МИКРОБИОТАСИСТЕМЫ КОРНЕВОГО КАНАЛА У ПАЦИЕНТОВС ДЕСТРУКТИВНЫМИ ФОРМАМИ ХРОНИЧЕСКОГО АПИКАЛЬНОГО ПЕРИОДОНТИТА ДО И ПОСЛЕ СТАНДАРТНОГО ЭНДОДОНТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ И СОВРЕМЕННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА НЕЁ

Демьяненко Светлана Александровна; Морозова Марина Николаевна; Павлова Наталья Викторовна; Марченко Наталия Вячеславовна; Шаблий Дмитрий Николаевич; Казинина Елена Николаевна; Тофан Юлия Владимировна; Кириченко Вячеслав Николаевич

МИКРОБИОТАСИСТЕМЫ КОРНЕВОГО КАНАЛА У ПАЦИЕНТОВ С ДЕСТРУКТИВНЫМИ ФОРМАМИ ХРОНИЧЕСКОГО АПИКАЛЬНОГО ПЕРИОДОНТИТА ДО И ПОСЛЕ СТАНДАРТНОГО ЭНДОДОНТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ И СОВРЕМЕННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА НЕЁ

ДЕМЬЯНЕНКО СВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА, ORCID ID: 0000-0002-2743-498X; докт. мед. наук, профессор, заведующая кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, тел.: 8 (978)763-33-01, dc.kvalitet@gmail.com

МОРОЗОВА МАРИНА НИКОЛАЕВНА, ORCID Ю:0000-0002-4627-925Х; докт. мед. наук, профессор кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, mmrz58@mail.ru

ПАВЛОВА НАТАЛЬЯ ВИКТОРОВНА, ORCID ID:0000-0002-6173-0619; канд. мед. наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологииИнститута «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7,Natalia_Natalia-1@inbox.ru

МАРЧЕНКО НАТАЛИЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА, ORCID ID:0000-0001-8157-5807; канд. мед. наук, доцент кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, marchella1961@mail.ru

ШАБЛИЙ ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ, ORCID ID:0000-0002-2704-8202; канд. мед. наук, доцент кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, shabliy@bk.ru

КАЗИНИНА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА, ORCID ID: 0000-0002-1293-4201; канд. мед. наук, доцент кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, kazinina@mail.ru

ТОФАН ЮЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА, ORCID ID:0000-0002-1190-596X; ассистент кафедры стоматологии и ортодонтии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, julia.tofan@yandex.ru

КИРИЧЕНКО ВЯЧЕСЛАВ НИКОЛАЕВИЧ, ORCID ID:0000-0002-2313-3936; канд. мед. наук, ассистент кафедры хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Института «Медицинская академия имени С.И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского», Россия, 295006, Республика Крым, Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, kirichenko24_08slava@mail.ru

Реферат. Введение. Несмотря на современные достижения эндодонтии получить положительный эффект при лечении деструктивных форм хронического апикального периодонтита удается в 80-85% случаев. У остальных пациентов прогрессирующая патология становится основной причиной утраты зубов с последующей деформацией зубного ряда, изменениями в области височно-нижнечелюстного сустава, развитием гнойно-воспалительных процессов челюстно-ли-цевой области либо осложненным течением соматических заболеваний. Цель исследования - изучение динамики микробиологических показателей у пациентов с хроническим апикальным периодонтитом до и после стандартного эндо-донтического лечения, а также возможности воздействия на них аутоплазмы крови и геля гидроксиапатита. Материал и методы. Исследование было проведено у 32 пациентов с деструктивными формами хронического апикального периодонтита. Изучены 82 мазка-соскоба, полученные из верхушечной трети канала до его первичной медикаментозной обработки. Результаты и их обсуждение. Изучение микрофлоры корневых каналов у больных с деструктивными формами хронического апикального периодонтита после выполнения основных этапов стандартного эндодонтического протокола показало, что к 10 суткам лечения в области верхушки корня обнаружены малочисленные ассоциации микроорганизмов, состоящие из грамположительных и грамотрицательных кокковидных, палочковидных, извитых форм, а также грибковая микрофлора, преимущественно Candidaalbicans. Проведенное invitro исследование антибактериальных свойств аутоплазмы крови и геля гидроксиапатита показало, что на международные тест-штаммы бактерий Staphylococcus aureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ 885 гидроксиапатит оказывает выраженное бактерицидное воздействие, обогащенная тромбоцитами аутоплазма крови - слабое бактерицидное действие, а совместное применение этих препаратов не имеет антибактериального эффекта. Вывод. Учитывая высокие остеоиндуктивные свойства этих веществ, для достижения положительного влияния их на течение воспалительного и регенераторного процессов может быть использована схема их последовательного включения в эндодонтическое лечение с целью оптимизации существующего стандартного протокола при деструктивных формах хронического апикального периодонтита, что является предметом последующего изучения.

