CC BY
99
УДК 616.314
МИКРОБНЫЙ СПЕКТР РОТОВОЙ ПОЛОСТИ У ПОДРОСТКОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГАСТРОДУОДЕНИТОМ
В статье изложены полученные нами данные о составе микробного спектра ротовой полости и скорости формирования микробной пленки на зубной эмали у подростков с хроническим гастродуоденитом, и влияние зубных паст «WELEDA» на микробиоценоз полости рта.
Бактериологическое исследование на аэробную и анаэробную составляющую микробиоты с идентификацией микроорганизмов с помощью тест-систем Erba Lachema проведено у 52 пациентов от 6 до 17 лет с хроническим гастродуоденитом и 15 здоровых детей и подростков. Двукратное бактериологическое исследование материала из зубодесневой борозды с интервалом в 2 месяца проведено у 20 больных с хроническим гастродуоденитом, причем у 10 детей, получавших гигиеническую чистку зубов солевыми пастами WeledaSol-Zahngel и у 10 использовавших другие гигиенические средства. Скорость формирования микробной пленки изучалась по оригинальной методике.
Нами были выделены особенности микробиоценоза полости рта при ХГД у детей: снижение колонизации представителями нор-мобиоты, колонизация ротовой условно-патогенной микробиотой с высокими адгезивными свойствами. Улучшение микробиологических показателей полости рта достигнуто назначениемсолевой зубной пасты WeledaSol-Zahngel, усиливающей слюноотделение.
Ключевые слова: хронический гастрит, дети, микробиота, микробная пленка.
Введение. Микробиота полости рта крайне нестабильна, так как тесным образом связана с характером принимаемой пищи; в ней насчитывается более 200 видов микроорганизмов [1, 2, 3, 4]. Установлено, что лактобациллы при этом составляют около 1% культивируемых бактерий, их видовой состав различается у пациентов с хроническим периодонтитом и здоровых людей с преобладанием у последних L. fermentum и L. gasseri, а у первых L. plantarum [5]. При кариесе у детей выявляли дисбиотические изменения у 100% обследованных, причем отмечалось увеличение присутствия лактобациллы, S. aureus, S. mutans и Actinomyces spp., уменьшение доминирования S. salivarius, S. sanguis, высев S. haemolyticus а также переход в доминирующую группу микроорганизмов дрожжепо-добных грибов рода Candida и семейства Enterobacteriaceae (E. coli, Klebsiella ozaenae, а также E. fae-calis, обладающих 2 или 3 генами патогенности) [6, 7]. Отмечены дисбиотические изменения ротовой полости у больных с гастропатологией: высокая частота обнаружения H. pylori [8], снижение колонизации представителями нормобиоты, колонизация ротовой полости микроорганизмами, устойчивыми к более низким значениям pH и условно-патогенной микрофлорой с высокими адгезивными свойствами при ГЭРБ [9, 10]. До конца не изучены адгезивные свойства бактерий (стрептококков, энтерококков, лактобацилл), грибов С. albicans к буккальному эпителию у больных с гастропатологией: есть сведения об их повышении [1, 10, 11], так и об отсутствии изменений [12]. Есть данные, что даже у практически здоровых детей в четверти случаев выявлены изменения в микробиоте ротоглотки, ха-растеризующиеся снижением количества стрептококков (105 КОЕ/г) у 15,4% и нейссерий (до 105 КОЕ/г) у 25,6% и повышением уровня золотистого стафилококка (до 105 КОЕ/г и более) у 7,7% [13].
Актуальность проблемы микробиоценоза ротовой полости связана с открытием механизмов опосредованного действия микроорганизмов полости рта на организм хозяина. Показано, что продукты микробной природы-модулины (экзотоксины, эндотоксины и другие компоненты клеточной стенки, капсулы, ресничек и др.), влияя на работу клеток иммунной системы приводят к неадекватному синтезу цитокинов, что вызывает патологический процесс в других органах и системах [14, 15, 16]. Предлагаются различные схемы для ликвидации дисбиотических сдвигов в полости рта и, тем самым, общего оздоровления организма: санация полости рта [17], использование специальных лечебных зубных паст [18, 19], применение местных антибактериальных препаратов [20], пре - и пробиотиков [21], а также иммуномодулирующих средств [22]. Эффективность такого подхода в детской гастроэнтерологии изучена недостаточно.
