CC BY
30УДК 616.9:616.34-002-053.2(072)
ХУДЖАГЕЛДИЕВА ЗУ., САИДОВ Х.М., БОБОЕВА Б.Р., ЯДГАРОВА Л.Р., МУБОРАККАДАМОВА RX., КЕНЖАЕВА RA
МИКРОБНАЯ ФЛОРА КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМИ КИШЕЧНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
Таджикский НИИ профилактической медицины МЗиСЗН РТ
г В работе приведены результаты изучения микробиологической характеристики кокковой флоры, Л энтеробактерий и облигатной кишечной флоры, выделяемой у детей младшего возраста с острыми кишечными заболеваниями. Выявлены качественные и количественные изменения микрофлоры в кишечнике, а также определён уровень чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам.
Показано, что в кале детей с острыми кишечными инфекциями были обнаружены бактерии группы кокковой флоры - 57,9%, из них: Staphylococcus epidermidis (29,2%), Staphylococcus aureus (14,6%), Staphylococcus saprophyticus (14,1%) от общего числа обследованных больных. Выявлены микроорганизмы группы патогенной, условно-патогенной кишечной флоры, что составило 53,7% в общем. Изучение количественного состава микроорганизмов показало, что бактерии присутствовали у 40,0% больных детей в разведении фекалий (1х105-1х106).
Представлена антибиотикограмма выявленных штаммов микроорганизмов, циркулирующих в Республике Таджикистан.
Ключевые слова: микрофлора кишечника, острые кишечные инфекции, питательные среды, антибиоти-у^кограмма, штаммы микроорганизмов. ^
KHUJAGELDIEVA Z.U., SAIDOV KH.M., BOBOEVA B.R., YADGAROVA LR., MUBORAKKADAMOVA R.KH., KENJAEVA R A.
MICROBIAL FLORA OF THE INTESTINE IN CHILDREN WITH ACUTE INTESTINAL
DISEASES
Tajik Research Institute of Preventive Medicine
The paper shows the study results of Microbiological characteristics of the coccal flora, enterobacteria and obligate intestinal flora released in young children with acute intestinal diseases. Qualitative and quantitative changes of microflora in the intestine are identified, as well as the level of sensitivity of isolated strains to antibiotics was determined.
In the feces of children with acute intestinal infections, the bacteria of the cocci flora group were detected - 57.9%, from them: Staphylococcus epidermidis (29,2%), Staphylococcus aureus (14,6%), Staphylococcus saprophyticus (14,1%) from the total number of researched patients. The microorganisms ofpathogenic group, conditionally pathogenic intestinal flora were identified, which accounted 53.7% in total. Study of the quantitative composition of microorganisms showed that, bacteria were present in 40.0% of sick children in a dilution offaeces (1x105-1x106).
Antibiogram of detected strains of microorganisms, circulating in the Tajikistan was presented.
Key words: Intestinal microflora, acute intestinal infections, nutrient medium, antibioticogram, strains of microorganisms.
Актуальность. Одной из серьёзных проблем педиатрии в мире, в т.ч. и в Республике Таджикистан, является высокий уровень заболеваемости острыми кишечными инфекциями среди детей. По данным ВОЗ, ежегодно по всему миру регистрируются от 68,4 до 275 млн. диарейных заболеваний. Острые кишечные инфекции являются широко распространённой патологией, занимающей 2 место (после ОРВИ) среди всех инфекционных заболеваний в детском возрасте. На долю детей приходится около 60-70% всех случаев, регистрирующихся в разных возрастных группах [1-3].
Актуальность этой группы инфекций обуславливает высокий уровень заболеваемости, летальности, социально-экономического ущерба [4].
В связи с этим возросло значение микробиологических исследований, направленных на обнаружение видовой принадлежности возбудителя и определение чувствительности его к антибактериальным препаратам [5].
Кроме того, широкое применение антибиотиков привело в последние годы не только к селекции множественно устойчивых штаммов, но и к видоизменению микрофлоры и этиологической структуры острых кишечных заболеваний [6].
Учитывая вышеизложенное, в настоящей работе представлены результаты определения частоты и массивности выделения микробов группы кокковой флоры и энтеробактерий у детей младшего возраста с острыми кишечными заболеваниями. Также представлена антибиотикограмма выделенных возбудителей инфекции.
Цель исследования. Изучить видовой состав микроорганизмов в кале больных детей с острыми кишечными заболеваниями и определить их чувствительность к антибиотикам.