Ключевые слова: гель гидроксиапатита, плазма крови человека, остеоиндуктивные свойства.

Для ссылки: Микробиота системы корневого канала у пациентов с деструктивными формами хронического апикального периодонтита до и после стандартного эндодонтического лечения и современные возможности воздействия на нее / Демьяненко С.А., Морозова М.Н., Павлова Н.В., и др. // Вестник современной клинической медицины. - Т.15, вып. 3. -С.15-20. DOI: 10.20969/VSKM.2022.15(3).15-20.

MICROBIOTA OF THE ROOT CANAL SYSTEM IN PATIENTS WITH DESTRUCTIVE FORMS OF CHRONIC APICAL PERIODONTITIS BEFORE AND AFTER STANDARD ENDODONTIC TREATMENT AND MODERN POSSIBILITIES OF INFLUENCING IT

DEMYANENKO SVETLANA A., ORCID ID:0000-0002-2743-498X; Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Department of Dentistry and Orthodontics of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, tel.: 8 (978)763-33-01, dc.kvalitet@gmail.com

MOROZOVA MARINA N., ORCID Ю:0000-0002-4627-925Х; Doctor of Medical Sciences, Professor of the Department of Dentistry and Orthodontics of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, mmrz58@mail.ru

PAVLOVA NATALIA V., ORCID ID:0000-0002-6173-0619; Candidate of Medical Sciences, Associate Professor of the Department of Microbiology, Virology and Immunology of the: « S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, Natalia_Natalia-1@inbox.ru MARCHENKO NATALIA V., ORCID ID:0000-0001-8157-5807; Candidate of Medical Sciences, Associate Professor of the Department of Dentistry and Orthodontics of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, marchella1961@mail.ru SHABLIY DMITRY N., ORCID ID: 0000-0002-2704-8202; Candidate of Medical Sciences, Associate Professor of the Department of Dentistry and Orthodontics of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal UniversityRussia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, shabliy@bk.ru

KAZININA ELENA N., ORCID ID: 0000-0002-1293-4201; Candidate of Medical Sciences, Associate Professor of the Department of Dentistry and Orthodontics of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, kazinina@mail.ru TOFAN YULIA V., ORCID ID:0000-0002-1190-596X; Assistant Professor of the Department of Dentistry and Orthodontics of «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, julia.tofan@yandex.ru

KIRICHENKO VYACHESLAV N., ORCID ID:0000-0002-2313-3936; Candidate of Medical Sciences, Assistant Professor of the Department of Surgical Dentistry and Maxillofacial Surgery of the «S.I. Georgievsky Medical Academy» Institute, Crimean Federal University, Russia, 295006, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7, kirichenko24_08slava@mail.ru

Abstract. Introduction. Despite the modern achievements of endodontics, it is possible to obtain a positive effect in the treatment of destructive forms of chronic apical periodontitis in 80-85% of cases. In other patients, progressive pathology becomes the main cause of tooth loss with subsequent deformation of the dentition, changes in the temporomandibular joint, the development of purulent-inflammatory processes of the maxillofacial region or complicated course of somatic diseases. Aim. The aim of the study was to study the dynamics of microbiological parameters in patients with chronic apical periodontitis before and after standard endodontic treatment, as well as the possibility of exposure to blood autoplasm and hydroxyapatite gel. Material and methods. The study was conducted in 32 patients with destructive forms of chronic apical periodontitis. 82 scraping smears obtained from the apical third of the canal before its primary drug treatment were studied.Results anddiscussion.The study of the microflora of root canals in patients with destructive forms of chronic apical periodontitis after performing the main stages of the standard endodontic protocol showed that by the 10th day of treatment, small associations of microorganisms consisting of gram-positive and gram-negative coccoid, rod-shaped, convoluted forms, as well as fungal microflora, mainly Candida albicans, were found in the area of the root apex. An in vitro study of the antibacterial properties of blood autoplasm and hydroxyapatite gel showed that hydroxyapatite has a pronounced bactericidal effect on international test strains of bacteria Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Candida albicans SSM 885, platelet-enriched blood autoplasm has a weak bactericidal effect, and the combined use of these drugs has no antibacterial effect. Conclusion. Taking into account the high osteoinductive properties of these substances, in order to achieve their positive effect on the course of inflammatory and regenerative processes, a scheme of their sequential inclusion in endodontic treatment can be used in order to optimize the existing standard protocol for destructive forms of chronic apical periodontitis, which is the subject of subsequent study. Keywords: Hydroxyapatite gel, human blood plasma, osteoinductive properties.

