CC BY
21Ветеринарный врач. 2023. № 1. С. 64 - 69. The Veterinarian. 2023; (1): 64 - 69
Научная статья
УДК 619:579.62:618.14-002:636.2 DOI: 10.33632/1998-698Х_2023_1_64
Микробиоценоз половых путей у коров при остром послеродовом эндометрите
Руслан Радиевич Хамидуллин, Анна Михайловна Тремасова, Ильгиз Ильясович Идиятов, Наиль Ильдарович Хаммадов, Юрий Михайлович Тремасов
Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности, Казань, Россия
Автор, ответственный за переписку: Анна Михайловна Тремасова, anuta.tremasova@yandex.ru
Аннотация. Цель данного исследования заключалась в изучении микробиоценоза половых путей у коров с острым послеродовым эндометритом, а также определения антибиотиков чувствительных к видам микроорганизмов. Образцы влагалищной слизи были отобраны у животных с клиническими признаками острого гнойно-катарального эндометрита (n = 10) и у клинически здоровых животных (n = 5) через 10-14 дней после отела. Определение видового состава микрофлоры половых путей проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с флуоресцентной детекцией. Выделение чистых культур микроорганизмов проводили по методу Дригальского. Их патогенность устанавливали в опыте на лабораторных белых мышах. Определение чувствительности выделенных изолятов к антибиотическим препаратам проводили диско-диффузионным методом с использованием среды АГВ. Установили, что микробиоценоз половых путей коров при остром, гнойно-катаральном эндометрите представлен бактериями Escherichia coli, Clostridium spp., Streptococcus spp., Proteus spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Klebsiella spp., Parvimonas micra, Shigella spp., Staphylococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. Условно-патогенная микрофлора была доминирующей. В 30 % проб от больных эндометритом коров обнаружены дрожжеподобные грибы рода Candida. Микробный фон половых путей представлен как монокультурами условно-патогенных микроорганизмов, так и их ассоциациями. Микробиоценоз влагалища у клинически здоровых коров был схож по составу, однако в нем преобладали представители нормофлоры - бактерии родов Lactobacillus spp., Clostridium spp., Bifidobacterium spp., дрожжеподобных грибов рода Candida в исследуемых образцах обнаружено не было. Выделенная микрофлора чувствительна к антибиотикам группы аминогликозидов, менее чувствительна к препаратам тетрациклинового ряда, противогрибковым средствам и устойчива к пенициллинам.
Ключевые слова: коровы, половые пути, влагалищные выделения, эндометрит, микробиоценоз, патогенность, антибиотикочувствительность
Microbiocenosis of the genital tract in cows with acute postpartum endometritis
Ruslan R. Khamidullin, Anna M. Tremasova, Ilgiz I. Idiyatov, Nail I. Khammadov, Yuri M. Tremasov
Federal Center for Toxicological, Radiation, and Biological Safety, Kazan, Russia Author responsible for correspondence: Anna M. Tremasova, anuta.tremasova@yandex.ru
Abstract. The purpose of this paper was to study the microbiocenosis of the genital tract in cows with acute postpartum endometritis. Vaginal mucus samples were taken from animals with clinical signs of acute purulent-catarrhal endometritis (n = 10) and from clinically healthy animals (n = 5) 10-14 days after calving. The species composition of the genital tract microflora was determined by real-time polymerase chain reaction (PCR-RV) with fluorescence detection. Isolation of pure cultures of microorganisms was carried out by the Drigalsky method. Their pathogenicity was established in an experiment on laboratory white mice. The sensitivity of isolated isolates to antibiotic drugs was determined by the disco-diffusion method using the AGV medium. It was established that the microbiocenosis of the genital tract of cows with acute, purulent-catarrhal endometritis is represented by the bacteria Escherichia coli, Clostridium spp., Streptococcus spp., Proteus
spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Klebsiella spp., Parvimonas micra, Shigella spp., Staphylococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. Conditionally pathogenic microflora was dominant. Yeast-like fungi of the genus Candida were found in 30 % of samples from cows with endometritis. The microbial background of the genital tract is represented by both monocultures of conditionally pathogenic microorganisms and their associations. Vaginal microbiocenosis in clinically healthy cows was similar in composition, but it was dominated by representatives of the normoflora - bacteria of the genera Lactobacillus spp., Clostridium spp., Bifidobacterium spp., yeast-like fungi of the genus Candida were not found in the studied samples. The isolated microflora is sensitive to antibiotics of the aminoglycoside group, less sensitive to tetracycline preparations, antifungal agents and resistant to penicillins.
