CC BY
27НОВЫЕ СВЕДЕНИЯ О ТОКСИЧНОСТИ И ОПАСНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВЕН
УДК 613.636 : 615.015.3
МИКРООРГАНИЗМ BACILLUS THURINGIENSIS SSP. TOUMANOFFI25
Н.И. Шеина1, Е.В. Буданова2, Л.И. Мялина1, Л.П. Сазонова1, В.В. Колесникова1
ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России, 117997, г. Москва, Российская Федерация 2ФГБОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России, 119991, г. Москва, Российская Федерация
Штамм Bacillus thuringiensis ssp. toumanoffi 25 не обладает сенсибилизирующими свойствами, не оказывает влияния на клеточное и гуморальное звенья иммунной системы, на микрофлору кишечника. ПДК штамма в воздухе рабочей зоны рекомендована на уровне 5х104 мг/м3, в атмосферном воздухе населенных мест - 5х103 мг/м3. Ключевые слова: B. thuringiensis ssp. toumanoffi 25, сенсибилизация, ПДК
Штамм представляет собой грамположитель-ные, подвижные, образующие жгутики палочки размером 0,7-1,2x2,5-4,0 мкм. Через 48 часов роста на МПА образуют овальные споры размером 0,6-0,8x1,2-2,0 мкм. Одновременно со спорой образуются параспоральные тельца ромбовидной формы разных размеров. На среде «А» образуют серые полупрозрачные колонии с ровным краем. Оптимальная температура роста +28-310С.
Штамм образует ацетилметилкарбинол, образует кислоту из маннозы; не образует кислоту при росте на салицине и сахарозе, не гидролизу-ет эскулин, образует уреазу на среде с мочевиной, гидролизует крахмал, пептонизирует молоко, на желтковой среде лецито-вителлиновая реакция положительная, ДНКазная активность отсутствует.
Культура хранится на скошенном агаре со средой «А» состава, г/л: пептон - 7,0, натрий хлористый - 5,0, рыбный гидролизат - 4,0, агар-агар - 15,0, можно использовать картофель-но-глюкозную среду (КГ среда).
Штамм B. thuringiensis ssp. toumanoffi 25 по критериям вирулентности, токсичности, токсигенно-сти и диссеминации относится к непатогенным для теплокровных животных микроорганизмов. Он не является фитопатогенным, а также не входит в состав 4-х групп патогенности в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами» в редакции Дополнений и изменений № 2, утвержденных Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 29.06.2011 № 86. Систематическое положение микроорганизма Царство Procaryota Класс Schizomycetes Отряд Eubacteriales Семейство Bacillaceae Род Bacillus Вид thuringiensis Штамм ssp. toumanoffi 25 На основе штамма энтомопатогенной бактерии B. thuringiensis ssp. toumanoffi 25 создан
Шеина Наталья Ивановна (Sheina Natal'ja Ivanovna), доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры гигиены ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва, ni_sheina@mail.ru
Буданова Елена Вячеславовна (Budanova Elena Vjacheslavovna), кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, г. Москва, e.v.budanova@mail.ru
Мялина Любовь Ивановна (Mjalina Ljubov' Ivanovna), кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры гигиены ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва, rsmu.ru
Сазонова Любовь Павловна (Sazonova Ljubov1 Pavlovna), кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры гигиены ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва, rsmu.ru
Колесникова Валентина Васильевна (Kolesnikova Valentina Vasil'evna), к кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры гигиены ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва, rsmu.ru
ЯНВАРЬ
- Ф Е ВРАЛ Ь 20 1 8
инсектицид «Биослип БТ, П», который обладает широким спектром действия в отношении насекомых-вредителей сельского хозяйства, относящихся к отрядам Чешуекрылые и Двукрылые. Он активен в отношении личинок бабочек из семейств Белянки, Совки, Настоящие моли, Выемчатокрылые моли, Огневки, Плодожорки, а также в отношении насекомых из отряда Двукрылые: журчалок, галлиц, серебрянок.
Действующей основой препарата являются кристаллы белкового -эндотоксина и жизнеспособные споры штамма В. 1Нипщ1ет1з ззр. (ви-танв/р. 25. Содержание жизнеспособных спор в инсектициде «Биослип БТ, П» составляет не менее 1х1010 КОЕ/г, количество кристаллов токсина равно общему количеству спор в препарате. В качестве вспомогательных веществ инсектицид содержит остатки защитной среды для сублимационной сушки - неорганические фосфаты, сухое молоко, желатин. Инсектицид представляет собой водорастворимый порошок
Кристаллы токсина действуют в кишечнике насекомого при поедании, белковый токсин растворяется в кишечном соке насекомого при рН 9,5-10,5 и переходит в активную форму под действием протеолитических ферментов кишечного сока. В активном состоянии токсины формируют поры в клетках эпителия кишечника, что в дальнейшем приводит к гибели насекомого.
В процессе экспериментальных исследований было изучено влияние микроорганизма В. 1Нипщ1ет1з ззр. 1витанв//1 25 (активное начало инсектицида «Биослип БТ, П») на интегральные показатели состояния организма экспериментальных животных и микрофлору кишечника, иммунотоксические свойства и возможность диссеминации его во внутренние органы с целью установления лимитирующего критерия вредного действия (ЛКВД).
Обследование экспериментальных животных показало, что воздействие штамма в двух концентрациях (5х105 и 5х104 кл/м3) в течение 1 месяца не приводило к изменению интегральных показателей состояния организма экспериментальных животных, которое оценивалось по динамике массы тела в процессе эксперимента и в восстановительном периоде. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии общего токсического действия штамма на организм крыс при субхронической экспозиции его в изученных концентрациях.
