десятичный логарифм концентрации в среде адреналина; панели В и Г — у полосок группы 1 и 2 на 10—60-й минутах действия гиперкалиевого раствора Кребса (60 мМ КС1, панель В) или адреналина (10_6 г/мл, панель Г); * — различие с полосками группы 2 достоверно (р < 0,05), по критерию Стьюдента.

В серии опытов № 2 (РК ^ ГРК, 60 мМ КС1, 10 мин ^ РК) показано, что вызванный ГРК тонус в группе 1 (п = 23) на 25% меньше, чем в группе 2 (п = 31) —9,2±0,6 против 12,2±0,7 мН (р < 0, 05). Это можно объяснить продукцией эндотелиоцитами полосок группы 1 N0, который препятствует развитию тонического ответа на ГРК. Для доказательства данного предположения была проведена серия опытов № 3 (РК ^ ГРК, 60 мМ КС1, 60 мин ^ РК). В ней показано (рис. 2, В), что в группе 2 (п = 31) тонус повышался до максимальной величины в первые 10 мин перфузии ГРК, а затем на протяжении 50 мин оставался относительно постоянным. В группе 1 (п = 23) тонус в первые 10 мин перфузии ГРК был ниже (на 44%), чем у полосок группы 2 (соответственно 9,2±1,6 против 16,4±1,5 мН, р < 0, 05), но в дальнейшем он постепенно возрастал и к 50-й мин становился таким же (16,6±1,9 мН), как у полосок группы 2 (17,6±2,7 мН, р > 0,1). Эти результаты можно объяснить тем, что по мере воздействия ГРК (60 мМ КС1) у полосок группы 1 в эндотелиоцитах снижается запас L-аргинина (источника синтеза N0) и поэтому уменьшается продукция N0 и его релаксирующее влияние на миоциты. При этом, учитывая данные [28] о повышении продукции N0 в эндотелии брыжеечной артерии крысы под влиянием ГРК (70 мМ КС1), не исключаем,

что и в наших опытах ГРК (60 мМ КС1) также увеличивал продукцию N0 и тем самым повышал скорость истощения запасов L-аргинина.

Для доказательства представления о N0 как факторе, препятствующем развитию тонического ответа миоцитов на ГРК, на полосках группы 1 (п = 9) была выполнена серия опытов № 4 с использованием L-NAME, блокатора синтеза N0 [16, 32]. В ней (РК

— L-NAME, 10~4 г/мл — РК — ГРК, 60 мМ КС1, 10 мин — ГРК + L-NAME — ГРК — РК) установлено (рис. 1, В), что L-NAME не изменяет базальный тонус полосок (это, однако, не исключает способность L-NAME снижать сократимость миоцитов). Вопреки ожиданию, в присутствии L-NAME тонус полосок не возрастал (вследствие блокады синтеза N0), а останавливался в своем росте; удаление L-NAME сопровождалось быстрым ростом тонуса (с 25,9±4,7 до 37,8±2,8 мН, р < 0, 05). Выявленный феномен противоречит представлению о L-NAME как блокаторе синтеза N0, но согласуется с данными литературы [23, 25] о способности L-NAME блокировать Са2+-каналы миоци-тов сосудов. Вероятно, это является одной из причин торможения тонического ответа на ГРК в присутствии L-NAME. Ранее было отмечено [28], что L-NAME (10~6 — 10~4М) не влияет на синтез N0, индуцированный ГРК, и это объяснялось наличием N08-независимого пути синтеза N0 в эндотелиоцитах. Очевидно, этот феномен частично объясняет отсутствие ожидаемого результата от применения L-NAME. Таким образом, результаты серии опытов № 4 не позволили доказать предположение о снижении синтеза N0 при длительном воздействии ГРК. В то же время они косвенно подтверждают данные литературы о блокирующем влиянии L-NAME на Са2+-проницаемость [23, 25] и о наличии N0S-независимого пути синтеза N0 в эндотелиоцитах ПАК [28]. В целом результаты серий опытов № 1-4 позволяют сделать заключение, что ГРК (60 мМ КС1) можно использовать для повышения тонуса миоцитов ПАК. Это важно в методическом отношении при исследовании вазодилатирующей активности веществ (в том числе АХ) при оценке функционального состояния эндотелиоцитов как продуцентов N0.

Адреналинвызванный тонус циркулярных полосок ПАК и влияние на него сыворотки крови человека (СК), лизофосфатидилхолина (ЛФХ), аминокислот и лекарственных препаратов. В серии опытов № 5, которую проводили на полосках группы 2 (п = 7) по схеме: РК — адреналин (Адр), 10~6 г/мл — РК — Адр, 10~10 г/мл — РК — Адр, 10~9 г/мл — РК— Адр, 10~8 г/мл — РК — Адр, 10-7 г/мл — РК—— Адр, 10~6 г/мл — РК, установлено (рис. 1, Г-Ж и 2, Б), что в концентрациях 10~10и 10~9 г/мл адреналин не влияет на базальный тонус, а в концентрациях 10~8, 10-7 и 10~6 г/мл дозозависимо и обратимо повышает его (соответственно до 0,9±0,5; 3,4±0,9 и 32,2±4,6 мН), что наблюдалось у 42,9, 85,7 и 100% полосок. С учетом этих данных, в следующих сериях опытов адреналин использовали в концентрации 10~6 г/мл.

В сериях опытов № 6, 7 и 8, проведенных на полосках группы 2 (п = 72) по схеме: РК — Адр, 10~6 г/мл — Адр + блокатор, 10~5 г/мл — Адр — РК, показано, что ни-церголин (блокатор а-АР) снижает вызванный адреналином тонус до 16,7±5,4% от его первоначальной величины, а обзидан (блокатор р1-и Р2-АР) и атенолол (блокатор Р1-АР) —лишь до 79,6±7,9 и 64,5±7,6% соответственно. Это свидетельствует о наличии в миоцитах ПАК а-АР (вероятнее всего а1-АР), Р1-АР и Р2-АР. С учетом степени снижения тонуса, вызванного адреналином, полагаем, что СА миоцитов ПАК возрастает при активации а1-АР, и в меньшей степени Р1-АР, но снижается при активации Р2-АР. Так как тоническая реакция миоцитов ПАК на адреналин обусловлена преимущественно активацией а-АР, то при исследовании а-адреномодулирующей активности различных воздействий (серии опытов № 9-41) р-АР блокировали обзиданом (10~6 г/мл).

