CC BY
105
УДК 615.272.3.056:616-006.04
I. D. Treshalin, Е. R. Pereverzeva, D. A. Bodyagin, Е. P. Mirchink, V. М. Bukhman
MODIFICATION OF ANTITUMOR DRUGS TOXICITY AS A METHOD OF ENHANCING ANTICANCER CHEMOTHERAPEUTIC EFFICACY
Cause Institute of New Antibiotics RAMS, Moscow
ABSTRACT
This work is devoted to screening new compounds to minimize the toxicity of well-known anticancer drugs. Combined treatment of experimental animals by cytostatics and polydan, betaleykin, ephazol, dikarbamine, ascorbygen resulted in decreasing the hemato-, nephro- and gastrointestinal toxicity. Ascorbygen prevented the development of alopecia, induced by cyclophosphamide. Administration of ephazol increased the antitumor activity of cyclophosphamide.
Key words: antitumor chemotherapy, toxicity, polydan, betaleykin, ephazol, dikarbamine, ascorbygen.
И. Д. Трещалин, Э. P. Переверзева, Д. А. Бодягин, E. П. Мирчинк, В. М. Бухман
МОДИФИКАЦИЯ ТОКСИЧНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ КАК МЕТОД ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИМИОТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
ГУ НИИНА им. Г. Ф. Гаузе РАМН, Москва.
РЕЗЮМЕ
Работа посвящена исследованию возможности использования новых соединений для уменьшения токсичности известных противоопухолевых препаратов. Использование комбинаций цитостатиков с полиданом, беталей-кином, эфазолом, дикарбамином и аскорбигеном в экспериментах на лабораторных животных приводило к снижению гемато-, нефро- и гастроинтестинальной токсичности. Введение аскорбигена препятствовало развитию алопеции, вызываемой циклофосфамидом. Применение эфазола приводило к усилению противоопухолевой активности циклофосфамида.
Ключевые слова: противоопухолевая химиотерапия, токсичность, полидан, беталейкин, эфазол, дикарба-мин, аскорбиген.
Многообразие путей фармакологического воздействия на различные этапы и звенья опухолевого процесса, а также побочные эффекты противоопухолевых препаратов позволяют говорить, что лекарственное лечение больного злокачественным новообразованием давно вышло за рамки только химиотерапии опухолей. Интенсификация химиотерапии поставила перед фармакологией задачу разработки новых средств, смягчающих токсические эффекты цитостатической терапии, и препаратов, корригирующих иммуномета-болические нарушения в организме онкологических больных [1].
В настоящее время в клиническую практику вошел ряд препаратов различного происхождения (природные соединения, их синтетические дериваты или
аналоги) и механизма действия — модификаторов биологических реакций (МБР), направленно обеспечивающих переносимость цитостатиков.
МБР обладают способностью изменять биологическую реакцию организма на опухоль таким образом, что это оказывает благоприятное терапевтическое действие. Оно может определяться:
1) повышением иммунной защиты путем применения агентов в качестве эффекторов или медиаторов ответа на опухоль;
2) усилением противоопухолевого иммунитета путем повышения или восстановления эффекгорного механизма либо путем подавления тех компонентов реакции организма на опухоль, которые могут снижать противоопухолевое действие;
88 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
3) усилением прямого противоопухолевого ответа при правильно подобранной дозировке препарата по-путем модификации опухолевых клеток или их анти- лучить выраженный терапевтический эффект без ток-генов, что может стимулировать индивидуальный им- сикоза. Вследствие различия в механизмах транспорта мунный противоопухолевый ответ организма; высоких доз метотрексата и терапевтических доз лей- 4) снижением трансформации и/или усилением коворина удается избирательно защитить нормальные дифференцировки (созреванием опухолевых клеток); ткани организма при сохранении противоопухолевого 5) повышением способности нормальных клеток эффекта высоких доз метотрексата. организма переносить повреждающее действие цито- Лейковорин используется также для биохимичес-статических препаратов в процессе противоопухоле- кой модификации действия фторпроизводных пири-вой терапии; мидина (фторурацил, фторафур), повышая их проти- 6) модификацией других биологических аспектов воопухолевую активность за счет изменения метабо-взаимоотношений организма и опухоли, например лизма этих препаратов. торможением процесса