For reference: Demyanenko SA, Morozova MN, Pavlova NV, Marchenko NV, Shabliy DN, Kalinina EN, Tofan YuV, Kirichenko VN. Microbiota of the root canal system in patients with destructive forms of chronic apical periodontitis before and after standard endodontic treatment and modern possibilities of influencing it. The Bulletin of Contemporary Clinical Medicine. 2022; 15(3): 15-20. DOI: 10.20969/VSKM.2022.15(3).15-20.

Введение. Несмотря на современные достижения эндодонтии получить положительный эффект при лечении деструктивных форм хронического апикального периодонтита (ХАП) удается в 80-85% случаев [1, 2]. У остальных пациентов прогрессирующая патология становится основной причиной утраты зубов с последующей деформацией зубного ряда, изменениями в области височно-нижнечелюстного сустава, развитием гнойно-воспалительных процессов челюстно-лицевой области либо осложненным течением соматических заболеваний. Любое из этих осложнений в конечном итоге приводит к существенному снижению качества жизни [3]. Следует признать, что на сегодняшний день существует недостаток теоретических и практических знаний о причинах и механизмах прогрессирования заболевания, а совершенствование протокола лечения деструктивных форм ХАП остается актуальным.

В концепции патогенеза деструктивных форм ХАП главным фактором признана взаимосвязь микробного начала с местной и общей иммунной реакцией организма [4]. При любой форме периодонтита в периа-пикальных тканях обнаруживаются ассоциации гра-

мотрицательных и грамположительных, анаэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов [5]. SakkoM. и соавт. (2016) выявили, что при гранулирующей форме ХАП в корневых каналах и в поврежденном периодонте обнаруживаются: Peptostreptococcusspp., ЕиЬа^епит^рр., Veillonellaspp., Bacteroidesspp., Сар-nocytophagaspp., Actinomycesisraelii, Actinomycessрр., Streptococcusfaecalis, Streptococcussalivaris, Staphy-lococcusaureus, Staphylococcusepidermidis, Lactoba-cillusspp., Bacillussuhtilis, Candidaalbicans. В случаях отсутствия свищевого хода, микрофлора становится менее разнообразной и преимущественно представлена строгими анаэробами. Аналогичные данные получены другими исследователями [6, 7].

В последние годы общепризнанным протоколом лечения, утвержденным Европейским обществом мэн-додонтов,предусмотрено, что при любых формах ХАП должны быть качественно и последовательно выполнены три основных этапа: механическая, антисептическая обработка системы корневых каналов и их полноценная обтурация. Хотя из приведенных выше статистических данных, очевидно, что не во всех слу-

чаях антибактериальное воздействие на микрофлору канала оказывается эффективным для регресса процессов хронического воспаления у верхушки корня зуба и запуска регенераторных процессов в кости.

