Методические положения по организации мониторинга инфекционных и инвазионных болезней диких хищных млекопитающих Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Методические положения

МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПО ОРГАНИЗАЦИИ МОНИТОРИНГА ИНФЕКЦИОННЫХ И ИНВАЗИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ДИКИХ ХИЩНЫХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Н.В. ЕСАУЛОВА кандидат ветеринарных наук

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, e-mail: esaulova@mail.ru С.В. НАЙДЕНКО кандидат биологических наук Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН (одобрены секцией «Инвазионные болезни животных РАСХН 19 мая 2011 г., протокол № 2)

Для реализации современных природоохранных проектов требуется комплексный подход, включающий изучение состояния популяции редких видов животных, наличия кормовых ресурсов, репродуктивной биологии животных, а также их зоолого-ветеринарного обследование. Важнейшее значение при изучении состояния здоровья животных имеют исследования на инфекционные и инвазионные болезни. Усовершенствование знаний о зараженности диких хищных млекопитающих возбудителями инфекционных и паразитарных болезней позволит разработать научно-обоснованные мероприятия по охране животных редких видов. Также немалую пользу данная информация может принести при организации питомников и центров реабилитации для животных, занесенных в Красную книгу Российской Федерации.

1. Сбор и консервирование проб от хищных млекопитающих для проведения диагностических исследований на инфекционные и инвазионные болезни.

а) Сбор проб фекалий от хищных млекопитающих осуществляют, в основном, для диагностики гельминтозов и кишечных протозоозов, а также ряда инфекционных болезней (панлейкопении кошачьих, чумы плотоядных, коронавирусного и парвовирусного энтерита). Для обнаружения большинства из вышеперечисленных вирусов необходимо собирать свежие экскременты, сроком давности не более нескольких часов. При сборе проб в зимний период (при постоянных отрицательных температурах) возможно использование образцов двухнедельной давности. Лишь для обнаружения парвовирусов - возбудителей парвовирусного энтерита собачьих и куньих и панлейкопении кошачьих, пригодны экскременты с достаточно большим сроком давности (вирус сохраняется в окружающей среде на протяжении полугода и более).

При сборе проб для гельминтоовоскопических исследований допустим сбор образцов различной давности, однако, необходимо помнить, что биология развития некоторых гельминтов связана с выходом личинок из яиц во внешней среде в течение нескольких суток, что может привести к снижению видового разнообразия гельминтов в проанализированных пробах.

Необходимо отметить, что наличие полевых навыков работы, знание повадок животных в значительной степени могут помочь в сборе образцов. Многие хищные оставляют экскременты, перемещаясь по дорогам (тигр, енотовидная собака, лиса), около нор (барсук), в специальных уборных (выдра, барсук), на упавших стволах деревьев (соболь), на водоразделах (рысь, леопард).

Принадлежность экскрементов тому или иному виду млекопитающих определяют на основании следов лап около места сбора образца, размера и формы экскрементов. При наличии сомнений и необходимости четкой идентификации часть экскремента (1-2 г) может быть помещена в 96%-ный эти-

ловый спирт, храниться при комнатной температуре и впоследствии использована для видовой идентификации молекулярно-генетическими методами. Еще одним способом длительного хранения образцов является их заморозка в жидком азоте и последующее хранение до проведения анализа.

У иммобилизированных животных фекалии берут из прямой кишки. Собранные образцы экскрементов этикетируют: дата сбора, координаты места сбора (регистрируют с помощью GPS), видовая принадлежность оставившей их особи. Для сохранения записей на этикетках необходимо помещать их в отдельный пластиковый пакет, который затем кладут в пакет с экскрементами. Этикетированные таким образом пробы замораживают. При отсутствии условий для замораживания фекалий их можно консервировать в жидкости Барбагалло (3%-ный формалин на физиологическом растворе). Жидкость Барбагалло готовят по следующей схеме: 1000 мл дистиллированной воды, 7,5 г NaCl, 30 мл формалина при соотношении фекалий и жидкости Барбагалло 1 : 1.

