CC BY
20
DOI: 10.24412/2074-5036-2023-2-54-59 УДК: 619:616.937.5
Ключевые слова: СБ4-лимфоциты, СБ8-лимфоциты, рецепторы, BLV, лейкоз, овцы Key words: CD4-lymphocytes, CD8-lymphocytes, receptors, BLV, leukemia, sheep
Григорьев А. Г., Ездакова И. Ю., Капустина О. В., Белоусова Р. В.
МОДУЛЯЦИЯ РЕЦЕПТОРОВ Т-КЛЕТОК КРОВИ ОВЕЦ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
MODULATION OF SHEEP BLOOD T-CELL RECEPTORS UNDER EXPERIMENTAL INCENTATION WITH CATTLE LEUKEMIA VIRUS
ФГБНУ Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук Адрес: 109428, Россия, г. Москва, Рязанский просп., 24, корп. 1
Federal State Budget Scientific Institution Federal Scientific Centre VIEV (FSC VIEV) Address: 24, Ryazan ave., 1, Moscow, 109428, Russia
Григорьев Артём Геннадьевич, аспирант. E-mail: griartis.viev@yandex.ru
GrigorievArtem Gennadievich, Post-Graduate student. E-mail: griartis.viev@yandex.ru Ездакова Ирина Юрьевна, д. б. н., заведующая лабораторией иммунологии. E-mail: ezdakova.i@viev.ru Ezdakova Irina Yuryevna, Doctor of Biological Sciences, Head of Laboratory of Immunology.
E-mail: ezdakova.i@viev.ru Капустина Ольга Владимировна, д. в. н., старший научный сотрудник лаборатории иммунологии.
E-mail: оlgakapustina2010@yandex.ru Kapustina Olga Vladimirovna, Doctor of Veterinary Sciences, Senior Researcher of the Laboratory of Immunology. E-mail: olgakapustina2010@yandex.ru Белоусова Раиса Васильевна, доктор ветеринарных наук. E-mail: rvbelousova@mail.ru Belousova Raisa Vasilyevna, Doctor of Veterinary Sciences. E-mail: rvbelousova@mail.ru
Аннотация. Вирус лейкоза крупного рогатого скота (BLV) вызывает неопластическую инфекцию, которая нарушает многие функциональные звенья иммунной системы. Т-лимфоциты являются одними из важнейших лейкоцитов, которые играют центральную роль в адаптивном иммунном ответе. На сегодняшний день исследования, направленные на изучение рецепторной активности Т-клеток при лейкозе, немногочисленны. В связи с этим данная работа была направлена на идентификацию рецепторной активности Т-клеток при длительном персистирова-нии BLV по форме локализации и степени экспрессии у овец разных возрастных групп. Результаты исследований показали, что в первую неделю после экспериментального заражения вирусом у животных обеих групп наблюдается супрессия CD4- и СБ8-лимфоцитов. Стабильное увеличение СБ4Ы811-клеток на второй год болезни у взрослых овец является признаком высокой напряженности Т-клеточного звена иммунитета под действием вируса и коррелирует с частой гибелью животных в этой группе. Волнообразное изменение экспрессионной активности CD4-рецептора Т-клеток в первый год у первой группы и в течение всего эксперимента у второй группы животных связано с адаптационными механизмами организма к вирусу в процессе хронизации болезни. Сохранение пролиферативной активности цитотоксических клеток при одновременном преобладании CD8low-лимфоцитов на протяжении всего опыта у взрослых и молодых овец говорит об анергии клеток и блокировке их цитотоксических функций. Установленные высокие значения форм-локализации рецептора CD4 «петч/эндоцитоз» свидетельствует об активной презентации вирусных белков Т-хелперам и могут являться индикатором инфекционного процесса, по которому можно судить о степени воздействия вируса на клетки мишени. Полученные данные могут помочь приблизиться к пониманию особенностей течения болезни у животных в процессе иммуногенеза и использовать данный алгоритм для дальнейшего изучения рецепторной активности Т- и В-клеток в процессе длительной хронической инфекции.