В результате проведенных исследований по изучению иммунотоксических свойств микроорганизма установлено, что коэффициенты массы тимуса и селезенки экспериментальных животных не отличались по сравнению с животными контрольной группы.
В лейкограмме периферической крови подопытных животных не обнаружено достоверных изменений всех изучаемых показателей (лейкоцитов, лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов).
При оценке сенсибилизирующей активности штамма в эксперименте не выявлено формирования клеточной реакции замедленного типа (ГЗТ) на мышах и клеточной реакции немедленного типа (ГНТ) на крысах.
Изучаемый микроорганизм не проявлял антигенной активности при используемом способе исследования на изучаемых уровнях воздействия. Не обнаружено образования специфических антимикробных антител (агглютининов) в сыворотке подопытных животных обеих групп.
В экспериментах на крысах ответ на эритроциты барана, оцениваемого по титрам гуморальных антител-гемагглютининов, был аналогичен таковому в контрольной группе животных, как по средним значениям, так и вариабельности показателя внутри группы.
Бактериологические исследования микрофлоры кишечника показали, что на фоне субхронического воздействия В. 1Нипщ1ет1з ззр. Iви-танв/А 25 не происходило значимого изменения (дисбаланса) микробиоценоза кишечника крыс.
Штамм не оказывал существенного влияния на показатели анаэробной составляющей (би-фидобактерии, лактобациллы) микробиоценоза кишечника. Не изменялась высеваемость и условно-патогенной микрофлоры (протеев, энтерококков и грибов СанйШса) у подопытных животных. Коэффициент массы слепой кишки не различался у крыс контрольной и подопытных групп.
В восстановительном периоде микрофлора кишечника крыс, подвергшихся воздействию штамма в обеих концентрациях, по качественным и количественным показателям не отличалась от таковых контрольных животных.
Штамм при субхроническом воздействии в обеих концентрациях не обладал способностью к диссеминации в кровь и внутренние органы (легкие, печень, почки, селезенка) экспериментальных животных ни через 1 месяц введения микроорганизма, ни через 2 недели восстановительного периода.
На основании полученных данных установлено, что лимитирующий критерий вредного действия микроорганизма на организм теплокровных животных не установлен при изучении характера биологического действия в концентрациях 5х104 кл/м3 и 5х105 кл/м3.
Согласно «Методическим указаниям по экспериментальному обоснованию ПДК микроорганизмов-продуцентов и содержащих их готовых форм препаратов в объектах производствен-
ной и окружающей среды» (N5789/1-91), величина ПДК в воздухе рабочей зоны ограничивается концентрацией 5х104 кл/м3 в случае, если не установлен порог вредного действия изучаемого штамма на организм на более высоких уровнях воздействия. В связи с этим для воздуха рабочей зоны предложена ПДК з B. thuringiensis ssp. Юи-manoffi 25 на уровне 5х®4 кл/м3 (4 класс опасности).
С учетом коэффициента запаса 10 для атмосферного воздуха населенных мест рекомендована ПДКа в штамма В. thuringiensis ssp. toumanoffi 25 на уровне 5х103 кл/м3 (4 класс опасности).
Разработаны методы микробиологического контроля штамма В. thuringiensis ssp. toumanoffi 25 по культурально-морфологическим признакам в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Критерии оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в промышленности микробиологического синтеза. МР, РГМУ, М., 1992.-22 с.
2. Методические указания по
REFERENCES:
1. Criteria of assessment the pathogenic properties of producer strains proposed for use in industrial microbiological synthesis. Methodical. Recommendations. M., Medical University, 1992.- 22 p. (in Russian)
экспериментальному обоснованию ПДК микроорганизмов-продуцентов и содержащих их готовых форм препаратов в объектах производственной и окружающей среды. Ы5789/1-М., 1991-22 с.
2. Guidelines on experimental justification of the limit permitted concentration of producing microorganisms and their containing strains products in industrial and environmental objects . N5789/1-91.
3. Определитель бактерий Берджи. Под ред. Дж.Хоулта, Н.Крига и др. -Девятое изд. в двух томах.-М., «Мир», 1997.
4. Шеина Н.И., Скрябина Э.Г., Пивоваров Ю.П. и др. Проблема биобезопасности промышленных
M., 1991.- 22 p. (in Russian)
3. The determinant of bacteria Bergey. Ed. J. Hoult, N. Krig et al. -M., „Mir". -1997. - 2v. (in Russian)
4. Sheina N.I., Scrjabina E.G., Pivovarov Yu.P. and others. The
микроорганизмов в России: настоящее и будущее. // Токсикологический вестник. - 2016. - №4.- С.2-
problem of biosafety of industrial microorganisms in Russia: the present and the future. // Toxicological bulletin. - 2016. - №4.- P.2-10 (in Russian)
N.I. Sheina1, E.V. Budanova2, L.I. Myalina1, L.P. Sazonova1, V.V. Kolesnikova1
MICROORGANISM BACILLUS THURINGIENSIS SSP. TOUMANOFFI 25
1 N.N.Pirogov Russian National Research Medical University, 117997, Moscow, Russian Federation 2I. M. Sechenov 1st Moscow State Medical University, 119991, Moscow, Russian Federation
Strain B. thuringiensis ssp. toumanoffi 25 does not have sensitizing properties, does not affect the cellular and humoral parts of the immune system, the intestinal microflora. The MAC of the strain in the air of the working area is recommended at 5x104 mg/m3, in the atmospheric air of residential areas it is 5x103 mg/m3. Keywords: B. thuringiensis ssp. toumanoffi 25, sensibilization, MAC.
Материал поступил в редакцию 9.11.2017 г.
