CC BY
60
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
из биопленок после их обработки дезсредством нельзя считать критерием утраты ими жизнеспособности. Устойчивость микроорганизмов в составе биопленок обусловлена также защитными свойствами эк-зоклеточного полисахаридного матрикса, наличие которого является основным признаком сформированной биопленки. Микробиологическими методами не представляется возможным оценить действие дезсредства на экзоклеточный матрикс биопленок.
Использование микроскопических методов существенно расширяет возможности объективизации оценки действия микробиоцидных препаратов на микроорганизмы, поскольку при использовании этих методов визуализируется процесс ориентированного действия молекул биоцидного вещества на структурные компоненты микроорганизмов и биопленок. По степени дезорганизации тех или иных структурных компонентов микроорганизмов можно судить об их жизнеспособности.
В данном исследовании методами световой и электронной микроскопии было изучено действие третичных алкиламинов (дезинфицирующее средство «Оптимакс») на структурно-функциональную организацию вегетативных форм грамотрицатель-ных и грамположительных бактерий (Escherichia coli, Pseudomonas aureginosa, Salmonella typhimurium и Staphylococcus aureus) и образуемых ими биопленок.
Показано, что под воздействием третичных ал-киаминов на вегетативные (планктонные) бактерии происходит флокуляция с образованием много -клеточных конгломератов, разрушение клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, дезорганизация цитоплазмы и рибонуклеопротеидного комплекса. Степень выраженности повреждений бактерий зависела от концентрации препарата — чем выше концентрация, тем более были изменены клетки. Бульонные культуры бактерий, обработанные средством «Оптимакс» в концентрации 2,5% в течение 60 мин, биопленки не образовывали.
При обработке дезинфицирующим средством «Оптимакс» в концентрации 2,5% в течение 60 мин зрелых биопленок вывлены ярко выраженные изменения структуры экзополисахаридного матрикса и деструкция бактериальных клеток внутри биопленки. Разрушение бактерий внутри биопленок свидетельствует о преодолении препаратом экзополиса-харидного барьера, и является важным показателем биоцидной активности третичных алкиламинов.
Таким образом, на основании проведенного исследования можно рассматривать дезинфицирующие средства на основе третичных алкиламинов как перспективные препараты для борьбы с биологическими пленками, которые образуют наиболее эпидемиологически значимые штаммы возбудителей госпитальных инфекций.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОЛОНИЙ СТРЕПТОКОККА
Е.В. Диц
ГБОУ ВПО ««Тюменская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, г. Тюмень
В стационарах России ежегодно регистрируется около 2,5 млн больных с внутрибольничными инфекциями (ВБИ), а ежегодный экономический ущерб, причиняемый инфекциями связанными
с оказанием медицинской помощи (ИСМП) составляет более 5 млрд рублей (Концепция. Минздрав России, 2011). Проблема снижения заболеваемости стептококковыми инфекциями остается актуальной до настоящего времени в связи со сложностью лабораторной диагностики, низкой устойчивостью возбудителей во внешней среде, селекцией и формированием госпитальных штаммов с множественной лекарственной устойчивостью. Задачей настоящих исследований явилось совершенствование методов лабораторной диагностики стрептококковых инфекций на основании изучения чувствительности к антибиотикам сопутствующей микрофлоры стрептококковым инфекциям. За период 1997—2011 гг. микробиологическими методами обследовано 5300 больных. Чувствительность выделенных бактерий к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом. Использовали следующие антибиотики: стрептомицин, эритромицин, гентамицин, ами-кацин, линкомицин, бензилпенициллин, олеан-домицин, цефаклор, цефуроксим, цефатоксим, цефалексин. На основании проведенного анализа установлено, что сопутствующая микрофлора стрептококковым инфекциям чувствительна к ген-тамицину, а стрептококки в присутствии данного антибиотика формировали изолированные колонии. В мазках из зева сопутствующая микрофлора была чувствительна к гентамицину в 90—96% случаев, а стрептококки были резистентны к гентами-цину. Поэтому предложен способ получения изолированных колоний стрептококков с использованием дисков с гентамицином. Для накопления стрептококков, обладающих анаэробными свойствами, предварительно делали посев исследуемого материала на печеночный бульон Китта—Тароцци.
Предложенный способ позволяет сократить время проведения лабораторных исследований, уменьшить расход питательных сред и повысить процент выделения стрептококков из исследуемого материала, что позволяет в более полном объеме проводить противоэпидемические мероприятия при возникновении ИСМП, вызываемых стрептококком.
МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ
И.И. Долгушин, А.Ю. Савочкина, Ю.С. Шишкова
ГБОУ ВПО ЧелГМА Минздравсоцразвития России, г. Челябинск
Открытие V. Brinkmann и соавт. в 2004 г. ней-трофильных внеклеточных ловушек и установление их антимикробного эффекта, является началом нового этапа в изучении нейтрофильных грануло-цитов. Весьма актуальной является разработка информативных и доступных методов обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек и их применения в клинической и диагностической практике.
Нейтрофильные гранулоциты, содержащиеся в крови, тканях и на поверхности слизистых оболочек, могут обладать неодинаковыми свойствами. Изначально была отработана методика определения ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови. Показано, что для ней-трофилов чистой фракции, окраска: акридиновым оранжевым, Sytox Green и по Романовскому—Гимзе могут быть использованы для определения внеклеточных ловушек.
