CC BY
3DOI 10.53980/24131997_2024_2_55
С.В. Гомбоева, канд. биол. наук, доц., e-mail: sv2@mail.ru Л.Ю. Прудова, канд. техн. наук, доц., e-mail: prudova456@mail.ru Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, г. Улан-Удэ
УДК579.69
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КОММЕРЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ
Приведены результаты общего микробного числа (ОМЧ), морфолого-биохимических методов анализа коммерческих биопрепаратов «Битоксибациллин», «Атлант», «Фитоспорин-М» на соответствие описаниям производителей. Выявлено, что во всех исследуемых коммерческих биопрепаратах отсутствуют патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Количество клеток в препарате «Фи-тоспорин-М» как в форме порошка, так и пасты составляло 2,8*109 и 3*108КОЕ/г соответственно, что указывает на более высокую жизнеспособность микроорганизмов в препарате-порошке. В биопрепаратах с истекшим сроком хранения «Битоксибациллин» и «Атлант» отмечалось уменьшение титра клеток. В препарате «Атлант» была выделена культура Bacillus megaterium, тогда как Pseudomonas fluorescens, Azotobacter chroococcum, Lactococcus lactis не были обнаружены.
Ключевые слова: биопрепараты, микроорганизмы, культивирование, ферментативная активность, общее микробное число.
S.V. Gomboeva, Cand. Sc. Biology, Associate Prof., e-mail: sv2@mail.ru L.Yu. Prudova, Cand. Sc. Engineering, Associate Prof., e-mail: prudova456@mail.ru East Siberia State University of Technology and Management, Ulan-Ude
MICROBIOLOGICAL ANALYSIS OF COMMERCIAL BIOLOGICAL PRODUCTS
The article outlines the results of the total microbial number (PMF), morphological and biochemical analysis of commercial biological products "Bitoxibacillin", "Atlant", "Phytosporin-M" for compliance with manufacturers' descriptions. No pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms are found in all studied commercial biological products. The number of cells in 1 g of the product "Phytosporin-M" in both powder and paste form was 2.8 *109 CFU/g and 3 x108 CFU/g, respectively, which indicates a higher viability of microorganisms in the powder preparation. In bioproducts with expired shelf life "Bitoxybacillin" and "Atlant" a decrease in cell titer was observed. Bacillus megaterium culture was isolated in the "Atlant" product, whereas Pseudomonas fluorescens, Azotobacter chroococcum, Lactococcus lactis were not detected.
Key words: biological products, microorganisms, cultivation, enzymatic activity, total microbial count.
Введение
Интенсификация сельского хозяйства, направленная на обеспечение продовольствием населения, сталкивается со множеством проблем. С одной стороны, в соответствии с запросом сельхозпроизводителей, наблюдается рост производства минеральных, органических удобрений, средств защиты растений от вредителей и болезней. С другой - чрезмерное использование удобрений и средств защиты растений негативно влияет на окружающую среду и здоровье людей.
Список пестицидов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, включая биопрепараты, достаточно внушителен: к примеру, по состоянию на март 2024 г. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов насчитывал более 650 препаратов [1]. Использование только химических средств защиты растений и минеральных удобрений не решает проблемы плодородия почвы полностью, негативных факторов при этом тоже достаточно. Недостатком органических и минеральных удобрений является относительно небольшой срок их
действия в связи с разрушением гранул под воздействием различных внешних факторов, переходом действующих веществ в недоступные для растений соединения и наличие экологических проблем.
Как отмечают Р. М^ег и др., «...интенсивные методы ведения сельского хозяйства на основе химических удобрений оказали неблагоприятное воздействие на автохтонные микробные сообщества (в том числе полезные для растений микроорганизмы, обосновавшиеся в ризосфере) и микробное биоразнообразие с одновременным значительным снижением содержания органического вещества и минеральных веществ в почве» [2].