б) Взятие проб крови. В большинстве случаев кровь берут у обездвиженных животных. Взятие крови у большинства видов хищных можно проводить из любого из наиболее доступных для исследователя крупных кровеносных сосудов: яремной вены, поверхностной вены плеча, паховой вены, подъязычной вены. Для большинства болезней отделяют сыворотку крови путем центрифугирования (20 минут при скорости 3-6 тыс. оборотов в минуту). Сыворотку крови отделяют пипеткой от клеточных элементов, переливают в виде аликвот в отдельные пробирки (по 100-300 мкл в зависимости от объема собранного материала). Пробирки тщательно этикетируют. Пробы сыворотки немедленно замораживают в жидком азоте, а при невозможности - в обычной морозилке при -18 °С (размораживание и повторное замораживание не допускается). Предпочтительно пробы крови на вирус лейкемии кошачьих анализировать сразу после забора (иммунохроматографический метод), либо хранить их в жидком азоте. Для диагностики кровепаразитарных болезней делают тонкие мазки крови и фиксируют в этиловом или метиловом спирте (15 и 5 мин соответственно).

в) Сбор и фиксация гельминтов. Гельминтов, обнаруженных в фекалиях и при проведении полного гельминтологического вскрытия по К.И. Скрябину, фиксируют в 70%-ном спирте или жидкости Барбагалло. Фиксация в спирте более предпочтительна, так как в этом случае возможно в дальнейшем окрашивание гельминтов для изучения морфологии или определения ДНК. Перед фиксированием гельминтов хорошо промывают, живых держат в воде, пока они не погибнут. Каждый сбор снабжают этикеткой с указанием вида животного, места и времени обнаружения, локализации паразита. Для диагностики трихинеллеза берут ножки диафрагмы или межреберные мышцы (пробы по 50 г). Пробы мышц этикетируют и замораживают.

г) Взятие соскобов кожи для исследования на саркоптоидозы и демоде-коз. Соскобы берут скальпелем со свежепораженного участка или со старого, но на границе со здоровой кожей, так как в эти местах скапливается наибольшее количество клещей. В связи с тем, что клещи могут быть экто- и эн-допаразитическими, соскобы следует делать глубокими (скарифицировать до появления капиллярного кровотечения). Полученный материал фиксируют в жидкости Барбагалло.

д) Сбор и фиксация эктопаразитов. Обнаруженных у отловленных или погибших животных эктопаразитов: иксодовых клещей, блох, вшей и власоедов, фиксируют в 70%-ном спирте. Пробирки с членистоногими этикетируют.

2. Методы диагностики основных инфекционных и инвазионных болезней диких хищных млекопитающих (табл. 1, 2).

1. Прижизненная диагностика инфекционных болезней диких хищных _млекопитающих_

Болезнь Возбудитель Вид восприимчивых животных Материал исследования Метод исследования

1 2 3 4 5

Чума плотоядных РНК- содержащий вирус из сем. Paramyxoviridae Сем. Canidae, Mustelidae, Procyonidae, роды Panthera, Uncia, Lynx Сыворотка крови (антитела, антиген) ИФА, ПЦР, ИХ*

Фекалии (антиген) ПЦР

Выделения из носа и глаз (антиген) ПЦР, ИХ

Панлейкопения (инфекционный парвовирусный энтерит кошек) Virus panleukopenia feline из сем. Parvoviridae Сем. Felidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Фекалии (антиген) ПЦР, ИХ

Парвовирусный энтерит собачьих и куньих Парвовирус типа 2 из сем. Parvoviridae Сем. Canidae, Mustelidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Фекалии (антиген) ПЦР, ИХ

Калицивирусная инфекция кошек (калицивироз) Calicivirus из сем. Picornaviridae Сем. Felidae Смывы с язв ротовой полости, выделения из носа и рта (антиген) ПЦР

Ринотрахеит (герпес) кошек ДНК- содержащий вирус из сем. Herpesviridae Сем. Felidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Смывы из носа (антиген) ПЦР

Герпес собачьих ДНК- содержащий вирус из сем. Herpesviridae Сем. Canidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Вирусная лейкемия кошек РНК- содержащий ретровирус С-типа из подсем. Oncornaviridae Сем. Felidae Сыворотка крови или цельная кровь (антиген) ИХ

Вирусный иммунодефицит кошек Lentivirus (РНК- содержащий вирус из сем. Retroviridae) Сем. Felidae Сыворотка крови или цельная кровь (антитела) ИХ

1 2 3 4 5

Инфекционный перитонит кошек РНК- содержащий вирус из сем. Coronaviridae Сем. Felidae Сыворотка крови или цельная кровь (антитела) ИХ

Коронавирусный энтерит собак РНК- содержащий вирус из сем. Coronaviridae Сем. Canidae, Mustelidae Сыворотка крови или цельная кровь (антитела) ИХ