Материал и методы исследования. Материалом для бактериологического исследования служили образцы проб испражнений от детей с острыми кишечными инфекциями.
Для выявления микроорганизмов в 1 г кала проведены качественные и количественные исследования фекалий (колониеобразующие единицы - КОЕ) с использованием элективных и селективных питательных сред (6,5% молочно-солевой и 5-10% кровяной агар, среды Эндо, Плоскирёва, Сабуро) [8-9].
Идентификация выявленных культур проводилась общепринятыми методами: бактериологическими, культуральными, морфологическими и биохимическими.
Худжагелдиева З.У - старший научный сотрудник лаборатории острых кишечных инфекций ТНИИ профилактической медицины МЗиСЗН РТ, к.м.н.; 734043 г. Душанбе, ул. Шерози 39/4, кв. 3; тел.: +992935208654; E-mail: zuli-51@ mail.ru
Морфологические свойства выделенных штаммов и их тинкториальных свойств определяли микроскопированием мазков, окрашенных по Грамму.
Определение биохимических свойств патогенных стафилококков проводилось на основе изучения плазмокоагулирующих, гемолитических, лецитиназных свойств, теста на каталазу и способности разлагать сахара (глюкоза, лактоза, маннит, сахароза, арабиноза, ксилоза, манноза).
Чувствительность микрофлоры к антибиотикам была изучена путем посева исходного материала на сухой питательный агар с бумажными дисками, пропитанных антибиотиками. Для определения чувствительности исследуемой бактериальной культуры готовили взвесь, содержащую стандартное количество жизнеспособных бактерий, засеянных газоном в чашки Петри сухим питательным агаром. Диски на засеянную поверхность накладывали с помощью аппликатора на расстоянии 2,5 см от центра чашки по кругу. Посевы инкубировали не более 18-20 часов при 37°С. Учёт результатов проводился путем измерения диаметра зоны подавления роста. Интерпретацию полученных результатов осуществляли на основании критериев чувствительности.
Статистическая обработка материала проводилась по формулам, приведенным в справочнике И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (1962). При определении вероятности различий (Р) пользовались таблицей Стьюдента [10].
Результаты и их обсуждение. Работа проводилась на базе НИИ профилактической медицины в лаборатории острых кишечных инфекций. В процессе изучения аутофлоры кишечника 240 детей с острыми кишечными заболеваниями учитывались микроорганизмы группы кокковой флоры и энтеробактерий. Больные были разделены на 4 возрастные группы: 0-3 мес. (67 детей), 3-6 мес. (68), 6-12 мес. (50) и 1-3 года (55). Выявлено 139 штаммов стафилококков и 129 штаммов энтеро-бактерий. Исходное разведение 1 грамма кала составило 1х101 с физиологическим раствором, где готовили ряд последовательных десятикратных разведений надосадочной жидкости до 1х107, где по 0,1 мл взвеси засевали на плотные питательные среды из следующих разведений: 1х103 - на среду Плоскирёва, молочно-солевой агар и среду Сабуро, 1х105 - на среду Эндо.
Разведение кала 1х107- на среду Эндо, кровяной агар, лакто-бифидум агар.
При бактериологическом исследовании в 1 грамме кала у больных детей обнаружена группа стафилококков, равная 57,9±3,2%: Staphylococcus epidermidis (29,2±2,9%), Staphylococcus aureus (14,6±2,27%) и Staphylococcus saprophyticus (14,1±2,24%). В ходе исследования возрастных
групп от 0 до 3 мес. и от 3 до 6 мес. стафилококки выявлялись у 19,6±2,5% и 22,9±2,7%, соответственно от общего числа обследованных. В 13,3±2,2% случаев обнаружены в группе детей
Количество изученных штаммов стафилококков в 1 грамме каловой массы больных в 96-ти случаях (40%) представлены в диапазоне от 1х105 до 1х106, что подтверждает стафилококковую этиологию патологического процесса.
В процессе изучения бактерий группы кокковой флоры нами также учитывались микроорганизмы группы патогенной, условно-патогенной флоры и облигатных представителей микрофлоры (бифидо-лактобактерии и колибактерии). При посевах испражнений было выделено 129 штаммов микробов. В таблице 2 представлены данные разнообразных микробов рода энтеро-бактерий при обычном культивировании кала в аэробных условиях. Результаты исследований показали, что энтеробактерии у обследуемых больных детей оказались равными 53,7±3,22% и
от 6 до 12 мес. В возрастной группе 1-3 года эти показатели были значительно ниже и составляли 2,1±0,9%. Полученные данные представлены в таблице 1.