В серии опытов № 9, проведенной на полосках группы 1 (п = 22) и группы 2 (п = 33) по схеме: РК — Адр, 10~6 г/мл, 10 мин — РК, установлено, что в группе 1 тонический ответ на адреналин был на 16% ниже (р < 0,05), чем в группе 2 (13,7±0,7 мН против 16,0±1,0 мН). Это означает, что наличие функционально активного эндотелия, т. е. способного продуцировать N0, препятствует развитию тонуса при активации а-АР. Данное предположение подтвердили и результаты серии опытов № 10 (РК — Адр, 10~6 г/мл, 60 мин — РК), проведенной на полосках группы 1 (п = 22) и группы 2 (п = 33). Установлено (рис. 2, Г), что в обеих группах тонус повышался до максимальной величины уже в течение первых 10 мин перфузии адреналином и оставался на этом уровне (11,0-11,6 мН в группе 1 и 13,1-14,6 мН в группе 2) еще 50 мин, притом на протяжении первых 40 мин перфузии в группе 1 тонус был на 16-20% ниже (р < 0,05), чем в группе 2. Это означает, что адреналин не влияет на синтез N0, что согласуется с представлением 8. Wang и соавторов [34]. Можно также утверждать, что базальная секреция N0 эндотелиоцитами полосок группы 1 на протяжении всего 60-минутного воздействия препятствует развитию максимального ответа на адреналин. Очевидно также, что активация а-АР на полосках ПАК протекает без выраженной де-сенситизации; это было отмечено и ранее [2].

В серии опытов № 11, проведенной на полосках группы 1 (п = 17) по схеме: РК — Адр, 10~6 г/мл — Адр + L-NAME, 10~4 г/мл — Адр — РК, установлено (рис. 1, Г), что L-NAME (10~4 г/мл) не повышает тонус, вызванный адреналином, а, наоборот, снижает его (до 61,3±12,1% от первоначальной величины, р < 0,05) с последующим его восстановлением (до 120,5±8,9%) после удаления L-NAME. Полагаем, что данный феномен связан со способностью L-NAME блокировать Са2+-проницаемость миоцитов сосуда, как это отмечено в литературе [23, 25] и нами в серии опытов № 4. В целом можно утверждать, что тонотропный эффект адреналина не связан с торможением синтеза N0 в эндотелиоцитах. По этой причине исследование модуляции эффективности активации а-АР мы проводили без учета функционального состояния эндотелия, т. е. на полосках, хранившихся после забоя животного 2-24 ч (серии опытов № 12-41).

В сериях опытов № 12-18 (РК — Адр, 10~6 г/мл — РК — воздействие — РК;

^2 п = 117) оценивали влияние СК (1:104, 1:103, 1:500, 1:100, 1:50), гистидина, тиро-

зина, триптофана, милдроната, предуктала (все —10~5 г/мл) и ЛФХ (10~6 г/мл) на базальный тонус. Установили, что ни одно из этих воздействий не повышает тонус. Вопрос о вазодилатирующем эффекте этих воздействий остается открытым, так как на фоне низкого базального тонуса выявить его сложно, хотя, судя по результатам ряда последующих серий (№ 21, 34-39), его могут проявлять 103-кратное разведение СК, милдронат и предуктал.

В сериях опытов № 19 (РК — ГРК, 60 мМ КС1 — ГРК + ЛФХ, 10~6 г/мл — РК;

п = 20) и № 20 (РК — Адр, 10~6 г/мл — Адр + ЛФХ , 10~8 — 10~4 г/мл — Адр —

РК; п = 207) оценивали влияние ЛФХ на тонус, вызванный ГРК или адреналином. Установлено, что ЛФХ (серия № 19) не снижает тонус, вызванный ГРК, а даже повышает его (с 9,7± 1,1 до 10,6±1,2 мН, или до 108,8±3,2% от исходной величины р < 0, 05). В то же время (серия № 20) тонус, вызванный адреналином, дозозависимо и обратимо снижался (рис. 1, Д-Ж и 3, А) под влиянием ЛФХ в концентрациях 10~7, 10~6, 10~5, 5 • 10~5 и 10~4 г/мл (соответственно до 43,2±6,3, 31,8±4,9, 21,3±5,6, 19,2±7,0 и 13,8±2,1% от первоначального уровня, р < 0,05). Так как в серии опытов № 20 применялся обзидан (10~6 г/мл) как блокатор р-АР, эти данные позволяют утверждать, что ЛФХ (10-7 — 10~4 г/мл) обладает а-адреноблокирующей активностью. Хотя это утверждение не согласуется с данными литературы о том, что ЛФХ не снижает адре-

Рис. 3. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при трех тестированиях адреналином (10-6 г/мл) совместно с обзиданом (10-6 г/мл), в % к первому тестированию Панель А: 1 — адреналин; 2 — адреналин + лизофосфатидилхолин (ЛФХ, 10-8 — 10-4 г/мл); 3 — адреналин; панель Б: 1 — адреналин; 2 — адреналин + ЛФХ, 10-6 г/мл; 3 — адреналин + ЛФХ + воздействие (104—50-кратные разведения сыворотки крови, гистидин, тирозин, триптофан, милдронат, предуктал, все— 10-5 г/мл). * и # — различия с 1-м (*) и 2-м (#) тестированиями адреналином достоверны (р < 0,05), по критерию Стьюдента. Здесь и на рис. 4 и 5 в скобках указано число наблюдений.

налинвызванный тонус полосок аорты крысы [27] и мезентериальной артерии крысы [36], миоциты которых в основном содержат а2-АР, мы объясняем это противоречие тем, что: 1) ЛФХ преимущественно снижает эффективность активации а1-АР, а не а2 -АР, т. е. ЛФХ является селективным а1-адреноблокатором; 2) миоциты ПАК в отличие от миоцитов аорты и мезентериальной артерии крысы содержат преимущественно а1 -АР, которые блокируются ЛФХ.