метастазирования. Возможность применения антрациклинов лимити- Наиболее частым осложнением цитостатической руется их кардиотоксичностью. Использование в каче-терапии является угнетение гемопоэза. В последние стве кардиопротектора препарата кардиоксан (диок-годы для борьбы с нейтропенией, осложняющей при- сипиперазил пропан гидрохлорид), снижая содержа-менение цитостатиков, стали применяться очищенные ние свободных радикалов кислорода в клетках человеческие рекомбинантные гемопоэтические фак- миокарда за счет хелирования железа, позволяет пред-торы роста — колониестимулирующие факторы упредить развитие кардиотоксичности, не снижая про-(КСФ). тивоопухолевого эффекта адриамицина [2]. Такие КСФ, как молграстим, нейпоген и грано- В настоящей статье мы приводим данные исследо-цит, широко используются в клинике для борьбы ваний некоторых новых МБР, проведенных в лабора-с нейтропенией, а также с целью предупреждения ми- тории фармакологии и химиотерапии НИИНА елосупрессии при интенсификации химиотерапии [2]. им. Г. Ф. Гаузе РАМН. Менее опасными для человека, но не менее часто Полидан, разработанный АОЗТ «ФАРМЭК», встречающимися осложнениями цитостатической хи- представляет собой натриевую соль низкомолекуляр-миотерапии являются тошнота и рвота. При использо- ной ДНК, выделенной из молок осетровых рыб [3]. вании высокоэметогенных терапевтических режимов Исследование гемостимулирующих свойств поли-они являются наиболее субъективно тягостными для дана было проведено на мышах различных линий, больных токсическими проявлениями, нередко служа- крысах Р1(АМСУ и \\^аг) и собаках породы англий-щими основанием для отказа от лечения. Введение ский бигль. в практику производных платины, вызывающих тош- Изучали влияние полидана на восстановление ноту и рвоту практически у всех больных, особенно кроветворения у мышей и крыс после применения обострило потребность в новых активных препаратах препарата циклофосфамид. для борьбы с этими явлениями. В настоящее время Циклофосфамид вводили внутрибрюшинно одно-в онкологической клинике используются такие препа- кратно мышам в дозе 200мг/кг, крысам — 100 мг/кг. раты, как навобан, зофран и китрил. Применение Полидан вводили подкожно в дозе 150мг/кг на 3, 5 этих препаратов позволяет значительно уменьшить ос- и 7-е сутки после применения циклофосфамида. У жи-трую тошноту и рвоту у 70 % больных, получающих вотных производили анализ периферической крови высокоэметогенную химиотерапию (цисплатин в дозах для оценки общего количества лейкоцитов и лейкоци-выше 100 мг/м2), и практически у всех больных, полу- тарной формулы. Исследовали костный мозг и селе-чающих менее эметогенные препараты [2]. зенку, производя подсчет клеточности костного мозга, Уропротектор уромитекан (MESNA), представля- определяя массу селезенки, ющий собой меркаптоэтансульфат, связывая акролеин, Показано, что циклофосфамид как у мышей, так предупреждает развитие акролеиновых циститов и у крыс приводил к снижению общего количества у больных, получающих ифосфамид, и является обяза- лейкоцитов периферической крови на 4-е сутки опыта тельным компонентом химиотерапии ифосфамидом. от исходной величины практически в 10 раз. Лишь Он используется также для защиты мочевыводящих к 14-м суткам эксперимента количество лейкоцитов путей у больных, получающих высокие дозы цикло- приближалось к физиологической норме, фосфамида, особенно у больных группы риска (цисти- У животных, получивших 1-ю инъекцию полидаты после применения эндоксана в анамнезе, воспали- на, в течение первых суток количество лейкоцитов тельные заболевания мочевыводящих путей, облуче- продолжало снижаться. Последующие инъекции прение таза). парата стимулировали восстановительный процесс Использование фолината кальция (лейковори- кроветворения. Максимум стимуляции показателя на) обеспечивает возможность применения высоких лейкоцитов периферической крови отмечен в период и сверхвысоких доз метотрексата, превышающих между 2-й и 3-й инъекциями полидана. Количество стандартные дозы в 200-500 раз. Лейковорин, влияя на лейкоцитов даже превысило фоновый показатель, транспорт метотрексата через клеточные мембраны, Дальнейшее колебание количества лейкоцитов прохо-уменьшает его токсическое действие, что позволяет дило в пределах физиологической нормы (рис. 1).