Keywords: cows, genital tract, vaginal discharge, endometritis, microbiocenosis, pathogenicity, antibiotic sensitivity
Введение. Эффективность деятельности сельскохозяйственных предприятий молочной и мясной направленности во многом зависит от воспроизводительных качеств животных. Отрицательное влияние на производительные характеристики предприятий оказывают акушерско-гинекологические заболевания животных, в частности эндометрит. Эндометрит является одной из основных причин бесплодия у коров, приводящей к высоким экономическим потерям [13, 16].
В возникновении эндометритов рассматривают причины как инфекционного, так и неинфекционного характера. По мнению ряда авторов, основными этиологическими факторами возникновения эндометрита у сельскохозяйственных животных являются снижение иммунитета, инфекции близ лежащих органов, травмирование слизистой оболочки половых путей при отеле, нарушения при осуществлении процедуры отделения последа, неудовлетворительная дезинфекция инструментов для родовспоможении, гормональные сбои у животных во время беременности и родов [1, 3, 6, 9, 11, 12, 14, 15].
Большинство исследователей также сходятся во мнении, что общим фактором возникновения эндометритов является патогенная и условно-патогенная микрофлора [2, 4, 5, 7, 10].
Целью нашего исследования явилось изучение микробиоценоза половых путей у коров с острым, гнойно-катаральным послеродовым эндометритом в сравнении с клинически здоровыми животными, а также определение чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам.
Достижению обозначенной цели способствовало решение следующих задач:
- отобрать образцы влагалищной слизи здоровых и больных эндометритом коров,
- изучить микробный фон половых путей здоровых и больных эндометритом коров,
- определить чувствительность выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Материалы и методы. Исследования проведены в лаборатории ветеринарной биотехнологии
ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Для определения микробиоценоза нами проведено исследование проб влагалищных выделений от здоровых (n=5) и больных эндометритом (n=10) коров из сельхозпредприятия Кукморского района Республики Татарстан. Пробы отбирали через 10-14 дней после отела. Для этого каждую корову фиксировали, а область промежности обрабатывали дезинфицирующим раствором. Пробы выделений отбирали полистироловой пипеткой с соблюдением правил асептики из влагалища под шейкой матки.
Определение видового состава микрофлоры матки проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с флуоресцентной детекцией. Для этого применяли наборы «Колонофлор-16» и «Андрофлор» в соответствии с инструкциями производителей. Выделение нуклеиновых кислот выполняли набором «ДНК сорб В» в соответствии с инструкцией производителя. Интерпретацию результатов амплификации осуществляли программным обеспечением, входящим с состав наборов «Колонофлор-16» и «Андрофлор».
Выделение чистых культур микроорганизмов проводили по методу Дригальского [8].
Наличие патогенных свойств у выделенных изолятов определяли на белых мышах массой тела 18-20 г при их внутрибрюшинном заражении суспензией суточной культуры в титре 1*109 КОЕ/см3 в объеме 0,5 см3/гол.