В сериях опытов № 21 и 22 (РК — Адр, 10~6 г/мл — Адр + СК, одно из 5 разведений

— Адр — РК) было исследовано влияние СК небеременных женщин на эффективность

«>/„ 1:1000 1:500 1:100 1:50 1:10000 1:1000 1:500 1:100 1:50

(12)

(23)

(25)

(18)

(3)

140 - * * і* * * іІі

МІ ііІ

123 123 123 123 123 123 123 123 123

(13)

(21)

(25)

(21)

предуктал

(25)

1 2 З

1 2 З

1 2 З

1 2 З

12 3

Рис. 4. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при трех тестированиях адреналином (10-6 г/мл) совместно с обзиданом (10-6 г/мл), в % к первому тестированию Панель А — до (1), на фоне (2), и после удаления (3) «свежей» сыворотки крови в разведениях 1:104—1:50; панель Б — до (1), на фоне (2), и после удаления (3) длительно хранившейся сыворотки крови в разведениях 1: 104—1:50; панель В — до (1), на фоне (2) и после удаления (3) вещества (гистидина, тирозина, триптофана, милдроната или предуктала, все— 10-5 г/мл). Для всех панелей: * и # — различия с 1-м (*) и 2-м (#) тестированиями адреналином достоверны (р < 0, 05), по критерию Стьюдента.

активации а-АР. В серии опытов № 21 (п = 78) показано (рис. 4, А) что СК, исследованная спустя 2-4 ч после забора крови, в разведении 1:103 снижает тонус, вызванный адреналином (до 80,4±6,2% от первоначального уровня, р < 0, 05). Это мы расцениваем как отражение способности больших разведений СК снижать сократимость миоцитов ПАК. В разведении 1:500 СК не влияла на тонус, вызванный адреналином, а в разведениях 1:100 и 1:50 повышала его (соответственно до 132,3±5,1 и 135,4±4,3% от первоначального уровня, р < 0,05), т. е. проявляла а-адреносенсибилизирующую активность, что можно объяснить наличием в крови ЭСААР. В серии опытов № 22 (п = 83) показано (рис. 4, Б), что хранившаяся 6 месяцев при -10°С СК небеременных женщин в разведениях 1:104, 1:103 и 1:500 не влияет на тонус, вызванный адреналином, а в разведениях 1:100 и 1:50 повышает его (соответственно до 128,0±5,0 и 135,6±9,2% от

исходного уровня р < 0,05). Это подтверждает наличие в крови ЭСААР, указывает на его устойчивость к длительному хранению при —10°С и говорит о том, что компонентами ЭСААР являются низкомолекулярные вещества.

Влияние СК на эффективность активации а-АР мы также исследовали в серии опытов № 46, основной задачей которой было изучение влияния СК на эффект АХ в условиях тонуса, вызванного адреналином (ее результаты изложены ниже). Эту серию опытов проводили на полосках группы 1 (п = 50, разведения 1:104, 1:103, 1:500, 1:50) и группы 2 (п = 37, разведения 1:103, 1:100, 1:50) по схеме: РК — Адр, 10-6 г/мл (этап 1) — Адр + СК, одно из 5 разведений (этап 2) — Адр + СК + АХ, 5 • 10-5 г/мл (этап 3) — РК. Анализ первых двух этапов показал, что СК в разведении 1:50 повышает (р < 0,05) адреналинвызванный тонус (таблица) на полосках группы 1 до 137,3±15,8% от исходного уровня, а на полосках группы 2 — до 118,6±5,6% (р1-2 < 0,1). Это означает, что способность эндотелиоцитов продуцировать N0 не имеет значения для проявления а-адреносенсибилизирующей активности СК. В разведении 1:103 (см. таблицу) СК не влияла на тонус в обеих группах (он составил соответственно 100,8±6,8 и 97,5±11,4% от исходной величины). Кроме того, в опытах на полосках группы 1 (1:104 и 1:500) и группы 2 (1:100), показано, что СК в разведении 1:100 повышает тонус (до 114,2±5,4%, р < 0, 05), а в разведениях 1:104 и 1:500 не влияет на него. Все это подтверждает вывод о наличии в крови ЭСААР, эффект которого проявляется при разведении СК в 100 и 50 раз, и указывает на то, что характер влияния ЭСААР на адреналинвызванный тонус не зависит от функционального состояния эндотелия, а определяется преимущественно кратностью разведения СК. Отметим также, что при исследовании СК здоровых женщин (серии опытов № 21, 22 и 46) нам не удалось наблюдать а-адреноблокирующую активность СК, которая ранее была обнаружена при исследовании 103-, 500-, 100-, и 50-кратных разведений СК у больных артериальной гипертензией III стадии и объяснялась наличием ЭБААР [2]. Это говорит о низком содержании ЭБААР в крови у здоровых женщин.

Вызванный адреналином тонус циркулярных полосок (групп 1 и 2) почечной артерии коровы (в мН и % к 1-му этапу опытов) при воздействии ацетилхолина на фоне 104—50-кратных разведений сыворотки крови человека

Сыворотка п Этапы эксперимента (все на фоне обзидана, 10 6 г/мл)

1-й 2-й 3-й

мН мН | % мН | %

Полоски группы, 1 (с интактным эндотелием)

1:50 11 13,4±2,3 16,4±2,7 137,3±15,8* 21,9±3,1* 206,2±37,6*

1:500 17 8,2±1,7 8,1±1,7 103,3±5,7 10,2±2,2 148,4±20,6*#

1:1000 9 20,0±1,6 20,7±2,6 100,8±6,5 25,5±2,6 128,4±10,2*#

1:104 13 17,4±2,4 18,0±2,8 104,0±6,5 24,5±3,4*# 144,7±11,7*#

Полоски группы, 2 (с поврежденным эндотелием)

1:50 14 15,3±1,8 17,3±1,9 118,6±5,6* 20,8±2,1 146,1±8,2*#

1:100 18 14,1±1,8 16,1±2,1 114,2±5,4* 20,1±2,4 152,9±9,8*#

1:1000 5 14,9±3,0 14,5±3,5 97,5±11,4 19,2±4,9 131,2±18,3

Примечание. Этапы опытов: 1-й: адреналин, 10_6 г/мл; 2-й: адреналин, 10_6 г/мл + разведение сыворотки; 3-й: адреналин, 10_6 г/мл + разведение сыворотки + ацетилхолин, 5 • 10_5 г/мл. * и #— различия соответственно с 1-м и 2-м этапами достоверны (р < 0, 05) по критерию Стьюдента.

