CC BY
43
УДК 637.5:637.068 Табл. 1. Ил. 1. Библ. 11.
методы выявления
АНТИМИКРОБНЫХ
препаратов в МЯСЕ
Юрчак З.А, канд. техн. наук, Батаева Д.С., канд. техн. наук ФГБНУ «ВНИИМП им. В.М. Горбатова»
Ключевые слова: фальсификация, мясо, рацион животных, антибиотики, определение, методы
Реферат
Рассмотрена проблема наличия в мясе и мясном сырье антимикробных препаратов. Представлен обзор основных методов определения содержания антибиотиков в мясе, включая микробиологические, иммунологические, хроматографические методы (методы жидкостной хроматографии и жидкостной хроматографии с масс-детектированием) и пр.
METHODOLOGICAL BASE OF IDENTIFICATION ANTIMICROBIC MEDICINES IN MEAT
Yurchak Z.A., Bataeva D.S.
The V.M. Gorbatov All-Russian Meat Research Institute
Key words: falsification, meat, animal ration, antibiotics, definition, methods
Summary
Problem of meat forgery by antimicrobials is considered. Methods for determination of antibiotics in meat including microbiological, physico-chemical including chromatography methods (liquid chromatography, liquid chromatography with mass detection) and other are described.
В настоящее время мясо в отрубах, а также мясные полуфабрикаты с длительными сроками годности являются востребованными в торговых сетях, что определяет рост объемов производства такой продукции. Не на всех мясоперерабатывающих предприятиях в полном объеме соблюдаются стандартные требования, соответственно, изготовление продукции стабильного качества в таких условиях проблематично. Проблема хранения заключается не только в санитарном состоянии производства, но и в состоянии самих животных (кожного покрова), поступающих на убой. При исследовании поверхности туш было установлено, что от состояния кожного покрова крупного рогатого скота (КРС) и свиней, а также от надлежащего соблюдения технологии нутровки в значительной степени зависит качество и безопасность получаемого мяса. Например, поверхность 20 % всех исследованных туш КРС после съемки шкур была конта-минирована L. monocytogenes [1]. В этой ситуации недобросовестные производители стараются решить не проблему, а ее последствия. Например, удлинить сроки годности мяса, подавив рост микроорганизмов за счет использования антимикробных препаратов, к которым можно отнести антибиотики, консерванты и пр. без указания применения их в маркировке, вопреки требованиям ТР ТС 029 «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» и ТР ТС 022/2011 «Пищевая продукция в части ее маркировки», что можно отнести к одной из форм фальсификации мяса.
Применение антимикробных и химио-терапевтических препаратов при жизни животного возможно как в лечебных целях, так и в рационе сельскохозяйственных животных и птиц, позволяющих значительно увеличить прирост живой массы. Направленное действие
антибиотиков повышает использование питательных веществ рациона, что дает возможность сократить расходы корма и сократить сроки откорма.
По данным, опубликованным на сайте американского общества потребителей (consumerunion.org), около 80% анти-битиков, продаваемых на территории США, используются при выращивании животных и птицы, в основном как стимуляторы роста или как средства против вспышек заболеваний при ненадлежащих условиях содержания (скученность животных или птицы, либо несоблюдение санитарии).
15 марта 2016 года был объявлен Всемирным днем защиты прав потребителей, который проводился под девизом: «Исключить антибиотики из меню» («Campaign to get antibiotics off the menu»). Международная организация по защите потребителей (CI) совместно со странами-членами провела кампанию, направленную на то, чтобы призвать предприятия быстрого питания прекратить продажу мяса (мясных продуктов), выращенного с использованием большого количества антибиотиков. В 2012 году Министерство США по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными веществами (Food and Drug Administration) отметило, что бесконтрольное использование антимикробных препаратов привело к избирательной эволюции микроорганизмов и к резкому увеличению числа антибио-тикорезистентых штаммов патогенов [8]. Несмотря на беспокойство потребителей по поводу чрезмерного использования антибиотиков, их применение, по данным Международной организации по защите потребителей, в сельском хозяйстве к 2030 году планируют увеличить на две трети: с 63200 тонн в 2010 году до 105600 тонн к 2030 году [7].