Установление чувствительности выделенных изолятов к антибиотическим препаратам проводили диско-диффузионным методом с применением среды АГВ. В эксперименте использованы микроорганизмы, которые наиболее часто выделялись из образцов влагалищной слизи больных эндометритом коров. Инокулюм полученных культур (плотность суспензии 0,5 по МакФарланду) засевали газоном на чашки Петри с питательной средой, после подсушивания при комнатной температуре в течение 30 минут. При помощи стерильного пинцета на поверхность среды наносили диски с антимикробными препаратами. Для эксперимента использовали стандартные диски с
антибиотиками «Кетоконазол», «Неомицин», «Гентамицин», «Канамицин», «Бензилпенициллин», «Тетрациклин» производства НИЦФ, г. Санкт- Петербург. Сразу после аппликации чашки помещали в термостат вверх дном. Срок инкубации составил от 18 до 24 часов при температуре 35 °С, дрожжеподобные грибы инкубировали в термостате при 25 °С. По истечении указанного срока при помощи линейки измеряли диаметр зоны задержки роста.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ Microsoft Excel.
Результаты и обсуждения. По результатам осмотра клинически здоровых животных выделений из половой щели не выявлено. Слизистые оболочки влагалища и его преддверия бледно-розового цвета, без видимых изменений. Матка расположена в тазовой полости, рога матки симметричны.
У коров, больных эндометритом, отмечали зловонные, катаральные и гнойно-катаральные выделения из половой щели, гиперемию слизистой оболочки влагалища, атонию матки, рога матки ассиметричны.
При исследовании проб выделений установлено, что микрофлора влагалища у коров при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите была представлена бактериями Escherichia coli, Clostridium spp., Streptococcus spp., Proteus spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Klebsiella spp., Parvimonas micra, Shigella spp., Staphylococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. Условно-патогенная микрофлора была доминирующей, отмечалось снижение количества лактобацилл и бифидобактерий. В 30 % проб от больных эндометритом коров обнаружены дрожжеподобные грибы рода Candida. Всего выделено 38 изолятов, при этом 13,2 % выделенных
культур оказались патогенными для лабораторных животных.
Микробный фон влагалищных выделений у коров при остром послеродовом эндометрите был представлен как монокультурами условно-патогенных микроорганизмов, так и их ассоциациями (рисунок 1).
Рисунок 1 - Микробный фон половых путей коров при остром послеродовом эндометрите
Ассоциации микроорганизмов были следующими: Escherichia coli + Clostridium perfringens + Candida albicans; Escherichia coli + Klebsiella pneumonia + Clostridium perfringens + Parvimonas micra; Escherichia coli + Streptococcus pyogenes; Escherichia coli + Klebsiella oxytoca; Parvimonas micra + Shigella spp.; Escherichia coli + Clostridium difficile + Clostridium perfringens + Proteus mirabilis; Escherichia coli + Fusobacterium nucleatum + Shigella spp.; Klebsiella pneumonia + Candida albicans; Escherichia coli + Proteus vulgaris; Escherichia coli + Staphylococcus aureus и другие.
Микробный фон половых путей клинически здоровых коров был схож по составу. Однако в количественном отношении в нем преобладали представители нормофлоры - бактерии родов Lactobacillus spp., Clostridium spp., Bifidobacterium spp. Дрожжеподобных грибов Candida. в пробах обнаружено не было.
Эксперимент по определению чувствительности выделенной из влагалищных выделений больных эндометритом коров микрофлоры к ряду антибиотиков показал, что не все препараты проявляют высокую антимикробную активность (таблица 1).
j монокультуры условно-патогенных микроорганизмов
S ассоциации условно-патогенных микроорганизмов
Таблица 1 - Чувствительность микрофлоры к антимикробным препаратам
Препарат Диаметр зоны задержки роста, мм
E. coli Staph. aureus Str. pyogenes C. albicans P. mirabilis
«Кетоконазол» 10,67±0,82 0 0 24,7±0,41 10,7±0,1
«Неомицин» 24,0±1,22 20,7±0,54 30,0±0,00 11,33±0,82 20,5±0,52
«Гентамицин» 25,0±1,41 30,0±0,00 29,3±0,98 13,33±2,04 25,0±0,00
«Канамицин» 25,33±1,08 25,0±0,00 20,0±0,94 10,33±0,41 20,0±0,9
«Бензилпенициллин» 9,7±0,41 10,33±0,54 10,0±0,00 10,0±0,00 10,0±0,00
«Тетрациклин» 10,33±0,41 21,0±0,00 10,0±0,00 14,0±1,41 15,67±0,8
Таким образом, выделенные из половых путей представители условно-патогенной микрофлоры оказались наиболее чувствительными к «Гентамицину», «Неомицину» и «Канамицину». Меньшая активность отмечена у «Тетрациклина». При этом микрофлора была устойчива к препаратам пенициллинового ряда.
