CC BY
13
вание низкотемпературных вакуумных испарителей и нетермических методов опреснения не исключает возможности попадания в нее морских микроорганизмов, поэтому требуется обеззараживание воды, получаемой указанными методами.
к Развитие перевозок грузов по водным путям привело к использованию
судов смешанного плавания типа море — река — море. В связи с этим стало целесообразным осуществлять водоснабжение морского судна в пресноводном переходе по схеме снабжения водой речного судна. С экономической и эксплуатационной точки зрения в данном случае выгодно кондиционирование питьевой воды из забортной речной или озерной (электрокоагуляция, коагуляция с применением флоккулянтов, обеззараживание воды озоном, йодом и ультрафиолетовыми лучами).
В последние годы в качестве конструкционных, теплоизоляционных, звукопоглощающих, отделочных материалов, клеев, мастик, герметиков, лаков и красок в судостроении применяют синтетические полимерные материалы. Природа полимеров не исключает возможности выделения ими во внешнюю среду различных биологически активных веществ (мономеры, добавки и пр.). Это требует постоянной гигиенической оценки таких материалов. Однако при использовании синтетических материалов в судостроении приходится руководствоваться критериями, разработанными для береговых условий, так как для судов таких критериев еще не существует. Вместе с тем механический перенос критериев оценки полимерных материалов, применяемых на территориальных объектах, в область судостроения вряд ' ли оправдан из-за специфических условий обитания на судах плавающего состава. Характеристика плавсостава по возрасту и состоянию здоровья, сравнительно долгие перерывы между плаваниями также существенно отличают условия на судне от условий в населенном пункте. Кроме того, при установлении ПДК тех или иных веществ в населенных местах учитывают влияние вредных факторов не только на человека, но и на зеленые насаждения, прозрачность атмосфеты и другие моменты, не имеющие значения для судов.
Накопление материалов, касающихся гигиенического нормирования токсических соединений в воздухе судовых помещений, позволяет установить определенную зависимость между этими нормативами и ПДК веществ в атмосферном воздухе населенных мест.
Таким образом, рассмотренные нами некоторые проблемы морской гигиены еще раз убеждают в том, что научные разработки в этой области требуют специфических гигиенических подходов.
Поступила 7/Х 1969 г.
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК 614.72/.73:618.33
МЕТОДИКА ИЗУЧЕНИЯ ЭМБРИОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Канд. мед. наук В. А. Гофмеклер
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
При экспериментальном изучении эмбриотропного действия того или иного фактора внешней среды и в частности химических веществ, загрязняющих атмосферный воздух, главными задачами являются создание ус-
ловий опыта, по возможности адекватных натурным (А. П. Дыбан), и анализ полученных результатов, Для решения первой задачи в наших экспериментах белых беспородных крыс, как наиболее удобных и достаточно чувствительных для этой дели, помещали в 100-литровые затравочные камеры, где и подвергали их круглосуточной динамической затравке определенными веществами в строго постоянных концентрациях — от очень больших, близких к летальным, до низких, среднесуточных предельно допустимых в атмосферном воздухе и ниже. Затравку вели в течение всего срока беременности самок крыс (примерно 22 дня). Концентрации веществ в камерах устанавливали ежедневно.
В отдельную клетку с 4—5 самцами весом до 250 г вечером подсаживали по 15—20 половозрелых самок весом около 200 г. Утром только оплодотворенных самок пересаживали в затравочные камеры, остальных подсаживали к самцам вновь вечером, оплодотворение, день которого считали первым днем беременности, проверяли по влагалищным мазкам (П. П. Сахаров). С этой целью во влагалище крысы вводили пипеткой несколько капель физиологического раствора и отсасывали его обратно в пипетку. Затем содержимое наносили на предметное стекло и под малым увеличением микроскопа без окрашивания препарата опеделяли наличие сперматозоидов. Оплодотворение у крыс возможно только в стадии течки.