№3/том4/2005 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
Сутки после введения ЦФ —♦— Контроль — *- - ЦФ
ЦФ+ПОЛ
Рис. 1. Влияние полидана (ПОЛ) на цитопению у мышей, индуцированную однократным применением циклофосфамида (ЦФ)
При анализе морфологического состава периферической крови выявлено, что циклофосфамид резко снизил содержание как лимфоцитов, так и гранулоци-тов. Полидан стимулировал выброс в периферическую кровь как лимфоцитов, так и, особенно, гранулоцитов. Этот факт важно подчеркнуть в связи с тем, что у грызунов лимфоидный тип кроветворения. Следует отметить, что уже к 6-м суткам в группе, получавшей полидан, количество лейкоцитов достигло нижнего предела физиологической нормы для мышей и далее монотонно нарастало.
При подсчете кариоцитов костного мозга выявлено, что общее количество ядро содержащих клеток костного мозга у мышей, получавших полидан, неизменно превышало этот показатель у животных, получавших только циклофосфамид. На 6-е сутки опыта это различие было статистически достоверно (рис. 2), что четко согласуется с выбросом гранулоцитов в периферическую кровь.
Сутки после введеня ЦФ
♦ контроль — *- - ЦФ — ■& — ЦФ+ПОЛ
Рис. 2. Влияние полидана (ПОЛ) на клеточность костного мозга мышей после однократного применения циклофосфамида (ЦФ)
Масса селезенки у мышей и крыс, получавших полидан после применения циклофосфамида, неизменно на всем протяжении опыта была выше, чем у мышей, получавших только циклофосфамид.
Исследовано влияние полидана на динамику лейкоцитов периферической крови мышей и крыс после применения фармарубицина и цисплатина.
Выявлено, что препараты фармарубицин и циспла-тин в дозах, близких к МПД, не вызывают столь значительной цитопении, как циклофосфамид в адекватной по токсичности дозе. Это связано с их фармакологическим действием.
Для выявления возможного протекторного действия полидана препарат применяли в виде курса из 4 ежедневных введений, начиная с 1-х суток перед применением цитостатиков. В этом случае полидан не купировал развития цитопении, вызванной цитостатика-ми, однако восстановление общего количества лейкоцитов в этой группе происходило интенсивнее, чем в контрольной, получавшей один цитостатик.
Данные, полученные в экспериментах на грызунах, воспроизведены на собаках. Это особенно важно, т. к. у собак в отличие от грызунов миелоидный тип кроветворения.
Аплазию кроветворной ткани у собак вызывали пероральным введением миелосана в дозе 15 мг/кг однократно. Полидан вводили подкожно на 3-е и 7-е сутки после применения миелосана в разовой дозе 10 и 25 мг/кг. Животные контрольной группы получали вместо полидана по 10 мл физиологического раствора натрия хлорида подкожно в те же сроки.
Определяли количество лейкоцитов периферической крови животных и содержание кариоцитов костного мозга в стернальных пунктатах.
Введение полидана существенно меняло картину токсического действия цитостатика и способствовало более быстрому восстановлению содержания костномозговых клеток и лейкоцитов.
В обеих экспериментальных группах наблюдалась менее глубокая лейкоцитопения. Тенденция к восстановлению количества лейкоцитов периферической крови отмечалась уже с 21-х суток опыта, и к концу наблюдения (49-е сутки) уровень лейкоцитов практически достигал исходного.