В серии опытов № 23 (РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ, 10 6 г/мл — Адр + ЛФХ + СК в одном из разведений — РК; п = 99) исследовали способность СК восстанавливать эффективность активации а-АР, сниженную ЛФХ. Показано

(рис. 1, Д; 3, Б), что СК проявляет эту способность в разведениях 1:104, 1:103, 1:500, 1:100 и 1:50. Так, в опытах с 500-кратным разведением СК (п = 19) адреналин повышал тонус до 26,2±2,7 мН; под влиянием ЛФХ тонус снижался до 5,1±2,3 мН или до 16,7±7,0%, а при введении СК он восстанавливался до 25,8±2,5 мН или до 101,5±3,9%. Аналогичные данные получены и в серии опытов № 24, проведенной по модифицированной схеме (РК — Адр, 10-6 г/мл — РК — Адр + ЛФХ, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ + СК в одном из разведений — РК; п = 65): ЛФХ препятствовал повышению тонуса полосок при активации а-АР адреналином (10-6 г/мл), а СК (во всех разведениях) способствовала развитию этого тонуса. Так, в опытах с 500-кратным разведением СК (п = 13) исходно адреналин повышал тонус до 22,6±3,4 мН, на фоне ЛФХ — лишь до 5,4±2,3 мН или до 19,4±7,9% от первоначальной величины, а на фоне ЛФХ и СК — до 23,4 ±3,8 мН или до 109,7±15,6%. Все это подтверждает представление о наличии в крови ЭСААР и указывает на то, что эффект ЭСААР особенно ярко проявляется на фоне сниженной (в частности, под влиянием ЛФХ) эффективности передачи сигнала от а-АР внутрь миоцита.

В сериях опытов № 25-33 изучали влияние гистидина, тирозина и триптофана на эффективность активации а-АР, в том числе в присутствии ЛФХ. В частности, в сериях опытов № 25, 26 и 27 (РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + аминокислота, 10-5 г/мл — Адр — РК) показано (рис. 4, В), что гистидин (п = 19), тирозин (п = 28) и триптофан (п = 16) повышают тонус, вызванный адреналином (соответственно до 127,1±4,4, 128,0±3,8 и 124,9±4,5% от его первоначальной величины, р < 0, 05). Аналогичные данные получены при изменении последовательности воздействий (серии опытов № 28, 29 и 30: РК — Адр, 10-6 г/мл — РК — аминокислота, АК, 10-5 г/мл — АК + Адр — РК) —гистидин (п = 9), тирозин (п = 10) и триптофан (п = 12) повышали тонус, вызванный адреналином, соответственно до 118,3±7,1, 127,3±5,9 и 143,0±16,6% от величины, наблюдаемой при 1-м тестировании адреналином (р < 0,05). В сериях опытов № 31, 32 и 33 (РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ + аминокислота, 10-5 г/мл — РК) показано (рис. 1, Е и 3, Б), что гистидин (п = 47), тирозин (п = 29) и триптофан (п = 24) восстанавливают адреналинвызванный тонус, сниженный ЛФХ. Так, в опытах с триптофаном (серия опытов № 33) адреналин повышал тонус до 17,5±1,1 мН; ЛФХ его снижал до 5,3±1,0 мН (т. е. до 29,6±4,8% от первоначального уровня), а триптофан восстанавливал его до 14,7±1,7 мН (до 78,2±12,1%). Следовательно, гистидин, тирозин и триптофан, подобно СК человека, обладают а-адреносенсибилизирующей активностью, которая проявляется на интактных полосках и на полосках, подвергнутых воздействию ЛФХ. Ранее в опытах с гладкими мышцами [6, 12, 15] и миокардом [8, 14] было показано, что эти аминокислоты (АК) обладают р-адреносенсибилизирующей активностью, т. е. повышают эффективность активации р-АР, в том числе сниженную озоном или ЛФХ; это позволило рассматривать АК в качестве компонентов ЭСБАР. Очевидно, что эти три АК могут быть и компонентами ЭСААР. Полагаем, что повышение и/или восстановление эффективности активации а-АР и р-АР под влиянием АК связано с их способностью (как внутриклеточных шаперонов) восстанавливать конформацион-ное состояние а-субъединицы G-белкa, нарушаемое под воздействием повреждающих агентов типа ЛФХ, а также с их способностью активировать фосфатазу (т. е. процесс дефосфорилирования АР) и повышать сродство АР к агонисту.

В сериях опытов № 34-41 изучали влияние милдроната и предуктала на эффективность активации а-АР, в том числе в присутствии ЛФХ. В частности, в сериях опытов № 34-39 показано, что милдронат и предуктал частично снижают тонус, вызванный адреналином. Так, в сериях опытов № 34 и 35 (РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + веще-

ство, 10-5 г/мл — Адр — РК) милдронат (п = 32) снижал адреналинвызванный тонус до 56,4±8,8% от первоначальной величины, а предуктал (п = 25) —до 61,0±11,0% (рис. 4, В). Аналогично, в сериях опытов № 36 и 37 (РК — Адр,10-6 г/мл — РК — вещество, 10-5 г/мл— вещество + Адр — РК), при 2-м тестировании адреналином, т. е. на фоне милдроната (п = 12) тонус составил 81,5±5,5% от первоначальной величины, а на фоне предуктала (п = 8) — 107,5±11,0%. Аналогично, в сериях опытов № 38 и 39 (РК — вещество, 10-5 г/мл — вещество + Адр, 10-6 г/мл — Адр — РК) удаление милдроната (п = 9) повышало адреналинвызванный тонус до 133,0±15,3% (р < 0,05) от величины тонуса, развиваемого на 5-й мин воздействия адреналина совместно с этим веществом, а удаление предуктала (п = 24) —до 143,1±18,4%. В то же время оба вещества восстанавливали тонический ответ полосок ПАК на адреналин, сниженный ЛФХ, т. е. проявляли а-адреносенсибилизирующую активность. Действительно, в сериях опытов № 40 и 41 (РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ, 10-6 г/мл — Адр + ЛФХ + вещество, 10-5 г/мл