Заключение. По результатам проведенных экспериментов установлено, что микробиоценоз половых путей у коров с острым послеродовым эндометритом по составу схож с таковым клинически здоровых животных. Однако в нем преобладают условно-патогенные бактерии. В некоторых пробах были обнаружены дрожжеподобные грибы рода Candida. Микробный фон содержимого влагалища был представлен как монокультурами, так и их ассоциациями. Из 38 выделенных изолятов 13,2 % оказались патогенными для лабораторных животных.
Выделенная микрофлора оказалась чувствительна к антибиотикам группы аминогликозидов, менее чувствительна к препаратам тетрациклинового ряда, противогрибковым средствам и устойчива к пенициллинам.
Данные, полученные в результате исследования, могут быть использованы при разработке эффективных средств и методов профилактики и лечения эндометритов у коров.
Литература
1. Багманов, М. А. Микрофлора матки коров после патологических родов / М. А. Багманов, Р. Н. Сафиуллов // Российский ветеринарный журнал. - 2007 - Спец. вып. - С. 12.
2. Брехов, Т. П. Значение мониторинга антибактериальной активности лекарственных препаратов при терапии больных эндометритом коров / Т. П. Брехов, В. В. Филин, Л. И. Ефанова // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации : мат. 3 съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург, 2011. - 76 с.
3. Вахитов, И. И. Изучение этиологии и распространения послеродовых эндометритов у коров в хозяйствах Республики Татарстан / И. И. Вахитов, М. А. Багманов, Р. К. Шаев // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана. - 2012. - Т. 211.- С. 229-233.
4. Войтенко, Л. Г. Влияние микробного фактора на возникновение скрытого эндометрита у коров / Л. Г. Войтенко, Т. И. Лапина, И. А. Головань // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. - 2015. - № 1. - С. 23-25.
5. Грига, Э. Н. Причины, пути и методы ликвидации бесплодия коров в Ставропольском крае / Э. Н. Грига // Вестник ветеринарии. - 2000. - № 16 (2). - С. 57-59.
6. Грига, Э. Н. Послеродовая патология коров (этиология, диагностика, терапия и профилактика) : специальность 16.00.07 «Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных» : автореферат дис. ... д-ра ветеринар. наук / Григ Эдуард Николаевич ; Ставроп. гос. аграр. ун-т. - Ставрополь, 2003. - 49 с.
7. Григорьева, Т. Е. Результаты применения электропунктуры для профилактики болезней матки у коров после родов / Т. Е. Григорьева, С. Г. Кондручина, Л. А. Трифонова // Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных : мат. Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию со дня рождения профессора Г. А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров. - Воронеж : Истоки, 2012 - С. 162-166.
8. Давлетшина, Г. К. Микробиологические методы : учеб. пособие / Г. К. Давлетшина, М. М. Туйгунов, Ю. З. Габидуллин. - Уфа : Изд-во ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России, 2018. -С. 28-35
9. Дегтярева, С. С. Видовой состав и чувствительность микроорганизмов из смывов шейки матки при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров / С. С. Дегтярева, И. С. Коба // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях : материалы Межд. науч.-практич. конф., посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2006. - С. 336-338.
10. Иванюк, В. П. Этиопатогенез послеродовых эндометритов у коров / В. П. Иванюк, Г. Н. Бобкова // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2022. - № 2 (94). - С. 191-195.