А.Ю. ЩЕРБАКОВА1, М.В. ИВАНОВА1, Д.А. КУЗЬМИНА2, В.П. НОВИКОВА3, ЕА. ОРИШАК2 , А.М. ШАБАЛОВ4
'Новгородский государствнный медицинский университет имени Ярослава Мудрого
"Юеверо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова, г. Санкт-Петербург
3) Федеральный медицинский исследовательский центр имени ВА. Алмазова, г. Санкт-Петербург
4)Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет
e-mail: [email protected]
Целью исследования явилось изучение микробного спектра ротовой полости и скорость формирования микробной пленки на зубной эмали у подростков с хроническим гастродуоденитом, и влияние зубных паст «WELEDA» на микробиоценоз полости рта.
Материалы и методы: Бактериологическое исследование на аэробную и анаэробную составляющую микробиоты с идентификацией микроорганизмов с помощью тест-систем Erba Lachema (каф. микробиологии СПбГМА) проведено нами у 52 пациентов от 6 до 17 лет с хроническим гастродуоденитом и 15 здоровых детей и подростков. Методика забора материала для бактериологического исследования состояла в следующем:
- полоскание полости рта 0,2% раствором хлоргексидина в течении 30 секунд;
- место забора материала выделяют ватным тампоном и слизистую просушивают ватой, пропитанной 0,2% раствора хлоргексидина;
- стерильные «paper-point» погружают в зубодесневую борозду на полную глубину на 10 секунд и затем помещают в контейнер с транспортной средой;
- целесообразно использовать «paper-point» наименьшего размера в количестве не менее трех на одну зубодесневую борозду.
Транспортная смесь готовится на основе раствора Рингера с добавлением стабилизаторов (ци-стеин и метафосфат натрия). В качестве контейнеров используют микропробирки объемом 1,5мм. Использование данной методики позволяло исключить высев транзиторной микрофлоры. Двукратное бактериологическое исследование материала из зубодесневой борозды с интервалом в 2 месяца проведено у 20 больных с хроническим гастродуоденитом, причем у 10 детей, получавших гигиеническую чистку зубов солевыми пастами Weleda Sol-Zahngel и у 10 использовавших другие гигиенические средства. Свои очищающие свойства паста Weleda Sol-Zahngel имеет за счет комбинации натуральных минеральных солей, нейтрализующих кислотосодержащие остатки пиши. Помимо этого, зольная паста в момент ее применения активизирует естественное слюноотделение, что вызывает физиологическое самоочищение полости рта.
Проводилась оценка адгезии выделенных штаммов микробов к буккальному эпителию по следующей методике:
1. Отмывку эпителиальных клеток (в пластиковые центрифужные пробирки вносили клетки и физ. раствор. Центрифугирование при 1000 оборотах в минуту 5 минут. Повторяли трижды. После каждого прокручивания надосадочную жидкость аккуратно убирали пипеткой, не взмучивая осадок и снова добавляют физ. раствор. Только после третьего центрифугирования физ. раствор не добавляяли.
2. Из суспензии клеток делали контрольный мазок пипеткой, окрашивали метиленовым синим.
3. Для изучения адгезивной активности в пробирку Эппендорфа вносили 200мкл эпителиальных клеток (которые получили в пункте 1) и 200 мкл суспензии микроорганизмов (которые заранее вырастили). Это микроорганизмы, выделенные из зубодесневой борозды от больного. Полученное содержимое «эппендорфов» перемешивали и помещали в термостат на 1-2 часа с периодическим повторным перемешиванием.
4. После инкубации неприкрепившиеся бактерии удаляли двукратным отмыванием. Для этого суспензию пипеткой переносили в центрифужную пробирку и добавляли физ. раствор. Центрифугировали 2 раза по 3 минуты со скоростью 1000 оборотов в минуту. После первого центрифугирования надосадочную жидкость убирали пипеткой и снова добавляли физ. раствор. После второго центрифугирования надосадочную жидкость убирали, физ. раствор не добавляли.