Summary. The bovine leukemia virus (BLV) causes a neoplastic infection that disrupts many functional links of the immune system. T-lymphocytes are among the most important white blood cells that play a central role in the adaptive immune response. To date, studies aimed at studying the receptor activity of T cells in leukemia are few. In this regard, this work was aimed at identifying the receptor activity of T cells during prolonged persistence of BLV by the form of localization and degree of expression in sheep of different age groups. The results of the studies showed that in the first week after experimental infection with the virus, CD4- and CD8-lymphocyte suppression was observed in animals of both groups. A stable increase in CD4 high cells in the second year of the disease in adult sheep is a sign of high tension of the T-cell link of immunity under the influence of the virus, and correlates with the frequent death of animals in this group. The wave-like change in the expression activity of CD4-receptor T cells in the first year in the first group and throughout the experiment in the second group of animals is associated with the adaptation mechanisms of the body to the virus during the chronization of the disease. The preservation of the proliferative activity of cytotoxic cells with the simultaneous
predominance of Cd8 lymphocytes throughout the entire experiment in adult and young sheep indicates anergy of cells and blocking of their cytotoxic functions. The established high values of the CD4 receptor localization "petch/endocytosis" indicates the active presentation of viral proteins to T-helpers and can be an indicator of the infectious process, by which one can judge the degree of exposure of the virus to target cells. The obtained data can help to get closer to understanding the features of the course of the disease in animals during immunogenesis and use this algorithm to further study the receptor activity of T and B cells during long-term chronic infection.
Введение
Степень изменчивости распределения рецепторов на поверхности мембраны лимфоцитов варьируется в зависимости от различных биологических факторов. Особый интерес представляет модуляция рецепторов под действием вирусов, которые могут влиять на развитие, межклеточные взаимодействия, контроль адгезии и многие другие важные функции лимфоцитов [1, 2, 3]. В связи с этим, понимание этих процессов может иметь особе значение в иммунодиагностике.
Вирус лейкоза крупного рогатого скота вызывает энзоотический лейкоз у овец и коров, очень схожий с вирусом Т-клеточного лейкоза человека 1 типа (НГЪУ-1). Особенностью этой болезни является пожизненное персистирование вируса в В-клетках хозяина, которая может проявляться либо лимфо-цитозом с высоким процентом В-лимфоцитов, либо оставаться клинически скрытой на протяжении всей жизни животного [5].
Известно, что провирус лейкоза КРС, помимо В-клеток, может регистрироваться во всех субпопуляциях Т-клеток [11]. Т-клетки являются важной популяцией лимфоцитов, играющие роль в адаптивной иммунной системе. CD4-лимфоциты отвечают за широкий спектр функций, в частности, регулирование иммунного ответа, тогда как CD8-лимфоциты являются основными эффекторными клетками, которые способны осуществлять цитолитические, противоопухолевые и противовирусные функции.
На сегодняшний день литературные данные по изучению пролиферативной и рецепторной активности Т- и В-лимфоцитов при лейкозе овец немногочисленны и противоречивы. В данной работе охарактеризованы формы локализации и уровни экспрессии дифференцировочных кластеров лимфоцитов у овец при лейкозе в течение двух лет после экспериментального заражения BLV.
Материалы и методы
В эксперименте использовали BLV-отрица-тельных овец романовской породы, которые были разделены на две группы: взрослые в возрасте 6-7 лет (5) и молодые в возрасте 3-4 месяца (5). Животным опытных групп внутримышечно в наружную поверхность бедра вводили кровь BLV-положительной коровы (5 мл), которую выявили по результатам гематологических исследований и реакции иммунодиффузии (РИД) с использовани-
ем набора для серологической диагностики лейкоза КРС производства Курской биофабрики. Выделенные лимфоциты из крови овец исследовали на 1-е, 3-е, 5-е, 7-е, 10-е, 12-е, 14-е и 20-е сутки иммунного ответа, а также на 7-й, 15-й, 18-й, 21-й, 26-й и 31-й месяц иммунного ответа. Для идентификации клеток использовали метод иммунопероксидазного окрашивания (ИПО) с применением моноклональ-ных антител (ООО «Сорбент») к поверхностным CD-маркерам Т-лимфоцитов человека. В качестве вторичных антител использовали пероксидазный конъюгат овечьих IgG к Ig мыши в разведении 1:400 в ЗФР-БСА буфере рН 7,2-7,4. В качестве субстрата использовали 3-амино-9-этил карбазол [6].