Хламидиоз Chlamydophila felis Chlamidia sp. Сем. Canidae, Mustelidae, Felidae, Procyonidae Сыворотка крови (антитела) ИФА (набор предназначен для анализа антител к родам Chlamidia и Chlami-dophilia)

Микоплазмоз Micoplasma felis M. gattae Сем. Canidae, Mustelidae, Felidae, Procyonidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Грипп А Вирус сем. Ortho mixoviridae Сем. Canidae, Mustelidae, Felidae, Procyonidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Риккетсиоз (эрли-хиоз) собак Ehrlichia canis Сем. Canidae Сыворотка крови (антитела) ИХТ

Болезнь Ауэски ДНК- содержащий вирус из сем. Herpesviridae Сем. Canidae, Mustelidae, Felidae, Procyonidae Сыворотка крови (антитела) ИФА

* ИФА - иммуноферментный анализ, ПЦР - полимеразная цепная реакция, ИХ - им-муннохроматография

2. Прижизненная диагностика инвазионных болезней диких хищных млеко_питающих_

Болезнь Возбудитель Вид восприимчивых животных Материал исследования Метод исследования

1 2 3 4 5

Токсо- плазмоз Toxoplasma gondii Сем. Felidae, Canidae, Ursidae и MusteШdae Сыворотка крови (антитела) ИФА

Фекалии кошачьих (антиген) ПЦР

Изоспо-роз собак Isospora canis, Isospora ohioensis и др. Сем. Canidae Фекалии Мет. Фюллеборна или Дарлинга

1 2 3 4 5

Изоспороз кошек Isospora felis, I. rivolta h gp. Сем. Felidae Фекалии Мет. Фюллеборна или Дарлинга

Бабезиоз Babesia canis, Babesia sp. Сем. Canidae, Mustelidae Кровь Иссл. тонкого мазка крови, окрашенного по Романовскому-Гимза

Лямблиоз кошек и собак Giardia duodenalis Сем. Canidae, Felidae и Mustellidae Фекалии ИХ

Лейшмани-оз собак Leishmania infantum Сем. Canidae Сыворотка крови (антитела) ИХ

Отодек-тоз Otodectes cynotis Сем. Canidae, Felidae и Mustellidae Поверхностный соскоб кожи из ушных раковин Мет. Приселковой

Саркоптоз собак Sarcoptes canis Сем. Canidae Глубокий соскоб кожи Мет. Приселковой

Нотоэдроз кошек Notoedres cati Сем. Felidae Глубокий соскоб кожи Мет. Приселковой

Демодекоз собак Demodex canis Сем. Canidae Глубокий соскоб кожи Мет. Приселковой

Демодекоз кошек Demodex cati Сем. Felidae Глубокий соскоб кожи Мет. Приселковой

Опистор- хоз Opisthorchis felineus Сем. Felidae и Canidae Фекалии Гельминтоово-скопия по Котель-никову и Варениче-вУ

Клонор- хоз Clonorchis sinensis Сем. Felidae и Canidae Фекалии Гельминтоово-скопия по Котель-никову и Варениче-вУ

Аляриоз Alaria alata Сем. Canidae, Felidae и Mustellidae Фекалии Гельминтоово-скопия по Котель-никову и Варениче-вУ

Параго-нимоз Paragonimus westermani Сем. Canidae, Felidae и Mustellidae Фекалии Гельминтоово-скопия по Котельни-кову и Вареничеву

Дифил-лоботриоз Diphyllobothri-um latum Сем. Canidae, Felidae и Ursidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоово-скопия по Котель-никову и Вареничеву

Эхино-коккоз Echinococcus granulosus Сем. Canidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Альвеокок-коз Alveococcus multilocularis Сем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоскопия по Фюллеборну

1 2 3 4 5

Тениозы Taenia hydatigena Taenia pisiformis и др. Сем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Гидатиге-роз Hydatigera taeniaformis Сем. Felidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Дипили-диоз Dipylidium caninum Сем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Мезоцес-тоидоз Mesocestoides lineatus Сем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоскопия, гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Токсока-роз собак Toxocara canis Сем. Canidae Фекалии Гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Токсока-роз кошек Toxocara cati Сем. Felidae Фекалии Гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Токсаска-риоз Toxascaris leoninа Сем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Бейлиса-скариоз Baylisascaris transfuga Сем. Ursidae Фекалии Гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Анкило-стомати-дозы Uncinaria stenocephala, Ancylostoma caninum Сем. Canidae, Felidae и Ursidae Фекалии Гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Трихоце-фалез Trichocepha-lus vulpis Cем. Canidae и Felidae Фекалии Гельминтоовоскопия по Фюллеборну

