CC BY
45
МИКРОБИОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2021
Червинец В.М.1, Червинец Ю.В.1, Леонтьева А.В.1, Козлова Е.А.1, Стулов Н.М.1, Беляев В.С.1, Григорьянц Э.О.1, Миронов А.Ю.2
МИКРОБИОМ ПОЛОСТИ РТА У БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ, АДГЕЗИВНЫЕ И БИОПЛЁНКООБРАЗУЮЩИЕ СВОЙСТВА
1ФГБОУ ВО Тверской государственный университет Минздрава РФ, 170100, Тверь, Россия;
2ФБУН Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора, 125212, Москва, Россия
Проанализирован микробиом полости рта у здоровых людей и больных пародонтитом, определены их адгезивные свойства и способность к образованию биоплёнок. В исследовании приняли участие 2 группы: здоровая,18 человек, и опытная группа, 20 больных с хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести. Средний возраст исследуемых людей составил 35-45 лет. Материал - зубодесневой налёт, соскоб со слизистой оболочки спинки языка, содержимое зубодесневого желобка и пародонтального кармана, ротовая жидкость. Основной метод исследования -культуральный, а также определяли степень адгезии микроорганизмов, пользуясь средним показателем адгезии (СПА) на клетках слизистой оболочки полости рта и способность формировать биоплёнки на пластике и стекле. Микро-биота полости рта больных пародонтитом характеризуется уменьшением частоты встречаемости бактерий родов Strеptоcоссus, РерояП-ерососсш, Рер^соссш, и увеличением Stаphylоcoссus аигеш, VеiПonеПa ярр, ВасйЫя ярр. Микроорганизмы опытной группы обладают большей способностью к адгезии на клетках слизистой оболочки, чем у здоровых людей, при этом усиливается их способность образовывать биоплёнки и проявлять патогенные свойства. Биоплёнкообразование микроорганизмов у здоровых и больных людей отличается как на стекле, так и на пластике.
Ключевые слова: микробиота; полость рта; хронический генерализованный пародонтит; адгезия; биоплёнки. Для цитирования: Червинец В.М., Червинец Ю.В., Леонтьева А.В., Козлова Е.А., Стулов Н.М., Беляев В.С., Григорьянц Э.О., Миронов А.Ю. Микробиом полости рта у больных пародонтитом, адгезивные и биоплёнкообразующие свойства. Клиническая лабораторная диагностика. 2021; 66 (1): 45-51. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2021-66-1-45-51 Chervinets V.M.', Chervinets Yu.V', Leont'eva A.V.1, Kozlova E.A. 1, Stulov N.M.1, Belyaev V.S.1, Grigoryants E.O.1, Mironov A.Yu.2
THE MICROBIOME OF ORAL CAVITY PATIENTS WITH PERIODONTITIS, ADHESIVE AND BIOFILM FORMING PROPERTIES
1Tver State Medical University, 170100,Tver, Russia;
2G. N. Gabrichevskogo Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 125212,Moscow, Russia
The microbiome of oral cavity in healthy people and patients with periodontitis was analyzed to determine their adhesive properties and the ability to form biofilms. The study involved 2 groups: healthy, 18 people, and an experimental group, 20 patients with chronic generalized periodontitis moderate severity of the disease. The average age of the studied people was 35-45 years. Material - dental plaque, scraping from the mucous membrane of the back of the tongue, the contents of the periodontal groove and periodontal pocket, as well as oral fluid. The main method of diagnostic was bacteriological. The average adhesion index (AA!) was used to determine adhesion level ofmicroorganisms to epithelial cells of oral cavity's mucous membrane. The microbiota's ability to form biofilm was tested on glass and plastic surface. The microbiota of oral cavity ofpatients with periodontitis was characterized by decrease in the frequency of bacteria of the genera: Streptococcus, Peptostreptococcus, Peptococcus, and an increase in Stаphylоcoссus ашеш, Vеillonеlla sрр., ВааНш sрр. The microbiota of the oral cavity ofpatients with generalized periodontitis has a greater ability to adhere to the cells of the mucous membrane than in healthy people, while their ability to form biofilms and exhibit pathogenic properties is enhanced. The biofilm formation of microorganisms in healthy and sick people differs both on glass and on plastic surfaces.
Key words: microbiota; oral cavity; chronic generalized periodontitis; adhesion; biofilms.