Статистическую обработку данных проводили с помощью программ Excel (Microsoft, USA) и Statistica 8.0.
Результаты и обсуждение
В результате экспериментального заражения в 1-й группе овец на 2-й год после начала опыта пало 3 овцы, а во 2-й группе 1 овца. После наблюдаемой недельной супрессии с момента экспериментального заражения было установлено первое увеличение числа CD8-лимфоцитов на 12-е (36,4±5,0%) сутки и далее на 18-й (49,0±3,0%) и 31-й (32,0±6,4%) месяц иммунного ответа у взрослых овец (фон 30,0±1,3%), тогда как у молодых животных увеличение CD8-клеток в последующие 2 года болезни ни разу не превысило фоновые значения (фон 35,0±0,2%). Существенных изменений в увеличении количества CD4-лимфоцитов у взрослых и молодых овец не установлено.
Как видно из данных таблицы 1, независимо от возраста животных, вирус блокирует пролиферацию Т-клеток у овец обеих групп, что говорит о анергии этих клеток в первую неделю инфекционного процесса. Подавление пролиферативной активности CD4- и CD8-лимфоцитов может происходить за счет активации и бесконтрольной экспрессии ингибитор-ных рецепторов (IRs) типа PD-1, CTLA-4, Lag-3 и Tim-3 после встраивания вируса в геном клетки. Эти рецепторы передают отрицательные костимулиру-ющие сигналы, которые блокируют оптимальные эффекторные ответы Т-лимфоцитов. Известно, что процесс может усугубляться за счет функциональной комбинации PD-1 и IL-10, тем самым напрямую влияя на функции и дифференцировку CD8-клеток [8]. Уменьшение числа Т-клеток может быть след-
Таблица 1
Динамика изменений пролиферативной активности Т и В-лимфоцитов
в процессе иммунного ответа
Срок/ п= Овцы
1 группа Срок/п 2 группа
СD4 CD8 CD5 СD4 CD8 CD5
Фон (п=5) 35,0±0,3% 30,0±1,3% 6,0±0,6% Фон (п=5) 40.0±2,5% 35,0±0,2% 7,1±0,5%
1-е (п=5) 12,4±2,6% 25,5±1,9% 20,0±1,7% 1-е (п=5) 12,0±1,8% 21,2±1,2% 8,4±1,9%
3-е (п=5) 7,0±1,0% 13,0±2,5% 7,0±2,0% 3-е (п=5) 3,0±0,5% 6,0±1,7% 5,2±3,3%
5-е (п=5) 4,0±0,9% 6,4±2,0% 8,0±0,9% 5-е (п=5) 2,0±0,6% 14,0±2,0% 3,2±0,8%
7-е (п=5) 3,0±0,8% 6,4±1,3% 6,0±1,4% 7-е (п=5) 8,0±2,6% 2,4±0,7% 8,4±2,5%
10-е (п=5) 22.0±6,7% 11,0±2,6% 6,0±1,4% 10-е (п=5) 21,0±6,0% 7,0±0,8% 8,4±2,5%
12-е (п=5) 16,0±6,2% 36,4±5,0% 29,2±6,3% 12-е (п=5) 9,2±3,0% 18,0±4,3% 20,0±5,6%
18 м (п=2) 19,5±5,2% 49,0±3,0% 13,5±4,0% 18 м (п=4) 8,5±2,5% 14,2±3,1% 17,2±3,5%
21 м (п=1) 22,5±3,9% 23,0±2,2% 28,0±2,0% 21 м (п=4) 39,5±4,0% 24,0±2,0% 31,0±1,3%
26 м (п=1) 15,4±4,2% 18,0±0,8% 12,1±2,2% 26 м (п=4) 29,0±2,0% 27,0±1,0% 9,3±4,4%
31 м (п=1) 6,0±1,2% 32,0±6,4% 10,0±2,0% 31 м (п=3) 7,0±1,8% 18,0±4,4% 10,0±2,0%
ствием быстрого размножения и обширного распространения возбудителя по организму в первую неделю болезни.
