CC BY
11
Литература
1. Гасимова 3. М.. Литвинов Н. Н.. Беляева Н. Н. и яр. // Охрана окружающей среды н здоровье населения.— Тарту, 1990,— С. 34—35.
2. Казачков В. И.. Гасимпва 3. М. Методология фундаментальных исследований в гигиене окружающей среды.— М„ 1989,— С. 130—137.
3. Кузьник Б. И., Васильев Н. В., Цыбиков Н. Н. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма.— М„ 1989.
4. Литвинов Н. П., Казачков В. И., Гасимова 3. М. // Арх. анат,— 1990,— № I,— С. 60—67.
5. Литвинов Н. П., Гасимова 3. М. // Там же.— № 9.— С. 78-84.
6. Литвинов Н. Н., Г асимова 3. М., Беляева Н. Н. // Карцерогенные Г^-нитрозосоединения и их предшественники — образование и определение в окружающей среде.— Таллинн, 1990,— С. 82—83.
7. Литвинов Н. Н., Г асимова 3. М.. Вепринцев Д. Б., Логинова Е. В. // Бюл. экспер. биол.— 1991.— № 4.— С. 425-427.
8. Логинов А. С., Блок Ю. Е. Хронические гепатиты и циррозы печени.— М., 1987.
9. Маянский Д. Н. "Клетки Купфера v система моконукле- ' арных фагоцитов.— Новосибирск, 1981.
10. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.— Новосибирск, 1983.
11. Меркурьева Р. В.. Литвинов H. Н.. Аулика Б. В. и др. // Бюл. экспер. биол,— 1982,— № 4.— С. 41 —44.
12. Методические рекомендации к морфологическому изучению влияния химических факторов окружающей среды на дыхательную систему.— M., 1984.
13. Ровенский Ю. А. Растровая электронная микроскопия нормальных и опухолевых клеток.— М., 1979.
14. Фрейдлин И. С. Система мононуклеарных фагоцитов.— М„ 1984.
15. Воуит А. // Tissue Antigens.— 1974,— N 4.— P. 269.
16. Cline M. J. The White Cell.— Cambridge, 1975.
17. Furth P. Ц Immunobiology.— 1982,— Vol. 161, N3—4,— P. 178-185.
18. Horst A. Molekularne podstawy Patogenezy chorob.— Warszawa, 1979.
19. Myrvic Q.. Leake E S., Farris В // J. Immunol.— 1961.— Vol. 86,— P. 128—132.
20. Rous P.. Beard J. W. // J. exp. Med.— 1934.— Vol. 59 — P. 577—591.
21. Tabacova S. // Nutr. Res.— 1985.— Suppl. I.— P. 670—673.
Поступила 16.07.91
© А. С. СПАССКИЙ. 1992 УДК 614.777:613.471
А. С. Спасский
МЕТОДИКА ОЦЕНКИ РАЗДРАЖАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ
НА ПЕРЕДНИЙ ОТДЕЛ ГЛАЗА
НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
В настоящее время при разработке гигиенических нормативов для оценки качества воды плавательных бассейнов, водоемов рекреационного назначения, горячей воды особое значение приобретает обязательный учет возможного раздражения органа зрения реагентами (стабилизаторы, антикоррозийные препараты), дезннфектантами, а также различными химическими веществами антропогенного характера. Изучению же неблагоприятного влияния подобных соединений на зрение не уделяется должного внимания как гигиенистами, так и офтальмологами [2| из-за отсутствия методической схемы проведения экспериментов.
Из литературы известно, что для оценки раздражающего действия на орган зрения различных химических «еществ достаточно широко используются методы, основан-
1
кс. 1. Установление пороговой концентрации ТЭА-соли при однократном воздействии на передний отдел глаза кроликов через 3 сут после инсталляции. Действие на роговицу и радужку.
По оси абсцисс — концентрации вещества (в %); по оси ординат—^ эффекта (в баллах). Кружки с черным пятном — степень интенсивности помутнения роговицы; I — усредненный .результат этого изменения. Свеллые кружки — площадь поражения рого* вицы; 2 — усредненный результат. Кружки с крестиком — степень изменения радужки: 3 — усредненный результат.
ные на балльной системе [3— 6]. Однако эти методы могут быть использованы либо для решения задач гигиены труда, связанных с применением средств индивидуальной защиты кожи (мази, пасты, кремы), либо для оценки внедряемых для массового потребления косметических составов. Анализ материалов по гигиеническому нормированию химических веществ в воде показал, что лишь в отдельных работах по обоснованию ПДК делались попытки определить пороги раздражающего действия с использованием упрощенной методики Драйза.