— РК) показано (рис. 1, Ж и 3, Б), что милдронат (п = 22) восстанавливает сниженный ЛФХ адреналинвызванный тонус до 73,4±4,7% от исходной величины (р < 0, 05), а предуктал (п = 79) —до 78,0±4,1% ( < 0,05); в этих опытах ЛФХ снижал адреналинвызванный тонус соответственно до 33,9±4,1 и до 32,1±2,6% (р < 0,05). Результаты серий опытов № 34-41 вполне объяснимы, если предположить, что милдронат и предуктал оказывают два эффекта — вазодилататорный и а-адреносенсибилизирующий. В обычных условиях, т. е. в опытах с интактными полосками доминирует вазодилататорный эффект (поэтому оба вещества снижают адреналинвызванный тонус), а в опытах на полосках, обработанных ЛФХ, преобладает а-адреносенсибилизирующий эффект, т. е. оба вещества повышают эффективность активации а-АР. Таким образом, подобно АК, милдронат и предуктал увеличивают эффектность активации и р-АР, как показано ранее [8, 10, 12], и а-АР. Поэтому мы склонны рассматривать милдронат и предук-тал как экзогенные сенсибилизаторы а-АР и как шапероны, действующие по тому же механизму, как ЭСААР, гистидин, тирозин и триптофан.

Сократительные ответы циркулярных полосок ПАК на ацетилхолин (АХ) и их модуляция сывороткой крови. Известно [16, 32], что эндотелийза-висимую вазодилатацию АХ реализует за счет активации М-ХР эндотелиоцитов, повышающей продукцию N0. Поэтому влияние АХ на базальный тонус (серии опытов № 42 и 43), и на тонус, вызываемый ГРК (серия опытов № 44) или адреналином (серии опытов № 45 и 46), мы изучали, как правило, на полосках с интактным (группа 1) и поврежденным (группа 2) эндотелием.

Исследование эффектов АХ на фоне базального тонуса в серии опытов № 42 (группа 1, п = 7) и в серии 43 (группа 1, п = 20; группа 2, п = 13), проводимое по схеме: РК

— АХ, в одной из концентраций, 10-9 — 5 • 10-5 г/мл — РК, показало, что в группе 1 АХ в концентрациях 10-9 —10-7 г/мл не изменяет базальный тонус полосок, а в концентрациях 10-6, 10-5 и 5 • 10-5 г/мл в первые 5 мин воздействия дозозависимо увеличивает его (до 5,4-5,9 мН), а в последующие 5 мин — снижает до исходного уровня или ниже (на 0,4-4,7 мН), т. е. на 84,0-126,7% от первоначального подъема. Такой же эффект АХ проявлял и в группе 2 (серия опытов № 43), но первичный подъем тонуса в ней был выше, чем в группе 1 (9,5±1,9 против 5,4±0,6 мН, р < 0, 05). Это говорит о том, что релаксирующий эффект АХ в группе 2 (из-за отсутствия эндотелия) выражен слабее, чем в группе 1. Учитывая представления о механизме влияния АХ на гладкие мышцы [12], полагаем, что в обеих группах вазоконстрикторный эффект АХ обусловлен активацией М-ХР миоцитов ПАК, а его прекращение — десенситизацией М-ХР мио-цитов к АХ, разрушением АХ ацетилхолинэстеразой, а также (в группе 1) усилением

продукции N0 эндотелиоцитами при активации их М-ХР. В целом результаты серий опытов № 42 и 43, интерпретация которых требует ряд допущений, указывают на то, что данная модель не является оптимальной для изучения влияния СК на эффекты АХ.

В серии 44 (РК — ГРК, 60 мМ КС1 — ГРК + АХ, в одной из концентраций, 10-9 — 10-5 г/мл — ГРК — РК) на полосках группы 1 (п = 45) показано (см. рис. 1, А и 5, А), что АХ в концентрации 10-9 — 10-7 г/мл не меняет тонус, вызванный ГРК, а в концентрациях 10-6 и 10-5 г/мл снижает его (соответственно до 78,1±8,7 и 60,2±16,7% от первоначальной величины, р < 0,05). В группе 2 (п = 36) АХ в концентрации 10-9 — 10-6 г/мл не влиял на тонус, а в концентрации 10-5 г/мл повышал его (до 149,3±17,2%; р < 0, 05; рис. 1, Б и 5, Б). Следовательно, на фоне тонуса, вызванного ГРК, направленность эффекта АХ зависит от функционального состояния эндотелио-цитов — если они продуцируют N0 (группа 1), то АХ оказывает вазодилатирующий эффект, а в противном случае (группа 2) — вазоконстрикторный. Это согласуется с представлением об АХ как эндотелийзависимом вазодилататоре [16, 32], свидетельствует

о способности АХ оказывать вазодилатацию на фоне тонуса, вызванного ГРК, и говорит о перспективности применения такой модели для изучения вазодилатирующего эффекта АХ и его модуляции.