После супрессии Т-клеточного звена первое незначительное увеличение CD4-лимфоцитов у обеих групп овец после экспериментального заражения установлено на 10-е сутки (22,0±6,7% и 21,0±6,0% соответственно). К 18-му месяцу у взрослых овец число CD8-клеток составляло 49,0±3,0%, тогда как у молодых овец эти изменения происходили только к 26-му месяцу эксперимента (27,0±1,0%). Замедление ответа со стороны цитотоксических клеток в этот период может быть обусловлено как заражением вирусом в пререпродуктивную стадию развития, так и представлением вирусных пептидов CD4-лимфоцитам антигенпрезентирующими клетками. Небольшая пролиферативная активность CD4-лимфоцитов у взрослых животных зарегистрирована на 21-й месяц иммунного ответа (22,5%). У молодых овец количество Т-хелперов на 21-й и 26-й месяц на 17% и 14% больше, чем у взрослых в этот же период [1, 2].
На 7-е и 12-е сутки, а также с 20-х суток по 31-й месяц иммунного ответа у обеих групп овец наблюдается преобладание высокорецепторных CD4-лимфоцитов (CD4hlsh) над низкорецепторны-ми (CD4low). Известно, что с помощью показателей CDlow и CDhlsh устанавливают степень экспрессии конкретных белковых молекул на поверхности клетки, что позволяет отслеживать состояние лимфоцитов как в норме, так и при патологии [12]. Экспериментальные данные показывают, что вирус лейкоза оказывает значительное воздействие на Т-хелперы 7-го по 31-й месяцы болезни путем усиления экспрессии их CD4 молекул, чем на цитотоксические
клетки. Так, с 20-х суток и по 31-й месяц иммунного ответа у взрослых овец наблюдается постепенное увеличение CD4hlsh лимфоцитов с 57% до 75%, тогда как у молодых овец динамика CD4hlsh клеток имеет волнообразный характер и варьируется от 30% до 57% (рис. 1).
Одновременно с этим, у животных обеих групп наблюдаются низкие значения CD8Ыsh лимфоцитов (рис. 2), однако, динамические изменения имеют схожие тенденции. Так, у взрослых овец увеличение числа CD8hlsh установлено в первый месяц на 7-е (67%) и 20-е (67%) сутки, а также на 15-й (76%) и 31-й (85%) месяц иммунного ответа (фон 32%). У молодых овец увеличение числа CD8hlsh зарегистрированы только на 15-й (66%) месяц после экспериментального заражения (фон 48%). Результаты эксперимента показывают, что, несмотря на сохранение пролиферативной активности CD8-лимфоцитов в процессе болезни, у молодых овец на протяжении всего эксперимента экспрессия CD8-рецептора находится на низком уровне, что может свидетельствовать о недостаточном цитотоксическом ответе вследствие потери эффекторной функции и возникновения анергии под влиянием постоянной хронической стимуляции вирусным антигеном. Данное супрессивное состояние наблюдается при многих хронических вирусных инфекциях [12].
Установлено, что у взрослых животных вирус инициирует высокую частоту изменчивости форм локализации CD4 рецепторов (ФЛР) (рис. 1): «петч/ эндоцитоз» (пятна), «кэп» (колпачок) и «шеддинг» (слущивание рецепторов).