For citation: Chervinets V.M., Chervinets Yu.V., Leont'eva A.V., Kozlova E.A., Stulov N.M., Belyaev V.S., Grigoryants E.O., Mironov A.Yu. The microbiome of oral cavity patients with periodontitis, adhesive and biofilm forming properties. Kliniches-kaya laboratornaya diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2021; 66 (1): 45-51 (in Russ.) DOI:http://dx.doi. org/10.18821/0869-2084-2021-66-1-45-51
For correspondence: Chervinets V. M., Doctor of Medical Sciences, professor, head of the department of microbiology and viru-sology with course of immunology; e-mail: chervinets@mail.ru Information about authors:
Chervinets V. M., https://orcid.org/0000-0001-6549-0010; Chervinets Yu. V., https://orcid.org/0000-0001-9209-7839; Kozlova E.A., https://orcid.org/0000-0001-9951-1377; Grigoryants E.O., https://orcid.org/0000-0003-4712-3043; Mironov A. Yu., https://orcid.org/0000-0003-1116-867X. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 20.04.2020 Accepted 27.05.2020
Для корреспонденции: Червинец Вячеслав Михайлович, д-р мед. наук, проф., зав. каф. микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии; е-mail: chervinets@mail.ru
MICROBIOLOGY
Введение. Полость рта по составу микробиологических сообществ представляет сложную систему, изменения в которой способны оказывать влияние не только на здоровье полости рта, но и всего организма в целом. Подчёркивается взаимосвязь разнообразия микробио-ма полости рта (700 видов) с множеством заболеваний висцеральных систем, например, рак кишечника и др. [1, 2]. Стоматологические заболевания многими авторами рассматриваются в контексте изменения состава биоплёнок [3-5]. Состав биоплёнок влияет на развитие таких заболеваний, как пародонтит, гингивит, кариес [6, 7]; отмечен комменсализм бактерий биоплёнок, который связан с передачей сигнальных молекул в сообществе [8-10].
Многие авторы связывают хронический пародонтит (ХП) с дисбиозом различных биотопов полости рта, самым важным из которых является пародонтальный карман. C развитием периодонтита могут быть связаны мутации, определяющие чувствительность тканей пародонта к колонизации специфическими микроорганизмами [11,12]. В результате комплексного исследования выяснено, что некоторые мутантные аллели связаны с уменьшением Tannerella forsythia, Actinomyces gerencseriae, Fusobacterium periodonticum, Prevotella nigrescens, другие с увеличением Porphyromonas gingivalis - ключевого парадонтопатогена [13]. Сравнивали микробиом щеки и пародонтального кармана при различных видах периодонтитов [14]. Среди обнаруженных 195 родов, наиболее часто встречались стрептококки и неспорообразующие анаэробы [15]. Проведён комплексный анализ - сравнение микробиоты языка, слюны, пародонтального кармана, десневого сосочека с пародонтитом [16]. В микробиоте языка преобладали Streptococcus, Prevotella, Veillonella, в микробиоте слюны Streptococcus, Veillonella, пародонтального кармана - Porphyromonas, Fusobacterium, десневом сосочке -Streptococcus, Capnocytophaga, Leptotrichia. Малоизученным остается вопрос изменения адгезивных свойств микроорганизмов полости рта у больных пародонтитом и их способность к образованию биоплёнок.
Цель исследования - провести сравнительный анализ микрофлоры полости рта здоровых людей и больных парадонтитом, определить её адгезивные свойства и образование биоплёнок.
Материал и методы. В группе здоровых обследовано 18 человек (9 женщин и 9 мужчин). Средний возраст составил 35-45 лет. В опытной группе было 20 больных с хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести (14 женщин, 6 мужчин). Средний возраст исследуемых составил 35-45 лет.
Исследуемый материал - зубодесневой налёт с вестибулярной поверхности резцов нижней челюсти площадью 1 см2, соскоб со слизистой оболочки спинки языка площадью 1 см2, содержимое зубодесневого желобка с одного резца нижней челюсти у здоровой группы и содержимое пародонтального кармана с одного резца нижней челюсти, у больных пародонтитом, взятое с помощью бумажного штифта, ротовая жидкость объёмом 1 мл. Материал с поверхности слизистой оболочки брали стерильным ватным тампоном.
