Методика очистки и окраски скелетов мелких позвоночных Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Литература

Svensson L. 1970. Identification Guide to European Passerines. Stockholm.

Ю ^

ISSN 0869-4362

Русский орнитологический журнал 2006, Том 15, Экспресс-выпуск 316: 377-378

Методика очистки и окраски скелетов мелких позвоночных

В. Г. Борхвардт, К. Ю. Караваева

Второе издание. Первая публикация в 1982*

Костный скелет мелких животных с успехом изучают на просветлённых тотальных препаратах. Подобную методику применяли и в отношении хрящевых элементов, причём были предложены способы одновременного окрашивания хряща и кости (Hardaway, Williams 1975; Иванченко, Иванченко 1978). Однако в тех случаях, когда вокруг скелета располагаются значительные массы мягких тканей, хрящевые элементы выявляются с трудом.

Нами опробован способ очистки скелетов от мягких тканей с помощью личинок бесхвостых земноводных (зелёной жабы Bufo viridis, обыкновенной чесночницы Pelobates fuscus, травяной Rana temporaria и остромордой R. arvalis лягушек), которые начиная с ранних стадий развития охотно поедают животную пищу. В широком масштабе использовали головастиков травяной лягушки, с чьей помощью было получено около 150 скелетов личинок того же вида. Мёртвых животных помещали в небольшие кюветы или стеклянные банки, где маленькими группами содержали «чистильщиков». Важно, чтобы поедаемые объекты не плавали, а лежали на дне. Головастики особенно интенсивно объедали трупы, обработанные в течение нескольких секунд горячей водой. Пять-шесть «чистильщиков», находившихся на 45-46-й стадии развития (Дабагян, Слепцова 1975) и имевших длину 28-36 мм, «изготавливали» скелет головастика той же стадии за 1-3 ч. Через несколько дней активность «чистильщиков» обычно снижалась, они становились вялыми, так что приходилось их заменять.

Головастики очень полно удаляют мягкие ткани, в частности, мышечную, обнажая поверхность скелетных элементов и выявляя мелкие детали, например, отверстия в черепе, служащие для прохождения

* Борхвардт В. Г., Караваева К. Ю. 1982. Методика очистки и окраски скелетов мелких позвоночных // Зоол. журн. 61, 1: 120-121.

кровеносных сосудов и нервов. Объедая мягкие ткани, головастики частично повреждают и скелетные образования, особенно хрящевые, поэтому их деятельность желательно контролировать. «Чистильщиков» можно использовать для работы не только со свежим материалом, но и с фиксированным. Так, им предлагали личинок лягушек и жаб, фиксированных в формалине, просветлённых и окрашенных ализариновым красным. Из глицерина, где хранились эти тотальные препараты, их переносили в холодную воду (на несколько часов), а затем в горячую (на 10 мин). Скелеты фиксированных личинок были «изготовлены» за 5-6 ч.

В качестве «чистильщиков» использовали головастиков, отловленных в природе, а также (зимой) полученных из искусственно оплодотворённой икры лягушек, стимулированных гипофизарными инъекциями (Дабагян, Слепцова 1975).

Наилучшие результаты в окрашивании скелетов дало применение методики О.Ф.Иванченко и Л.А.Иванченко (1978), без проведения операций, связанных с обработкой мягких тканей. Скелеты фиксировали в 96-градусном спирте. Хрящевую ткань окрашивали в течение 30-60 секунд 0.2-процентном раствором альцианового синего, приготовленного на 96-градусном спирте, подкисленном до 0.5-1% уксусной кислотой. После ополаскивания спиртом и водой объекты на 3-5 ч помещали в слабый щелочной раствор ализаринового красного до чёткого выявления кальцинированных тканей. В результате хрящ окрашивался в яркий голубой или зеленовато-голубой цвет, кость и другие кальцинированные ткани — в красный. Готовые препараты помещали в глицерин.

Литература

Дабагян Н.В., Слепцова Л.А. 1975. Травяная лягушка Rana temporaria L. // Объекты биологии развития. М.: 442-462. Иванченко О.Ф., Иванченко Л.А. 1978. Методика дифференцированного окрашивания хряща и кости у личинок рыб // Морфология и систематика рыб. Л.: 85-86.

Hardaway T.E., Williams K.L. 1975. A procedure for double staining cartilage and bone // Brit. J. Herpetol. 5, 4: 473-474.