В Российской Федерации проблема наличия антимикробных препаратов в мясном сырье также рассматривается
на государственном уровне. Согласно п. 18 ТР ТС 034/2013 «О безопасности мяса и мясной продукции» антибиотики в продуктах убоя должны контролироваться в соответствии с информацией об их использовании, предоставляемой изготовителем или при поставке продуктов убоя на переработку. Кроме того, ТР ТС 034/2013 устанавливает максимально допустимые уровни остатков лекарственных средств (в том числе антибиотиков) в мясе и продуктах убоя животных. Перечень препаратов значительный и в настоящее время включает в себя 51 вещество и группу веществ, однако на большинство из них отсутствуют стандартизованные методы исследования и выявления.
ГОСТ Р 55481-2013 «Мясо и мясные продукты. Качественный метод определения остаточных количеств антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ» позволяет определить наличие антимикробных препаратов в мясе и в продуктах убоя животных. Исследования, проведенные с использованием этой методики, показали, что нередки случаи когда для переработки на промышленные предприятия поступает мясное сырье с антимикробными препаратами, при этом около 80 % хозяйств по выращиванию животных нарушают сроки выдержки животных перед убоем после применения антибиотиков [3]. Используя указанный метод в 2016 году в испытательном центре ВНИИМП им. В.М. Горбатова» были проведены скрининговые исследования 43 образцов мяса, приобретенных в различных торговых точках г. Москвы на содержание остаточных количеств антибиотиков. В результате скрининга в 53 % исследованных образцах обнаружены вещества, не заявленные на маркировке, что может рассматриваться в качестве информационной фальсификации мяса.
Также были проведены исследования мяса, печени и почек сразу после убоя животных. Результаты исследования свидетельствуют о прижизненном введении антибиотиков животным.
Дифференцированные исследования этих образцов на наличие левомицети-на и тетрациклина показали их отсут-
ствие, что указывает на необходимость разработки методов контроля на все лекарственные препараты, указанные в ТР ТС 034/2013, а, возможно, и их метаболитов.
Разработка методов контроля тесно связана с необходимостью их применения для установления факта присутствия
этих веществ в мясе и мясных продуктах, приобретенных в розничной торговле. Наиболее распространенные в РФ методы определения содержания тех или иных антимикробных веществ можно разделить на микробиологические, иммунологические и физико-химические (таблица 1).
Распространенные методы определения антимикробных веществ в мясе в РФ
Таблица 1
№ п/п Наименование метода Нормативный документ на метод Разработчик Определяемый показатель Объект исследований
1. Микробиологические
1.1 Качественный ГОСТ Р 55481-2013 «Мясо и мясные продукты. ВНИИМП им. Остаточные Мясо всех видов убойных
экспресс-метод Качественный метод определения остаточных В.М. Горбатова количества анти- животных, в мясо птицы и их количеств антибиотиков и других антимикробных биотиков и других субпродукты
химиотерапевтических веществ» антимикробных
химиотерапевти-ческих веществ
1.2 Количественный МУ 3049-84 «Методические указания по опре- Роспотреб-метод делению остаточных количеств антибиотиков надзор
в продуктах животноводства»
Тетрациклиновая Молоко, молочные продукты,
группа
Стрептомицин
Пенициллин Гризин Цинкбацитрацин Мясо
яйца, мясо, мясные продукты, в т.ч. мясо и субпродукты птицы
Молоко и молочные продукты, яйца
Молоко и молочные продукты Мясо
1.3 Экспресс-метод ГОСТ 31903-2012 «Продукты пищевые. Экспресс- ВНИИС Остаточные количе- Пищевые продукты
метод определения антибиотиков» ства антибиотиков
1.4 Экспресс-метод Инструкция по применению Ргет1Те$1 для опреде- Россельхоз- Остаточные количе-Мясо, молоко с использованием ления остаточных количеств антибиотиков в кор- надзор ства антибиотиков