Во всех обследуемых группах материал забирали утром (в 8-9 ч) до приёма пищи, помещали в транспортную среду Эймса (Amies) без угля. Ротовую жидкость собирали в стерильные пробирки. В бактериологическую лабораторию материал доставляли в течение 2-х
часов. Для выделения факультативно-анаэробных и аэробных бактерий использованы среды - Эндо для энте-робактерий, маннит-солевой агар (М118) для стафилококков, для выявления лецитиназной активности - агар Бэрда-Паркера, М 304 - стрептококковый агар, МРС -лактоагар, Сабуро декстроза агар, Колумбия кровяной агар, хромогенные среды для выявления грибов рода Candida, стрептококков и энтерококков (HiMedia). Для культивирования анаэробов использовали среды бифи-доагар и кровяной Шедлера агар. Анаэробные условия создавались в анаэростатах при помощи газогенераторных пакетов BBL. Культивирование проводили при температуре 37°С в течение 24-48 часов. Количество колоний выражали в lg КОЕ/см2 или lg КОЕ/мл. Идентификация осуществлялась по биохимической активности с применением API систем (bioMerieux, Франция).
Степень адгезии микроорганизмов определяли, пользуясь средним показателем адгезии (СПА) на клетках слизистой оболочки полости рта (Патент РФ N° 2630060; 2017 ). Тестирование микроорганизмов на способность формировать биоплёнки на пластике и стекле проводили в стерильных пластиковых чашках Петри (диаметром 90 мм) со стеклышками по методике [17], по измерению оптической плотности спиртового красителя, окрасившего биоплёнки.
Данные экспериментов обрабатывались с помощью прикладной программы «STATISTICA» (Stat Soft Russia). Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия Стьюдента, различия считали достоверными при р<0,05.
Результаты. Из содержимого зубодесневого налёта здоровых исследуемых (см. рисунок, а) выделялись Strеptоcоссus sff. в 94,4% случаев, Peptоstrеptоcоссus sff. - в 72,2%, Stаphylоcoссus sff., Entеrоcоссus s/р., ^Homlla sff. - в 22,2%, Stаphylоcoссus атеш, Bаcillus ,чрр., Pеptоcoссus sff. - в 11,1%, Klеbsiеllа pnеumоniаe, Stаphylоcoссus еpidеrmidis, Strеptоcоссus sаlivаrius, Strеptоcоссus pyogenes, Bacillus subtilis, Bacteroides spp., Miсrocоссus sff. - менее 10%.
Из содержимого зубодесневого налёта больных па-родонтитом (см. рисунок, а) в 80% случаев выделялись Strеptоcоссus sff., Peptоstrеptоcоссus sff., Streptococcus agalactiae - в 50%, Stаphylоcoссus sff., Pеptоcoссus sff. - в 40%, Уей^е^ sff. - в 25%, Bаcillus sff. - в 20%, Entеrоcоссus sff., Stаphylоcoссus атеш - в 15%, Stomatococcus spp. - в 10%, Klеbsiеllа pnеumоniаe, Stаphylоcoссus еpidеrmidis, Strеptоcоссus sаlivаrius, Bacillus subtilis, Lactobacillus spp., Candida albicans -менее 10%.
В соскобе с языка здоровых людей (см. рисунок, б) в 94,4% случаев выявлялись Strеptоcоссus sff., Peptоstrеptоcоссus sff. - в 66,7%, Stаphylоcoссus атеш - в 55,55%, Bаcillus sff. - 27,8%, Stаphylоcoссus sff., Stаphylоcoссus еpidеrmidis, УеНЬт^ sff. -в 22,2%, Entеrоcоссus s/р., Candida albicans - в 16,7%, Streptobacillus, Miсrocоссus s/р., Pеptоcoссus sff. - в 11,1% Klеbsiеllа pnеumоniаe, Proteus spp., Strеptоcоссus sаlivаrius, Lаctоbаcillus sff., Chstridium sff. - менее 10%.
В соскобе с языка больных пародонтитом (см. рисунок, б) выделялись Peptоstrеptоcоссus sff. в 95% случаев, Strеptоcоссus sff. - 79%, Streptococcus agalactiae - в 65%, Stаphylоcoссus sff. - в 30%, Bаcillus sff., Lactobacillus spp. - в 20%, Stаphylоcoссus атеш, Entеrоcоссus sff. - в 15%, Streptobacillus, Bacillus subtilis, Stomatococcus spp. -
МИКРОБИОЛОГИЯ
Спектр и частота встречаемости микроорганизмов здоровых и больных с пародонтитом. а - зубного налёта; б - слизистой оболочки языка; в - зубодесневого желобка; г - ротовой жидкости.