5. Из осадка делали мазки пипеткой, окрашивали метиленовым синим.
Результаты: Нами выявлены достоверные различия в микробиоценозе полости рта в обследованных группах. Так частота высева аэробных Гр+ палочек и анаэробных Гр+ палочек была выше у детей с ХГД (табл.1), а частота высева грибов у них была меньше, чем в контрольной группе.
Таблица 1
Частота высева микробов в полости рта у подростков с ХГД в абс. числах и %
Микроорганизмы ХГД п=52 Здоровые п=15 р
Аэробы и факультативные анаэробы
Грам + кокки 6 (11,5) 1 (6,6) р>0,05
Грам+ палочки 32 (61,5) 5 (33,3) р<0,05
Грам - кокки 3 (5,8) 0 (0) р>0,05
Грам- палочки 31(60) 7 (46,6) р>0,05
Анаэробы
Грам + кокки 26 (50) 7 (46,6) р>0,05
Грам+ палочки 13 (25) 1 (6,6) р<0,05
Грам - кокки 1 (1,9) 0 (0) р>0,05
Грибы 7 (13,4) 7 (46,6) р<0,05
Более выраженные различия получены при изучении качественного состава микрофлоры полости рта у детей с ХГД и здоровых. Данные, представленные в таблице 2, характеризуют видовой состав микрофлоры полости рта у детей в обследованных группах. Как видно из таблицы 2, у детей с ХГД отмечалось снижение колонизации полости представителями нормальной микрофлоры Neisseria lactamica, Clostridium sphenoides, Clostridium ramosum а также увеличение частоты условно-патогенных микроорганизмов Enterococcus faecium и Streptococcus parvulus.
Таблица 2
Частота высева бактерий из полости рта у обследованных детей
ХГД (n = 52) Здоровые (n = 15)
Абс. ч. % Абс. ч. %
Lactobacillus spp. 20 38 7 46,6
Neisseria spp. 9 17,3 3 21,4
S.aureus 4 7,6 0 0
Enterococus faecium 7 13,4 1 6,6*
S.epidermidis 5 9,5 1 6,6
S. parvulus 13 25 1 6,6*
S. saprophitus 2 3,8 0 0
Clostr. ramosum 2 3,8 1 6,6*
Clostr. sphenoides 2 3,8 2 13,3*
N. lactamica 2 3,8 2 13,3*
N. sicca 10 19 2 13,3
Примечание: *p<0,05
Что же касается количественных показателей высеваемости микроорганизмов из полости рта - здесь также наряду с увеличением частоты обнаружения отмечено существенное увеличение титров микроорганизмов: Lactobacillus spp, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, saprophyticus, S. mutans, энтерококков с измененными свойствами и грибов рода Candida при снижении титров S. salivarius и S. salivarius (табл. з).
Таблица 3
Количественный состав микрофлоры полости рта у детей с ХГД (M+m)
Количество микроорганизмов в 1 г
Вид микрофлоры содержимого зубного налета, lg КОЕ/г
Нормативные показатели Здоровые (п=15) ХГД (n=52)
Lactobacillus spp. не более 3-4 3,01+0,12 5,44+0,46
Staphylococcus aureus не более 3-4 2,54+0,08 6,35+0,68
S. epidermidis, saprophyticus не более 3-4 2,86+0,06 4,17+0,21
S.salivarius не менее 5-7 7,98+0,06 5,19+0,28
S.sanguis не более 5-7 7,01+0,71 4,27+0,89
S.mutans не более 5-7 3,21+0,12 8,26+0,14
S.haemolyticus отсутствие 0 2,47+0,34
Энтерококки с типичными свойствами не более 1-2 1,01+0,05 2,26+0,8
Энтерококки с измененными свойствами отсутствие 0 2,46+0,52
Neisseria spp. не более 5-7 4,26+0,28 5,93+0,25
P. propionicum не более 3-4 2,09+0,44 2,45+0,61
Actinomyces species не более 2-3 2,17+0,06 1,54+0,05
Грибы рода Candida не более 2-3 1,14+0,01 4,26+0,28
Анализ адгезивной активности выделенных микроорганизмов из полости рта к клеткам бук-кального эпителия у детей выявил более высокую адгезивную активность у бактерий Neisseria spp. в группе здоровых, чем в группе ХГД. Только низкая адгезивная активность представителей нормальной микрофлоры Str. mitior к буккальным эпителиоцитам была отмечена как у детей с ХГД, так и у здоровых детей. Более высокая адгезивная активность в группе ХГД выявлена у бактерий Lactobacillus spp., S.epidermidis, saprophyticus и у энтерококков. При проведении анализа адгезивной активности других выделенных микроорганизмов в обследованных группах различий получено не было (таблица 4).