Возможным решением вопроса станут дополнения к существующему протоколу в виде использования веществ, обладающих, помимо антибактериальных, осте-оиндуктивными свойствами. Проведенный нами поиск остановил внимание на двух препаратах, которые обладают указанными свойствами: гидроксиапатит и обогащенная тромбоцитами аутоплазма крови (PRP). По опубликованным в настоящее время результатам исследования препараты успешно используются в общей хирургии и взаимно усиливают действие друг друга. Остеокондуктивное действие гидроксиапатита широко освещено в научной стоматологической литературе, в том числе при лечении ХАП. В последние годы к гидрок-сиапатиту кальция и коллагену стали добавлять различные антимикробные компоненты, а препарат стал приобретать новые свойства. Мы остановились на геле гидроксиапатита, содержащем коллоидное серебро, которое является природным антисептиком и имеет широкий антибактериальный спектр действия, не вызывая привыкания микроорганизмов [8, 9, 10]. Об использовании препарата PRP также имеется большое число работ во всех областях медицины. Известно, что плазма содержит белки, фибриноген, питательные вещества, гормоны, витамины, ферменты, неорганические ионы, которые непосредственно участвуют в каскаде процесса регенерации тканей, а также, по данным литературы, обладают бактерицидными свойствами [11, 12]. Кроме того, доказано, что при активации и разрушении тромбоцитов, последние выделяют цитокины, оказывающие влияние на основные звенья регенераторного процесса в тканях (хемотаксис, клеточную пролиферацию, миграцию клеток, их дифференцировку и ангиогенез) [13]. Вместе с тем, об использовании препарата в эндодон-тии существуют лишь единичные работы, хотя и с многообещающим результатом.

Целью исследования явилось изучение микробиологических показателей каналов зубов пациентов с деструктивными формами хронического апикального периодонтита после стандартного лечения, а также характер антимикробного воздействия обогащенной тромбоцитами аутоплазмы крови (PlateleRichPlasma-PRP) и биоактивного геля гидроксиапатитана остаточную микрофлору канала и на международные тест-штаммы бактерий Staphylococcusaureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ885 для уточнения возможности их сочетанного использования в эндодонтии.

Материал и методы. Изучение спектра микрофлоры корневого канала было проведено у 32 пациентов с деструктивными формами ХАП. Исследованы мазки-соскобы из верхушечной трети канала до его первичной медикаментозной обработки через 10 суток после первого этапа лечения, рекомендованного протоколом Европейского общества эндодонтов, то есть, после удаления из канала временного пломбировочного материала на основе гидроокиси кальция. Отбор проб биоматериала из каналов проводился после промывания канала стерильным физиологическим раствором согласно МУ4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории».Всего исследовано 82 мазка-соскоба.

Бактериоскопическое исследование проводили с помощью микроскопа «Биолам» с применением иммерсионного объектива (ув.90х10) в нативных мазках-отпечатках после окраски по Граму. Для качественного описания микрофлоры использовали определитель Берджи.

При выполнении бактериологического исследования материал вначале подвергался накоплению в жидких средах (Сабуро, сахарный бульон, редуцированная среда Китта-Тароцци) с последующим пересевом на твердые среды (Сабуро, мясо-пептонный агар, Эндо). Инкубацию чашек Петри со средой Сабуро проводили 48 часов при температуре 28°С. При замедленном росте посевы выдерживали в течение 3 суток при комнатной температуре. Инкубацию чашек Петри с мясо-пеп-тонным агаром (МПА) и средой Эндо осуществляли при 37°С в течение 24 часов. Для получения чистой культуры производили ряд пересевов методом рассева единичных колоний. Выделенные чистые культуры идентифицировали по морфологическим, тинкториальным и биохимическим характеристикам (цветной ряд Гисса).

Изучение воздействия препаратов гидроксиапа-титаи PRP на музейные международные тест-штаммы бактерий Staphylococcusaureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ885 было проведено на аппарате TermoMultisckanFC. Подготовка бактериальной культуры Staphylococcusaureus АТСС 25923 суточная культура, выращенная на скошенном МПА, была смыта стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Приготовлены разведения бактериальной взвеси каждого вида культур до 10 Ед (10х108 КОЕ/мл) по стандарту мутности для оптической стандартизации бактерий (ГИСК им. Тарасевича Л.А.). После чего проведено разведение бактериальных культур в дозе 0,2 мл в 1,8 мл в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия для получения концентрации 103. В лунки планшета добавлен МПА до объема 200 мкл.

В первой серии эксперимента с культурой Staphylo-coccusаureus в четыре лунки добавлен гель «Кол-лапан-С», в пятую лунку вместе с гелем добавлена PRP Затем в каждую исследуемою лунку планшета и в лунку контроля бактериальной культуры добавлена культура Staphylococcusаureus в количестве 20 мкл. Планшет с подготовленными компонентами эксперимента установлен в ридер MultisckanFC на 24 часа, после чего учитывали результат по наличию или отсутствию роста колоний по секторам, соответствующим лункам планшета.