По оси абсцисс - распространённость микроорганизмов (в %); по оси ординат - наименования микроорганизмов. Столбики сверху вниз: верхний здоровые люди, нижний - больные пародонтитом.
а
б
в 10%, менее чем в 10% - Stаphylоcoссus еpidеrmidis, VеШonеПa sрр., Мкюсоссш sрр.
Из содержимого зубодесневого желобка здоровых людей (см. рисунок, в) выделялись Strеptоcоссus sрр. -94,4% случаев, Рер^^ер^соссш sрр. - в 77,8%, ВасШт
spp. - в 44,4%, Peptococcus spp. - в 38,9%, Enterococcus spp. - в 22,2%, Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus, Streptococcus salivarius, Veillonella spp. - в 11,1%, Streptobacillus, Micrococcus spp., Clostridium spp., Candida albicans, Candida tropicalis - менее 10%.
MICROBIOLOGY
Спектр и частота встречаемости микроорганизмов здоровых и больных с пародонтитом. а - зубного налёта; б - слизистой оболочки языка; в - зубодесневого желобка; г - ротовой жидкости.
По оси абсцисс - распространенность микроорганизмов (в %); по оси ординат - наименования микроорганизмов. Столбики сверху вниз: верхний -здоровые люди, нижний - больные пародонтитом.
в
г
В содержимом пародонтального кармана больных пародонтитом (см. рисунок, в) в 80% случаев выявлены St^p^^^us sff., Peptоstrеptоcоссus sff., Streptococcus agalactiae - в 45%, Pеptоcoссus sff. - в 40%, Bаcillus sff. - в 25%, Vеillonеlla sff., Stomatococcus spp. - в 20%,
Bacillus subtilis - в 15%, Entеrоcоссus sрр., Stаphylоcoссus атеш, Lactobacillus spp. - в 10%, Stаphylоcoссus sрр., Mi^o^^us sрр., Bacteroides spp. - менее 10%.
В ротовой жидкости у здоровых людей (см. рисунок, г) в 83,3% случаев выявлены Peptоstrеptоcоссus
spp., Streptococcus spp.- в 72,2%, Streptococcus salivarius, Bacillus subtilis, Bacteroides spp., Veillonella spp., Peptococcus spp. - в 22,2%, Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp., Lactobacillus spp. - в 16,7%, Streptococcus pyogenes - в 11,1%, Staphylococcus epidermidis, Bacillus spp., Micrococcus spp., Clostridium spp., Candida albicans, Actinomycetes - менее 10%.
Из ротовой жидкости у больных пародонтитом (см. рисунок, г) выделялись Streptococcus spp., Bacillus spp. - в 70% случаев, Peptostreptococcus spp. - в 60%, Streptococcus agalactiae - в 40%, Veillonella spp. -в 35%, Staphylococcus spp. - в 25%, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus - 20%, Peptococcus spp. - в 15%, Lactobacillus spp., Stomatococcus spp. - в 10%, Enterococcus faecalis - менее 10%.
В зубном налёте у здоровых исследуемых определено 5,17 lg КОЕ/мл Bacteroides spp., 4,8 lg КОЕ/мл Streptococcus spp., 4,7 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp., 4,17 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 3,9 lg КОЕ/мл Peptococcus spp., 3,76 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 3,17 lg КОЕ/мл Streptococcus pyogenes, 3,14 lg КОЕ/мл Enterococcus spp., 3,1 lg КОЕ/мл Klebsiella pneumonia, 2,86 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 2,1 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 2 lg КОЕ/мл Micrococcus spp., 1,7 lg КОЕ/мл Staphylococcus epidermidis, Streptococcus salivarius, Bacillus subtilis.