У первой группы овец высокие значения показателя ФЛР-CD4 «петч/эндоцитоз» зарегистрированы с 14-х по 20-е сутки и с 7-го по 31-й месяц
CD4+
80 70 60 50 40 30 20 10 0
II -Л—"
\ *
ж/ / /
Ч\ \ /у
♦
фон 1-е 3-е 5-е 7-е 10-е 12-е 14-е 20-е 15 мес 18 мес 21 мес 26 мес 31 мес ••••♦••• 1 группа (low) —■— 1 группа (high)
А
ф
:0
щ
л
X 9 »
Щ
Ш I
-л
ш
т
h * О
ж #$
.-.г 'л.
йЬ
* Т'
ё':
7
ф
1 €
ф« в>
<й
■М
Рис. 1. Динамика изменения экспрессии CD4 на Т-хелперах у взрослых овец в процессе иммунного ответа (х400): А - CD4hlgh на 20-е сутки; Б - CD4hlgh на 31-й месяц
Рис. 2. Уровень экспрессии CD8 на цитотоксических клетках взрослых и молодых овец в процессе иммунного ответа
1А 1Б ' й
2А О 2Б
1В ' Щ 1Г
2В и 2Г ш • ^^^
Рис. 3. Формы локализации СD4 в процессе инфекционного процесса (х1000). Слева направо: 1А - «ринг» CD4low, 1Б - «петч/эндоцитоз» CD4low, 1В - «кэп» CD4low, 1Г - «шеддинг» CD4low. 2А - «ринг» CD4hlgh, 2Б - «петч/эндоци-тоз» CD4hlgh, 2В - «кэп» CD4hlgh, 2Г - «шеддинг» CD4hlgh
иммунного ответа, в то время как показатель ФЛР-CD8 «петч/эндоцитоз» в этот же период менялся незначительно. У второй группы овец ФЛР-CD4 «петчинг/эндоцитоз» так же начинает изменяться с 14-х по 20-е сутки и с 7-го по 31-й месяц иммунного ответа, а ФЛР-CD8 «петчинг/эндоцитоз», наоборот, становится несколько выше показателей взрослых животных (рис. 4). Установлено, что у взрослых овец изменчивость ФЛР CD4 «петч/эндоцитоз» в первый и второй год болезни выше (29-44%), чем в CD8-лимфоцитах (8-32%), в то время как у молодых овец изменчивость показателей ФЛР-CD4 и ФЛР-CD8 «петч/эндоцитоз» варьируется примерно в тех же диапазонах (20-67% и 19-70%, соответственно). В последующие 2 года уменьшение ФЛР-CD8 «петч/ эндоцитоз» у взрослых овец в процессе болезни, возможно, связана с образованием CD8+ Т-клеток памяти, которые сформировались в первый месяц иммунного ответа на вирусную инфекцию, и у которых снижена модуляция остальных форм локализации. Регистрируемые стабильно высокие значения ФЛР-CD4 «петч/эндоцитоз» могут свидетельствовать о постоянном воздействии вирусного АГ на рецепторы наивных CD4-лимфоцитов. В ходе данного процесса уже активированные Т-хелперы, по аналогичному механизму при HIV, могут представлять на своей поверхности вирусные пептиды другим антиген-специфическим клеткам [4], что может объяснять преобладание этой формы. Наблюдаемое доминирование и варьирование числа «рингов» у CD8-лимфоцитов в течение всего опыта у обеих групп животных (47-60% и 28-83%, соответственно), как и в случае с В-1 лимфоцитами при
хроническом лимфолейкозе человека (CLL) [13] и с CD4-лимфоцитами при вирусном иммунодефиците (HIV) может быть связано и с нарушением баланса холестерола и сфинголипидов в мембране клеток, способствуя текучести цитоплазматической мембраны и нарушению локализации рецепторов в результате неправильного расщепления белка связывающего регуляторный элемент стерола (SREBP) [9]. Задействование такого рода механизма может быть связано с установленной нами низкой экс-прессионной активностью CD8-рецептора на поверхности цитотоксических клеток, которые теряют нормальные эффекторные функции под действием вируса. При этом мы не исключаем, что «ринг» бимодальный показатель, который может характеризовать либо состояние физиологического равновесия различных ФЛР (фон), либо являться индикатором рецепторной активности во время болезни, так как при высоких значениях ФЛР-CD4- и CD8-ринг закономерно уменьшаются другие формы локализации, что подтверждается слабыми и отрицательными коэффициентами корреляции.