Таблица 4
Особенности адгезивной активности микроорганизмов полости рта к клеткам буккального эпителия у детей обследованных групп (in vitro)
ХГД здоровые
n=20 n=7
Lactobacillus spp. 5 (25,0%) 0 (0%) 15 (75,0%) 5 * (71,5%) 2** (28,5%) 0*** (0%)
n=4 n=0
Staphylococcus aureus 2 (50%) 2 (50%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
S.epidermidis и saprophyticus n=7 n=1
5 (71,5%) 0 (0%) 2 (28,5%) 1 (100%) 0 (0%) 0*** (0%)
n=9 n=8
S.mutans 4 (44,4%) 5 (55,6%) 0 (0%) 3 (37,5%) 5 (62,5%) 0 (0%)
n=9 n=4
S. mitior 9 (100%) 0 (0%) 0 (0%) 4 (100%) 0 (0%) 0 (0%)
n=9 n=3
Neisseria spp. 4 5 0 1 0** 2***
(44,4%) (55,6%) (0%) (33,3%) (0%) (66,7%)
n=9 n=1
Enterococcus spp. 2 5 2 1* 0** 0***
(22,2%) (55,6%) (22,2%) (100%) (0%) (0%)
Примечание:
1. - низкая степень адгезии микроорганизмов к клеткам буккального эпителия,
2. - средняя степень адгезии,
3. - высокая степень адгезии,
* — достоверные различия между показателями низкой степени адгезии микроорганизмов в группах ХГД и здоровых (p<0,05),
** — достоверные различия между показателями средней степени адгезии микроорганизмов в группах ХГД и здоровых (p<0,05),
*** — достоверные различия между показателями высокой степени адгезии микроорганизмов в группах ХГД и здоровых (p<0,05).
На рис. 1 а представлена высокая адгезивная способность энтерококка, выделенного от больного с ХГД со значительным числом фиксированных энтерококков на цитоплазме клетки и с образованием характерной микробной пленки. Адгезивная способность штамма энтерококка, выделенного от здорового ребенка, представлена на рис. 1б. Фиксированные энтерококки на поверхности цитоплазмы клетки буккального эпителия немногочисленны и поддаются подсчету.
Динамика удельного веса различных микроорганизмов полости рта у детей с ХГД на фоне применения средств гигиены фирмы «Weleda» представлены в таблице 5. У пациентов на фоне применения солевой пасты Weleda Sol-Zahngel, усиливающей слюноотделение, наблюдалась нормализация микробиоценоза полости рта в виде увеличения колонизации представителями нормобиоты и исчезновения условно-патогенных микроорганизмов. В группе, использовавших другие гигиенические средства, после лечения сохранялись явления дисбиоза ротовой полости.