«РгетлТеБЬ мах и продуктах животноводства, утвержденная
Россельхознадзором
2. Физико-химические
2.1 Жидкостная хрома- ГОСТ ISO 13493-2014 «Мясо и мясные продукты. ВНИИПП Хлорамфеникол Мышечная ткань, включая мясо
тография Метод определения содержания хлорамфеникола с массовой долей птицы
(левомицетина) с помощью жидкостной хрома- не менее 6,5 мкг/кг. тографии»
2.2 Высокоэфективная жидкостная хроматография с масс-спектроме-трическим детекти рованием
ГОСТ 31694-2012 «Продукты пищевые, продоволь- ВГНКИ ственное сырье. Метод определения остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»
Остаточное Молоко, молочная продукция,
содержание яйца, яичный порошок, мед,
антибиотиков органы и ткани животных, тетрациклиновой продукты переработки мясного группы сырья, мясо птицы, субпродук-
ты, в том числе птичьи, рыба, нерыбные объекты и продукция из них
2.3 Высокоэфективная ГОСТ 32014-2012 «Продукты пищевые, продоволь-ВГНКИ, ЦНМВЛ Метаболиты
жидкостная хроматография с масс-спектроме-трическим детектированием
ственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов нитрофуранов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»
нитрофуранов
Продукты пищевые, продовольственное сырье
2.4 Жидкостная хроматография с масс-детектированием
ГОСТ 32798-2014 «Продукты пищевые, продо- ВГНКИ вольственное сырье. Метод определения остаточного содержания аминогликозидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»
Остаточное Продукты пищевые, продоволь-
содержание амино- ственное сырье
гликозидов
2.5 Высокоэфективная жидкостная хроматография с масс-спектроме-трическим детектированием
ГОСТ 33934-2016 «Мясо и мясные продукты. Определение цинкбацитрацина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»
ВНИИМП им. В.М. Горбатова
Цинкбацитрацин
Мясо, включая мясо птицы, субпродукты, мясные и мясосо-держащие продукты
Окончание табл. 1
№ п/п Наименование метода Нормативный документ на метод Разработчик Определяемый показатель Объект исследований
2.6 Жидкостная хроматография с масс-спектроме-трическим детектированием
3. Иммунологические
ГОСТ Р 54904-2012 «Продукты пищевые, продо- ВГНКИ Остаточное
вольственное сырье. Метод определения остаточ- содержание
ного содержания сульфаниламидов, нитроимида- сульфаниламидов,
золов, пенициллинов, амфениколов с помощью нитроимидазолов,
высокоэффективной жидкостной хроматографии пенициллинов,
с масс-спектрометрическим детектором» амфениколов
Продукты пищевые, продовольственное сырье
3.1
Иммунофермент-ный метод
3.2 Иммунофермент-ный метод
ГОСТ 33634-2015 «Продукты пищевые, продо- ВГНКИ вольственное сырье. Иммуноферментный метод определения остаточного содержания антибиотиков фторхинолонового ряда»
ГОСТ 33615-2015 «Продукты пищевые, продо- ВГНКИ вольственное сырье. Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона
Остаточное содержание антибиотиков фторхинолонового ряда
Остаточное содержание метаболита фуразолидона
Продукты пищевые, продовольственное сырье
Продукты пищевые, продовольственное сырье
3.3 Иммунофермент- МУК 4.1.2158-07 «Определение остаточных ко- НИИ питания Остаточные количе-Пищевое сырье и пищевые
ный метод
личеств антибиотиков тетрациклиновой группы РАМН, Центр ства антибиотиков продукты животного происхож-
и сульфаниламидных препаратов в продуктах государ-
животного происхождения методом иммунофер-ментного анализа»
тетрациклиновой дения(мясо и мясопродукты;
птица и птицепродукты; молоко и молочные продукты)
ственного группы и суль-санитарно-эпи- фаниламидных демиологиче- препаратов ского надзора в г. Москве
3.4 Экспресс-метод Не утвержден - Антибиотики Мясо, корма, молоко, моча
«Tetrasensor» тетрациклиновой и широкий спектр тканей
группы животного происхождения
Рассмотрим принципы некоторых наиболее используемых методов контроля пищевой продукции на наличие антибиотиков.