Аналогичная картина наблюдалась и в восстановлении содержания кариоцитов костного мозга.
Таким образом, в экспериментах на собаках подтверждено, что полидан способствует существенному ускорению восстановления показателей кроветворения при гипоплазии костного мозга, вызванной миелосаном.
В настоящее время препарат широко применяется в онкологической клинике.
Беталейкин (рекомбинантный интерлейкин-1 бета человека) разработан в ГосНИИ особо чистых биопрепаратов. Определение количественных характеристик токсикомодифицирующего действия беталейкина в отношении 5-фторурацила показало, что беталейкин значительно снижает токсичность последнего. Так, предварительное 5-кратное введение беталейкина
в дозе 10 тыс. ЕД/мышь повышало величину однократной ЛД50 5-фторурацила с 320 до 480 мг/кг (в 1,5 раза). При курсовом 5-кратном ежедневном введении 5-фторурацила суммарная ЛД50 составила 150 мг/кг. 5-кратное введение беталейкина в дозе 10 тыс. ЕД/мышь за час до введения ежедневной дозы 5-фторурацила повысило величину ЛД50 5-фторурацила до 250 мг/кг (в 1,67 раза). 5-кратное ежедневное введение беталейкина в дозе 10 тыс. ЕД/мышь несколько увеличивало содержание кариоцитов костного мозга и эритроцитов в периферической крови, не оказывая влияния на содержание лейкоцитов и тромбоцитов. Как курсовое, так и однократное применение 5-фторурацила приводило к глубокой тромбоцитопении на 10-13-е сутки эксперимента. Восстановление этого показателя наступало к 22-му дню. Превентивное введение беталейкина перед 5-фторурацилом позволяло предупредить развитие тромбоцитопении, а количество лейкоцитов оставалось на нижнем пределе физиологической нормы и быстро восстанавливалось до исходного уровня. Защитный эффект беталейкина проявился также в отношении кариоцитов костного мозга.
Выявленный эффект снижения токсичности 5-фторурацила при комбинировании его с беталейки-ном неизбежно ставит вопрос о сохранении его противоопухолевой активности. Исследование влияния беталейкина на противоопухолевую активность 5-фторурацила проведено на мышах с внутрибрюшин-но привитым лейкозом Р388. Терапию 5-фторурацилом начинали через 24 ч с момента прививки опухоли. Показано, что 5-фторурацил вызвал увеличение средней продолжительности жизни животных (УПЖ) на 154 %; беталейкин — на 107 %; беталейкин в комбинации с 5-фторурацилом — на 127 %. Исследование, проведенное на мышах с подкожно привитой аденокарциномой молочной железы (штамм АК755), показало, что комбинированное применение беталейкина с 5-фторурацилом не снижало противоопухолевой активности последнего по критерию ТРО (%). Различий в противоопухолевой активности 5-фторурацила и комбинации его с беталейкином не наблюдалось также и по критерию увеличения средней продолжительности жизни подопытных животных по сравнению с контролем. Таким образом, показано, что беталейкин в сочетании с 5-фторурацилом снижает токсичность последнего, не уменьшая противоопухолевой активности.
Эфазол, синтезированный И. А. Ефименко и со-авт. в лаборатории координационной химии ИОНХ им. Курнакова РАН, представляет собой комплексное соединение хлористого палладия (И) с гидрохлоридом эфедрина: 1-фенил-(2-метилам-моний) пропанол-1-те-трахлорпалладиевокислый [4].
Нами было показано, что эфазол, как и полидан, стимулирует восстановление кроветворения после применения циклофосфамида, усиливая репарацию клеток костного мозга и лимфоидных органов.
Поскольку циклофосфамид является радиомиме-тиком, представляло интерес изучить влияние эфазола
на интенсивность повреждений нормальных тканей, вызванных ионизирующим излучением. Показано, что эфазол проявляет радиомодифицирующую активность и защищает нормальные ткани организма млекопитающих от ионизирующего излучения. Фактор изменения дозы (ФИД) возрастает при снижении мощности дозы облучения и увеличении количества фракций и достигает 1,48.
