CC BY
214
_МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №6/2016 ISSN 2410-700Х_
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
УДК 577.1:633.66:531.524
Васильченко Елена Николаевна
старший научный сотрудник ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт cахарной свеклы и сахара имени А.Л. Мазлумова»
п. Рамонь, Воронежской обл., РФ Е-mail: biotechnologiya@mail.ru
МИКРОКЛОНАЛЬНОЕ РАЗМНОЖЕНИЕ СТЕВИИ (STEVIA REBAUDIANA (BERTONI) HEMSL.)
В КУЛЬТУРЕ IN VITRO
Аннотация
Представлены результаты культивирования семян стевии, включающие этапы стерилизации, введения их в культуру in vitro и длительного сохранения. Показано, что в качестве стерилизующего агента следует использовать композицию (этиловый спирт 96 %, хлорамин 10%), для проращивания семян и размножения цитокинины БАП (бензиламинопурин), Кн (кинетин) и ауксин НУК (нафтилуксусная кислота) в различных сочетаниях.
Ключевые слова
Семена стевии, питательная среда, микроклоны.
Большую значимость в народном хозяйстве имеет интродукция лекарственных растений-подсластителей, из которых наиболее практически ценной является стевия (Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl.). Это нетрадиционное малораспространенное растение содержит целый комплекс сладких веществ-дитерпеновых гликозидов под общим названием стевиозид, который содержится во всех органах растения. Выращивание стевии в условиях умеренного климата показало высокую способность растений адаптироваться к почвенно-климатическим условиям в ЦЧР [1, с.580], Ставрополье, Приморском крае.
Однако введение стевии в сельскохозяйственное производство сдерживается из-за трудностей связанных с низкой семенной продуктивностью. Отсутствие завязывания полноценных семян и низкий индекс их жизнеспособности вызвали необходимость сохранения сортообразцов стевии различного происхождения в виде коллекции in vitro.
Необходимым условием при введении семян стевии в культуру in vitro является соблюдение строгой стерильности. Результаты сравнительного действия различных стерилизующих агентов показали, что использование 10 % - го раствора хлорамина обеспечивало 99% стерильность материала. Однако, при этом отмечалось угнетение развития регенерантов (2%). Наибольшее число регенерантов (23%) и их нормальное развитие наблюдалось при стерилизации этиловым спиртом 96% время экспозиции 10 секунд, затем 10 минут в 10% растворе хлорамина. При стерилизации раствором анолита и кратковременным воздействием этиловым спиртом + хлорамин 10% не только уничтожалась инфекция, но и получено максимальное количество регенерантов (34%), что объясняется стимулирующим воздействием анолита на прорастание семян [1, с.580].
Одним из факторов, от которого зависит эффективность получения регенерантов из семян стевии в культуре in vitro, является питательная среда. Установлено, что наилучшей средой для прорастания семян и культивирования явилась среда Мурасиге-Скуга. Дополненная гормонами НУК 1 мг/л + Кн 0,04 мг/л, она обеспечивала появление проростков до 40 % на 6-8 день. Добавление цитокинина БАП 0,5мг/л стимулировало прорастание семян до 32 %.
_МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №6/2016 ISSN 2410-700Х_
Развитие растений при культивировании семян на питательной среде проходило в течение месяца. Было выявлено, что на второй день после посадки наблюдался разрыв оболочки семени и появление на его поверхности средней части гипокотиля.
На третий день происходило удлинение гипокотиля и появление семядольных листьев, которые на 6 день, на свету, разворачивались и приобретали зеленый цвет. Затем отмечалось появление корешка (рис.1).
Рисунок 1 - Прорастание семян стевии в культуре in vitro А- введение семян в культуру; Б - разрыв оболочки семени; В - разрастание гипокотиля ; Г - появление семядольных листьев
На 12 -13 день отмечалось появление 1 пары настоящих листьев и удлинение корешка. К концу первого месяца растения стевии были полностью сформированы (рис. 2).
Рисунок 2 - Развитие растений стевии в культуре in vitro А- появление первой пары настоящих листьев; Б- сформированные растения
Материал, полученный при прорастании семян in vitro, введен в коллекцию стевии, где осуществляется его культивирование, клональное размножение и длительное сохранение сортообразцов различных генотипов.
Список использованной литературы:
1. Корниенко А.В., Знаменская В.В., Жужжалова Т.П. Характерные особенности и условия выращивания стевии (Stevia rebaudiana Bertoni)// Первый международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования». - Тез. докладов. - Пущино.- 1995.- С.579-581.
2. Жужжалова Т.П., Васильченко Е.Н. Экологические предпосылки использования активированной воды //Сахарная свекла - 2006. - № 1. - С. 24-25.
© Васильченко Е.Н., 2016