В настоящий момент в Российской Федерации существует ряд стандартов, позволяющих определить антибиотики в пищевых продуктах, в том числе и в мясном сырье. К скрининговым микробиологическим методам можно отнести метод, описанный в ранее указанном ГОСТ Р 55481-2013, разработанный ВНИИМП им. В.М. Горбатова. Этот метод основан на способности антибиотиков и других антимикробных химиотера-певтических веществ подавлять рост тест-культуры. Наличие антибиотиков и других антимикробных химиотера-певтических веществ устанавливают по отсутствию роста тест-культуры в агаре вокруг лунки с исследуемой пробой.
Также действует ГОСТ 31903-2012 «Продукты пищевые. Экспресс-метод определения антибиотиков», подготовленный ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации». Данный стандарт устанавливает ускоренный метод качественного определения (обнаружения) антибиотиков в пищевых продуктах, основанный на подавлении антибиотиком дегидрогеназной активности тест-культур в жидкой питательной среде.
Из-за высокой экономической эффективности и широкого спектра определяемых антимикробных препаратов, методы, основанные на ингибировании роста микроорганизмов наиболее предпочтительны для
крупномасштабных программ наблюдения за остатками ветеринарных лекарств. Эти методы обычно включают среду, инокули-рованную чувствительными бактериями, и основаны на диффузии в агар остатков антимикробного препарата - ингибиро-вание роста указывает на присутствие антимикробных соединений. В соответствии с этим принципом были разработаны многие тест-системы. В 1 980-х был предложен метод, известный как четырех чашечный метод ЕС (Bogaerts&Wolf, 1980). В качестве тест-культуры в трех чашках используется микроорганизм B. subtilius BGA при этом значения рН тест-агара различны, в четвертой чашке содержится микроорганизм Kocuria rhizofila АТСС 9341, ранее известная как M. luteus. Кусочки исследуемого образца размещают на поверхности агара (рисунок 1) каждой из четырех чашек. За счет того, что у каждого из антибиотиков свой рН оптимум активности,
Рисунок 1. Ингибирование роста тест-культуры антибиотиками, присутствующими в мясе
он, воздействуя на ту или иную культуру, ингибирует ее рост, соответственно, мы визуально наблюдаем его присутствие по зоне отсутствия роста тест-штамма [9]. Исследования в этом направлении были продолжены в следующих работах: Calderón, Gonzalez, Diez&Berenguer, 1996; Ferrini, Mannoni&Aureli, 2006; Gaudinetal., 2004; Myllyniemietal., 2001; Okermanet al., 2001). Основным недостатком этих методов являлась трудоемкая процедура подготовки пробы [10].
Для обнаружения в мышечной ткани и в бульоне тетрациклина и неомицина использовали штамм B. subtilis L2. Культуру M. luteus АТСС 9341 применяли для обнаружения левомитецина. Данная методика по сравнению с общепринятой (МУ 3049-84) является более упрощенной. Она может быть использована в производственных условиях для определения остаточного содержания антибиотиков, например, в случаях реализации мяса от животного, подвергнутого вынужденному убою; при определении остаточных количеств антибиотиков-консервантов, применяемых против бактериальной порчи мяса при хранении и транспортировке и т.д.
Ученый из Нидерландского Ваге-нингенского университета и научно-исследовательского центра Мариель Г. Пиккемаат описывает новый микробиологический скрининговый метод для обнаружения остатков антимикробных средств у убойных животных - тест Nouws для обнаружения присутствия антибиотиков (NAT-скрининг). Он основан на анализе
жидкости почечной лоханки с использованием пяти чашек с различными агарами и позволяет проводить групповую идентификацию антибиотиков. NAT-скрининг комбинирует простую и эффективную стратегию отбора и подготовки проб с высокой способностью обнаружения. После валидации, в соответствии с 2002/657/ЕС, NAT-скри-нинг заменил новый нидерландский почечный тест для рутинного анализа в рамках нидерландского национального плана мониторинга остатков антибиотиков [11]. В России описана методика, позволяющая определять количество антибиотических препаратов в продуктах животного происхождения, в частности, в мясе птицы. Сущность этого метода заключается в том, что адсорбирующие бумажные диски, смоченные экстрактом из мышечной ткани мяса птицы, бульоном и растворами антибиотика разной концентрации, размещают на поверхности твердой питательной среды, содержащей тест-культуру. Рост тест-культуры при термостатировании приводит к помутнению агара. Отсутствие зоны помутнения вокруг диска с изучаемым образцом (нет роста микроорганизмов) свидетельствует о наличии в изучаемом субстрате антибиотического вещества. Диаметр этой зоны сравнивают с диаметром зоны отсутствия роста микроорганизмов вокруг дисков, содержащих разные концентрации антибиотиков [2].