Параллельно с этим наблюдали изменения количества «кэп» на CD4-клетках и «шеддинг» на CD8-клетках у взрослых овец (рис. 4). После экспериментального заражения количество ФЛР-CD4 «кэп» уже с 10-х суток и по 31-й месяц иммунного ответа значительно уменьшается (фон 28%) и начинает варьироваться в пределах 4-9% (4-6% у молодых животных, соответственно), тогда как ФЛР-CD4 «шеддинг» (фон 19%) варьируется в пределах 4-18% (2-33% у молодых животных). Известно, что «кэп» и «шеддинг» являются метаболически связанными процессами
[7, 10]. Действительно, регистрируемые изменения в этот период происходят одновременно, а между показателями ФЛР-CD4 «кэп» и ФЛР-CD4 «шеддинг» у взрослых овец установлена положительна функциональная связь (i=0,6-1,0). Снижение ФЛР-CD4 «кэп» с 10-х суток по 31-й месяц может быть обусловлено высокой скоростью распределения комплекса рецепторов с фрагментами вирусных белков между «петч/ эндоцитоз» и «кэп», чем у CD8, а также более низким количеством связанного АГ. В Т-хелперах «шеддинг» не сопровождается образованием большого количества «кэпов», как, например, в В-1 клетках, что может быть напрямую связано с особенностями влияния вируса лейкоза конкретно на этот рецептор, т.к. механизм изменчивости CD-антигенов при различных лимфопролиферативных заболеваниях довольно вариабельный, что имеет особое значение в диагностике и классификации подобных патологических состояний. По-видимому, увеличение «шеддинга» на второй год экспериментального заражения может сопровождаться активным процессом переноса вирусных белков или фрагментов генетической информации, что может являться причиной инфицирования соседних лимфоцитов без непосредственного межклеточного контакта [7].
Заключение
В результате проведенных исследований было установлено, что в первую неделю после экспериментального заражения в сравнении с фоновыми значениями количество CD4-лимфоцитов у взрослых и молодых овец снижается почти в 12 и 20 раз, а CD8-лимфоцитов в 5 и 12,5 раз соответственно, что говорит о сильном угнетении Т-клеточного звена иммунитета. Подобного рода механизм может быть связан с аномальной экспрессией ингибиторных рецепторов после встраивания вируса в геном клетки, что приводит к блокировке функций Т-клеток и последующих стадий их дифференцировки.
Волнообразное изменение экспрессионной активности от CD4low к CD4high у обеих групп овец в первый месяц иммунного ответа, а также на второй год у молодых животных может быть связано с адаптационными механизмами организма к вирусу в процессе хронического течения болезни.
При лейкозе крупного рогатого скота у овец двух групп, несмотря на сохранение пролиферативной активности цитотоксических Т-лимфоцитов в первый и второй год болезни, наблюдается преобладание CD8low клеток на протяжении всего эксперимента, что свидетельствует о снижении цитотоксической функции в процессе лейкоза крупного рогатого скота.
CD4- и CD8-лимфоциты обладают большой вариабельностью всех форм локализации рецепторов при лейкозе овец двух групп. Увеличение значений
ФЛР-CD4 «петч/эндоцитоз» у взрослых и молодых овец в 2 раза на 15-й месяц иммунного ответа в сравнении с фоном может быть результатом активной презентации вирусных белков Т-хелперам. Такая рецепторная активность может служить одним из индикаторов инфекционного процесса, по которому можно судить о степени воздействия вируса на клетки мишени.
Таким образом, по-видимому, Т-хелперы играют одну из ключевых ролей в патогенезе лейкоза и являются, наряду с В-лимфоцитами, важной клеточной популяцией, через которую происходит поддержание репликационного цикла вируса лейкоза.