В силу различных природных явлений (засуха, частые проливные дожди, ветер) земля обедняется и растения начинают страдать от нехватки необходимых веществ. Это приводит к замедлению их роста, они перестают плодоносить, повышается вероятность развития болезней, а при выраженной нехватке питательных элементов не исключена гибель полезной растительности.
На территории Бурятии почвенный покров достаточно разнообразен по своему генезису, механическим, биологическим, физическим и химическим свойствам, что в конечном счете характеризует важнейший показатель почвы для развития растениеводства - ее плодородие. Говоря о плодородии почвы, важно учитывать такие показатели, как «.. .гумусность верхнего слоя почвы и характер изменения ее по профилю, мощность гумусированного слоя, поглотительная способность и буферность, реакция почвенного раствора, наличие элементов питания, а также наличие полезной микрофлоры» [3].
В почве большая часть минеральных и органических соединений растениям недоступна, поскольку находится в нерастворимой форме. А микроорганизмы, действующие путем сложных реакций, постепенно переводят многие соединения в форму, доступную для растений. Таким образом, под воздействием микрофлоры почвы повышается ее плодородие.
Препараты, содержащие эффективные штаммы микроорганизмов, появились на рынке сравнительно недавно, несколько десятилетий назад. Считается, что биопрепараты улучшают плодородие почвы естественным путем, а также помогают при этом культурным растениям получить питательные вещества из почвы. По данным Союза органического земледелия, в реестре средств производства для органического сельского хозяйства на территории РФ на 2018 г. зарегистрированы и разрешены к использованию свыше 40 биологических препаратов для защиты растений от болезней, вредителей и регуляции их роста [4].
По оценкам ученых, биопрепараты не только способны подавлять развитие болезней растений, но и обладают рядом полезных свойств. В монографии Н.Е. Павловской и др. отмечается положительное влияние биопрепаратов на растения и сделан вывод о перспективах их использования как «новом этапе развития сельского хозяйства» [5]. К преимуществам использования биопрепаратов авторы относят способность усиливать устойчивость растений к неблагоприятным условиям (засуха, заморозки), улучшать минеральное питание растений и стимулировать их рост вследствие продуцирования физиологически активных веществ типа витаминов, ауксинов, гиббереллинов. Кроме того, отмечается подавление развития фитопатогенных микроорганизмов и регулирование накопления в растениях вредных соединений: тяжелых металлов, радионуклидов, нитратов и др. [5]. Эти доказанные свойства позволяют развивать производство биоинсектицидов, биофунгицидов, поскольку средства борьбы с вредителями и болезнями плодовых культур - неотъемлемая часть растениеводства, наряду с применением удобрений, причем вопросы отрицательного воздействия на окружающую среду при использовании биопрепаратов снимаются с повестки дня.
Как отмечают Е. Ма1ша и др., микробиом растений состоит не только из полезных, но и патогенных микроорганизмов. Поэтому важным моментом является судьба вносимых в почву удобрений, содержащих микроорганизмы, их влияние на структуру микробного сообщества, в том числе автохтонных почвенных патогенов. Экологическое поведение интродуцированных микроорганизмов и возможность взаимодействия должны учитываться для оценки риска [6]. В
то же время метаболиты, высвобождаемые из внесенных микроорганизмов, могут стимулировать рост любого микроорганизма из микробиома растения, включая патогены, связанные с растениями [7]. В связи с этим необходимо проводить в полевых условиях и долгосрочные эксперименты по оценке риска биопрепаратов для окружающей среды. Особое значение имеют исследования риска и определение потенциально инвазивных грибов и бактерий, способных выживать в стрессовых условиях [8].