были представлены 7-ю видами микроорганизмов. Среди условно-патогенных энтеробактерий наиболее часто обнаруживались микробы рода Клебсиелл (15,8±2,3% в группе детей 0-3 мес. и 8,7±1,8% в возрасте 1-3 года от общего числа обследованных). На втором месте по частоте обнаружения микробов в возрасте 0-3 мес. и 1-3 года наблюдались Е. Coli (Lac-), что составило 5,83±1,5% и 2,1±0,9% соответственно. Наименьший процент выделения составили микробы группы: Salmonella редких групп, Pseudomonas aeruginosa, Citrobacter, Proteus SPP, Acinetobacter, где частота обнаружения от общего числа обследованных составило от 0,4±0,41% до 1,25±0,73%. Количество микроорганизмов содержимого в 1 грамме кала было представлено в пределах от 1х104 до 1х106.
Таблица 2
Видовой состав энтеробактерий у детей с кишечными инфекциями в зависимости от возраста
Наименование Микробов 0-3 мес. в % 3-6 мес. в % 6-12 мес в % 1-3 года в %
Salm. редких групп (8) 4 (1,7±0,8) 1 (0,4±0,41) - 3 (1,25±0,73)
Klebsiella (76) 38 (15,8±2,3) 9 (3,75±1,23) 8 (3,3±1,2) 21 (8,7±1,8)
Citrobacter (4) - 1 (0,4±0,41) - 3 (1,25±0,7)
Pseud. aeruginosa (8) 2 (0,8±0,6) 2 (0,8±0,6) - 4 (1,6±0,8)
Proteus SPP (5) - - 2 (0,8±0,6) 3 (1,25±0,7)
Acinetobacter (2) - - - 2 (0,8±0,6)
E.Coli (Lac-) (25) 14 (5,83±1,5) 3 (1,25±0,7) 3 (1,25±0,7) 5 (2,1±0,9)
Итого: 129 штаммов 58 (24,2±2,8) 16 (6,7±1,6)** 13 (5,4±1,5)** 42 (17,5±2,4)*
Дисбактериоз (28) 12 (5,0±1,4) 4 (1,7±0,8) 5 (2,1±0,9) 7 (2,9±1,1)
Примечание:* - статистически значимые различия в сравнении между больными детьми 0-3 мес. и группами больных детей 3-6, 6-12 мес. и 1-3 лет (*Р>0,01,**Р< 0,001)
Таблица 1
Частота выявления стафилококков у детей с кишечными инфекциями
Наименование Микробов 0-3 мес. в % 3-6 мес. в % 6-12 мес в % 1-3 года в %
Staph. аигеш (35) 12 (5,0±1,4) 17 (7,1±1,6) 6 (2,5±1,0) 0
Staph. epidermidis (70) 26 (10,8±2,0) 20 (8,3±1,8) 19 (7,9±1,7) 5 (2,1±0,9)
Staph. saprophyticus(34) 9 (3,75±1,2) 18 (7,5±1,7) 7 (2,9±1,1) 0
Итого: 139 штаммов 47 (19,6±2,5)* Р>0,5 55 (22,9±2,7) 32 (13,3±2,2)* Р<0,01 5 (2,1±0,9)* Р<0,01
Примечание:* - статистически значимые различия в сравнении между больными детьми группы 3-6 мес. и группами больных детей 0-3 мес., 6-12 мес., 1-3 года
Состав микробов характеризовалась тем, что бактерии вегетируют в виде различных ассоциаций. В виде монокультуры преимущественно встречались бактерии рода Клебсиелл -7,5±1,7%. Частота встречаемости 2-компонентной микробной ассоциации определялась в пределах 42,5±3,2%.
Наиболее частая 2-компонентная ассоциация наблюдалась между штаммами Klebsiella и бактериями рода кокковой флоры. В 6,25±1,6% случаев встречалась 3-компонентная микробная ассоциация: Klebsiella + Pseudomonas aeruginosa + Staphylococcus; Klebsiella + Staphylococcus + E.Coli (Lac-) и др. (табл. 3).