Во второй серии эксперимента с культурой Staphy-lococcusaureus также во все лунки планшета добавлен МПА в нужном объеме до 200 мкл. В стерильных условиях в шесть лунок планшета вносили PRP, взятую у 3 больных (с одной стороны - вносили PRP, разведенную в 2 раза физиологическим раствором для уточнения бактерицидной концентрации плазмы, а с другой -цельную). В 4 лунки с каждой стороны вместе с плазмой добавлен гель «Коллапан-С». Затем добавлена культура S. аureus в количестве 20 мкл. Планшет с подготовленными компонентами эксперимента устанавливали в ридер MultisckanFC на 24 часа, после чего учитывали результат по наличию или отсутствию роста колоний по секторам, соответствующим лункам планшета.

Аналогичные две серии эксперимента были проведены для культуры Candidaalbicans ССМ885, но с использованием среды Сабуро. Учет результатов эксперимента проводили через 24 часа по наличию или отсутствию роста колоний по секторам.

Протокол исследования был одобрен в Комитете по этике ФГАОУ ВО «Крымский Федеральный Университет имени В.И. Вернадского. От каждого участника было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Для статистической обработки данных исследования был использован пакет статистических программ STATISTICA 8.1. Оценка величины влияния методов лечения проводилась дисперсионным анализом с повторяющимися переменными (Repeatedmeasures ANOVA). В качестве факторов были использованы: вид лечебного воздействия на данную группу (контроль, эксперимент), регистрация (до, после), пол (мужской, женский), способ (мазки-соскобы). Конкретные отличия в отдельных показателях определяли с помощью апостериорных (post-hoc) критериев Тьюки и метода контрастов.

Анализ и графические представления изменений в величинах исследуемых показателей был рассчитан по формуле относительного прироста/падения показателя КИ=(НВ-КВ)*100%/НВ. Положительные величины показателя свидетельствуют о росте показателя, тогда как отрицательные о падении. НВ - начальная величина показателя, зарегистрированного у группы до лечебного воздействия, КВ - конечная величина показателя после лечебного воздействия.

Результаты и их обсуждение. При изучении маз-ков-соскобов, взятых со стенок корневого канала, у пациентов всех групп до и после выполнения первого этапа эндодонтического лечения, отмечали наличие грамположительных и грамотрицательных бактерий различной формы.

Бактериоскопическая характеристика содержимого каналов в мазках-соскобах до и после первого этапа эндодонтического лечения представлена на микрофото (рис. 1а, 1б).

В исследованном материале до начала лечения были обнаружены скопления грамположительных и грамотрицательных бактерий различной формы (кокки, палочки) и с разным взаимным расположением.

Среди бактерий в 20 случаях (64,5% мазков) выявлены дрожжеподобные клетки округлой формы, почкующиеся, с хорошо выраженным ядром, типичные для грибов рода Candida. Их число в разных полях зрения было от 10 до 100. Следует отметить, что грибы рода Candidaне во всех препаратах, даже в чистой культуре, имели типичное морфологическое строение: в 40% случаев нами зарегистрировано наличие псеводомицелия, что характерно для инвазив-ных форм кандидоза. Основной встречающийся вид Candida - это Candidaalbicans. В случаях отсутствия грибковой микрофлоры преимущественно были обнаружены ассоциации грамположительных кокков и грамотрицательных палочек.

Исследование мазков-соскобов после 10 суток 1 этапа эндодонтического лечения показало наличие в каналах во всех изученных препаратах бактерий, хотя их количество существенно снизилось и изменился микробный пейзаж (рис.1б).

В количественном выражении динамика бактериальной обсемененности представлена на диаграмме (рис. 2), из которой следует, что число грамположи-тельной кокковой флоры мелких и средних размеров снизилось более чем на 30%, диплококковой - в 4,3 раза, кокков, расположенных цепочками - в 4 раза, из грамотрицательных бактерий - число кокковой и диплококковой флоры снизилось в 1,5 раза, палочковидной - почти в 2 раза.