Оплодотворенные животные находились в затравочных камерах в течение всего срока беременности.
Наиболее трудной частью исследования является анализ эмбриотроп-ной активности изучаемого вещества, т. е. вторая задача эксперимента. Прежде всего требуется установить, что считать тератогенным действием. Мнений на этот счет много. Наиболее ясна картина, когда имеются внешние нарушения развития (уродства), однако это бывает далеко не всегда, тем более что в практике изучения эмбриотропной активности атмосферных загрязнений приходится иметь дело с очень небольшими концентрациями. И. А. Рапопорт считает, что интенсивность аномалий развития (модификаций) строго соответствует концентрации химических веществ, которая введена в развивающийся организм. В то же время у Fraser создается впечатление, что кратковременное воздействие большими дозами вещества на внутриутробно развивающийся организм вызывает больший тератогенный эффект, чем хроническое, но меньшими дозами.
Следовательно, суждение о действии того или иного вещества только по внешним аномалиям развития неполно. Нужно комплексное микроанатомическое и гистологическое исследование, поскольку расхождение между внутренними и наружными аномалиями может превышать 30—40% (А. П. Дыбан). Brock и Kreybig указывают также, что к названным аномалиям требуется отнести отставание в развитии эмбрионов по сравнению с контролем (малый вес и длина), раннюю и позднюю резорбцию (т. е. пред-и постимплантационная гибель плода) и, наконец, явные уродства. Дополнительно Weil рекомендует для правильного анализа действия токсического агента изучать вес органов эмбриона и проводить их биохимические исследования.
П. Г. Светлов, П. Н. Александров с соавторами считают, что, согласно современным представлениям, любое отклонение от нормы в эмбриогенезе следует рассматривать как аномалии развития» Аномалии могут быть общими (повреждение всего зародыша) или локальными (повреждение отдельных частей), анатомическими или функциональными. К мнению, что и функциональные отклонения нужно учитывать при анализе тератогенной активности вещества, присоединяются и другие авторы (Gerbelle; H. H. Константинова; Л. С. Персиянинов, и др.).
Исходя из сказанного, целесообразно изучать как внешние и внутренние аномалии развития, так и внутриутробную гибель зародышей, задержку нормального развития эмбрионов, а также тонкие гистологические, гистохимические и биохимические отклонения в тканях. Внешние и внутрен-
ние аномалии развития позволяют вскрыть наиболее совершенные ме-тоды Wilson и Dawson. Первый метод дает возможность после фиксации эмбрионов в жидкости Буэна проанализировать вес и длину эмбриона, внешние аномалии развития и микроанатомические путем ряда разрезов эмбриона. Второй метод позволяет вскрыть аномалии развития скелета путем просветления тела эмбриона и окрашивания скелета ализарином.
Метод изучения микроанатомических изменений у эмбрионов по Wilson заключается в следующем. 20-дневные эмбрионы фиксируют в жидкости Буэна (перенасыщенный раствор пикриновой кислоты, 40% раствор формалина и ледяная уксусная кислота в соотношении 15:3:1). Через 7 дней пребывания в таком растворе эмбрион готов к исследованию как внешних, так и внутренних аномалий развития. Для этого эмбрион разрезают по определенным линиям (рис. 1) и срезы рассматривают под бинокулярной лупой.
Рис. 1. Зафиксированный в жидкости Буэна крысенок с линиями разреза по Вильсону для микроанатомического изучения органов. Цифрами указана последовательность разрезов.
Рис. 2. Окрашенный скелет у просветленного крысенка.
Wilson рекомендует производить 25 срезов, однако для этого требуется специальная аппаратура. Производимые нами 9 разрезов (по рекомендации А. П. Дыбана) дают возможность определить строение неба, глаз, мозга и внутренних органов, целостность диафрагмы, пол эмбриона и другие особенности.