Влияние АХ на тонус, вызванный адреналином, и модуляцию эффектов АХ под влиянием СК оценивали в сериях опытов № 45 и 46, отличающихся последовательностью воздействий. Серию опытов № 45 проводили с полосками группы 1 (п = 84) и группы 2 (п = 44) по схеме: РК — Адр, 10-6 г/мл (этап 1) — Адр + АХ, 5 • 10-5 г/мл (этап 2) — Адр + АХ + СК в одном из 5 разведений (этап 3) — РК. На полосках группы 2 (рис. 5, Г) при воздействии АХ на фоне тонуса, вызванного адреналином, к 5-й мин тонус возрастал (до 127,9-138,4% от его исходной величины, р < 0, 05); к 10-й мин он оставался повышенным (129,5±11,8% в опытах с 50-кратным разведением СК), либо снижался до исходного уровня (в опытах с СК в разведениях 1:100-1:104). В группе 1 (рис. 5, В) АХ не изменял тонус, вызванный адреналином, ни к 5-й мин (97,1118,3% от первоначального уровня, р > 0,1), ни к 10-й мин (88,0-101,1%, р > 0,1); в отдельных экспериментах к 10-й мин АХ снижал тонус. Очевидно, что в обеих группах АХ вызывает вазоконстрикцию (за счет активации М-ХР миоцитов), а в группе 1 —и вазодилатацию (за счет активации М-ХР эндотелиоцитов), которая компенсирует вазоконстрикцию. Анализ результатов третьего этапа этой серии показал (см. рис. 5, Г), что на полосках группы 2 введение 50-кратного разведения СК на фоне тонуса, вызванного адреналином и АХ, повышало его (до 135,4±10,0% от первоначальной величины, р < 0,05). Этот эффект мы расцениваем как проявление а-адреносенсибилизирующей активности СК, реализации которой не препятствует наличие АХ в среде. Остальные разведения СК (1:100, 1:500, 1:103, 1:104) не повышали тонус (он составил соответственно 112,3±13,4, 106,2± 11,2, 105,1±14,9 и 88,3±8,9% от первоначальной величины), т. е. не проявляли а-адреносенсибилизирующую активность. Иные результаты получены в группе 1 (рис. 5, В) —разведение 1:50 не повышало тонус, вызванный адреналином и АХ (он составил 109,6±9,9% от первоначальной величины, р > 0,1), разведения 1:100 и 1:500 также не меняли тонус (он составил 107,3±8,0 и 85,5±10,3%), а разведения 1:103 и 1:104 снижали тонус (соответственно до 81,6±6,9 и 77,5±8,4%, р < 0,05). Следовательно, наличие в среде ЭБМХР (СК в разведениях 1:50, 1:100, 1:500) уменьшает способность АХ повышать синтез N0 в эндотелиоцитах и тем самым снижает вазоре-лаксирующий эффект АХ; в отсутствии ЭБМХР (СК в разведениях 1:103 и 1:104) АХ вызывает характерный для него вазорелаксирующий эффект. Таким образом, результаты серии опытов № 45 говорят о возможности исследования эффектов АХ на фоне

109 108 и 107 106 105

140 ■ (8) (5) | (17) (9) (6) #

120' ГП — гп

пишм.

109 108 107 10б ю5

(4) (4) (11) (3) (12)

о п П' М

123 123 123 123 123

В

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

123 123 123 123 123

% ° % Г 140 Л 1:10 ООО (16) 1:1 000(17) 1:500(16) 1:100(16) 1:50(18) 160 Т 1:10 000(8) 1:1 000(10) 1:500(9) 1:100(8) .1:50^(9)

11111 >Ш1

1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3

1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3 1 2а 26 3

Рис. 5. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при действии ацетилхолина (АХ, 10_6 г/мл) на фоне тонуса, вв1-званного гиперкалиеввш (60 мМ КС1) раствором Кребса (ГРК, панели А и Б) или адреналином (10-6 г/мл) совместно с обзиданом (10_6 г/мл; панели В и Г), в % к исходной величине вызванного тонуса

Панели А (группа 1) и Б (группа 2): 1 — ГРК, 2 — ГРК+АХ, 3 — ГРК. Панели В (группа 1) и Г (группа 2): 1 — адреналин; 2а — адреналин + АХ, 5 мин воздействия; 26 — адреналин + АХ, 10 мин воздействия; 3 — адреналин + АХ + сыворотка крови в одном из разведений, 1:10000—1:50). * и ф — различия соответственно с 1-м (*) и 2-м или 2-м (=#=) этапами достоверны (р < 0,05), по критерию Стьюдента.

С5

тонуса, вызванного адреналином, и о способности ЭБМХР (СК в разведениях 1:50, 1:100 и 1:500) снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов. Этот вывод подтверждают и результаты серии опытов № 46.

Серию опытов № 46 (частично о ней говорилось выше) проводили на полосках группы 1 (п = 50) и группы 2 (п = 37) по схеме: РК — Адр, 10-6 г/мл — Адр + СК, в одном из 5 разведений — Адр + СК + АХ, 5 • 10-5 г/мл — РК. Установлено (см. таблицу), что 50-кратное разведение СК, вводимое на фоне тонуса, вызванного адреналином, повышает (р < 0,05) тонус в обеих группах (до 137,3±15,8% в группе 1 и до 118,6±5,6% в группе 2) от его исходной величины, что объясняется наличием в ней ЭСААР. Введение АХ на фоне адреналина и СК дополнительно повышало (р < 0,05) тонус до 206,2±37,6% (группа 1) и 146,1±8,2% (группа 2) от величины тонуса, вызванного адреналином (р1-2 > 0,1). Таким образом, в присутствии в среде 50-кратного разведения СК реакция на АХ у полосок с интактным эндотелием (группа 1) стала такой же, как у полосок с поврежденным эндотелием (группа 2). В разведении 1:500 в группе 1 (группу 2 не исследовали) СК не изменяла адреналинвызванный тонус (103,3±5,7%), т. е. не проявляла ЭСААР-активность, а введение АХ на фоне адреналина и СК дополнительно повышало тонус (до 148,4±20,6%, р < 0,05). Аналогично, в разведении 1:103 СК в группах 1 и 2 (см. таблицу) не изменяла адреналинвызванный тонус (100,8±6,5 и 97,5± 11,4%), а введение АХ на фоне адреналина и СК повышало (р < 0, 05) тонус соответственно до 128,4±10,2 и 131,2±18,3% (р1-2 > 0,1). В разведении 1:104 СК в группе 1 (группу 2 не исследовали) также не изменяла адреналинвызванный тонус (104,0±6,5%), а введение АХ на фоне адреналина и СК повышало (р < 0, 05) тонус до 144,7±11,7%. Следовательно, СК в разведениях 1:104, 1:103 и 1:500 (как и разведение 1:50) препятствует проявлению релаксирующего эффекта АХ, и это объясняется наличием в ней ЭБМХР. Отметим, что СК в разведении 1:100 в группе 2 (группу 1 не исследовали) повышала адреналинвызванный тонус (до 114,2±5,4% от исходного уровня, р < 0, 05), что объясняется наличием ЭСААР, а введение АХ на фоне адреналина и СК дополнительно повышало тонус до 152,9±9,8% (р < 0, 05). Таким образом, результаты серии опытов № 46 свидетельствуют о том, что СК в разведениях 1:104, 1:103, 1:500, 1:50 (и, вероятно, 1:100) снижает способность АХ вызывать релаксацию миоцитов. Это мы объясняем наличием в сыворотке ЭБМХР.