11. Леонов, К. В. Возможность коррекции репродуктивной функции у коров при различных состояниях естественной резистентности : специальность 16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с митотоксикологией и иммунология», 16.00.07 «Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных» : автореферат дис. ... д-ра ветеринар. наук / Леонов Константин Васильевич ; Моск. гос. акад. ветеринар. медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина. Москва, 2006. - 37 с.
12. Никитин, В. Я. Основные причины бесплодия в Ставропольском крае и меры его предупреждения / В. Я. Никитин // Науч. Тр. - Ставрополь : Ставропольский СХИ, 1972. - С. 35.
13. Тремасов, Ю. М. Фармако-токсикологическая и биологическая оценка препарата ДС-2 и его применение при эндометритах у животных : специальность 16.00.04 «Ветеринарная фармакология с токсикологией», 16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с митотоксикологией и иммунология» : дис. ... канд. биол. наук / Тремасов Юрий Михайлович. - Казань, 2009. - 139 с.
14. Турченко, А. Н. Разработка и усовершенствование лечебно-профилактических мероприятий при остром послеродовом эндометрите у коров : специальность 16.00.07 «Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных» : дис. ... д-ра ветеринар. наук / Турченко Алексей Николаевич. - Воронеж, 1999. - 385 с.
15. Чеходариди, Ф. Н. Этиопатогенетическая терапия гнойно-катарального эндометрита у коров / Ф. Н. Чеходариди, Л. А. Мугниева // Известия Горского государственного аграрного университета. - 2015. - Т. 52, № 2. - С. 111-115.
16. Defining postpartum uterine disease and the mechanisms of infection and immunity in the female reproductive tract in cattle / I. M. Sheldon, J. Cronin, L. Goetze [et al.] // Biol Reprod. - 2009. - No 81 (6). -Р.1025-1032.
References:
1. Bagmanov, M. A. Microflora of the uterus of cows after pathological childbirth / M. A. Bagmanov, R. N. Safiullov // Russian Veterinary Journal. - 2007. - Special issue. - Р. 12.
2. Brekhov, T. P. The importance of monitoring the antibacterial activity of drugs in the treatment of cows with endometritis / T. P. Brekhov, V. V. Filin, L. I. Efanova // Actual problems of veterinary pharmacology, toxicology and pharmacy : мat. 3 Congress of Pharmacologists and toxicologists of Russia. -St.-Petersburg, 2011. - 76 p.
3. Vakhitov, I. I. Study of the etiology and spread of postpartum endometritis in cows on farms of the Republic of Tatarstan / I. I. Vakhitov, M. A. Bagmanov, R. K. Shaev // Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman. - 2012. - Vol. 211. - P. 229-233.
4. Voitenko, L. G. The influence of microbial factor on the occurrence of latent endometritis in cows / L. G. Voitenko, T. I. Lapina, I. A. Golovan // Proceedings of the Samara State Agricultural Academy. - 2015. - No 1. - Р. 23-25.
5. Griga, E. N. Causes, ways and methods of elimination of infertility of cows in the Stavropol territory / E. N. Griga // Bulletin of Veterinary Medicine. - 2000. - No 16 (2). - P. 57-59.
6. Griga, E. N. Postpartum pathology of cows (etiology, diagnosis, therapy and prevention): specialty 16.00.07 «Veterinary obstetrics and biotechnology of animal reproduction» : abstract of dis. ... Dr. veterinarian. Sciences / Grig Eduard Nikolaevich ; Stavrop. state agrarian un-t. - Stavropol, 2003. - 49 p.
7. Grigorieva, I. E. The results of the use of electropuncture for the prevention of uterine diseases in cows after childbirth / T. E. Grigorieva, S. G. Kondruchina, L. A. Trifonova // Modern problems of veterinary obstetrics and animal reproduction biotechnology : мat. International Scientific and Practical Conference, dedicated. To the 85th anniversary of the birth of Professor G. A. Cheremisinov and the 50th anniversary of the establishment of the Voronezh School of Veterinary Obstetricians. - Voronezh : Istoki. - 2012. - Р. 162166.