Метод окрашивания скелета эмбриона ализарином по Dawson применяется таким образом. 20-дневные эмбрионы заливают 96° спиртом на срок не менее 7 дней, затем у каждого из них удаляют печень и кишечник и заливают 1% раствором КОН на 1—2 дня до просветления тканей и появления видимого скелета. Затем эмбрионы 3—4 раза промывают водопроводной водой и заливают на 2—3 дня ализариновым красителем (несколько капель ализарина в раствор «Б» до фиолетового окрашивания. Раствор «Б» состоит из 10 г КОН, 200 г глицерина и 800 мл дистиллированной воды).
После того как скелет приобретает красный цвет, эмбрионы промывают в растворе «Б» 3 раза и заливают новым раствором, в котором 40% глицерина, 30% спирта и 30% воды, на 1 день. На следующий день раствор меняют на более концентрированный по глицерину, пропорционально снижая концентрации спирта и воды. В 6—7 приемов доводят глицерин до 100%, добавляют 2—3 капли формалина; в таком растворе готовые прокрашенные эмбрионы могут долго храниться (рис. 2).
исследование пред- и постимплантационной гибели зародышей удобно проводить по формулам, описанным А. М. Малашенко и И. К. Егоровым. Эти формулы следующие:
В — (А + Б) Смертность до имплантации -ц-.
Смертность после имплантации д ^ . Относительная смертность до имплантации ГВ-(А + Б)
В
опыт
В-(А+Б) -g-контроль
Относительная смертность после имплантации
г Б
Х100.
I
А + Б
опыт
Д g контроль Общая эмбриональная смертность
ХЮО.
1 —
В
опыт
А
-g- контроль.
Примечание. А — число живых эмбрионов; Б — число мертвых эмбрионов; В — число желтых тел.
Для анализа внутренних и внешних уродств мы забивали 50—60% животных на 20-й день беременности, остальных крыс оставляли до естественных родов. Делали это с целью изучения продолжительности беременности, изменения веса эмбрионов и их органов (тимус, сердце, легкие, печень, селезенка, почки и надпочечники). Вес определяли на торсионных весах и пересчитывали на 10 г веса крысенка. Часть органов фиксировали в 12% растворе формалина и фиксаторе Шабадаша для патогистологиче-ских и гистохимических исследований, а часть органов (печень, надпочечники и мозг) подвергали биохимическому исследованию (баланс аскорбиновой кислоты, сумма нуклеиновых кислот и ДНК). Такое комплексное изучение влияния химических факторов внешней среды при ингаляционном хроническом поступлении в организм, на наш взгляд, является наиболее полным, вскрывающим как внешние и внутренние, так и функциональные изменения, происходящие при внутриутробном развитии эмбриона.
ЛИТЕРАТУРА
Александров П. Н., Богданова В. А., Иванов А. И. и др. Вестн. АМН СССР, 1965, № 3, с. 78. — Д ы б а н А. П. Там же, 1967, № 1, с. 18. — К о н с т а н-т и н о в а Н. Н. Физиол. ж. СССР, 1960, № 6, с. 750. — Малашенко А. М., Егоров И. К. Генетика, 1967, № 3, с. 59. — ПерсианиновЛ. С. Тезисы докл. 11-го Всесоюзн. съезда акушеров-гинекологов. М., 1963, с. 42. — Р а п о п о р т И. А. В кн.: Фармакология и токсикология. М., 1966, с. 7. — С а х а р о в П. П. Лабораторные животные. М,—Л.,1937.— Светлов П. Г. Вест. АМН СССР, 1962, № И, с. 13. — В г о с k|N., К г е у b i g Th., Arch. exp. Path. Pharmak., 1964, Bd 249, S. 117. — D a w s о n A., Stain Tech no1., 1926, v. 1, p. 123. - Gerbelle J. С., C. R. Soc. Biol. (Paris), 1962, v. 156, p. 2016. — Weil C. S., Toxicol, appl. Pharmacol., 1962, v. 4, p. 561.
Поступила 4/11 1968 r.