Еще одну проблему для потребителей биопрепаратов представляет их контаминация патогенными или условно-патогенными микроорганизмами. L. Наггтапп и др. в 2015 г. опубликовали исследования по выделению, очищению и идентификации микроорганизмов, содержащихся в европейских коммерческих инокулянтах, которые показали, что около 64 % продуктов имели одну или несколько посторонних штаммов и только 37 % продуктов - «чистые» культуры, 40 % протестированных продуктов не содержали ни одного из заявленных штаммов, а только посторонние штаммы [9]. На основании полученных данных было предложено совершенствование систем контроля с целью получения действительно эффективных биопрепаратов, используемых для повышения урожайности сельскохозяйственных культур. В случае контаминации растений и их плодов биопрепаратами, содержащими патогенные или условно-патогенные микроорганизмы, возможны негативные последствия для потребителя. Нельзя забывать о том, что болезнетворные бактерии и грибы могут сохранять жизнеспособность при определенных условиях длительное время.
Цель исследования - провести микробиологический анализ доступных потребителям коммерческих биопрепаратов на соответствие описанию производителей и отсутствие посторонней микрофлоры.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования были выбраны четыре биопрепарата, наиболее популярные у потребителей. Препараты имели разные даты выпуска, два из них на момент изучения оказались с истекшим сроком годности. В то же время они представляли интерес для оценки по выживаемости культур при хранении. Характеристика изученных биопрепаратов, проанализированная исходя из данных от производителей, размещенных на упаковках, представлена в таблице 1.
Таблица 1
Общая характеристика биопрепаратов (по инструкциям производителей)
№ Наименование Назначение Заявленный состав Дата производства Годность препарата
1 2 3 4 5 6
1 Битоксиба-циллин Воздействует на широкий спектр вредителей: от паутинного клеща до ли-стогрызущих гусениц. Репеллентное действие - отпугивает бабочек от обработанного участка в период яйцекладки, быстро разлагается, можно применять за 5 дней до сбора урожая. Обладает инсектоакарицидными свойствами Bacillus thuringiensis, БА-1500 ЕА/мг. В 1 г препарата содержится не менее 45 млн спор бактерий 07.2020 1,5 года
2 Атлант Оздоравливает почву, повышает плодородие, искореняет и подавляет вредную патогенную микрофлору, позволяет получить здоровые сильные растения и экологически безопасный, полезный для здоровья урожай Титр живых клеток Bacillus megaterium, Pseudomonas fluorescens, Azo-tobacter chroococum, Lac-tococcus lactis общим титром не менее 1,0 х 109 КОЕ/см3, вспомогательные вещества 01.2021 2 года
Продолжение таблицы 1
1 2 3 4 5 6
3 Фитоспорин-М (порошок) Содержит большее количество бактерий, чем паста, и помогает бороться с болезнями, особенно на начальных стадиях Bacillus subtilis штамм 26Д, не менее 2 млрд клеток / 1 г. Порошок содержит стимулятор роста Гуми, включающий более 90 видов минералов и микроэлементов 01.06.2020 4 года
4 Фитоспорин-М (паста) Используется для профилактических целей: стимуляции и защиты Bacillus subtilis штамм 26 Д, не менее 100 млн. клеток / 1 г 02.09.2021 4 года
Микробиологический анализ осуществляли по общепринятым методикам. При проведении исследований были использованы следующие питательные среды: мясопептонный агар -МПА (для выявления общего микробного числа), Сабуро (для культивирования дрожжей и плесневых грибов), Левина (для культивирования энтеробактерий), Плоскирева (для выделения микроорганизмов рода Salmonella и Shigella), Кесслера (для выявления бактерий группы кишечной палочки). Посевы проводили методом Дригальского. Культивирование, в зависимости от видовой принадлежности изучаемых микроорганизмов, проводили при температурах 37 и 28 °С.