У больных пародонтитом в зубном налёте выявлено 3,7 lg КОЕ/мл Streptococcus spp, 3,93 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp., 3,73 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 3,63 lg КОЕ/мл Peptococcus spp., 3,9 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 4,17 lg КОЕ/мл Enterococcus spp., 1,7 lg КОЕ/мл Klebsiella pneumonia, 2,2 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp, 2,25 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 2,74 lg КОЕ/мл Staphylococcus epidermidis, 3,4 lg КОЕ/мл Streptococcus salivarius, 2,6 lg КОЕ/мл Bacillus subtilis, 4,17 lg КОЕ/ мл Streptobacillus spp, 3,24 lg КОЕ/мл Candida albicans, 3 lg КОЕ/мл Streptococcus agalactiae, 2,7 lg КОЕ/мл Lactobacillus spp., 2,63 lg КОЕ/мл Stomatococcus spp.
Из соскоба с языка у здоровых исследуемых выделялись 5,18 lg КОЕ/мл Streptococcus salivarius, 4,9 lg КОЕ/ мл Peptostreptococcus spp., 4,63 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 4,53 lg КОЕ/мл Enterococcus spp, 3,67 lg КОЕ/мл Micrococcus spp., 3,54 lg КОЕ/мл Streptobacillus spp., 3,5 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 3,4 lg КОЕ/мл Lactobacillus spp., 2,8 lg КОЕ/мл Streptococcus spp., 2,74 lg КОЕ/мл Clostridium spp., 2,69 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 2,65 lg КОЕ/мл Peptococcus spp, 2,4 lg КОЕ/мл Klebsiella pneumonia, 2,39 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 2,23 lg КОЕ/мл Candida albicans, 2,17 lg КОЕ/мл Staphylococcus epidermidis, 1,7 lg КОЕ/мл Proteus spp.
В соскобе с языка у больных пародонтитом определено 4,17 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp., Veillonella spp. и Streptobacillus spp. 4,1 lg КОЕ/мл Streptococcus agalactiae, 4 lg КОЕ/мл Streptococcus spp, 3,92 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 3,43 lg КОЕ/мл Bacillus subtilis, 3,17 lg КОЕ/ мл Staphylococcus epidermidis, 3 lg КОЕ/мл Lactobacillus spp., 2,82 lg КОЕ/мл Stomatococcus spp., 2,69 lg КОЕ/ мл Enterococcus faecalis, 2,61 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 2,6 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 2,5 lg КОЕ/мл Enterococcus spp, 2,3 lg КОЕ/мл Micrococcus spp.
В материале зубодесневого желобка у здоровых исследуемых определялись 4,8 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp, 4,2 lg КОЕ/мл Streptococcus spp., 4,17 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 4 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 3,4 lg КОЕ/ мл Micrococcus spp., 3,3 lg КОЕ/мл Streptobacillus spp.,
МИКРОБИОЛОГИЯ
3,2 lg КОЕ/мл Streptococcus salivarius, 3,1 lg КОЕ/мл En-terococcus spp. и Clostridium spp., 3 lg КОЕ/мл Peptococcus spp., 2,17 lg КОЕ/мл Candida tropicalis, 1,9 lg КОЕ/ мл Staphylococcus aureus, 1,85 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 1,7 lg КОЕ/мл Candida albicans.
В материале пародонтального кармана у больных пародонтитом определено 4,17 lg КОЕ/мл Enterococcus spp. и Bacteroides spp, 4,1 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp., 4 lg КОЕ/мл Veillonella spp, 3,55 lg КОЕ/мл Streptococcus spp., 3,5 lg КОЕ/мл Peptococcus spp., 3,3 lg КОЕ/мл Lactobacillus spp., 3,2 lg КОЕ/мл Streptococcus agalactiae и Stomatococcus spp., 3 lg КОЕ/мл Micrococcus spp., 2,5 lg КОЕ/мл Stomatococcus spp., 2,3 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 2,17 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 2,16 lg КОЕ/мл Bacillus subtilis.
В ротовой жидкости здоровых исследуемых выявлено 7,9 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp., 7,6 lg КОЕ/мл Streptococcus spp., 7 lg КОЕ/мл Bacteroides spp., 6,8 lg КОЕ/мл Peptostreptococcus spp., 6,6 lg КОЕ/мл Bacillus subtilis, 6,5 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 6,2 lg КОЕ/мл Peptococcus spp., 6,17 lg КОЕ/мл Micrococcus spp., 6,08 lg КОЕ/мл Actinomycetes, 6 lg КОЕ/мл Clostridium spp., 5,8 lg КОЕ/мл Streptococcus pyogenes, 5,77 lg КОЕ/мл Lactobacillus spp., 5,7 lg КОЕ/мл Staphylococcus epiger-midis и Staphylococcus aureus, 5,3 lg КОЕ/мл Candida albicans, 5,17 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 4,53 lg КОЕ/мл Streptococcus salivarius.