Таблица 3
Ассоциация микроорганизмов, выделенных в ис-
пражнениях детей с кишечными инфекциями
Наименование n в %
Монокультура 18 7,5±1,7*
2-компонентная 102 42,5±3,2
3-компонентная 15 6,25±1,6 **
Примечание: достоверное отличие сравниваемых групп (* Р<0,01, **Р<0,002)
Кроме того, отмечены изменения в составе облигатных представителей микрофлоры: би-
фидобактерии, лактобактерии и колибактерии, что ведет к нарушению микробного пейзажа -дисбактериозу, о чём свидетельствует снижение содержания молочно-кислых палочек у 11,6±2,1% (табл. 2). При микробиологическом исследовании образцов 1 грамма фекалия детей с остро-кишечными инфекциями в 12 случаях (5,0±1,4%) в возрасте 0-3 мес. и в 7 случаях (2,9±1,1%) в возрасте 1-3 года нормальная кишечная флора либо не высевались, либо количество её снижено до 1х102-1х103, по сравнению с нормой. В группах детей 3-6 и 6-12 месяцев содержание облигатных представителей микрофлоры в кале составило 1,7±0,8% и 2,1±0,9% соответственно. У больных детей с острыми кишечными инфекциями рост бифидобактерий наблюдалось в разведении 1х103-1х102 при норме (1х109-10). Среднее количество лактобактерий в 1 грамме кала в норме составляет 1х106-1х107. У обследуемого контингента лактобактерии в испражнениях высевались в разведении 1х103-1х105.
Нельзя недооценить клиническое значение группы микробов, относящихся к семейству кишечных палочек (E. Coli). У детей пределы колебаний минимальных и максимальных количеств в 1 грамме пробы представлены в диапазоне от 1х107 до 1х108. В бактериологических посевах кала E. Coli высевалась во всех случаях и колебалась в пределах от 1х104 до 1х106.
Таблица 4
Антибиотикограмма штаммов микроорганизмов, выделенных в кале детей с кишечными инфекциями
Наименование антибиотиков Staph.epidermidis (n=70) Staph.aureus (n=35) Staph. saprophyticus (n=34) Группа энтеро-бактерий (n=129)
абс. % абс. % абс. % абс %
Ципрофлоксацин 60 85,7 27 77,1 30 88,2 111 86,0
Пефлоксацин 30 42,8 11 31,4 13 38,2 69 53,4
Цефтриаксон 56 80,0 32 91,4 31 91,2 119 92,2
Цефотаксим 65 92,8 31 88,6 32 94,1 120 93,0
Цефазолин 48 68,5 18 51,4 16 47,0 112 86,8
Эритромицин 44 62,8 19 54,3 25 73,5 0 0
Сумамед 38 54,3 18 51,4 21 61,7 0 0
Пенициллин 23 32,8 6 17,1 7 20,6 21 16,2
Амоксициллин 22 31,4 5 14,3 9 26,5 35 27,1
Гентамицин 64 91,4 34 97,1 32 94,1 115 89,1
Тетрациклин 55 78,5 20 57,1 12 35,3 76 58,9
Левомицетин 61 87,1 24 68,6 30 88,2 95 73,6
Фурадонин 67 95,7 28 80,0 28 82,3 121 93,7
У всех выделенных микробов изучалась чувствительность к следующим группам антибиотиков: фторхинолоны, цефалоспорины, макролиды, препараты пенициллинового ряда и аминоглюко-зиды (табл. 4)
Результаты проведённых исследований показали, что штаммы стафилококков оказались чувствительными к антибиотикам цефалоспори-нового ряда (к цефтриаксону - от 80,0% до 91,4%, клафорану - 88,6-94,1 %) и ципрофлоксацину
- 77,1-88,2%. Кроме того, против штаммов стафилококков эффективными оказались макролиды (эритромицин 54,3-73,5%, сумамед - 51,4-61,7%). Выраженные бактерицидные свойства проявлялись и к гентамицину (91,4-97,1 %), левомицетину (68,6-88,2%) и фурадонину (80,0-95,7%).
К остальным антибиотикам (абактал, пенициллин, амоксициллин) процент чувствительных штаммов варьировал от 14,3% до 42,8 %, что необходимо учитывать при проведении этиотроп-ной терапии кишечных инфекций.
Цефалоспорины активны и в отношении большинства грамотрицательных микроорганизмов (энтеробактерий). В частности, чувствительность бактерий обнаружена к цефтриаксону (92,2%), це-фотаксиму (93,0%) и цефазолину (86,8%). Высокую чувствительность энтеробактерии проявляли к гентамицину (89,1%), ципрофлоксацину (86,0%) и фурадонину (93,7%). Широкое применение антибиотиков при ряде заболеваний, в частности острых кишечных инфекций, обосновывается преимущественно тем, что эти препараты обладают весьма значительной активностью в отношении самых разнообразных видов микробов и в ряде случаев оказываются более эффективными.