Рисунок 1. Микрофото мазка-соскоба из апикальной части канала. Окраска по Граму. Увеличение Х 125:

а) до лечения: скопления грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также бластоспор

CаndidaAlbicans и отдельно лежащих микробных клеток Figure 1. Microphoto of a scraping smear from the apical part of the canal. Gram coloring. Raising the microscope by 125 times: a) before treatment: accumulations of grampositive and gram-negative bacteria, as well as Candida

Albicans blastospores and separate microbial cells

б) после лечения: небольшое количество скоплений бактерий, а также и отдельно лежащих микробных клеток

b) after treatment: a small number of accumulations of bacteria, as well as separate microbial cells

Рисунок 2. Динамика бактериальной об-семененности корневого канала Figure 2. Dynamics of bacterial contamination of the root canal

Менее всего проведенное эндодонтическое лечение оказало воздействие на кокки, расположенные гроздьями (что характерно для стафилококков) и грибковую микрофлору. Учитывая тщательность проведения механического и медикаментозного этапа эн-додонтического лечения, можно констатировать, что инфекция может сохраняться в многочисленных разветвлениях микроканальцев у верхушки корня, а также в заапикальных тканях, где она недоступна при традиционном способе эндодонтического лечения. Проанализировав результаты о преобладании в «остаточ-

ной» микрофлоре бактерий из числа стафилококков и кандид, была поставлена вторая часть эксперимента, заключавшаяся в изучении композиции антибактериального действия препарата гидроксиапатитаи PRP.

Для этого были использованы музейные международные тест-штаммы бактерий: Staphylococcus aureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ885.Тесты с указанными культурами бактерий были проведены трижды. %

100

80 60 40 20 0

При проверке активности препарата «Коллапан-С» по отношению к Staphylococcusaureus АТСС 25923 (рис. 3) было установлено, что в контрольных лунках с мясо-пептонным бульоном (МПБ) рост бактерий отсутствовал; с культурой Staphylococcusаureus на МПА выявлен рост бактерий. В четырех лунках рост микроорганизмов не обнаружен, но впятой лунке (2 препарата- «Колла-пан-С» и PRP) был зарегистрирован рост колоний.

щ

■

О

Грамположительные до лечения

Грамотрицательные ■ после лечения

ю от"

I

га

"О

тз с

а

О

а д

о р

Рисунок 3. Бактерицидная активность геля «Коллапан-С» по отношению к культуре Staphylococcusaureus АТСС 25923, где КК - контроль культуры, КБ - контроль МПА, лунки 1-4 лунки с гелем - отсутствие

роста культуры, 5 лунка - рост колоний Staphylococcusаureus Figure 3. Bactericidal activity of the gel «Collapan-C» in relation to the culture of Staphylococcus aureus ATCC 25923, where CC is culture control, KB is MPA control, wells 1-4 wells with gel are the absence of culture growth,

hole 5 is the growth of colonies of Staphylococcus aigeis

Также проверка активности геля «Коллапан-С» была проведена на среде Сабуро с культурой Candidaalbicans ССМ885. В лунках 1 - 4 роста микроорганизмов не обнаружено. В 5 лунке, в которую вносили 2 препарата -гидроксиапатит и PRP, зарегистрирован рост колоний гриба. Полученные результаты доказывают бактерицидную активность препарата «Коллапан-С» по отношению к Staphylococcus aureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ885, но вызывает сомнение целесообразность использования препарата вместе с PRP.

При анализе активности PRP по отношению к культуре Staphylococcusaureus АТСС 25923, оказалось, что в контрольной лунке с МПА рост бактерий отсутствовал, а в контрольной лунке с культурой Staphylococcusаureus на МПБ выявлен рост бактерий. При высеве тест-штамма в лунки планшета с МПА, содержащие PRP, выявлен умеренный рост стафилококка. Это доказывает умеренный (60-75%) бактерицидный эффект цельной PRP по отношению к Staphylococcusaureus АТСС 25923. При высеве тест-штамма в лунки планшета с МПА, содер-жащиеразведенную в 2 раза PRP, выявлен обильный рост колоний бактерий, что доказывает отсутствие бактерицидного эффекта разведенной PRP. То есть, при снижении концентрации плазмы увеличивалось количество бактерий, что подтверждалось ростом бактерий при контрольном высеве на МПА.

Аналогичный эксперимент по проверке активности PRP был проведен на среде Сабуро с культурой Candidaalbicans ССМ885. При разведении PRP в 2 раза обнаружено полное отсутствие бактерицидного эффек-

та препарата, а при использовании цельной PRP был зарегистрирован умеренный рост колоний гриба.