На рынке лабораторно-исследователь-ского оборудования и препаратов имеются различные экспресс-тесты для определения и дифференциации антибиотиков, например:
1. «Tetrasensor» (Тетрасенсор) - это экспресс-метод (иммунохромато-графические тест-полоски) с использованием специфичных антител для выявления антибиотиков тетра-циклиновой группы в пробе мяса, мочи, кормов и широкого спектра тканей животного происхождения. Работает он при комнатной температуре, не требует предварительного термостатирования, что облегчает контроль за поступающим сырьем для предприятий мясоперерабатывающей промышленности.
2. «PremiTest» (Премитест) - микробиологический экспресс-метод, основанный на отсутствии роста спор Bacillus stearothermophilus при присутствии в пробе ингибирующих веществ. По сравнению с традиционными тестами Премитест позволяет получать результат в течение 3 часов. Премитест признан и используется в качестве официального тест-метода в Бельгии, Франции, Нидерландах, Великобритании, Гер-
мании. В России исследования с его использованием проводят по документу «Инструкция по применению Преми-Теста для определения остаточных количеств антибиотиков в кормах и продуктах животноводства», утвержденному Федеральной службой по ветеринарному и фи-тосанитарному надзору от 17 июля 2007 года N ПВН-1-4. 6/01921.
Хроматографические методы нашли более широкое применение при определении антибиотиков в пищевых продуктах. Сущность метода ВЭЖХ заключается в экстракции тетрациклиновых антибиотиков (окситетрациклина, тетрациклина, хлор-тетрациклина, доксициклина) из образца экстракционным буферным раствором; очистке и концентрировании полученного экстракта с использованием картриджа для твердофазной экстракции и последующей идентификации и определения содержания этих антибиотиков методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием жидкостного хроматографа со спектрофотометрическим детектором при определенной длине волны.
Во ВНИИПП был подготовлен на базе международного стандарта ISO 13493:1998 Meat and meat products -Determination of chloramphenicol content -Method using liquid chromatography (Мясо и мясные продукты. Определение содержания хлорамфеникола. Метод жидкостной хроматографии) ГОСТ ISO 13493-2014 «Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии». Этот стандарт устанавливает метод определения с помощью жидкостной хроматографии содержания хлорамфеникола в мышечной ткани мяса, включая мясо птицы, где массовая доля хлорамфеникола составляет не менее 6,5 мкг/кг. Сущность метода состоит в экстракции водой хлорамфеникола из пробы. Экстракт фильтруют и полученный водный раствор очищают от липофиль-ных компонентов методом твердофазной экстракции. Хлорамфеникол элюируют с экстракционного патрона дихлормета-ном. Органический растворитель выпаривают и остаток очищают с помощью жидко-жидкостной экстракции в системе вода-толуол. Хлорамфеникол определяют методом обращенно-фазной хроматографии с детектированием в ультрафиолетовой (УФ) области спектра.
Кроме того, Всероссийским государственным Центром качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов были разработаны и введены в действие:
□ ГОСТ Р 54904-2012 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометри-ческим детектором», устанавливающий метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометри-ческим детектированием. Сущность метода состоит в трехэтапном исследовании. Первоначально проводится определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометриче-ским детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Затем количественное определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пеницилли-нов, амфениколов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений при помощи градуировочной кривой. И, в заключение, проводят детектирование анализируемых проб в режиме регистрации выбранных реакций.