Число клеток микроорганизмов определяли методом глубинного посева на плотные среды (чашечный метод). Для изучения морфологии выделенных микроорганизмов (форма клеток, ультраструктура клеточной стенки, выявление спор) готовили препараты и окрашивали их по Граму, Трухильо. Для выявления биохимических показателей выделенных микроорганизмов были использованы питательные среды Гисса с разными углеводами (глюкоза, сахароза, мальтоза, лактоза, манноза, маннит, сорбит). Для изучения биохимических свойств выделенных микроорганизмов определяли их ферментативную активность. При изучении сахаролитических ферментов, выделяемых микроорганизмами, учитывали не только явление расщепления сахаров по кислотообразованию, но и глубину ферментативного процесса по количеству в питательной среде газообразующих продуктов расщепления. Определение протеолитической активности микроорганизмов производили посевом (уколом) в столбик питательной среды с желатиной. После инкубирования отмечали разжижение питательной среды. Амилолитическую активность определяли посевом на крахмальный агар, отмечали зоны просветления и изменение цвета при окрашивании йодом. Антибиотическую активность определяли диско-диффузионным методом [10-12]. Все исследования были проведены в трех повторностях, статистически обработаны по общепринятым методикам [13].
Результаты исследования и их обсуждение
Биопрепараты «Атлант», «Битоксибациллин» и «Фитоспорин-М» (в двух формах: паста и порошок) по внешнему виду соответствовали описаниям в инструкциях производителей. Препараты «Атлант» и «Битоксибациллин» были с истекшим сроком годности, что позволило получить результаты по выживаемости и активности микроорганизмов. Были проведены исследования на определение общего микробного числа биопрепаратов и обнаружение посторонних и патогенных микроорганизмов в трех повторностях. Результаты средних значений представлены в таблице 2.
Из таблицы 2 видно, что в исследуемых биопрепаратах отсутствовали патогенные микроорганизмы, а также плесневые грибы и дрожжи. По общему количеству микроорганизмов результаты исследования показали, что у биопрепаратов «Битоксибациллин» и «Атлант», име-
ющих истекший срок годности, титр клеток снизился до 3,3*107 и до 5*108 КОЕ/г соответственно, тогда как у биопрепаратов «Фитоспорин М» (порошок) и «Фитоспорин-М» (паста) титр клеток соответствовал показателям, заявленным производителями.
Таблица 2
Результаты посева биопрепаратов на питательные среды
№ Биопрепарат Питательная среда, КОЕ/г
МПА Сабуро Плоскирева Левина Кесслера
1 Битоксибациллин 3,3х107 - - - -
2 Атлант 5х108 - - - -
3 Фитоспорин-М (порошок) 2,8х109 - - - -
4 Фитоспорин-М (паста) 1,3х108 - - - -
Примечание. «-» — отсутствие роста микроорганизмов.
Для определения соответствия микробного состава препаратов были проведены морфологические и биохимические анализы, которые позволили идентифицировать заявленные производителями микроорганизмы.
Биопрепарат «Битоксибациллин». На питательной среде МПА выросли колонии, которые по морфологическим характеристикам соответствовали друг другу, но различались цветом: одна группа колоний имела серовато-белый цвет, а другая серовато-кремовый с прозрачными краями. Данные группы были пронумерованы I и II соответственно. Различие цвета колоний может быть обусловлено возрастными характеристиками: колонии через 24 ч инкубации образовывали округлые серовато-белые колонии, а через 3-5 сут колонии становились серовато-кофейного цвета, что подтверждается литературным источником [14]. При микрокопировании препаратов, выделенных из двух колоний, были обнаружены грамположительные спорообразу-ющие бактерии палочковидной формы, что соответствовало описанию бактерий Bacillus thuringiensis, которые входят в состав препарата «Битоксибациллин». Для идентификации выделенных культур микроорганизмов двух групп колоний (I и II) использовали биохимические методы анализа, результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Биохимические свойства микроорганизмов, выделенных из препарата «Битоксибациллин»
Свойство Группа колоний I Группа колоний II
Отношение к углеводу:
глюкоза + +
лактоза - -
мальтоза + +
манноза + +
сахароза + +
сорбит - -
Протеолитическая активность + +
Амилазная активность + +
Уреазная активность - -
Рост на МПБ Наблюдается помутнение, образо- Наблюдается помутнение, образо-
вание вуали вание вуали
Примечание. «+» - положительная реакция, «-» - отрицательная реакция.