Список литературы
1. Ездакова И. Ю. Характеристика В1-клеток в процессе экспериментального лейкомогенеза / И. Ю. Ездакова, О. В. Капустина, М. И. Гулюкин, Т. В. Степанова // Вопросы вирусологии. Т. 65, №1, 2020. С. 35-40. DOI: 10.36233/0507-4088-2020-65-135-40
2. Ездакова И. Ю. Модуляция Ig-рецепторов В-клеток крови крупного рогатого скота / И. Ю. Ездакова, О. В. Капустина, Е. В. Попова // Морфология. 2019. Т. 156. №6. С. 93-94.
3. Капустина О. В. Иммунофенотипирование и морфологические изменения циркулирующих лимфоцитов крупного рогатого скота в процессе культивирования ex vivo и лейкомогенеза / О. В. Капустина, И. Ю. Ездакова // Гены и клетки. 2019. Т. 14. № 3. С. 81-82.
4. Alexandra S. M. Cytotoxic CD4+ T-cells during HIV infection: Targets or weapons? / S. M. Alexandra, P. C. Fedeiico, A. M. Liliana, M. T. Rugeles, P.A. Velilla // Journal of Clinical Virology. 2019. Vol. 119. P. 17-23. https://doi.org/10.1016/jjcv.2019.08.004
5. Bai L. Mapping of CD4+ T-cell epitopes in bovine leukemia virus from five cattle with differential susceptibilities to bovine leukemia virus disease progression / A. Sn. Takeshima, M. Sato et al. // Virol. 2019. J. 1. № 157 https://doi.org/10.1186/s12985-019-1259-9
6. Ezdakova I. Yu. Identification of bovine blood b cells witch the immunoperoxidase straining method / I. Yu. Ezdakova // Russian Agricultural Science. 2018. Т. 14. P. 361-364.
7. Emanuele C. Shedding microvesicles: artefacts no more / C. Emanuele, R. Gabriella, M. Jacopo // Trends in Cell Biology. 2009. Vol. 19, I. 2. P 43-51. https://doi.oIg/10.1016/j.tcb.2008.11.003.
8. Laura M. CD8 T Cell Exhaustion During Chronic Viral Infection and Cancer / M. Laura, S. Mohamed, J. Wherry // Annual Review of Immunology. 2019. Vol. 37. P. 457-495. https://doi. org/10.1146/annurev-immunol-041015-055318.
9. Naeim F. Membrane receptors and their redistribution in lymphoproliferative disorders / F. Naeim, K. Bergmann, R. Gatti // Blood. 1979. T. 54, № 3. Р. 648-658. PMID: 465733.
10. PavanA. Patching and capping of LFA-1 molecules on human lymphocytes / G. Lucania, T. Sansolini et al. // Histochemistry. 1992. Vol. 98. P. 253-258. https://doi.org/10.1007/BF00271039.
11. Panei C. J. Estimation of bovine leukemia virus (BLV) proviral load harbored by lymphocyte subpopulations in BLV-infected cattle at the subclinical stage of enzootic bovine leucosis using BLV-CoCoMo-qPCR / C. J. Panei, Sn. Takeshima, T. Omori et al. // BMC Vet Res. 2013. Т. 9, № 95 https://doi.org/10.1186/1746-6148-9-95.
12. Weiqin J. Exhausted CD8+T Cells in the Tumor Immune Mcroenvironment: New Pathways to Therapy/ J. Weiqin, H. Yinjun, H. Wenguang, W. Guosheng, Z. Xile et. Al // Frontiers In Immunol 11:622509. doi: 10.3389/fimmu.2020.622509.
13. Yavasoglu I. Cholesterol Levels in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia / I. Yavasoglu, S. Gokhan, Y. Fergun, A. Sermin, A. Gulsum et. al // Journal of the National Medical Association. 2017. Vol. 109. I. 1. P 23-27. https://doi.org/10.1016/j. jnma.2016.11.006.