Цель нашей работы — разработка доступной при проведении токсиколого-гигиенических экспериментов методики изучения раздражающего действия химических средств при попадании их в глаз, позволяющей не только субъектив-
Рис. 2. Установление пороговой концентрации ТЭА-соли при однократном воздействии на передний отдел глаза кроликов через 3 сут после инстилляции. Действие на конъюнктиву.
По оси абсцисс — концентрации вещества (в %); по оси ординат — эффекта (в баллах). Кружки с черным пятном — степень покраснения конъюнктивы; /— усредненный результат это-о явления Светлые кружки — отечность; 2 — усредненный результ«т. Кружки с крестиком — выделения; 3 — усредненный результат.
Пороговые концентрации (в- %) ТЭА-соли, вызывающие раздражающий эффект на структуры глаза кроликов
Роговица Конъюнктива
Срок наблюдения степень интенсивности поыутнения степень распространения помутнения Радужка покраснение отечность выделения
Сразу после опыта 0 0 0 68 0 0
15 мин 0 0 0 68 0 0
30 мин 0 0 0 40 0 0
45 мин 0 0 0 39 0 0
1 ч 0 0 0 23 0 0
1 ч 30 мин 70 0 0 36 0 0
2 ч 36 54 0 31 0 0
3 ч 26 34 0 26 60 0
1 сут 22 34 0 37 40 0
2 сут 14 13 67 40 40 50
3 сут 12 10 24 29 36 47
• 5 сут 10,8 8 27 40 47 62
10 сут 11,2 10,8 27 60 60 0
20 сут 2,7 1.2 14 55 65 0
30 сут 2,4 1.5 15 60 65 0
Примечание. О — отсутствие эффекта.
но оценить повреждающий эффект, но и установить объективную количественную зависимость концентрация — эффект.
В опытах на кроликах изучалось раздражающее действие на передний отрезок глаза при однократном введении в различных концентрациях соединений ТЭА-соли, формалина, хлора и др. За I ч до эксперимента оба глаза животного проверялись на наличие раздражения или дефекта роговицы с помощью увеличительного стекла, затем глаза окрашивались 2 % раствором флуоресцеина натрия для проверки целостности роговицы. Убедившись в том, что глаза здоровы, вносили изучаемое вещество в правый глаз животного (левый служил контролем) следующим образом: оттягивали нижнее веко вниз и в сторону от глазного яблока и в образовавшуюся конъюнктивальную полость вводили 1—3 капли водного раствора изучаемого вещества в определенных концентрациях.
После инстилляции оценка действия вещества определялась сразу и через 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180 мин, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30 сут. Каждая группа животных, на которых испытыва-лось вводимое вещество в определенной концентрации, состояла из 6 особей.
Раздражающее действие оценивалось в баллах по следующей системе.
Роговица. А. Степень интенсивности помутнения: локальные или диффузные изменения (исчезновение блеска). Детали радужки хорошо просматриваются — 1 балл; хорошо различимы полупрозрачные области (впечатление запотевшего стекла с шероховатой поверхностью). Детали радужки незначительно затемнены — 2 балла; матовые области молочного цвета (помутнение передних слоев, изъязвление ткани). Детали радужки не видны; край зрачка едва различим — 3 балла. Полное помутнение (бельмо) и (или) гнойное расплавление ткани; радужка не видна — 4 балла. Б. Степень распространенности помутнения (площадь поражения): '/< или меньше — 1 балл; больше '/«. но меньше '/г — 2 балла; больше '/г, но меньше 3/« — 3 балла; больше — 4 балла.
Радужка. Складки выражены, реакция зрачка на свет сохраняется (застойная инъекция вокруг роговицы) — 1 балл; геморрагии, объемные деструкции (разрушение) радужки, реакция зрачка-на свет отсутствует — 2, балла.
Конъюнктива века. А. Покраснение: поверхностно-цилиар-ные сосуды заметно инъецированы — I балл. Глубокие сосуды темно-красного цвета, трудно различимы — 2 балла; диффузная яркая краснота — 3 балла. Б. Отечность: любая припухлость выше нормы — 1 балл; очевидная припухлость с частичным переходом на веки —' 2 балла; припухлость на веках с частичным их прикрытием — 3 балла; то же с полным прикрытием — 4 балла. В. Выделения: обильное слезотечение — I балл; сукровичные серозные выделения — 2 балла; гнойные выделения — 3 балла.
В исследованиях предусматривалось определение вероятностных пороговых концентраций для отдельных химических соединений, содержащихся в воде. С этой целью испытыва-лось от 3 до 6 концентраций. Так, при воздействии ТЭА-соли в разных концентрациях (100, 50, 25, 12, 6 и 3%) на структуры глаза наблюдалась определенная закономерность клинических проявлений в зависимости от концентрации вещества и временя, прошедшего после внесения его в глаз.