Капилля-риоз ЖКТ Capillaria putorii Сем. Canidae, Felidae, Ursidae и Mustellidae Фекалии Гельминтоовоско-пия по мет. Фюлле-борна

Томин-ксоз Thominx aerophillus Сем. Canidae, Felidae, Ursidae и Mustellidae Фекалии Гельминтоовоско-пия по Фюллеборну

Дирофи-ляриоз Dirofilaria immitis, D. repens D. ursi Cем. Canidae и Felidae. Сем. Ursidae Сыворотка крови (антитела) ИХ

Кровь Иссл. тонкого мазка крови, окрашенного по Романовскому-Гимза

3. Посмертная диагностика гельминтозов методом полного гельминтологического вскрытия по К.И. Скрябину. Этот метод позволяет проводить как количественный, так и качественный учет всех гельминтов, которыми заражено животное (табл. 3). После снятия с трупа кожи тщательно осматривают подкожную клетчатку, затем вскрывают грудную и брюшную полости и извлекают все органы систем: пищеварительной, дыхательной, кровеносной, мочеполовой и др. Органы той или иной системы отделяют и исследуют порознь, при этом используют метод последовательных смывов: содержимое органов смешивают с водой и дают смеси отстояться, затем верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют свежую порцию воды, так

повторяют несколько раз. Таким образом, удаляется большая часть посторонних веществ, а в осадке остаются паразиты. Все трубчатые органы вскрывают по их длине, содержимое помещают в таз, ведро или банку (в зависимости от объема органа), со слизистых оболочек делают соскоб. Паренхиматозные органы (печень, легкие, поджелудочную железу, почки и др.) помещают в отдельную посуду и превращают в гомогенат (фарш), разрезая на мелкие кусочки ножом или ножницами. Детрит, соскобы, содержимое органов отмывают водой или физиологическим раствором, пользуясь методом последовательных смывов. Полученные материалы (осадки) изучают небольшими порциями сначала в черных, а затем в белых кюветах или в чашках Петри на черном и белом фоне. Крупных гельминтов выбирают визуально, а мелких - при помощи ручной лупы с 8-10-кратным увеличением. Собирают гельминтов только кисточками или препаровальными иглами, но не пинцетом и не пальцами.

3. Диагностика основных гельминтозов диких хищных млекопитающих при __патологоанатомическом вскрытии _

Гельминт Вид восприимчивого животного Регион распространения возбудителя Основные морфологические особенности возбудителя Исследуемый при вскрытии орган

1 2 3 4 5

Opisthorchis felineus Сем. БеШае и Са^ае Бассейны рек Оби, Иртыша, Северной Двины, Камы, Днепра, Дона, Волги Тело сероватого цвета продолговатой формы, суживающееся к переднему концу, длиной 8-13, шириной 1,2-2,5 мм Желчные ходы печени, желчный пузырь, протоки поджелудочной железы

Clonorchis sinensis Сем. БеШае и Са^ае Бассейны рек Уссури и Амура, северный Сахалин Тело сероватого цвета продолговатой формы, суживающееся к переднему концу, длиной 1020, шириной 2-4 мм Желчные ходы печени, протоки поджелудочной железы

Alaria alata Сем. Са^ае, БеШае и Мш1е1Шае Широко распространено Тело белого цвета, передняя часть плоская, задняя -цилиндрическая, длина 2,4-4,4, ширина 1,2-2,1 мм Тонкий кишечник

Paragoni- mus westermani Сем. Са^ае, БеШае и Мш1е1Шае Амурская область, Хабаровский и Приморский края, Япония, Китай, Корея Тело красно-коричневого цвета яйцевидной формы, длина 7,5-13, ширина 4-8 мм Преимущественно мелкие бронхи, иногда плевра, диафрагма, поджелудочная железа, кишечник, мезен-териальные лимфоузлы, предстательная железа, печень, кожа, головной мозг, сердце и др.