Выявлено, что эфазол, примененный после облучения или цитостатиков, усиливает миграцию стволовых клеток крови и хоминг-эффект (образование эндоколоний), что приводит к более быстрому восстановлению кроветворения и иммунитета.
Получены данные о разнонаправленном действии эфазола на нормальные и опухолевые клетки. Так, внутривенное применение эфазола в дозе 15 мг/кг в сочетании с локальным облучением животных с развившимися (около 1 см3) радиорезистентными экспериментальными опухолями (аденокарцинома молочной железы мышей АК755, рак легкого мышей РЛ67, карцинома Эрлиха штамм ЕЛД) значительно повышает терапевтический эффект облучения вплоть до полного исчезновения первичного опухолевого узла (рис. 3).
Препарат прошел первую фазу клинических испытаний.
ж—■
^9 • ф
Шг % А ^ #
■■ и 3 & —1 "1Ьг- 7&— —2Ь—
% А 1
Сутки после облучения
..♦ Контроль - « - Облучение —А- Обл+эфаз
Рис. 3. Влияние эфазола (эфаз) на противоопухолевый эффект локального облучения (обл) (мыши с опухолью рак легкого — штамм РЛ67)
Дикарбамин — 4-[1Ч-(2-(имидазол-4-ил)этил)кар-бамоил] масляной кислоты синтезирован В. Е. Небольсиным и соавт. в Московском институте тонкой химической технологии им. М. И. Ломоносова. Лекарственная форма разработана компанией РНАЯ-МЕЖЕЯРИКЕЗ [5].
В исследованиях на мышах и крысах нами показано, что ежедневное 5-кратное введение дикарбамина в разовой дозе 500 мкг/кг перед циклофосфамидом, примененным однократно в градиенте доз, достоверно увеличивает ЛД50 циклофосфамида на 50 мг/кг, МПД — на 100 мг/кг. При этом гибель животных наступает в срок, характерный для кишечной токсичности, пик гематотоксической гибели отсутствует (рис. 4).'
количество
павших
1 " 1
! ■ I
і
3456789 10
Сутки после введения ЦФ | -Ц4> н -ЦФ+ ДИК
•Контроль ■
■ЦФ
10 13 17 21
Сутки после введения ЦФ
А Дикарб+ЦФ+Дикарб
х
к
ч
г,
%
§ I
я »»
У
а
£
ч
Ьй
Рис. 4. Количество павших мышей и сроки их гибели после однократного внутрибрюшинного введения циклофосфамида (ЦФ) в комбинации с дикарба-мином (ДИК)
Гематологические исследования показали, что ди-карбамин достоверно предупреждает развитие глубокой лейкоцитопении у животных, получивших цикло-фосфамид в дозе 200 мг/кг однократно. Последующее (после циклофосфамида) применение дикарбамина стимулирует более быстрое восстановление показателей периферической крови (гранулоциты, лимфоциты и тромбоциты), что коррелирует с его действием на клеточность костного мозга, лимфатических узлов, массу тимуса и селезенки (рис. 5 и 6).
Сутки после введения ЦФ .Дикарб+ЦФ+Дикарб —■— ЦФ
Рис. 6. Влияние дикарбамина (Дикарб) на клеточность костного мозга мышей после применения циклофосфамида (ЦФ)
600
500
400
300
<2
<
200
100
; 1 і
Р
; ■
.! І : _й шй -Й
10
13 17
21
Рис. 5. Влияние дикарбамина (Дикарб) на лейко-цитопению мышей, индуцированную циклофосфами-дом (ЦФ)
При этом восстановление органов кроветворения происходит быстрее, чем показателей периферической крови. Отсутствие в периферической крови незрелых клеточных форм позволяет предположить, что дикарба-мин не только стимулирует пролиферацию кроветворной ткани, но и ускоряет ее дифференцировку (рис. 7) [6].
Гематопротекторные свойства дикарбамина были изучены в эксперименте с курсовым введением циклофосфамида. Последний вводили 5-кратно с интервалом 5 сут (0, 5, 10, 15 и 20-е сутки опыта) в дозе 200 мг/кг.