По результатам, представленным в таблице 3, и в соответствии с литературными источниками изученные колонии микроорганизмов можно было охарактеризовать как бактерии Bacillus thuringiensis. Для бактерий В. thuringiensis характерен бактерицидный и бактериостати-ческий эффект 5-эндотоксинов в отношении энтеробактерий Esherichia coli, Salmonella spp, а также стафилококков - Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis [10], поэтому был проведен анализ совместного культивирования выделенных культур с E. Coli М17. В результате
экспериментов были обнаружены зоны отсутствия роста E. Coli М17 2+0,1 см, что доказало бактерицидный эффект выделенных культур по отношению к энтеробактериям.
Обобщая результаты исследований, сделали вывод, что в препарате «Битоксибациллин» присутствовала монокультура, соответствующая бактерии Bacillus thuringiensis.
Биопрепарат «Атлант» по заявлению производителя содержал живые клетки Bacillus megaterium, Azotobacter chroococum, Pseudomonas fluorescens, Lactococcus lactis. Посев на МПА показал наличие плоских, непрозрачных, грязно-белого цвета колоний с влажной поверхностью, волнистыми краями. При микроскопировании наблюдали грамположительные, спорооб-разующие палочки, расположенные одиночно или в парах, что характерно морфологическим признакам Bacillus megaterium. Отсутствие заявленных производителем культур Lactococcus lactis, Pseudomonas fluorescens, Azotobacter chroococcum, возможно, было связано с истекшим сроком годности биопрепарата. Результаты исследований биохимических характеристик выделенной на МПА культуры представлены в таблице 4. Сравнивая изученные свойства выделенных микроорганизмов с литературными данными, можно сделать вывод о присутствии в биопрепарате «Атлант» бактерий Bacillus megaterium.
Таблица 4
Биохимические свойства выделенных микроорганизмов из препарата «Атлант»
Свойство Выделенная культура
Отношение к углеводу:
глюкоза +
лактоза -
мальтоза +
манноза -
сахароза +
сорбит -
Протеолитическая активность +
Каталазная активность +
Амилазная активность +
Уреазная активность -
Посев на МПБ со стерильной фильтровальной бумагой, пропитанной нитратом азота -
Образование индола -
Образование сероводорода -
Свертываемость молока отсутствует
Примечание. «+» - положительная реакция, «-» - отрицательная реакция.
Биологическое средство защиты от грибковых и бактериальных болезней растений «Фи-тоспорин-М». Независимо от образца исследования (порошок или паста) на МПА выросли одинаковые по морфологии колонии светло-бежевого цвета, слегка складчатые с волнистыми краями. При микроскопировании были выявлены грамположительные, спорообразующие палочки, что соответствовало культуре Bacillus subtilis. Результаты биохимического анализа выделенной культуры микроорганизмов представлены в таблице 5.
Таблица 5
Биохимические свойства выделенных микроорганизмов из препарата «Фитоспорин-М»
Свойство Выделенная культура (препарат-порошок) Выделенная культура (препарат-паста)
1 2 3
Отношение к углеводу:
глюкоза + +
лактоза - -
мальтоза + +
маннит - -
сахароза сорбит + +
Продолжение таблицы 5
1 2 3
Протеолитическая активность + +
Каталазная активность + +
Амилазная активность + +
Уреазная активность - -
Рост на МПБ Помутнение жидкой среды, наличие хлопьевидного осадка
Образование индола - -
Образование сероводорода + +
Примечание. «+» - положительная реакция, «-» - отрицательная реакция (без признаков роста).
Чистую культуру предположительно Bacillus subtilis, выделенную из препаратов «Фито-спорин-М», изучали на наличие устойчивости к антибиотикам. Были использованы следующие антибиотики: тетрациклин, ампициллин, стрептомицин. Результаты показали, что культура чувствительна к тетрациклину, гентамицину, малочувствительна к стрептомицину, более высокая устойчивость наблюдалась к ампициллину. Согласно полученным данным таблицы 5 и результатам антибиотической активности, сделали вывод, что биопрепарат «Фитоспорин-М» содержит бактерию Bacillus subtilis и соответствует описанию производителя.