1 2 3 4 5

Diphylloboth rium latum Сем. Canidae, Felidae и Ursidae Бассейны рек Енисея, Лены, Индигирки, Оби, Амура; Карелия, Сахалин, Таймыр, Тюмень, Астрахань Цестода бело-желтого цвета, длиной 1,5-10 м, членики короткие, широкие Тонкий кишечник

Echinococcus granulosus Сем. Canidae Широко распространено (очагово) Мелкая цестода, состоящая из сколекса и 3-4 члеников, длина 2-6 мм Тонкий кишечник (между ворсинками слизистой оболочки)

Alveococcus multilocularis Сем. Canidae и Felidae Широко распространено (очагово) Мелкая цестода, состоящая из сколекса и 3-4 члеников, длина 2-5 мм Тонкий кишечник (между ворсинками слизистой оболочки)

Taenia hydatigena T. pisiformis Сем. Canidae и Felidae Широко распространено Цестода белого цвета длиной до 4-5 м, имеется хорошо развитый сколекс с хоботком и короной крючьев Тонкий кишечник

Hydatigera taeniaformis Сем. Felidae Повсеместно Цестода белого цвета длиной 15-60, шириной 5-6 мм Тонкий кишечник

Dipylidium caninum Сем. Canidae и Felidae Повсеместно Цестода белого или розоватого цвета длиной 40-70, шириной 3 -5 мм, зрелые членики по форме напоминают огуречное семя Тонкий кишечник

Mesocesto-ides lineatus Сем. Canidae и Felidae Широко распространено Цестода длиной до 2,5 м, сколекс невооруженный, зрелые членики по форме напоминают семена арбуза Тонкий кишечник

Toxocara canis Сем. Canidae Повсеместно Нематода серо-желтого цвета, на головном конце широкие кутику-лярные крылья; длина самки 1018, самца 5-10 см, имеют изогнутый хвостовой конец Тонкий кишечник

1 2 3 4 5

Toxocara Сем. Felidae Повсеместно Нематода серо- Тонкий кишеч-

cati желтого цвета, на головном конце широкие кутикулярные крылья; длина самки 4-10, самца 3-6 см, имеют изогнутый хвостовой конец ник

Toxascaris Сем. Повсеместно Нематода серо- Тонкий кишеч-

leonina Canidae и Felidae желтого цвета, на головном конце узкие ку- тикулярные крылья; длина самки 6-10, самца 4-7 см, имеют изогнутый хвостовой конец ник

Baylisasca-ris transfuga Сем. Ursidae Широко распространено Крупная нематода бело-розового цвета, длина самки 11-25, самца 9-10 см Тонкий кишечник

Uncinaria Сем. Повсеместно Нематоды свет- Тонкий кишеч-

stenocephala, Ancylostoma caninum Canidae, Felidae и Ursidae ло-желтого цвета длиной 15-20 мм ник

Trichoce- Cем. Широко рас- Нематоды бело- Слепая и обо-

phalus vulpis Canidae и Felidae пространено го цвета, передний конец тонкий, задний -утолщенный, длина 3,8-7,5 см. дочная кишка

Capillaria Сем. Cani- Широко рас- Нитевидные не- Тонкий кишеч-

putorii dae, Felidae, Ursidae и Mustellidae пространено матоды белого цвета, самки 9-13, самцы 5-7 мм ник

Thominx aerophillus Сем. Canidae, Felidae, Ursidae и Mustellidae Широко распространено Нитевидные нематоды белого цвета с утонченным передним концом, самки 18-20, самцы 15-18 мм Бронхи, трахея

Dirofilaria Cем. Широко рас- Тонкие немато- Сердце

immitis Canidae и Felidae пространено ды белого цвета, самки 25-30 см, самцы 12-18 см

Dirofilaria Cем. Широко рас- Тонкие немато- Подкожная

repens Canidae и пространено ды белого цвета, клетчатка, под

Felidae самки 10-17 см, самцы 5-7 см конъюнктивой глаза

1 2 3 4 5

Dirofllaria Сем. Широко рас- Тонкие немато- Подкожная

ursi Ursidae пространено ды белого цвета, клетчатка, мыш-

длиной 10-20 см цы

Dioctophym Сем. Дальний Вос- Нематода крас- Лоханка почки,

а renale Canidae, ток, Карелия, ного цвета с ци- мочеточники,

Felidae и Сибирь За- линдрическим мочевой пузырь,

Ursidae кавказье, телом, самки 20- брюшная по-

Средняя 100, самцы 14- лость, могут

Азия, Казах- 40 см встречаться в

стан печени, крове-

носных сосудах

и сердце