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
Нейтрофилы из периферической крови мигрируют в ткани и в секреты слизистых оболочек, где и осуществляют свои основные функции. На сегодняшний день не разработаны методы определения ловушек, образованных нейтрофилами в мукозаль-ных секретах. Главное препятствие в том, что существующие методы не позволяют дифференцировать нейтрофильную ДНК от слизи, которая находится в мукозальных секретах. Сущность предлагаемого нами способа окраски заключается в одновременном использовании двух красителей: Sytox Green для окрашивания внеклеточных волокон ДНК и ядер погибших клеток, а также синьки Эванса для фонового окрашивания нативного препарата (живые клетки и слизь).
Следующей задачей нашей работы, была клиническая апробация методов обнаружения НВЛ, разработанных на экспериментальных моделях.
Одну из таких клинических групп составили пациенты с сепсисом. С этой целью исследовали мазки из цельной крови. Полученные данные свидетельствуют о том, что при сепсисе, в отличие от здоровых пациентов в крови обнаруживается значительное количество нейтрофильных внеклеточных ловушек. Другую группу составили женщины с церви-цитом и вагинитом. Цервикальный и вагинальный секреты окрашивали сложным красителем. Было установлено, что при воспалении нижнего отдела гениталий увеличивается количество нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные методы доступны, просты в исполнении, и могут быть использованы для оценки функционального статуса нейтрофильных гранулоцитов в клинической лабораторной диагностике.
АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ БИОМАТЕРИАЛА ИССЛЕДУЕМОГО В УЧРЕЖДЕНИЯХ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
О.Г. Дудникова, Л.М. Дементьева
Департамент здравоохранения Воронежской области, БУЗ ВО «Воронежская областная клиническая больница № 1», г. Воронеж
Проблема профилактики внутрибольничных инфекций является актуальной для учреждений здравоохранения Воронежской области. С целью разработки оперативных противоэпидемических мероприятий в течение ряда лет проводится мониторинг возбудителей, обнаруженных микробиологическими лабораториями больниц при обследовании госпитализированных лиц.
Анализировались результаты лабораторных микробиологических исследований биоматериала от больных — кровь, моча, отделяемое ран, пунктат, мокрота, грудное молоко, мазки со слизистых и кожных покровов.
Итоги: В 2011 г. проведен анализ 375 470 проб материала. Результаты микробиологического мониторинга показали, что наибольший процент высева микроорганизмов обнаружен при исследовании проб грудного молока (48,1%), мазков из зева и носа (42,3%), отделяемого слизистой глаз (37,8%). При анализе установлено, что чаще выделяется кокковая флора: стафилококки, стрептококки, энтерококки (57,8%), на втором месте — семейство энтеробакте-рий (24,3%). При анализе выделенной микрофлоры
за последние 5 лет отмечается тенденция роста выделенных грибковых возбудителей.
Для проведения коррекции противоэпидемических мероприятий руководителям учреждений здравоохранения регулярно направлялась информация с результатами мониторинга. В подразделениях больниц осуществлялась ротация дезинфицирующих средств.
В соответствии с результатами исследований, в микробиологических лабораториях учреждений здравоохранения области стали активнее внедряться методики видовой идентификации грибов рода Candida и контроля определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам методом диффузии в агар.
Полученные данные позволяют утверждать, что пейзаж микрофлоры, обнаруженной при обследовании больных, изменяется.
Проведенные исследования показали, что в целях организации своевременных профилактических мероприятий в стационарах учреждений здравоохранения существует необходимость оперативного реагирования противоэпидемических служб на изменение циркулирующей микрофлоры.
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
А.Н. Евстропов, Ю.А. Пименова, Л.Н. Захарова, Т.А. Агеева
Новосибирский государственный медицинский университет
Золотистый стафилококк, будучи хорошо изученным микроорганизмом, продолжает привлекать внимание, поскольку является инициатором инфекционно-воспалительных процессов любой локализации. Цель исследования — изучение структурных преобразований в мезентериальных лимфатических узлах и селезенке в динамике экспериментальной стафилококковой инфекции. Исследование выполнено на 160 самцах крыс породы Wistar массой 180—200 г. Животным опытной группы (n = 150) внутрибрюшинно под эфирным наркозом вводили 1 х 109 микробных клеток суточной культуры S. aureus. Через 3, 6, 12 часов, 1, 2, 3, 7, 9, 14 суток животных выводили из эксперимента, забирали мезентеральные лимфатические узлы, селезенку, кровь и перитонеальную жидкость для бактериологического и морфометрического исследований.
При бактериологическом исследовании выявлена разная интенсивность элиминации микроба. У животных 1 подгруппы (n = 50) наблюдалось длительное нахождение стафилококка (в лимфатических узлах, крови и перитонеальной жидкости — до 9 суток, в селезенке — до 3 суток). У животных 2 подгруппы (n = 100) отмечено быстрое освобождение от стафилококка (из лимфатических узлов и селезенки микроб не высевался уже через сутки).
При морфометрическом исследовании также установлены различия выраженности изменений и вовлеченности структурно-функциональных зон лимфатических узлов и селезенки животных 1 и 2 подгрупп. Наиболее интенсивно этот процесс происходил у животных 2 подгруппы — значительно увеличивались размеры и число лимфоидных фолликулов, — обеспечивая быструю элиминацию микроба. Освобождение от микроба через сутки