Заключение
В последние годы активно развивается новый метод защиты сельскохозяйственных культур, основанный на применении биопрепаратов, содержащих живые микроорганизмы. Подбор культур для этих целей осуществляется по двум критериям: они не должны быть патогенными для растений и человека, но должны подавлять фитопатогенные грибы, вызывающие болезни растений, или являться энтомопатогенами в отношении вредителей садовых (овощных) культур. Многочисленные исследования по влиянию биопрепаратов на различные виды растений и почву [16-18] доказывают их высокую эффективность в борьбе с фитопатогенами и увеличении урожайности культур.
Экспериментально было доказано отсутствие патогенной микрофлоры (дрожжей, плесневых грибов, бактерий группы кишечной палочки, энтеробактерий, микроорганизмов рода Salmonella и Shigella) в биопрепаратах «Атлант», «Битоксибациллин» и «Фитоспорин-М». В связи с этим изученные биопрепараты не представляли опасности для человека и соответствовали заявленному производителем составу по наличию микроорганизмов.
По общему количеству микроорганизмов результаты исследования показали, что у биопрепаратов «Битоксибациллин» и «Атлант», имеющих истекший срок годности, титр клеток снизился до 3,3*107 и до 5*108 КОЕ/г соответственно. В биопрепаратах «Фитоспорин-М» общий титр микроорганизмов соответствовал заявленному на упаковках.
Биопрепарат «Атлант», согласно проведенным исследованиям, не содержал указанные производителем Lactococcus lactis, Pseudomonas fluorescens, Azotobacter chroococcum, возможно, из-за истекшего срока хранения.
Стоит отметить, что для того, чтобы вышеперечисленные средства были эффективными, необходимо соблюдать условия и срок хранения. Таким образом, проведенные исследования показали, что биопрепараты содержат полезные микроорганизмы и могут положительно влиять на фитосанитарное состояние растений и почвы, благотворно воздействовать на рост овощных и садовых культур и данное исследование будет востребовано при дальнейшей разработке биопрепаратов на основе новых симбиозов микроорганизмов.
Библиография
1. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, по состоянию на 01 марта 2024 г. // Министерство сельского хозяйства
Российской Федерации. - URL: https://mcx.gov.ru/ministry/departments/departament-rastenievodstva-mekhanizatsii-khimizatsii-i-zashchity-rasteniy/industry-information/info-gosudarstvennaya-usluga-po-gosudarstvennoy-registratsii-pestitsidov-i-agrokhimikatov (дата обращения: 29.04.2024).
2. Mäder P., Fließbach A., Dubois D. et al. Soil fertility and biodiversity in organic farming // Science, 2002. - N 296 (5537). - P. 1694-1697. - URL: https://www.science.org/doi/10.1126/science.1071148 (дата обращения: 09.01.2024).
3. Промышленный портал Оренбургской области: офиц. сайт - г. Оренбург, 2024. - URL: https://agro-portal.su/zemledelie-buryatii/2379-pochvenno-klimaticheskie-usloviya-buryatii.html (дата обращения: 09.01.2024).
4. Союз органического земледелия в России: офиц. сайт - г. Москва, 2024. - URL: https://soz.bio/soz-predstavil-reestr-sredstv-proizvodstva-dlya-organicheskogo-proizvodstva (дата обращения: 09.01.2024).
5. Павловская Н.Е., Гагарина И.Н., Бородин Д.Б. и др. Агробиологическое обоснование технологии выращивания овощной продукции с применением биологических средств защиты: монография. -Орел: Изд-во ОрелГАУ, 2018. - 160 с. - URL: https://e.lanbook.com/book/118771 (дата обращения: 07.01.2024).