В ротовой жидкости у больных пародонтитом определено 7,5 lg КОЕ/мл Streptococcus agalactiae, 7 lg КОЕ/ мл Streptococcus spp, 6,9 lg КОЕ/мл Peptococcus spp. 6,7 lg КОЕ/мл Veillonella spp., 6,6 lg КОЕ/мл Bacillus subtilis,
6.4 lg КОЕ/мл Bacillus spp., 6,17 lg КОЕ/мл Enterococcus faecalis, 6,1 lg КОЕ/мл Staphylococcus spp, 5,6 lg КОЕ/ мл Lactobacillus spp, 5,55 lg КОЕ/мл Bacteroides spp.,
5.5 lg КОЕ/мл Staphylococcus aureus, 5,2 lg КОЕ/мл Stomatococcus spp.
Адгезивную способность определяли на эпителиальных клетках слизистой оболочки полости рта здоровых людей у 8 культур стафилококков, 13 культур стрептококков, 10 культур анаэробных микроорганизмов. У здоровых людей среднее число адгезиро-ванных стафилококков разных видов неодинаково: Staphylococcus aureus - 5,03±0,4, S. epidermidis -2,62±0,27, S. xylosis - 5,83±0,97, S. scileri - 6,2±1,17 (p<0,05). У больных людей среднее число адгезиро-ванных стафилококков в 2-3 раза выше и варьирует: S. aureus - 13,23±0,6, S. epidermidis - 12,8±0,43, S. xylosis - 11,63±0,66, S. lentus - 11,16±1 (p<0,05). У здоровых людей среднее число адгезированных стрептококков различалось: S. mitis - 3,06±0,52, S. uberis -3,06±0,43, S. bovis - 6,88±0,43, S. oralis - 4,44±0,76, Aerococcus viridans - 3,58±0,61 (p<0,05). У больных людей среднее число адгезированных стрептококков намного выше. СПА S. mitis - 11,01±0,57, S. uberis -4,54±0,76, Gemella haemolysans - 9,76±0,58, Lactococ-cus lactis - 9,31±0,4, S. salivarius - 13±0,67, S. constella-tus - 4,8±0,95, S. sanguis - 10,48±1,04, S. acidominimus
- 4,34±1,04 (p<0,05). Среди анаэробных микроорганизмов у здоровых людей средний показатель адгезии у Bifidobacterium spp. - 5,32±0,48, у S. intermedius
- 3,64±0,75, у Clostridium clostridiforme - 5,52±0,88, у Gemella morbillorum - 4,36±0,46, у Clostridium bu-tyricum - 4,4±0,62 (p<0,05). У больных людей среди анаэробных микроорганизмов средний показатель адгезии высокий. У Bifidobacterium spp. - 11,17±0,47, у
MICROBIOLOGY
S.intermedius - 11,84±0,71, у Bacteroides ureolyticus -9,4±0,75, у Actinomyces israelli - 10,65±1,24, у Bacteroides disfasonis - 10,86±0,74 (p<0,05).
Способность формировать биоплёнки на пластике и стекле определена для стафилококков, стрептококков, пептострептококков, клостридий, бифидобактерий здоровых людей и больных пародонтитом.
Биоплёнкообразование микроорганизмов у здоровых и больных людей отличается как на стекле, так и на пластике. У больных пародонтитом Staphylococcus aureus в 2 раза меньше обладал способностью образовывать биоплёнку на стекле и на пластике в сравнении со здоровыми людьми. Бифидобактерии у больных пародонтитом в этом отношении в 2 раза активнее на стекле и пластике. Пептострептококки вели себя неоднозначно, у больных на стекле активность выше, на пластике в 3 раза ниже. Клостридии здоровых людей на стекле образовывали биоплёнку в 2 раза выше, на пластике в 2 раза ниже, чем у больных. S. mitis, S. salivarius активнее образовывали биоплёнки на стекле у здоровых людей, на пластике - у больных пародонтитом.