□ ГОСТ 31694-2012 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спек-трометрическим детектором», устанавливающий метод идентификации и количественного определения остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы в молоке, молочной продукции, яйцах, яичном порошке, меде, органах и тканях животных с использованием высокоэффективной жидкостной хромато-графи и с масс-спектрометрическим детектированием в диапазоне измерений от 1,0 до 1000,0 мкг/кг. Сущность метода включает в себя трехэтапное исследование, когда первоначально производится определение остаточных количеств антибиотиков тетрацикли-новой группы, проводимое методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометриче-ским детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Далее производится количественное определение остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы, проводимое методом внутреннего стандарта по сумме площадей пиков идентифицированных соединений и их эпи-форм для каждого антибиотика при помощи градуировочной кривой. И, в заключение, проводят детектиро-
вание анализируемых проб в режиме
регистрации выбранных реакций.
Люминесцентные методы, в основном, используются при определении антибиотиков тетрациклинового и хинолового ряда. Обладая высокими значениями молярных коэффициентов поглощения, органические лиганды, в том числе и антибиотики, эффективно поглощают энергию возбуждения. Если при этом энергия триплетного состояния лиганда больше энергии резонансного уровня иона лан-танида, то она может передаваться ему. Ион переходит в возбужденное состояние, а затем высвечивает, выделяя кванты света. Для снижения предела обнаружения при люминесцентном определении антибиотиков в качестве аналитических форм часто используют разнолигандные комплексы, в которых в качестве второго лиганда вводятся органические основания или донорно-активные вещества (1,10-фенантролин, р-дикетоны, р-ци-клодекстрин, оксикарбоновые кислоты и др.). Люминесцентный анализ основан на различии цвета люминесценции, производимой веществами разной химической природы. Одним из разновидностей метода является люминесцентная микроскопия [3, 4].
Спектрографические методы также, как и люминесцентные, в основном, неселективны. Электрохимические методы привлекают интерес благодаря минимальным трудозатратам, быстрого получения результата и низкой стоимости. Однако необратимый характер окисления определяемых соединений и адсорбция продуктов их окисления на поверхности электрода ухудшают метрологические параметры результатов анализа.
В последнее время твердофазный иммуноферментный анализ получил широкое распространение для контроля продуктов питания. Метод основан на конкуренции свободного антибиотика из пробы и антибиотика, предварительно адсорбированного на твердой фазе (лунке планшета) в составе белкового конъю-гата, за центры связывания специфичных к тетрациклинам антител во вносимом растворе. После отделения несвязавших-ся реагентов количество антител, прореагировавших с иммобилизованным антигеном, определяют с помощью вторичных антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена. Количество связавшегося с антителами конъюгата вторичных антител определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси. Количество определяемого антибиотика, содержащегося в анализируемой пробе, обратно пропорционально регистрируемой оптической плотности продукта ферментатив-
ной реакции. Большое количество работ посвящено определению антибиотиков тетрациклинового ряда, которые широко применяются в животноводстве. При определении окситетрациклина в тканях свиней после ВЭЖХ используют флуори-метрическое детектирование [4, 5].
Следует отметить, что в связи с широким применением антимикробных препаратов и недостаточным количеством методов по их определению на базе лабораторий ВНИИМП им. В.М. Горбатова в рамках НИОКР на протяжении нескольких лет проводятся работы по постановке и практическому внедрению дополнительных методов определения антибиотиков, к которым можно отнести, например, следующие:
1) методику количественного определения левомицетина на основе применения иммуноферментного метода ELISA;
2) методику определения тетрациклина флуориметрическим методом, который основан на флуорометрии цветного комплекса экстрагированного тетрациклинового антибиотика с барбиталом натрия;
3) иммуноферментный метод количественного определения тетрациклина;
4) методику количественного определения стрептомицина иммунофер-ментным методом [6].
1. Батаева Д.С., Юшина Ю.К., Зайко Е.В. Идентификация микробиологических рисков контаминации туш крупного рогатого скота и свиней патогенными микроорганизмами при убое и переработке. Теория и практика переработки мяса. 2016;1(2):34-41. 001:10.21323/2414-438Х-2016-1-2-34-41
7. Электронный ресурс [http://www.consumersinternational. org/media/1645877/english-antibiotics-off-the-menu-re-port-feb-2016.pdf / "Oampaign to get antibiotics off the menu» (дата обращения 20.06.2016)]
Поскольку антибиотики в пищевых продуктах, в основном, содержатся в остаточных количествах, то методы их определения должны быть высокочувствительными. Наиболее подходящими этому требованию являются хромато-графические методы, в частности метод ВЭЖХ, однако из-за высокой стоимости аппаратуры он не всегда доступен для предприятий пищевой промышленности.