6. Malusa E., Berg G., Biere A. et al. A holistic approach for enhancing the efficacy of soil microbial inoculants in agriculture: from lab to field scale // Global Journal of Agricultural Innovation, Research & Development, 2021. - Vol. 8. - Р. 176-190. - DOI: 10.15377/2409-9813.2021.08.14.
7. Berg G., Eberl L., Hartmann A. The rhizosphere as a reservoir for opportunistic human pathogenic bacteria // Environmental Microbiology. - 2005. - Vol. 7, Iss. 11. - P. 1673-1685.
8. Vassilev N., Eichler-Löbermann B., Vassileva M. Stress-tolerant P-solubilizing microorganisms // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2012. - N 95. - P. 851-859.
9. Herrmann L., Atieno M., Bräu L. et al. Microbiological Quality of Commercial Inoculants to Improve BNF and Nutrient Use Efficiency // Biological nitrogen fixation. - 2015. - Р. 1031-1040.
10. Хоулт Дж., КригН. Определитель бактерий Берджи. - М.: Изд-во «Мир», 1997. - 368 c.
11. Гомбоева С.В., Цыренов В. Ж., Захаров Е.В. и др. Идентификация и исследование микроорганизмов, выделенных из коммерческих биопрепаратов «Байкал ЭМ-1» и «БИЭМ», способных элиминировать липидные, белковые и углеводсодержащие компоненты сточных вод // Вестник ВСГУТУ. -2018. - № 4. - С. 113-120.
12. Полыгалина Г.В., Чередниченко В.С., Римарева Л.В. Определение активности ферментов: справочник. - М.: Де Ли принт, 2005. - 375 с.
13. ГрачёвЮ.П., ПлаксинЮ.М. Математические методы планирования экспериментов: учеб. пособие для вузов. - М.: ДеЛи принт, 2005. - 294 с.
14. Патент RU2033721C1. Штамм бактерий Bacillus thuringiensis var kurstaki для получения биоинсектицида. / Шевцов Е.В., Щелокова С.К., Жиглецова В.В. Патентообладатели: Малое государственное предприятие «Биотехнологический внедренческий центр» Заявка SU915014489A, заявл. 10.10.1991, опубл. 30.04.1995. - URL: https://patents.google.com/patent/RU2033721C1/ru
15. Трейвас Л.Ю. Защита плодовых, огородных и декоративных растений от болезней и вредителей. Атлас-определитель. - М.: Фитон XXI, 2016 - 160 с.
16. Пыркин В.О., Хапчаева С.А., Дидович С.В. и др. Влияние комплексных биопрепаратов на почвенный микробиом // Таврический вестник аграрной науки. - 2018. - № 2. - С. 35-45. - URL: https://e.lanbook.com/journal/issue/309898 (дата обращения: 08.01.2024).
17. ГнеушеваИ.А., СолохинаИ.Ю. Оценка антифунгальных и ростостимулирующих свойств биопрепаратов на основе природных компонентов // Вестник Иркутской государственной сельскохозяйственной академии. - 2020. - № 99. - С. 31-39.
18. Абрамова А.А., Шаймуллина Г.Х. Оценка количественных изменений в микробиоме почвы и растений яровой пшеницы на ранних стадиях ее развития при обработке биопрепаратами в полевых опытах 2020 и 2021 годов // Агробиотехнологии и цифровое земледелие. - 2022. - № 3 (3). - С. 6-1.
Bibliography
1. State catalog of pesticides and agrochemicals approved for use on the territory of the Russian Federation as of March 1, 2024 // Ministry of Agriculture of the Russian Federation. URL: https://mcx.gov.ru/minis-try/departments/departament-rastenievodstva-mekhanizatsii-khimizatsii-i-zashchity-rasteniy/industry-infor-mation/info-gosudarstvennaya-usluga-po-gosudarstvennoy-registratsii-pestitsidov-i- agrokhimikatov (date of access: 04/29/2024).
2. Mäder P., Fließbach A., Dubois D. et al. Soil fertility and biodiversity in organic farming // Science.
- 2002. - N 296 (5537). - P. 1694-1697.
