CC BY
85. Гюсан А. О. Трудности диагностики туберкулезного среднего отита. /А. О. Гюсан. // Современные наукоемкие технологии. 2007. - №11. - С. 125.
6. Гюсан С. А. Особенности диагностики туберкулеза гортани. / С. А. Гюсан, А. О. Гюсан. Актуальные вопросы клинической оториноларингологии: Мат. респ. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию кафедры ОРЛ Дагестанской ГМА. Махачкала, - 2007. - С. 78-79.
7. Дягилев В. В. Наблюдение туберкулеза гортани. / В. В. Дягилев, В. Н. Степанов, С. С. Малашенок. Тр. Всерос. конф. с международным участием и семинара «Актуальные вопросы фониатрии»: Проблемы реабилитации в оториноларингологии, Самара, 2003. - С. 422-423.
8. Езерский Р. Ф. Туберкулезное поражение среднего уха с генерализацией процесса у новорожденного ребенка. /
Р. Ф. Езерский, И. Н. Белых, Е. Н. Копылов // Вестн. оторинолар., 1995. - №1. - С. 54-55.
9. Левашев Ю. Н. Внелегочный туберкулез в России: официальная статистика и реальность. /Ю. Н. Левашев,
А. Ю. Мушкин, А. Н. Гришко // Пробл. туб. - 2006. - №11. - С. 3-6.
10. Чумаков Ф. И. Туберкулез гортани. /Ф. И. Чумаков. // Вестн. оторинолар., 2001. - №4. - С. 63-65.
11. Чумаков Ф. И. Об особенностях туберкулеза гортани. /Ф. И. Чумаков, М. А. Лукьянова. //Там же. 1999. -№6. - С. 40-42.
12. Gertler R. Tuberculous laryngitis - a one year harvest. /R. Gertler,L. Ramages. // J. Laryng. Otol.,1985, 99, №11, 1119-1125.
13. Glover S. C. Clinical record. Tuberculos otitis media - A reminder. /S. C. Glover, R. M. D. Tranter, J. A. Innes. // J. Laryngol. Otol., 1981, 96, №12, 1201-1204.
14. Godbersen G. S. Reversible Innenohrschwerhorigkeit bei Mittelohrtu berkulose. /G. S. Godbersen, H. Rudert. //
H. N. O., 1984, 32, №10, 426-428.
15. Kley W. Zur Diagnose der Mittelohr-tuberkulose. /W. Kley. // H. N. O., 1984, 32, №10, 424-425.
16. Laryngeal tuberculosis: Review of twenty cases. /M. J. Levenson, M. Ingerman, C Grimes et al. // Laryngo scope, 1984, 94, №8, 1094-1097.
17. Travis L. W. Tuberculosis of the Larynx. /L. W. Travis, R. L. Hybels, M. N. Newman. // Laryngo scope (St. Louis), 1976, 86, №4, 549-558.
18. Tuberculosis Otitis Media. / F. E. Lucente, G. W. Tobias, S. C. Parisier et al. // «La ryngoscope» (St. Louis), 1978, 88, №7 р. 1, 1107-1116.
19. Yaniv E. Tuberculosis otitis media: A clinical record. /E. Yaniv. // Laryngoscope, 1987, 97, №11, 1303-1306.
УДК: 616. 22-006. 52: 615. 37
МЕТОД ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ В ИНДИВИДУАЛЬНОМ ПОДБОРЕ ИММУНОКОРРЕКТОРОВ У БОЛЬНЫХ ПАПИЛЛОМАТОЗОМ ГОРТАНИ
*Х. Ш. Давудов, *И. И. Матёла, **А. А. Темнов,
*И. И.Нажмудинов, *Ю. Б. Сулейманов, *Б. Х. Давудова
*ФГУ НКЦ оториноларингологии Росздрава, г. Москва (Директор - проф. Н. А. Дайхес)
**НИИ трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ, г. Москва (Директор - член-кор. РАМН С. В. Гатье)
Среди иммунологических факторов, принимающих участие в защите организма от опухолей, основная роль принадлежит клеточной форме защиты. Наиболее активными клетками в разрушении опухоли являются CD8 (Т-супрессоры) и CD4 (Т-хелперы) Т-клетки. Если CD8 Т-клетки выполняют прямую киллерную функцию, то CD4 Т-клетки способствуют её успешной реализации. Помощь со стороны Т-хелперов осуществляется через секретируемые цито-кины. Среди них наибольшую роль играет интерферон-(р который стимулирует макрофаги и увеличивает активность НК клеток (естественных киллеров CD16) [5, 8, 13].