В завершение следует отметить, что вслед за трансформацией антимикробных препаратов, применяемых в животноводстве и пищевой промышленности, идет и совершенствование методологической базы по их выявлению. Однако в настоящее время в Российской Федерации отмечается необходимость стандартизации новых методов исследований, позволяющих идентифицировать конкретные антибиотические вещества и их метаболиты.
© КОНТАКТЫ:
Юрчак Зоя Андреевна a st@vniimp.ru
V +7 (495) 676-35-29 Батаева Дагмара Султановна a b.dagmara@inbox.ru
V +7 (495) 676-60-11
Bataeva D.S., Yushina Y.K., Zaiko E.V. identification of the microbiological risks of contamination of cattle and pig carcasses with pathogens at slaughter and processing. Theory and practice of meat processing. 2016;1(2):34-41. (In Russ.) D0I:10.21323/2414-438X-2016-1-2-34-41
URL: [http://www.consumersinternational.org/media/1645877/ english-antibiotics-off-the-menu-report-feb-2016.pdf / Campaign to get antibiotics off the menu (date of the application 20.06.2016)
список ЛИТЕРАТУРЫ:
REFERENCES:
2. Кальницкая, О. И. Определение содержания антибиотиков в мышечной ткани птицы / О.И. Кальницкая // Мясная индустрия. — 2005. — № 12. — 351 с. Kalnickaya, O.I. Opredelenie soderganiya antibiotikov v mishechnoy tkani pticw [Determination of the content of antibiotics in the muscle tissue of fewl] / O.I. Kalnickaya // Myasnaya industriya. — 2005. — № 12. — 351 p.
3. Васильев, В.П. Аналитическая химия. В 2 ч. Ч. 2. Физико-химические методы анализа: Учеб. для химико-технол. спец. Вузов / В.П. Васильев. — М.: Высш. шк. — 1989. — 384 с. Vasilev, V.P. Analiticheskaya himiya. V 2ch. Ch.2 Fiziko-himicheskie metodi analiza: Ucheb. Dlyahimiko-tehnol. spec. Vuzov [Analytical chemistry. In 2 parts. Part two. Physicochemical methods of analysis: A textbook for chemistry and technology specialties of higher educational institutions] / V.P. Vasilev. — M.: Vwssh. shk. — 1989 — 384 p.
4. Бельтюкова, С.В. Методы определения антибиотиков Beltukova, S.V. Metodi opredeleniya antibiotikov v pishevih pro-в пищевых продуктах (Обзор) / С.В. Бельтюкова, Е.О. Ли- duktah (Obzor) [Methods for the determination of antibiotics венцова // Методы и объекты химического анализа. - in food products (Review)] / S.V. Beltukova, E.O. Livencova // 2013. - № 1. - С. 4-13. Metodi I obekti himicheskogo analiza. - 2013. - № 1. - P. 4-13.
5. Егоров, А.М. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гав-рилова. — М.: Высш. шк. — 1991. — 288 с. Egorov, A.M. Teoriya I praktika immunofermentnogo analiza [Theory and practice of enzyme immunoassay] / A.M. Egorov, A.P. Osipov, B.B. Dzantiev, E.M. Gavrilova. — M.: Vwssh. shk. — 1991. — 288 p.
6. Лисицын, А.Б. Методы практической биотехнологии. Анализ компонентов и микропримесей в мясных и других пищевых продуктах / А.Б. Лисицын, А.Н. Иванкин, А.Д. Неклюдов. — М.: ВНИИМП. — 2002. — 408 с.
Lisitsyn, A.B. Metodi prakticheskoy biotehnologii. Analiz kom-ponentov I mikroprimesei v myasnix I drugih pishevih produktah [Methods of practical biotechnology. Analysis of components and microimpurities in meat and other food products] /A.B. Lisitsyn, A.N. Ivankin, A.D. Nekludov. — M.: VNIIMP. — 2002. — 408 p.