Заключение. В содержимом зубодесневого налёта больных пародонтитом, по сравнению со здоровыми людьми, реже изолировались: Entеrоcоссus sрр, Stаphylоcoссus еpidеrmidis, Strеptоcоссus sаlivаrius; в тоже время увеличивалось количество Pеptоcoссus sрр., Stаphylоcoссus sрр. (в том числе Stаphylоcoссus атеш), Peptоstrеptоcоссus sрр. Vеillonеlla sрр. Streptococcus agalactiae, Bаcillus sрр. В соскобе с языка обследуемых опытной группы, по сравнению с контрольной, реже присутствовали Lactobacillus spp., Peptоstrеptоcоссus sрр, с другой стороны увеличивалось количество Stаphylоcoссus еpidеrmidis, Vеillonеlla sрр., Stаphylоcoссus атеш, Strеptоcоссus sрр., Bаcillus sрр. В содержимом зубодесневого желобка больных пародонтитом, по сравнению со здоровыми людьми, реже выделялись Stаphylоcoссus sрр. (в том числе Stаphylоcoссus атеш), Strеptоcоссus sрр.; с другой стороны выявлено увеличение количества Vеillonеlla sрр., Peptоstrеptоcоссus sрр. и Pеptоcoссus sрр, Bаcillus sрр. В ротовой жидкости опытной группы, по сравнению с контрольной, реже изолировались Lactobacillus spp., Pеptоcoссus sрр, Peptоstrеptоcоссus sрр, Strеptоcоссus sрр.; в тоже время увеличивалось количество Vеillonеlla sрр., Bаcillus sрр, Stаphylоcoссus sрр. (в том числе Stаphylоcoссus атеш).
В опытной группе средний показатель адгезии условно-патогенных бактерий (S. aureus, Bacteroides spp., Clostridium spp., Actinomyces spp.), так и представителей нормобиоты (Stаphylоcoссus sрр., Streptococcus spp., Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp) был в 2-3 раза выше, чем у контрольной группы. При изучении биоплёнок на стекле отмечено, что у здоровых людей способность образовывать биоплёнки стафилококками, стрептококками, клостридиями в несколько раз выше, чем у больных пародонтитом. У бифидобактерий и пептострептококков биоплёнкообразование на стекле было выше у больных людей. На пластике стафилококки и пептострептококки здоровых людей гораздо лучше образовывали биоплёнки, чем у больных пародонтитом. Бифидобактерии, клостридии и стрептококки больных людей показали большую способность к образованию биоплёнок на пластике, чем у здоровых.
Таким образом, у больных хроническим генерализованным пародонтитом во всех биотопах полости
рта наблюдалась тенденция к уменьшению количества нормобиоты и увеличению условно-патогенных микроорганизмов. Все микроорганизмы в опытной группе обладают большей способностью к адгезии на клетках слизистой оболочки, чем у здоровых людей. Биоплёнкообразование микроорганизмов у здоровых и больных людей отличается как на стекле, так и на пластике.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп . 1, 2, 6-10, 13-16 см .REFERENCES)
3. Харсеева Г.Г., Миронов А.Ю., Фролова Я.Н. Биоплёнки патогенных бактерий: биологические свойства и роль в хронизации инфекционного процесса. Успехи современной биологии. 2015; 135(4): 346-54.
4. Чепуркова О.А., Чеснокова М.Г., Недосеко В.Б., Миронов А.Ю. Кандида-ассоциированный пародонтит. Диагностика. Лечение. Омск: «Вариант-Омск»; 2012.
5. Харсеева Г.Г., Миронов А.Ю., Алиева А.А. Подавление бактериальной адгезии: современные подходы, проблемы и перспективы. Успехи современной биологии. 2019; 139 (5): 506-15.
11. Лебедев Д.В., Червинец В.М., Миронов А.Ю., Червинец Ю.В. Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом и их коррекции. Стоматолог. 2011; 12: 23-9.
12. Комлева А.С., Чеснокова М.Г., Недосеко В.Б., Миронов А.Ю., Козуб С.Н. Патогены биотопа пародонта и их чувствительность к антибиотикам у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом. Стоматолог. 2012; 3: 54-60.
17. Романова Ю.М. Алексеева Н.В., Смирнова Т.А., Андреев А.Л., Диденко Л.В., Гинцбург А.Л. Способность к формированию биопленок в искусственных системах у различных штаммов Salmonella typhimurium. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006; 4: 38-42.