Проведенное исследование позволило заключить, что цельная PRP обладает умеренной бактерицидной активностью, но при ее разведении - бактерицидный эффект исчезает. Гель «Коллапан-С» обладает высокой бактерицидной активностью по отношению к штаммам Staphylococcusaureus и Candidaalbicans, но в сочетании с PRP этот эффект отсутствует (происходит нейтрализация антибактериальной активности «Коллапана С»).

Вывод. Таким образом, изучение микрофлоры корневых каналов у больных с деструктивными формами хронического апикального периодонтита после выполнения основных этапов стандартного эндодонтического протокола показало, что к 10 суткам лечения в области верхушки корня обнаружены ассоциации микроорганизмов, состоящие из грамположительных и грамо-трицательных кокковидных, палочковидных, извитых форм, а также грибковая микрофлора, преимущественно Сandidaalbicans. Проведенное ^йго исследование-антибактериальных свойств PRP и «Коллапана-С» показало, что намеждународные тест-штаммы бактерий Staphylococcusaureus АТСС 25923 и Candidaalbicans ССМ885 препарат«Коллапан-С» оказывает выраженное бактерицидное воздействие, PRP- слабое бактерицидное действие, а совместное применение этих препаратов не имеет антибактериального эффекта. Однако, учитывая высокие остеоиндуктивные свойства этих веществ, для достижения положительного влия-

нияих на течение воспалительного и регенераторного процессов может быть использована схема их последовательного включения в эндодонтическое лечение с целью оптимизации существующего стандартного протокола при деструктивных формах хронического апикального периодонтита, что является предметом последующего изучения.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Авторы несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и других взаимоотношениях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Литература / References

1. Иванченко О.Н., Зубов С.В. Результаты 10-летнего ретроспективного анализа лечения хронического периодонтита // Российский стоматологический журнал.

- 2015. - № 19 (6). - С.21-23. [Ivanchenko ON, Zubov SV. Rezul'taty 10-letnego retrospektivnogo analiza lecheniya hronicheskogo periodontita [Results of a 10-year retrospective analysis of the treatment of chronic periodontitis]. Rossijskij stomatologicheskij zhurnal [Russian Dental Journal]. 2015; 19 (6): 21-23. (In Russ.)].

2. Митронин А.В., Понякина И.Д. Комплексное лечение пациентов с хроническим апикальным периодонтитом на фоне сопутствующих заболеваний // Эндодонтия today. - 2009. - № 3. - С.32-37. [Mitronin AV, Ponyakina ID. Kompleksnoe lechenie pacientov s hronicheskim apikal'nym periodontitom na fone soputst-vuyushchih zabolevanij [Complex treatment of patients with chronic apical periodontitis on the background of concomitant diseases]. Endodontiya today [Endodontics today]. 2009; 3: 32-37. (In Russ.)].

3. Демьяненко С.А., Марченко Н.В., Кириченко В.Н., Тофан Ю.В. Эффективность лечения хронического гранулирующего периодонтита у больных с гепатобилиарной патологией // Российский стоматологический журнал. - 2015. - № 19 (5). - С.12-15. [Dem'yanenko SA, Marchenko NV, Kirichenko VN, Tofan YUV. Effektivnost' lecheniya hronicheskogo granu-liruyushchego periodontita u bol'nyh s gepatobiliarnoj patologiej [Effectiveness of treatment of chronic granulating periodontitis in patients with hepatobiliary pathology]. Rossysky stomatologichesky zhurnal [Russian Dental Journal]. 2015; 19(5): 12-15. (In Russ.)].

4. Морозова М.Н. Концепция липополисахарид-зависи-мого этиопатогенеза одонтогенных гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области // Таврический медико-биологический вестник. - 2010.

- № 13 (3). - С.137-141. [Morozova MN. Koncepciya lipopolisaharid-zavisimogo etiopatogeneza odontogen-nyh gnojno-vospalitel'nyh zabolevanij chelyustno-licevoj oblasti [The concept of lipopolysaccharide-dependent etiopathogenesis of odontogenic purulent-inflammatory diseases of the maxillofacial region]. Tavrichesky mediko-biologichesky vestnik [Tauride medico-biological Bulletin]. 2010; 13(3): 137-141. (In Russ.)].

