CC BY
6
Щ SCIENCE TIME Щ
(jj II < 5л ' 1-1Ф -1 щг 1 - 4_W JT |Г1 1 r^g) МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ РАСТЕНИЙ Шарыпова Алсу Рустамовна, Башкирский государственный университет, г. Уфа E-mail: alsu-sharipova2009@yandex.ru
Аннотация. Данная статья посвящена методам выделения и очистки продуктов в биотехнологии на различных этапах производства. Рассмотрены основные методы и общие принципы выделения и очистки биотехнологических продуктов.
Ключевые слова: культивирование, биомасса, культуральная жидкость.
Для выявления патогенных микроорганизмов в растениях применяют различные методы. Наиболее распространенными являются нижеследующие.
1. Постановка первичного скрининга семян: полученные семена с испытуемых районов проходят проверку на первичную зараженность семян. После данной проверки в чашки Петри кладут по 2 круга фильтровальной бумаги, наливают небольшое количество воды (8-10 мм) и держат в течение 30 минут. Раскладывают семена в чашки Петри с питательной средой КГА, или МПА, или NBY в количестве 20-30 штук на 1 чашку Петри; накрывают крышками (создание влажной камеры). Через 3-5 дней снимают результаты. При проявлении на чашках Петри необходимо промикроскопировать колонии. Результаты вносятся в протокол первичного скрининга семян.
2. Первичный скрининг почвы: готовят для работы необходимое количество пробирок, колб вместимостью 250,500 мл, для работы используют чашки Петри с питательными средами КГА и МПА. Почву высыпают в ступку и измельчают с помощью пестика. Взвешивают 1 г измельченной почвы и вносят в колбу со 100 мл физраствора или воды. Колбу ставят на мешалку (не менее чем на 1 час). Колбы переносят в бокс фитопатологии, подписывают чашки Петри с
I
SCIENCE TIME
I
образцами почвы (с указанием района и степенью разведения), для титрации на чашках Петри берут разведения 10"4,10"5,10"6,10"7. Убирают в термостат на температуру 25-28 градусов. Колонии вырастают в течение 3-8 дней, делают микроскопию мазков (бактерии полное окрашивание по Граму, грибы- только фуксином). Результаты вносятся в протокол [2].
3. Определение патогенов из злаковых: для выявления патогенов подготавливают чашки Петри с питательными средами (КГА, МПА, СОА, NBY). Чашки Петри подписывают, с указанием объекта, названием сорта и района с которого привезен образец. Корневую систему растений хорошо отмывают от грязи, нарезают на мелкие кусочки и помещают в раствор 96 % спирта на 22-25 секунд. С помощью пинцета кусочки корня проводят над пламенем горелки и помещают в чашки Петри с питательными средами. Такие же процедуры проводят с корневой шейкой, 1 междоузлием и листьями растения. Чашки Петри ставят в термостат на 25-28 градусов. Через 5-8 дней снимают результаты, делают микроскопию и вносят данные в соответствующие протоколы.
4. Определение внутренней инфекции семян: за 1-2 суток до начала работы подготавливают и разливают в ламинарном шкафу питательную среду Сабуро или КГА с антибиотиком (Офлаксадин 1 мл/ 100 мл питательной среды). А также подготавливают и разливают в ламинарном шкафу питательную среду СОА или NBY, без антибиотиков. Взвешивают по 1 г семян соответствующих районов и измельчают их до состояния муки. Промолотые семена всыпают в подписанные заранее колбочки с физраствором. Колбы ставят на мешалку на 2-4 часа, проводят титрацию взвеси из колбочек с высевом на питательные среды. Чашки Петри с титрацией ставят в термостат, полученные результаты вносят в протокол
5. Фитоэкспертиза семян рулонным методом (ГОСТ 12044 - 93): отбираются пробы: из средней пробы, предназначенной для анализа семян на зараженность болезнями, выделяют навеску. Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие пробы по 50 или 100 семян в зависимости от вида анализируемых культур.
Для проращивания семян используют два слоя увлажненной до полной влагоемкости фильтровальной бумаги.
Если анализируют четыре рабочих пробы по 100 семян, то размер полосок фильтровальной бумаги для каждой пробы должен быть 10х110 см (±2 см), если анализируют четыре рабочих пробы по 50 семян, то 10х55 см (±2 см).
Семена раскладывают в одну линию с интервалом 1 (2) см и на расстоянии 2-3 см от верхнего и боковых краев бумаги зародышами вниз. (Округлые семена - без ориентации зародыша).
Разложенные на бумаге семена накрывают такой же полоской увлажненной фильтровальной бумаги, поверх которой накладывают коррекс или полоску
[3].
I
SCIENCE TIME
I
полиэтилена, и сворачивают в рулон. Рулоны ставят вертикально в сосуды и помещают в термостат при температуре 22°С - 25 °С.
При проращивании семян не допускать подсыхания рулонов. Воду в поддоне термостата менять каждые 3-5 суток.
Просмотр семян проводят в сроки определения всхожести семян. На основании фитоэкспертизы определяется суммарная инфекция, степень зараженности семян головневыми болезнями, уровень поражения проростков корневыми гнилями фузариозной или гельминтоспориозной этиологии [1].
Литература:
1. Волынец А.П. Физиология патогенеза и болезнеустойчивости растений. Минск: Беларуская навука, 2016. - 254 с.
2. Гулидова В.А. Инфицированные семена сельскохозяйственных культур и их защита: монография. Елец: Елецкий государственный университет им И.А. Бунина, 2010. - 282 с.
3. Чикин Ю.А. Общая фитопатология. Томск: Томский государственный университет, 2001. - 170 с.
4. Штерншис М. В. Биологическая защита растений. М.: Колосс, 2004. - 264 с.