REFERENCES
1. Asakawa M., Takeshita T., Furuta M. S. Kageyama, K. Takeuchi, J. Hata, et al. Tongue Microbiota and Oral Health Status in Community-Dwelling Elderly Adults. mSphere. 2018; 3(4): e00332-18.
2. Maoyang Lu, Song Xuan, Zhao Wang. Oral microbiota: A new view of body health. Food Science and Human Wellness. 2019; 8(1): 8-15.
3. Kharseeva G.G., Mironov A.Yu., Frolova Ya.N. Biofilms of pathogenic bacteria: biological properties and role in the chronicity of the infectious process. Uspekhi sovremennoy biologii. 2015; 135(4): 346-54. (in Russian )
4. Chepurkova O.A., Chesnokova M.G., Nedoseko V.B., Mironov A.Yu. Candida-associated periodontitis. Diagnostics. Treatment [Kandidaassotsiirovannyi parodontit. Diagnostika. Lechenie]. Omsk: "Variant-Omsk"; 2012. (in Russian )
5. Kharseeva G.G., Mironov A.Yu., Alieva A.A. Suppression of bacterial adhesion: current approaches, problems and prospects. Uspekhi sovremennoy biologii. 2019; 139(5):506-15. (in Russian)
6. Junges R., Sturad K., Salvadori G., Amdal H.A., Chen T., Petersen F.C.. Characterization of a signaling system in the oral commensal Streptococcus mitis that mediates interspecies communication with the pathogen Streptococcus pneumonia. Applied and Environmental Microbiology. 2019; 85(2): e02297-18.
7. Boutin S., Hagenfeld D., Zimmermann H. et al. Clustering of Subgingival Microbiota Reveals Microbial Disease Ecotypes Associated with Clinical Stages of Periodontitis in a Cross-Sectional Study. Frontiers in Microbiology. 2017; 8:340.
8. Berger D., Rakhamimova A., Pollack A., Loewy Z. Oral Biofilms: Development, Control, and Analysis. High Throughput. 2018; 7(3): 24.
9. Velsko I.M., Shaddox L.M. Consistent and reproducible long-term 14. in vitro growth of health and disease-associated oral subgingival biofilms. BMC Microbiology. 2018; 18(1):70.
10. Ulvi K. Gursoy, M. Gursoy, E. Kônônen, H. O. Sintim. Cyclic 15. Dinucleotides in Oral Bacteria and in Oral Biofilms. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2017; 7: 273.
11. Lebedev D. V., Chervinets V. M., Mironov A. Yu., Chervinets
Yu. V. Oral microbiocenoses in patients with generalized 16. periodontitis and their correction. Stomatolog. 2011; 12: 23-9. (in Russian )
12. Komleva A. S., Chesnokova M. G., Nedoseko V. B., Mironov A.
Yu., Kozub S. N. Periodontal biotope pathogens and their sensitivity 17. to antibiotics in patients with chronic generalized periodontitis. Stomatolog. 2011; 12: 23-9. (in Russian )
13. Cavalla F., Biguetti C.C., Melchiades J.L. A. P. Tabanez, M. de C. S. Azevedo, A. P. F. Trombone et al. Genetic Association with Subgingival Bacterial Colonization in Chronic Periodontitis. Genes (Basel). 2018; 9(6):271.
МИКРОБИОЛОГИЯ
Pedersen A.M.L., Belstram D. The role of natural salivary defences in maintaining a healthy oral microbiota. Journal of Dentistry. 2019; 80(1): 3-12.
Wei Y., Shi M., Zhen M., Cui W., Wenjie H., Yong N. et al. Comparison of Subgingival and Buccal Mucosa Microbiome in Chronic and Aggressive Periodontitis: A Pilot Study. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2019; 9:53. Kageyama S., Takeshita T., Asakawa M., Shibata Y., Takeuchi K., Ya-manaka W. et al. Relative abundance oftotal subgingival plaque-specific bacteria in salivary microbiota reflects the overall periodontal condition in patients with periodontitis. PLoS One. 2017; 12(4): e0174782. Romanova Yu.M., Alekseeva N.V., Smirnova T.A., Andreev A.L., Didenko L.V., Gunzburg A.L. The ability to form biofilms in artificial systems in various strains of Salmonella typhimurium. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 2006; 4: 38-42. (in Russian )
Поступила 20.04.20 Принята к печати 25.05.20