Как отмечалось выше, на полосках группы 1 на фоне тонуса, вызванного адреналином, АХ в отсутствии СК вызывает два эффекта — вазоконстрикторный (за счет активации М-ХР миоцитов) и вазодилататорный (за счет активации М-ХР эндотелио-цитов, повышающей синтез N0). И так как оба эффекта АХ компенсируют друг друга, то в этих условиях АХ не вызывает дополнительного роста тонуса. Наличие же СК, которая, как известно [2, 5, 11, 12, 18, 19, 20], содержит ЭБМХР, приводит к доминированию вазоконстрикторного эффекта АХ. Это можно объяснить тем, что под влиянием ЭБМХР эффективность активации у М-ХР эндотелиоцитов снижается в большей степени, чем у М-ХР миоцитов. Но это утверждение будет правильным в том случае, если предположить, что сродство к ЭБМХР у М-ХР эндотелиоцитов выше, чем у М-ХР миоцитов. Мы также полагаем, что вероятность снижения эффективности активации М-ХР эндотелиоцитов под влиянием ЭБМХР должна быть выше в том случае, если ЭБМХР оккупирует свободные М-ХР, а не занятые АХ. Действительно, в серии опытов № 45, в которой СК вводилась на фоне адреналина и АХ, она проявляла М- холинобло-кирующую активность в разведениях 1:500, 1:100 и 1:50, а в серии 46 (введение СК до воздействия АХ)—в разведениях 1:104, 1:103, 1:500, 1:50 (и, очевидно, в разведении 1:100).

В целом из результатов серий опытов № 45 и 46 следует, что: 1) эффекты ЭБМХР достаточно универсальны, т. е. в различных концентрациях ЭБМХР может блокировать любые М-ХР; 2) чувствительность разных М-ХР к ЭБМХР неодинакова (у М-ХР эндо-телиоцитов она выше, чем у М-ХР миоцитов); 3) наличие ЭБМХР может существенно влиять на способность АХ проявлять эндотелийзависимое расслабление. С этих позиций полагаем, что высокое содержание в крови у человека ЭБМХР повышает риск развития артериальной гипертензии.

Выводы

1. Наличие функционально активного эндотелия, продуцирующего N0, снижает тонические ответы циркулярных полосок почечной артерии коровы (ПАК) на гипер-калиевый (60 мМ КС1) раствор (на 16-40%) и на адреналин (10~6 г/мл; на 16-20%).

2. Эффективность активации а-адренорецепторов (АР) миоцитов ПАК повышают 50- и 100-кратные разведения сыворотки крови человека (это объясняется наличием в ней эндогенного сенсибилизатора а-АР, или ЭСААР), а также гистидин, тирозин и триптофан (10~5 г/мл), но снижает лизофосфатидилхолин (ЛФХ, 10~7-10~4г/мл). Сыворотка крови (1:50-1:104), аминокислоты, милдронат и предуктал восстанавливают эффективность активации а-АР, сниженную ЛФХ (10~6 г/мл).

3. В опытах с циркулярными полосками ПАК ацетилхолин за счет активации М-ХР эндотелиоцитов оказывает релаксирующий эффект. Он наблюдается на фоне базального тонуса и на фоне тонуса, вызванного ГРК или адреналином. Эффективность этой активации, как показано в опытах с адреналином, снижает сыворотка крови человека (в разведениях 1:50-1:104), что объясняется наличием в ней эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР).

4. В регуляции тонической активности гладких мышц почечной артерии коровы важную роль играет продуцируемый эндотелием N0, а также содержащиеся в крови эндогенные модуляторы — ЭСААР и ЭБМХР.

* * *

Авторы выражают признательность за помощь в работе Н. В.Проказовой — кандидату химических наук, ведущему научному сотруднику, зав. отделом биохимии липидов Института экспериментальной кардиологии РКНПК (Москва).

Литература

1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., 1999.

2. Демина Н. Л., Циркин В. И., Тарловская Е. И., Кашин Р. Ю. а и р-адрено-, М-холино-модулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2008. №2. С. 16-22.

3. Коротаева К. Н. Влияние лизофосфатидилхолина на эффективность активации М-хо-линорецепторов изолированного миокарда крысы // Молодежь и наука на Севере: Материалы докл. I всерос. молодежн. науч. конф. Сыктывкар, 2008. Т. II. С. 226-228.

4. Куншин А. А., Циркин В. И., Проказова Н. В. Влияние лизофосфатидилхолина, фосфа-тидилхолина и куриного яичного желтка на сократительные эффекты ацетилхолина в опытах с гладкими мышцами желудка крысы // Бюл. эксп. биологии и медицины. 2007. Т. 143, №6. С. 4-7.

5. Мальчикова С. В., Сизова Е.Н., Циркин В. И. и др. Изменение р-адреносенсибилизиру-ющей и М-холиноблокирующей активности сыворотки крови у пожилых людей при остром

коронарном инциденте и под влиянием физических тренировок // Кардиоваск. терапия и профилактика. 2003. Т. 2, №6. С. 36-43.

6. Ноздрачев А. Д., Туманова Т. В., Дворянский С. А. и др. Активность ряда аминокислот как возможных сенсибилизаторов р-адренорецепторов гладкой мышцы // ДАН. 1998. Т. 363, №1. С. 133-136.

7. Осадчий Л. И., Балуева Т. В., Сергеев И. В. NO-зависимый механизм адренергической реакции системной гемодинамики // Бюл. эксп. биологии и медицины. 2005. Т. 140, № 8. С. 124-126.

8. Пенкина Ю.А., Ноздрачев А. Д., Циркин В. И. Влияние сыворотки крови человека, гистидина, триптофана, тирозина, милдроната и лизофосфатидилхолина на инотропный эффект адреналина в опытах с миокардом лягушки и крысы // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2008. Вып. 1. С. 55-68.

9. Проказова Н. В., Звездина Н. Д., Суслова И. В. и др. Влияние лизофосфатидилхолина на чувствительность сердца к ацетилхолину и параметры связывания хинуклидинилбензилата с мембранами миокарда // Рос. физиол. журн. 1998. Т. 84, № 10. С. 969-978.