Животные 1-й группы ежедневно в течение 5 дней перед введением циклофосфамида получали перо-
Сутки после введения ЦФ ■ Дикарб+ЦФ 0 ЦФ
Рис. 7. Влияние дикарбамина (Дикарб) на содержание незрелых форм лейкоцитов в периферической крови мышей после однократного применения циклофосфамида (ЦФ)
рально дикарбамин в разовой дозе 500 мкг/кг. Далее после каждого введения циклофосфамида (в промежутках между последующими его введениями) животные получали ежедневно дикарбамин в той же дозе.
Животные 2-й группы получали только циклофо-сфамид в дозе 200 мг/кг.
Всего было произведено по 5 введений циклофосфамида в обеих группах животных. Суммарная доза составила 1000 мг/кг.
Показано, что в группе из 15 животных, получавших только циклофосфамид, пало 9 (60 %) мышей. Первая мышь пала уже после 3-го введения препарата (суммарная доза 600 мг/кг). На 3-и сутки после 5-го введения циклофосфамида (суммарная доза 1000 мг/кг) в этой группе пало еще 2 животных. Это и послужило причиной прекращения дальнейших введений препарата. В дальнейшем гибель в этой группе животных распределялась следующим образом: 1 мышь пала на 5-й день после последнего введения
циклофосфамида; 1 — на 12-е сутки; 1 — на 15-е; 1 — на 18-е; 2 — на 24-е сутки.
В группе животных, получавших циклофосфамид на фоне введений дикарбамина, пало всего 3 (20 %) мыши из 15. Гибель распределялась следующим образом: 1 мышь пала на 18-е сутки после последнего введения циклофосфамида; 2 — на 19-е. Различие выживаемости в группах по критерию X2 достоверно при /><0,05. Гибель животных в обеих группах происходила на фоне снижения массы тела. Статистических различий по этому параметру в контрольной и подопытной группах не отмечено. Восстановления массы тела до исходного уровня в обеих группах не наблюдалось до конца эксперимента (30 сут после последнего введения циклофосфамида).
Исходный уровень лейкоцитов в обеих группах составлял 11-12 тыс. клеток в 1 мм3.
Так же, как и в ранее проведенных экспериментах, дикарбамин препятствовал развитию глубокой лейко-цитопении. Так, к 3-м суткам после первого введения циклофосфамида уровень лейкоцитов в 1-й группе практически в 2 раза превышал уровень лейкоцитов во 2-й группе. К 5-м суткам этот показатель возвращался в 1-й группе к исходному уровню, тогда как во 2-й группе он достигал лишь нижнего предела физиологической нормы. После последующих введений циклофосфамида это соотношение показателей практически сохранялось (рис. 8).
Сутки опыта
—♦—Днкарб+ЦФ ■ ЦФ
Рис. 8. Влияние дикарбамина (Дикарб) на лейко-цитопению у мышей, вызванную многократным применением циклофосфамида (ЦФ) в разовой дозе 200 мг/кг
Проведенное исследование показало, что применение дикарбамина позволяет провести 4 введения циклофосфамида в МПД с интервалом между введениями 5 сут без развития гематотоксических и других осложнений. Применение одного циклофосфамида вызвало гибель уже после 3-го введения.
Дальнейшие исследования показали, что дикарбамин обладает токсикомодифицирующей активностью в отношении не только циклофосфамида, но и комбинаций циклофосфамида с цисплатином, карбоплати-
ном и циклоплатамом. Предварительное ежедневное применение дикарбамина за 5 сут до, на фоне и в течение 5 дней после введения цитостатиков предотвращает развитие глубокой цитопении, ускоряет процесс восстановления кроветворения, несколько снижает их нефротоксическое действие и гастроинтестинальную токсичность, что позволяет сократить интервалы между повторными курсами химиотерапии [7].
Выявленные в экспериментах на лабораторных животных свойства дикарбамина подтвердились при клинических испытаниях. В настоящее время дикарбамин разрешен для широкого клинического применения.