Установлено, что при более высоких концентрациях (100 и 50 %) поражающий эффект отмечался тотчас и через 15 мин после введения вещества; тяжесть клинических проявлений нарастала на протяжении всего периода наблюдения и приводила к гибели глаза. При более низких концентрациях (25 и 12%) первичные изменения в роговице и конъюнктиве наблюдались не ранее, чем через 30—45 мин, а в радужке через 1,5—2 ч.
При концентрациях 6 и 3 % изменения в большей степени и в более ранний период наблюдались в конъюнктиве и роговице, в радужке они были значительно слабее и возникали позже. Так, если появление первых признаков поражения в конъюнктиве регистрировалось уже через 30—45 мин после инстилляции, а в роговице — через 3 ч, то в радужке они отмечались только через 3 ч (концентрация 6%) и даже лишь через 2 сут (концентрация 3%).
При анализе полученных материалов в качестве пороговой концентрации вещества принималось такое его содержание, которое вызывало начальные клинические проявления в отдельных структурах глаза, оценивавшиеся в 1 балл.
Результаты опытов со всеми испытанными веществами в разных концентрациях с выявленными признаками воздействия на роговицу, радужку и конъюнктиву, выраженными в баллах (по каждому из 15 временных промежутков наблюдения), сводились в таблицы, на основании которых строились соответствующие графики, куда наносились средние арифметические данные по каждой из групп кроликов (6 животных).
На рис. 1, 2 приведены результаты воздействия на структуры глаза ТЭА-соли через 3 сут после инстилляции.
По оси абсцисс откладывалась концентрация вещества в логарифмическом выражении, по оси ординат — эффект воздействия в баллах (также в логарифмическом масштабе). Нанесенные на график точки, отражающие соответствующие эффекты при определенных концентрациях, спрямлялись линией по методу Миллера — Тейтнера [ 1 ]. Из точки пересечения данной линии с ординатой, равной эффекту в 1 балл, опускался перпендикуляр на ось абсцисс для определения соответствующей пороговой концентрации.
Подобным же образом были вычислены пороговые концентрации для остальных врменных отрезков наблюдения. Сводные данные представлены в таблице.
При анализе полученных данных установлено, что наиболее чувствительными показателями первых признаков раздражающего действия ТЭА-соли на орган зрения являются покраснение конъюнктивы и степень интенсивности помутнения роговицы. Вместе с тем следует отметить, что при воздействии на конъюнктиву наблюдается определенная тенденция к снижению пороговых концентраций (по признаку покраснения) в первые 1—1,5 ч после внесения вещества н 2—3 сут (по явлениям отечности и наличию выделений) с последующим повышением, начиная с 3—5 сут, что очевидно свидетельствует о постепенном улучшении слизистой глаза и восстановлении ее нормального состояния.
Таким образом, разработанная методика позволяет устанавливать пороги раздражающего действия растворимых в воде химических соединений как дополнительного критерия вредности при их гигиеническом нормировании в воде.
f
Литература
1. Беленький M. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.— Л., 1963.
2. Корбакова А. И. // Гиг. труда,— 1990,— № 5.— С. 56—57.
3. Draize У., Woodard G., Calvery Н. // J. Pharmacol, exp. Ther.— 1944.— Vol. 82,— P. 377—390.
4. Green W.. Sullivan J.; Hehir R. A Systematic Comparison
of Chemically Induced Eye Injury in the Albino Rabbit and Rhesus Monkey. The Soap and Detergent Association.— New York, 1978.
5. Marzulli F., Ruggles D. // J. Ass. off. analyt. Chem.— 1973.- Vol. 56,- P. 905-914.
6. Marzulli F.. Simon M. // Amer. J. Opton.— 1971.— Vol. 48 — P. 61.
Поступила 02.08.91
© С. В. BAPEHOBA, 1992 УДК 614.485-036.8-078
С. В. Варенова
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ИЗУЧЕНИЯ БАКТЕРИЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ УФ-ИЗЛУЧЕНИЯ
Московский НИИ гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
В качестве физического агента для обеззараживания объектов воздушной среды стационаров, фармацевтических учреждений, микробиологических и вирусологических лабораторий широко применяется коротковолновое (бактерицидное) УФ-из-л.'чение [1, 3, 4]. Оно используется для обеззараживания воздуха закрытых помещений лечебных учреждений и, в частности, операционного блока и перевязочных.