8. Davletshina, G. K. Microbiological methods : textbook. manual / G. K. Davletshina, M. M. Tuigunov, Y. Z. Gabidullin. - Ufa : Publishing House of the BSMU of the Ministry of Health of Russia, 2018. - Р.28-35
9. Degtyareva, S. S. Species composition and sensitivity of microorganisms from cervical flushes in postpartum purulent-catarrhal endometritis in cows / S. S. Degtyareva, I. S. Koba // Actual problems of veterinary medicine in modern conditions : мat. international scientific and practical conf., dedicated. The 60th anniversary of the Wildebeest of the Krasnodar NIVI. - Krasnodar, 2006. - Р. 336-338.
10. Ivanyuk, V. P. Etiopathogenesis of postpartum endometritis in cows / V. P. Ivanyuk, G. N. Bobkova // Proceedings of the Orenburg State Agrarian University. - 2022. - No 2 (94). - P. 191-195.
11. Leonov, K. V. Possibility of correction of reproductive function in cows in various states of natural resistance: specialty 16.00.03 «Veterinary microbiology, virology, epizootology, mycology with mitotoxicology and immunology», 16.00.07 «Veterinary obstetrics and biotechnology of animal reproduction» : abstract dis. ... Dr. veterinarian. Sciences / Leonov Konstantin Vasilyevich ; Moscow state acad. veterinarian. medicine and biotechnology them. K.I. Scriabin. - Moscow, 2006. - 37 p.
12. Nikitin, V. Ya. The main causes of infertility in the Stavropol Territory and measures to prevent it / V. Ya. Nikitin // Scientific Tr. - Stavropol : Stavropol SCI, 1972. - Р. 35.
13. Tremasov, Yu. M. Pharmaco-toxicological and biological evaluation of the drug DS-2 and its use in endometritis in animals: specialty 16.00.04 «Veterinary pharmacology with toxicology», 16.00.03 «Veterinary microbiology, virology, epizootology, mycology with mitotoxicology and immunology» : dis. ... cand. biol. Sciences / Tremasov Yuri Mikhailovich. - Kazan, 2009. - 139 p.
14. Turchenko, A. N. Development and improvement of therapeutic and preventive measures for acute postpartum endometritis in cows: specialty 16.00.07 «Veterinary obstetrics and biotechnology of animal reproduction» : dis. ... Dr. veterinarian. Sciences / Turchenko Alexey Nikolaevich. - Voronezh, 1999. - 385 p.
15. Chehodaridi, F. N. Etiopathogenetic therapy of purulent-catarrhal endometritis in cows / F. N. Chehodaridi, L. A. Mugnieva // News of the Gorsky State Agrarian University. - 2015. - Vol. 52, No 2. - Р. 111-115.
16. Defining postpartum uterine disease and the mechanisms of infection and immunity in the female reproductive tract in cattle / I. M. Sheldon, J. Cronin, L. Goetze [et al.] // Biol Reprod. - 2009. - No 81 (6). -Р.1025-1032.
Вклад авторов:
Хамидуллин Р. Р. - написание статьи и интерпретация результатов исследований. Тремасова А. М. - научное руководство; концепция исследования; формулировка заключения. Идиятов И. И. - концепция исследования; доработка текста.
Хаммадов Н. И. - методологическое и научно-практическое обеспечение исследований.
Тремасов Ю. М. - научно-практическое обеспечение исследований, интерпретация результатов
исследования.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Contribution of the authors:
Khamidullin R. R. - writing an article and interpreting research results.
Tremasova A. M. - scientific guidance; research concept; formulation of the conclusion.
Idiatov I. I. - the concept of research; revision of the text.
^ammadov N. I. - methodological and scientific-practical support of research.
Tremasov Yu. M. - scientific and practical support of research, interpretation of research results.
The authors declare that there is no conflict of interest.
© Хамидуллин Р. Р., Тремасова А. М., Идиятов И. И., Хаммадов Н. И., Тремасов Ю. М. 2023