Аскорбиген — 2-С-(индол-три-ил)метил-а-Ь-кси-ло-гекс-3-улофуранозоно-1,4-лактон (основное ин-дольное производное аскорбиновой кислоты и индолсодержащих алкалоидов горчичных масел — индолил-глюкозинолатов, образующихся, в частности, при разрушении растительной клетки) синтезирован в Институте по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе РАМН профессором М. Н. Преображенской и соавт. [8].
В исследованиях на животных нами было изучено влияние аскорбигена на кроветворение, слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта и структуру органов иммунной системы.
Оценка влияния аскорбигена на количество лейкоцитов в периферической крови показала, что в процессе его введения изменение числа лейкоцитов происходит в пределах физиологической нормы.
Применение аскорбигена внутрь в дозе 100 мг/кг после однократного внутрибрюшинного введения циклофосфамида в дозе 200 мг/кг не снижало глубины цитопении, возникающей к 3-м суткам, однако восстановление числа лейкоцитов происходило быстрее. Уже к 5-м суткам уровень лейкоцитов достигал значений нормы, а второго пика цитопении вообще не наблюдалось. Подсчет лейкоцитарной формулы показал, что восстановление уровня лейкоцитов происходит за счет нейтрофилов (рис. 9).
Сутки после однократного введения ЦФ
—А— Циклофосфан - ■ Циклофосфан + Аскорбиген .♦ Интактныи контроль
Рис. 9. Влияние аскорбигена на динамику лейкоцитов периферической крови у мышей после применения циклофосфамида (ЦФ)
Морфологическое исследование показало, что 14-дневное введение аскорбигена после циклофосфамида приводило к практически полному восстановлению структуры ворсинок и собственной пластинки слизистой оболочки. Их повреждение выражалось лишь в наличии небольших очагов отека. На отдельных ворсинках в области верхушки сохранялись зоны некроза цилиндрического эпителия. Клетки Панета по морфологическому строению и количеству не отличались от интактного контроля (рис. 10 и И) [9].
Рис. 10. Тонкая кишка мыши. 15-е сутки после введения циклофосфамида, х 10
Аскорбиген, введенный после циклофосфамида, ускорял восстановление лимфоидной ткани тимуса, селезенки и лимфатических узлов.
Аскорбиген, введенный до циклофосфамида, предотвращал развитие атрофических изменений в лимфоидных органах. Это было показано как гистологическими исследованиями, так и при подсчете весовых коэффициентов тимуса, селезенки и лимфатических узлов подопытных животных. При сочетанном использовании циклофосфамида и аскорбигена масса этих органов не снижалась.
Применение цитостатиков, в частности циклофосфамида, часто сопровождается развитием симптоматической алопеции. При однократном внутрибрюшин-ном введении циклофосфамида в дозе 200 мг/кг мы-шатам-сосункам на 8-9-й день от рождения возникает полная потеря волосяного покрова. Предварительное введение аскорбигена в дозе 100 мг/кг в течение 5 дней до инъекции циклофосфамида снижает выраженность (интенсивность) алопеции, а последующее введение аскорбигена способствует более интенсивному восстановлению волосяного покрова (рис. 12). Мышата полностью восстанавливали волосяной покров на 3-\ дня раньше животных контрольной группы (без введения аскорбигена) [10].
1 2 3
Рис. 12. Влияние аскорбигена (АСГ) на алопецию, индуцированную циклофосфамидом (ЦФ)
Рис. 11. Тонкая кишка мыши. 15-е сутки после введения циклофосфамида в комбинации с аскорбиге-ном, х10
Гистологические исследования подтвердились данными об изменении массы тела животных. Введение циклофосфамида приводило к достоверному снижению массы тела мышей на 10-12 % по сравнению с контролем на 5-е сутки. Восстановление массы тела до. уровня контроля происходило лишь к 11-12-м суткам. При применении аскорбигена после циклофосфамида масса тела животных достоверно не снижалась.