Рис 1 а), 1 б) Адгезивная способность энтерококка
Таблица 5
Динамика удельного веса различных микроорганизмов полости рта у детей с ХГД на фоне применения средства гигиены Weleda Sol-Zahngel
Микроорганизмы ХГД
Диагноз Weleda Sol-Zahngel N=10 Другие гигиенические средства N=10
До лечения После лечения До лечения После лечения
Аэробы и факультативные анаэробы % 29,3% 38,4% 36,8% 26,9%
В том числе:
Гр.+ палочки 19,4% 18,5% 23,6% 21,5%
Гр.+ кокки 6,1% 8,6% 6,1% 10,6%
Гр.- палочки 3,1% 2,5% 4,5% 3,0%
Гр.- кокки 1,5% 3,8% 0% 3,8%
Облигатные анаэробы 48,8% 49,4% 53,6% 56,9%
В том числе:
Гр.+ палочки 8,2% 9,3% 9,5% 12,7%
Гр.+ кокки 37,0% 25,0% 29,3% 27,3%
Гр.- палочки 5,5% 9,5% 3,5% 6,1%
Гр.- кокки 8,4% 6,5% 12,2% 9,0%
Дрожжеподобные грибы рода Candida 15,8% 13,1% 6,5% 13,7%
Заключение. Нами были выделены особенности микробиоценоза полости рта при ХГД у детей: снижение колонизации представителями нормобиоты, колонизация ротовой условно-патогенной микробиотой с высокими адгезивными свойствами. Улучшение микробиологических показателей полости рта можно достичь назначением солевой зубной пасты Weleda Sol-Zahngel, усиливающей слюноотделение.
Литература
1. Каргальцева, Н.М. Ротовая полость - важный биотоп организма человека / Н.М. Каргальцева // Институт стоматологии. - 2001. - C. 20 - 21.
2. Мартынова, Е.А. Полость рта как локальная экологическая система / Е.А. Мартынова // Стоматология. - 2008. - № 3. - С. 68 - 75.
3. Томников, А.Ю. Микрофлора полости рта : метод. пособ. для стоматологов / А.Ю. Томников. - Саратов, 1996. - С. 3-15.
4. Хавкин, А.И. Микрофлора пищеварительного тракта / А.И. Хавкин. - М. : Фонд социальной педиатрии, 2006. - С. 65-72.
5. Oral lactobacilli in chronic periodontitis and periodontal health: species composition and antimicrobial activity / P. Koll-Klais, R.E. MandarLeibur, at al. // Oral Microbiol Immunol. - 2005. - Vol. 20. - Р. 354 - 361.
6. Candida spp-и микробоценоз полости рта у детей с декомпенсированной формой кариеса / Д.А. Кузьмина, В.П. Новикова, Н.В. Шабашова, Е.А. Оришак // Проблемы медицинской микологии. - 2011. - Т. 13, 1. -С. 23-27.
7. Кузьмина, Д.А. Комплексное патогенетическое, фармако-экономическое и клинико-организационное обоснование системы ранней диагностики, профилактики и этапного лечения кариеса у детей: автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Д.А. Кузьмина. - СПб., 2011. - 46 с.
8. Цимбалистов, А.В. Влияние стоматологического статуса больных язвенной болезнью на инфицирован-ность полости рта и слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori /А.В. Цимбалистов, Н.С. Робакидзе // Клиническая стоматология. - 2001. - № 1. - С. 16 - 18.
9. Орехова, Л.Ю. Клинико-иммунологические и микробиологические параллели в течение хронического генерализованного пародонтита и язвенной болезни желудка / Л.Ю. Орехова, Д.М. Нейзберг // Стоматология. -2006. - № 6. - С. 22 - 26.
10. Шабалов, А.М. Микробиоценоз полости рта и особенности стоматологических проявлений рефлюкс-эзофагита у детей / А.М. Шабалов, В.П. Новикова, Д.А. Кузьмина, М.А. Суворова // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - СПб., 2008. - № 3. - С. 127 - 130.
11. Бондаренко, В.М. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции / Бондаренко В.М. - М., 2007. - С. 8 - 11.
12. Маянский, А.Н. Адгезивные реакции буккальных эпителиоцитов на С. Albicans у детей с бронхиальной астмой и хроническим гастродуоденитом / А.Н. Маянский, Е.В. Салина // Педиатрия. - 2002. - № 3. - С. 41 - 43.
13. Феклисова, Л.В. Микробиоценоз слизистых оболочек ротоглотки и кишечника у детей, посещающих дошкольное учреждение / Л.В. Феклисова / / Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - СПб., 2007. - № 2.- С. 5-7.