10. Сизова Е. Н., Циркин В. И., Подтетенев А. Д. и др. Способность триметазидина (пре-дуктала) и милдроната оказывать прямое р-адреносенсибилизирующее действие на гладкие мышцы. Сообщение 2 // Рос. кардиол. журн. 2002. № 2 (34). С. 50-56.

11. Сизова Е. Н., Циркин В. И., Трухин А. Н. Наличие в крови и ликворе человека эндогенных модуляторов М-холинорецепторов // Вестн. Поморск. ун-та. 2004. №6. С. 22-31.

12. Сизова Е. Н., Циркин В. И. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холинореактивности. Киров, 2006.

13. Ткачук В. А. Рецепция и внутриклеточная сигнализация // Современный курс классической физиологии. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. С. 325-348.

14. Трухин А. Н., Циркин В. И., Сизова Е. Н. Повышение р- адренореактивности миокарда лягушки под влиянием гистидина // Бюл. эксп. биологии и медицины. 2004. Т. 138, № 8. С. 144-147.

15. Туманова Т. В., Сизова Е. Н., Циркин В. И. Способность L-гистидина снижать десен-ситизацию миометрия к адреналину // Бюл. эксп. биологии и медицины. 2004. Т. 138, № 10. С. 364-367.

16. Хлыбова С. В., Циркин В. И., Дворянский С. А. Роль системы L-аргинина-оксида азота в регуляции висцеральных функций в обеспечении гестационного процесса. Киров, 2007.

17. Циркин В. И., Дворянский С. А., Ноздрачев А. Д. и др. Адреномодулирующие эффекты крови, ликвора, мочи, слюны и околоплодных вод человека // ДАН. 1997. Т. 352, №1. C. 124-126.

18. Циркин В. И., Ноздрачев А. Д., Сизова Е. Н. и др. Система эндогенной модуляции, регулирующая деятельность периферических автономных нервных структур // ДАН. 2002. Т. 383, № 5. С. 698-701.

19. Циркин В. И., Кононова Т. Н., Сизова Е. Н. и др. О возможной роли эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холинореактивности в патогенезе бронхиальной астмы // Пульмонология. 2007. № 5. С. 46-50.

20. Циркин В. И., Ноздрачев А. Д., Куншин А. А. Влияние сыворотки крови человека на М-холинореактивность гладких мышц желудка крысы // ДАН. 2007. Т. 414, № 3. С. 419-422.

21. Chelly J., Tsao G., Nath R. et al. Effects of norepinephrine on the dog common carotid, coronary and renal arteries in vitro studies // Eur. J. Pharmacol. 1986. Vol. 120, N 1. P. 137-139.

22. Enkhjargal B., Hashimoto M., Kinoshita H., Sakai Y. Characteristics of contractile activity in the renal artery of ovariectomized rats // J. Smooth Muscle Res. 2008. Vol. 44, N 1. Р. 17-28.

23. Henrion D., Dowell F., Levy B., Michel J. In vitro alteration of aortic vascular reactivity in hypertension induced by chronic NG-nitro-L-arginine methyl ester // Hypertension. 1996. Vol. 28, N 3. P. 361-366.

24. Hesse I., Johns E. An in vivo study of the alpha-adrenoreceptor subtypes on the renal vasculature of the anaesthetized rabbit // J. Auton Pharmacol. 1984. Vol. 4, N 3. P. 145-152.

25. Lopez R., Ortiz C., Ruiz A. et al. Impairment of smooth muscle function of rat thoracic aorta in an endothelium-independent manner by long-term administration of N (G)-nitro-L-arginine methyl ester // Fundam. Clin. Pharmacol. 2004. Vol. 18, N 6. P. 669-677.

26. Makita Y. Effects of adrenoceptor agonists and antagonists on smooth muscle cells and neuromuscular transmission in the guinea-pig renal artery and vein // Brit. J. Pharmacol. 1983. Vol. 80, N 4. P. 671-679.

27. Matsumoto T., Kobayashi T., Kamata K. Mechanisms underlying lysophosphatidylcholine-induced potentiation of vascular contractions in the Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) rat aorta // Br. J. Pharmacol. 2006. Vol. 149, N 7. P. 931-941.

28. Mendizabal V., Poblete I, Lomniczi A. et al. Nitric oxide synthase-independent release of nitric oxide induced by KCl in the perfused mesenteric bed of the rat // Eur. J. Pharmacol. 2000. Vol. 409, N 1. P. 85-91.

29. Suenaga H, Kamata K. Marked dissociation between intracellular Ca2+ level and contraction on exposure of rat aorta to lysophosphatidylcholine // Eur. J. Pharmacol. 1999. Vol. 378, N 2. P. 177-186.

30. Tang Y., Lu R., Li Y. et al. Effect of calcitonin gene-related peptide-induced preconditioning on attenuated endothelium-dependent vasorelaxation induced by lysophosphatidylcholine // Zhongguo yaoli xuebao. 1997. Vol. 18, N 5. P. 405-407.

31. Taniguchi J., Honda H., Shibusawa Y. et al. Alteration in endothelial function and modulation by treatment with pioglitazone in rabbit renal artery from short-term hypercholesterolemia // Vascul. Pharmacol. 2005. Vol. 43, N 1. P. 47-55.

32. Vanhoutte P. Endothelium-derived free radicals: for worse and for better // J. Clin. Invest. 2001. Vol. 107, N1. P. 23-25.

33. Vuong T., de Kimpe S., de Roos R. et al. Albumin restores lysophosphatidylcholine-induced inhibition of vasodilatation in rat aorta // Kidney Int. 2001. Vol. 60, N 3. P. 1088-1096.

34. Wang S., Datta S., Segal S. Pregnancy alters adrenergic mechanisms in uterine arterioles of rats // Anesth. Analg. 2002. Vol. 94, N5. P. 1304-1309.

35. Whitney E., Menice C., Yeh J. et al. Renal artery smooth muscle is refractory to contraction by angiotensin II // J. Surg Res. 1996. Vol. 61, N 2. P. 307-310.

36. Zhang R., Rodrigues B., MacLeod K. Lysophosphatidylcholine potentiates phenylephrine responses in rat mesenteric arterial bed through modulation of thromboxane A2 // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006. Vol. 317, N 1. P. 355-361.

Статья поступила в редакцию 15 октября 2009 г.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.