3. Industrial portal of the Orenburg region: official. website - Orenburg, 2024. - URL: https://agro-portal.su/zemledelie-buryatii/2379-pochvenno-klimaticheskie-usloviya-buryatii.html (access date: 01/09/2024).
4. Union of Organic Farming in Russia: official. website - M., 2024. - URL: https://soz.bio/soz-pred-stavil-reestr-sredstv-proizvodstva-dlya-organicheskogo-proizvodstva (access date: 01/09/2024).
5. Pavlovskaya N.E., GagarinaI.N., Borodin D.B. et al. Agrobiological substantiation ofthe technology of growing vegetable products using biological means of protection: monograph. - Orel: OrelGAU, 2018. -160 p. - URL: https://e.lanbook.com/book/118771 (access date: 01/07/2024).
6. Malusa E., Berg G., Biere A. et al. A holistic approach for enhancing the efficacy of soil microbial inoculants in agriculture: from lab to field scale // Global Journal of Agricultural Innovation, Research & Development. - 2021. - Vol. 8. - P. 176-190. - DOI: 10.15377/2409-9813.2021.08.14.
7. Berg G., Eberl L., Hartmann A. The rhizosphere as a reservoir for opportunistic human pathogenic bacteria // Environmental Microbiology. - 2005. - Vol. 7, Iss. 11. - P. 1673-1685.
8. Vassilev N., Eichler-Löbermann B. et al. Stress-tolerant P-solubilizing microorganisms // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2012. - N 95. - P. 851-859.
9. Herrmann L., Atieno M., Bräu L. et al. Microbiological Quality of Commercial Inoculants to Improve BNF and Nutrient Use Efficiency // Biological nitrogen fixation. - 2015. - P. 1031-1040.
10. Hoult J., Krieg N. Identifier of Burgee's bacteria. - M.: Publishing House "Mir", 1997. - 368 p.
11. Gomboeva S.V., Tsyrenov V.Zh. et al. Identification and study of microorganisms isolated from commercial biological products "Baikal EM-1" and "BIEM", capable of eliminating lipid, protein and carbohydrate-containing components of wastewater // ESSUTM Bulletin. - 2018. - N 4. - P. 113-120.
12. Polygalina G.V., Cherednichenko V.S., RimarevaL.V. Determination of enzyme activity: reference.
- M.: De Li print, 2005. - 375 p.
13. Grachyov Yu.P., Plaksin Yu.M. Mathematical methods for planning experiments: Textbook. manual for universities. - M.: DeLi print, 2005. - 294 p.
14. Patent RU2033721C1. Bacterial strain Bacillus thuringiensis var kurstaki for the production of bioinsecticide / Shevtsov E.V., Shchelokova S.K., Zhigletsova V.V. Patent holders: Small State Enterprise "Bio-technological Implementation Center Application SU915014489A, application 10.10.1991, published 30.04.1995. - URL: https://patents.google.com/patent/RU2033721C1/ru.
15. Treyvas L.Yu. Protection of fruit, garden and ornamental plants from diseases and pests. Atlas-determinant. - M.: Fiton XXI, 2016 - 160 p.
16. Pyrkin V.O., Khapchaeva S.A., Didovich S.V. et al. The influence of complex biological products on the soil microbiome // Tauride Bulletin of Agrarian Science. - 2018. - N 2. - P. 35-45. - URL: https://e.lanbook.com/journal/issue/309898 (date of access: 01/08/2024).
17. GneushevaI.A., SolokhinaI.Yu. Assessment of antifungal and growth-stimulating properties of biological products based on natural components // Bulletin of the Irkutsk State Agricultural Academy. - 2020. -N 99. - P. 31-39.
18. Abramova A.A., Shaimullina G.Kh. Assessment of quantitative changes in the microbiome of soil and spring wheat plants at the early stages of its development when treated with biological products in field experiments in 2020 and 2021 // Agrobiotechnologies and digital agriculture. - 2022. - N 3 (3). - P. 6-1.