Заключение. Анализ полученных данных позволяет прийти к мнению о том, что у детей острые кишечные инфекции в 57,9±3,2% случаев вызваны стафилококками и энтеробактериями (53,7±3,22%).Чаще всего стафилококки выделялись у детей 0-3 и 3-6 месяцев (19,6±2,5% и 22,9±2,7%, соответственно).
Среди условно-патогенных энтеробактерий наиболее часто обнаруживались микробы рода Клебсиелл (15,8±2,3% в группе детей 0-3 месяцев и 8,7±1,8% в возрасте 1-3 лет). Процент выделения других микробов (Salmonella редких групп, Pseudomonas aeruginosa, Citrobacter, Proteus SPP, Acinetobacter) был незначительным - 0,4±0,41%
- 1,6±0,8%.
Выявленные изменения в составе облигатных представителей микрофлоры (бифидобактерии, лактобактерии и колибактерии), свидетельствовали о нарушении микробного пейзажа с возможным развитием дисбактериоза кишечника. Косвенным подтверждением сказанного является факт значительного снижения содержания мо-лочно-кислых палочек у 11,6±2,1% обследуемого контигента.
Изучение противомикробного действия антибактериальных препаратов, относящихся к группе фторхинолонов, цефалоспоринов, макролидов, аминоглюкозидов, показало, что большинство возбудителей кишечных инфекций у детей проявляют высокую чувствительность к вышеперечисленным антибиотикам, что следует учесть при проведении этиотропной терапии этих заболеваний. Полученные данные могут быть использованы при составлении клинических протоколов лечения острых кишечных инфекций у детей.
Исследования по определению чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам следует периодически возобновлять, так как нерациональное применение последних может способствовать формированию устойчивости к ранее эффективным препаратам.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов
ЛИТЕРАТУРА
1. Ткаченко У И., Суворова А.Н. Дисбиоз кишечника. Руководство по диагностике и лечению.- СПб.: Информ. Мед., 2009.- 276 с.
2. Ильянко Л.И. Дисбиотические нарушения кишечника у детей.- Методические рекомендации.- М., 2000.- 47 с.
3. Рафиев Х.К., Усманова Г.М., Дабуров К.Н. Социально-экономическая значимость внутри-больничных инфекций // Здравоохранение Таджикистана.- №2.- 2010. - С. 83-84.
4.Тец В.В. Микроорганизмы и антибиотики.- СПб, 2000.- 172 с.
5. Шепелин И.А., Миронов А.Ю., Шепелин К.А. Питательные среды. Справочник бактериолога. - М., 2015.- 194 с.
6. Ашурова Р.Ш., Ходжаева Н.М., Джураева Н.С., Салимов А.М. Бактериальные и грибковые оппортунистические инфекции у ВИЧ-позитивных детей // Вестник Академии медицинских наук Таджикистана. - 2016. - N»4. - С. 109-119.
^ХУЧДГЕЛДИЕВА З.У., САИДОВ Х,.М., БОБОЕВА Б.Р., ЯДГАРОВА Л.Р., МУБОРАККЛДАМОВА Р.Х., КЕНЧДЕВАР.А.
МИКРОФЛОРАИ РОВДОИ ^ОЗИМАИ КУДАКОН ^АНГОМИ БЕМОРИИ ШАДИДИ РУДА
Кафедраи стоматологияи ортопедии ДДТТ ба номи АбуалИ ибни Сино Маркази «Стоматология»
Калима^ои калиди: микрофлораи руда, уфунатдои шадиди руда, гизодо, антибиотикограмма, штаммдои микро-организмдо.
Татцицот%ои бактериологи нишон дод, ки сабаби бемории шадиди руда миёни кудакон дар 57,9+3,2% стафилакок-к%о ва дар 53,7+3,22 энтеробактерия%о мебошанд.
Дар синну соли аз 0-3 мо%а, аз 3-6 мо%а, бештар стафилококщо (мутаносибан 19,6% ва 22,9%) дарёфт гарди-данд. Дар байни микроб%ои шартан касалиовар бошад асосан клебсиелла%о ба цайд гирифта мешуданд. Дар 11,6+2,1% кудакон дигаргуншавии шумора ва таркиби микрофлора%ои табиии руда%о муайян карда шуд, ки ин %олат метовонад сабаби дисбактериоз гардад. Инчунин, %ассоснокии микроб%ои дарёфтшуда ба антибиотищо муцаррар гардид. Ан-тибиотикограмма%о метавонанд %ангоми гузарондани табобати ин гуру% беморон мавриди истифода царор гиранд.