14. Грудянов, А.И. Воспалительные заболевания пародонта как фактор риска развития патологии сердечно-сосудистой системы / А.И. Грудянов, В.В.Овчинникова // Стоматология.- 2007. - № 5. -С. 76-78.
15. Шабалов, А.М. Дисбиотические изменения в полости рта и рост грибов рода Candida как фактор риска нарушения ритма сердца у детей с рефлюкс-эзофагитом/ А.М. Шабалов, Д.А. Кузьмина, В.П. Новикова и др. // Проблемы медицинской микологии , 2010. - Т. 12. - № 2.- С. 18-22.
16. Тец, В.В. Роль микрофлоры полости рта в развитии заболеваний человека/ В.В. Тец // Стоматология.-2008. - № 3. - С. 76-80.
17. Виноградова, Т.Ф. Организация профилактики кариеса детей в различные возрастные периоды / Т.Ф. Виноградова, Н.В. Морозова. - М., 1987. - 48 с.
18. Иванова, Л.А. Диагностика дисбиоза и пути коррекции микробного состава полости рта : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Л.А. Иванова. - Пермь, 2010. - 25 с.
19. Кузьмина, Д.А. Применение зубных паст «WELEDA» для оздоровления полости рта при рефлюкс-эзофагите : метод. пособ. для стоматологов / Д.А. Кузьмина, В.П. Новикова, Д.В. Кошечкин и др. - СПб., 2008. - 40 с.
20. Борчалинская, К.К. Эффективность использования местных антибактериальных препаратов у подростков с гингивитом / К.К. Борчалинская, Т.Ш. Саакян // Dentalforum, 2008.- № 3 [27]. - С. 51 - 55.
21. Грудянов, А.И. Применение пробиотиков в комплексном лечении заболеваний пародонта / А.И. Гру-дянов, Н.А. Дмитриева, Е.В. Фоменко. - М. : ООО "Медицинское информационное агентство", 2006. - 112 с.
22. Кузьмина, Д.А. Микробиоценоз и врожденный иммунитет слизистой оболочки ротовой полости при декомпенсированной форме кариеса до и после лечения иммуномодулятором «Гепон» / Д.А. Кузьмина, Н.В. Шабашова, В.П. Новикова и др. // Стоматология детского возраста и профилактика. - Поли Медиа Пресс, 2010. - Т. IX; 1 (32). - С. 16 - 20.
MICROBIC RANGE OF THE MOUTH AT TEENAGERS WITH CHRONIC GASTRODUODENIT
In article the data on structure of a microbic range of a mouth and speed of formation of a microbic film obtained by us on tooth enamel at teenagers with a chronic gastroduodenit, and influence of the WELEDA toothpastes on an oral cavity microbiocenosis are stated.
Bacteriological research on an aerobic and anaerobic component of a microbiota with identification of microorganisms by means of Erba Lachema test systems is carried out at 52 patients from 6 to 17 years with a chronic gastroduodenit and 15 healthy children and teenagers. Double bacteriological research of material from a zubodesnevy furrow with an interval in 2 months is conducted at 20 patients with a chronic gastroduodenit, and at 10 children receiving hygienic toothbrushing by salt Wele-daSol-Zahngel pastes and at 10 the using other hygienic means. Speed of formation of a microbic film was studied by an original technique.
We marked out features of a microbiocenosis of an oral cavity at HGD at children: decrease in colonization by representatives of a normo-biota, colonization by an oral opportunistic microbiota with high adhesive properties. Improvement of microbiological indicators of an oral cavity is reached naznacheniyemsolevy tooth pastyweledasol-Zahngel, strengthening salivation.
A.Y. SCHERBAKOVA1, M.B. IVANOVA1,
D.A. KUZMINA2, V.P. NOVIKOVA3,
E.A. ORISHAK2, A.M. SHABALOV4
1)The competitor of chair of postdegree preparation on stomatologic specialties of NOVGMU of Yaroslav the Wise
2)North- Western State Medical University named after I.I. Mechnikov
3)Federal Medical Research Center Almazov
4)St. Petersburg state pediatric medical university of the Russian Ministry
of Health
e-mail: [email protected]
Key words: chronic gastritis, children, microbiota, microbic film.