Вместе с тем вопрос о влиянии УФ-излучения на микрофлору на поверхностях изучен недостаточно. В предыдущих исследованиях показано, что бактерицидное воздействие на потенциальные возбудители внутрибольничных инфекций достигается при облучении микроорганизмов в жидкой среде и на увлажненной поверхности (поверхность питательной среды); выявлены определенные различия в чувствительности отдельных видов микроорганизмов к УФ-лучам. Эти данные позволили высказать предположение о возможности использования коротковолнового УФ-излучения для уничтожения возбудителей внутрибольничных инфекций на поверхностях в стационарах.
В настоящем исследовании была предпринята попытка научить возможность обеззараживания сухих поверхностей при их искусственной контаминации индикаторными и условно-патогенными микроорганизмами.
В связи с тем что, как показали исследования последних лет, руки медицинского персонала являются основным источ-■ЯИ10М передачи возбудителей многих внутрибольничных инфекций, в частности грамотрицательных бактерий [2, 6, 8), была/разработана специальная методика контаминации поверхностей, имитирующая возможный путь передачи инфекционного агента в условиях стационара.
Суспензия клеток суточной культуры исследуемых микроорганизмов вносилась в сосуд объемом 3 л, содержащий 2 Л прокипяченной и предварительно охлажденной воды. В этот соф опускались руки испытуемого приблизительно на 1,5— 2'Мин. После стекания жидкости с рук делались их отпечатки на поверхности покрытого пластиком лабораторного стола. Последняя вместе с отпечатками рук облучалась бактерицидной лампой с интенсивностью коротковолнового излучения 0.4 Вт/м2 при времени экспозиции 15, 30, 45 с и 1, 3. 5 и 10 мин.
Облучение проводилось газоразрядной ртутной лампой низкого давления ДБ-30; поверхность находилась на расстоянии 130 см от источника излучения. В эксперименте использовалась суспензия суточных культур кишечной и синегнойной палочек в стерильной водопроводной воде. После 10 мин работы бактерицидной лампы ДБ-30 (время, необходимое для вхождения в стандартный ритм работы) проводился эксперимент.
После облучения с каждого отпечатка производился смыв ватным тампоном, смоченным перед отбором пробы стерильной водопроводной водой. Из каждой пробы делались 10-кратные разведения. Посевы разведений в количестве 0,2 мл осуществлялись на чашки с плотной средой Эндо. Посев производился таким образом, чтобы на контрольных чашках (без облучения) вырастало не более 300—500 колоний.
Чашки с посевами помещались в термостат и выдерживались при 37 °С в течение 24 ч. Затем подсчитывалось число выросших колоний и определялся процент гибели микроорганизмов под действием различных экспозиций (доз) УФ-излучения.
В настоящем исследовании изучалось бактерицидное действие УФ-излучения на грамотрицательные микроорганизмы: кишечную и синегнонную палочки. Оба микроорганизма являются частыми возбудителями внутрибольничных инфекций в хирургических и урологических клиниках, в родовспомогательных учреждениях (5, 7, 9| и, как правило, передаются контактным путем.
Как показали проведенные исследования, кишечная палочка оказалась в высокой степени чувствительной к действию УФ-излучения. Уже при экспозиции 15 с четко проявляется бактерицидный эффект, который выражается в гибели 57 % клеток бактерий. При увеличении экспозиции облучения до 1 мин происходит отмирание сохранивших жизнеспособность клеток вплоть до полной их гибели.
Довольно близкие результаты были получены также в экспериментах с синегнойной палочкой. Отмечается более медленное нарастание бактерицидного эффекта при увеличении дозы облучения. При экспозиции 1 мин погибает 99,3 % клеток. Динамика гибели микроорганизмов представлена на рисунке.
В результате проведенных сравнительных исследований была установлена высокая чувствительность обоих изученных микроорганизмов к бактерицидному действию УФ-излучения. Хотя чувствительность изученных микроорганизмов к коротковолновому бактерицидному действию УФ-излучения близкая, имеются некоторые различия в характере кривой отмирания. При различных экспозициях УФ-излучения для синегнойной палочки кривая отмирания имеет более пологий характер.
Полученные данные свидетельствуют о возможности обеззараживания не только воздуха, но и поверхностей в условиях стационаров. Высокая чувствительность грамотрриательных бактерий к УФ-излучению позволяет расширить область его применения при проведении профилактических мероприятий по предупреждению внутрибольничных инфекций.
Таким образом, разработанная экспериментальная модель контаминации поверхностей оказалась эффективной. Предложенная методика может найти применение при изучении действия физических и химических факторов на многие микроорганизмы — возбудители внутрибольничных инфекций, в первую очередь для определения эффективности дезинфекционных мероприятий в стационарах.
Бактерицидный эффект действия УФ-излучения на кишечную и синегнойную палочки.
По оси абсцисс — жепозииия действия УФ лучей (в *ин|; по оси ординат — гибель клеток (в %>; /— синсгнойная палочка; II — кишечная палом««