Это было подтверждено морфологическими исследованиями. При микроскопическом изучении в группе положительного контроля (мыши, получившие циклофосфамид однократно внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг) в коже был найден ряд патологических изменений. Они выражались в истончении слоя эпидермиса, умеренном отеке и фрагментации коллагеновых волокон дермы. В части волосяных фолликулов волос отсутствовал. При этом отдельные клетки матричного (камбиального) слоя и мышца, поднимающая волос, находились в состоянии атрофии.
У мышей, получавших аскорбиген до и после введения циклофосфамида, эпидермис был без признаков повреждения, отек дермы отсутствовал, структура коллагеновых волокон дермы и придатков кожи — без особенностей. Клетки матричного слоя волосяного фолликула и мышца, поднимающая волос, не отличались от нормы.
Полученные результаты позволяют заключить, что аскорбиген, примененный в.комбинации с цик-лофосфамидом, ускоряет восстановление показателей периферической крови до нормы, способствует более быстрому и полному восстановлению целостности структур стенки тонкой кишки, ускоряет восстановление лимфоидной ткани тимуса, селезенки и лимфатических узлов, предотвращает развитие атрофических изменений в коже новорожденных мышей и способствует восстановлению волосяного покрова.
Полученные данные указывают на возможность создания такого препарата, который будет модифицировать несколько различных видов токсичности противоопухолевых агентов.
Таким образом, группа модификаторов биологических реакций, несомненно, заслуживает дальнейшего изучения. Можно надеяться, что усовершенствование методик использования уже известных МБР и разработка новых препаратов этой группы расширит их перечень и, в конечном итоге, позволит повысить эффективность противоопухолевой химиотерапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гершанович М. Л., Филов В. А., Акимов М. А., Акимов А. А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей. — Санкт-Петербург: БОТК, 1999.
2. Мирчинк Е. П., Исакова Е. Б., Переверзева Э. Р., Бухман В. М. Противобактериальная активность аскорбигена и его влияние на алопецию у мышей, вы-
званную применением циклофосфамида // Рос. биоте-рап. журн. — 2003. — Т. 2, № 1. — С. 34.
3. Переверзева Э. Р., Бодягин Д. А., Трещалин М. И. и др. Биологическая активность аскорбигена—важнейшего компонента диет, содержащих капусту и другие крестоцветные И Медико-фармацевтический форум, Москва, 29 октября — 2 ноября. — М., 2002. С. 160.
4. Противоопухолевая химиотерапия: Справочник / Под ред. Н. И. Переводчиковой. — М., 1996.
5. Райхлин Н. Т., Трещалин И. Д., Бодягин Д. А., Смирнова Е. А., Небольсин В. Е. Защита препаратом дикарбамин гемопоэтических клеток костного мозга от апоптоза, развивающегося в экспериментальных условиях под воздействием циклофосфамида (морфологическое исследование) // Рос. биотерап. журн. — 2003. —Т. 2, № 1. —С. 36.
6. Трещалин И. Д., Кримкер В. М., Бодягин Д. А. и др. Эфазол — представитель нового класса палладийсодержащих радиомодификаторов // V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 21-25 апреля 1998. — М., 1998. С. 626.
7. Трещалин И. Д., Небольсин В. E., Бодягин Д. А. и др. Витам — новый модификатор токсичности циклофосфамида // Тезисы II съезда онкологов стран СНГ, Украина, Киев, 23-26 мая, 2000, № 289.
8. Трещалин И. Д., Бодягин Д. А., Переверзева Э. Р. и др. Модификация токсичности циклофосфамида и ряда комплексных соединений платины с помощью нового препарата витама // Рос. биотерап. журн. — 2002. —Т. 1, № 2. — С. 146.
9. Трещалин М. И., Бодягин Д. А., Переверзева Э. Р., Трещалин И. Д., Бухман В. М. Влияние аскорбигена на кроветворение и защитную функцию тонкой кишки // Рос. биотерап. журн. — 2003. — Т. 2, № 1. — С. 44.
10. Asafov A., Bychkov М., Bodyagin D. et al. Polydan — new Stimulator of leucopoiesis // Int. Islam. Med. J. — 1997. — Vol. II, No. 1-2. — P. 23-29.