5. Лукоянова Н.С. Морфологическое обоснование участия грибковой микрофлоры в периапикальной патологии // УкраТнський стоматолопчний альма-

нах. - 2011. - № 2. - С.47-49. [Lukoyanova NS. Morfo-logicheskoe obosnovanie uchastiya gribkovoj mikroflory v periapikal'noj patologii [Morphological justification of the participation of fungal microflora in periapical pathology]. UkraTnsky stomatologichny almanakh [Ukrainian dental Almanac]. 2011; 2: 47-49. (In Russ.)].

6. Sakko M, Tjaderhane L, Rautemaa-Richardson R. Microbiology of Root Canal Infections. A review: PrimDent J. 2016; 5(2): 84-89. D0I:10.1308/205016816819304231

7. Гризодуб Д.В. Клиническое обоснование выбора альгинатного материала в различных клинических ситуациях // УкраТнський стоматолопчний альманах. -2012. - № 3. - С.25-28. [Grizodub DV. Klinicheskoe obosnovanie vybora al'ginatnogo materiala v razlichnyh klin-icheskih situaciyah [Clinical justification of the choice of alginate material in various clinical situations]. UkraTnsky stomatologichny almanakh [Ukrainian dental Almanac]. 2012; 3: 25-28. (In Russ.)].

8. Митронин А.В. Отсроченный метод лечения хронического периодонтита с применением гидроксида кальция у больных, имеющих сопутствующие заболевания организма // Стоматология сегодня. - 2003. - №

9. - 31 с. [Mitronin AV. Otsrochennyj metod lecheniya hronicheskogo periodontita s primeneniem gidroksida kal'ciya u bol'nyh, imeyushchih soputstvuyushchie zabol-evaniya organizma [Delayed method of treatment of chronic periodontitis with the use of calcium hydroxide in patients with concomitant diseases of the body]. Stomatologiya se-godnya [Dentistry today]. 2003; 9: 31 p. (In Russ.)].

9. Опанасюк И.В., Опанасюк Ю.Л. Костнопластические материалы в современной стоматологии // Современная стоматология. - 2002. - № 1. - С.77-80. [Opanasyuk IV, Opanasyuk YUL. Kostnoplasticheskie materialy v sovremennoj stomatologii [Bone-plastic materials in modern dentistry]. Sovremennaya stomatologiya [Modern dentistry]. 2002; 1: 77-80. (In Russ.)].

10. Пахлеванян Г.Г., Пахлеванян С.Г. Влияние препарата «Коллапан» на остеогенез при дефектах на верхних челюстях у человека. Научный альманах. - 2016. - № 8 (22). - С.303-305. [Pahlevanyan GG, Pahlevanyan SG. Vliyanie preparata «Kollapan» na osteogenez pri defektah na verhnih chelyustyah u cheloveka [The effect of the drug "Collapan" on osteogenesis in human upper jaw defects]. Nauchny almanakh [Scientific almanac]. 2016; 8(22): 303-305. (In Russ.)]. DOI: 10.17117/ na.2016.08.01.303

11. Макаров М.С., Пономарев И.Н. Роль богатой тромбоцитами плазмы в репарации дефектов костной ткани // Хирургия. Журнал имени Н.И. Пирогова. - 2015. - №

10. - С.94-99. [Makarov MS, Ponomarev IN. Rol' boga-toj trombocitami plazmy v reparacii defektov kostnoj tkani [The role of platelet-rich plasma in the repair of bone tissue defects]. Khirurgiya. Zhurnal imeni N.I. Pirogova [Surgery. Magazine named after N.I. Pirogov]. 2015; 10: 94-99. (In Russ.)]. D0I:10.17116/hirurgia20151094-99

12. Gkini М, Kouskoukis A, Tripsianis G, Rigopoulos D, Kouskoukis K. Study of platelet-rich plasma injections in the treatment of androgenetic alopecia through an one-year period. Aestetic Surgery. 2014; 7: 213-219. D0I:10.4103/0974-2077.150743

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

13. Panda S, Doraiswam J, Malaiappan S, Varghese S, Fab-bro M. Additive effect of autologous platelet concentrates in treatment of intrabony defects: a systematic review and meta-analysis. J Investig: Clin Dent. 2016; 7(1): 13 p. D0I:10.1111/jicd.12117

MICROBIOTA OF THE ROOT CANAL SYSTEM IN PATIENTSWITH DESTRUCTIVE FORMS OF CHRONIC APICAL PERIODONTITIS BEFORE AND AFTER STANDARD ENDODONTIC TREATMENTAND MODERN POSSIBILITIES OF INFLUENCING IT