Состояние иммунодепрессии хорошо известно при онкологических заболеваниях. С этим синдромом связывают механизм опухолевой прогрессии [1].
Однако иммунодепресия выявляется не только при злокачественных опухолях, но и при доброкачественных - таких как папиллома. Многими исследователями при папилломатозе гортани (ПГ) выявлены нарушения в Т-звене иммунитета, изучены микробиологические и иммунологические аспекты системы антиинфекционной защиты [5, 10, 12].
Научные статьи
При папилломатозе угнетение иммунитета обусловлено вирусной инвазией - вирус папилломы человека (ВПЧ). [4, 7, 9].
Нормализация иммунных показателей в этих случаях служит одним из важных факторов в профилактике рецидивов и лечении папиллом гортани.
Основой терапии при папилломатозе гортани остаётся хирургическое воздействие. С целью улучшения результатов хирургического лечения широкое применение получили иммуно-тропные препараты.
Однако сложность и множественность механизмов действия иммунокорректоров (ИК) до сих пор не позволяют достаточно глубоко и полно охарактеризовать их роль в развитии иммунных реакций и выработать достаточно обоснованные рекомендации их применения. Наиболее выраженный эффект (30-50%) при лечении респираторного папилломатоза был получен при использовании человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2 и его рекомбинантных форм, оказывающих противовирусное, антипролиферативное и иммуномодулирующее действие. Стоимость препарата и побочные эффекты (увеличение уровня ферментов печени в крови, нарушение функции почек, гриппоподобный синдром, феномен «рикошета» при отмене препарата, снижение выработки эндогенного интерферона, выработка антител к интерферону) препятствуют его широкому использованию, особенно у детей, т. к. положительный результат лечения достигается при введении больших доз препарата, длительными курсами и не всегда приводит к клиническому выздоровлению больных.
В связи с этим большое значение приобретает применение индивидуального подхода при проведении иммуномодулирующей терапии.
Учитывая это, мы используем методику оценки эффекта лекарственных препаратов на иммунокомпетентные клетки больных папилломатозом гортани, основанную на оценке степени изменения реактивности нейтрофилов периферической крови больного в тесте на хемилю-минесценцию [8]
Материалы и методы
Характеристика больных. В исследование включена группа, состоящая из 56 больных, в возрасте от 18 до 57 лет, из них 42 лица мужского и 14 - женского пола, поступивших на плановое лечение по поводу рецидива папилломатоза гортани.
Всем больным произведено удаление папилломы гортани: у 46 при прямой микроларингоскопии под наркозом, у 13 - при непрямой ларингоскопии под местной апликационной анестезией 2% раствором дикаина.
Перед назначением терапии проводили анализ по оценке индивидуальной чувствительности к препаратам методом хемолюминесценции.
Иммунологическое исследование крови проводили до и после иммунотерапии. Комплекс лабораторных тестов включал стандартные унифицированные параметры (число лейкоцитов, лейкоцитарная формула), колличество Т- и В-лимфоцитов, содержание натуральных киллеров, фагоцитарную активность нейтрофилов. Функциональная активность клеточного звена иммунитета оценивалась по количеству Т-лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности рецептор к интерлейкину-2 и антигены HLA-DR.
Для получения лейкоцитарной суспензии 2 мл гепаринизированной крови (25 ЕД/мл) смешивали с 1 мл подогретого до 37° С 3% раствора желатина и инкубировали в термостате при 37° С в течение 30 мин. После оседания эритроцитов слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отбирали в пластиковые пробирки и отмывали 10-кратным объемом фосфатно-солевого буфера (рН=7,4). Затем лейкоциты центрифугированием в течение 10 мин. при 1000 об/мин. ресуспендировали в растворе Хенкса. После подсчета числа лейкоцитов концентрацию клеток доводили до 106 кл/мл. Суспензию клеток инкубировали с иммунологическими препаратами в течение 60 мин. при 37° С. В контрольные кюветы вносили раствор Хэнкса.
Хемилюминесцентный анализ. После инкубации производили запись кривых хемилю-минесцентной реакции (ХЛР) с использованием хемилюминометра «Хелюм-111/01» в комплексе с компьютером 1ВМ-РС при температуре счетной камеры 37° С. В качестве усилителя свечения использовали люминол (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион) в концентрации
10-4М, а в качестве активатора образования активных форм кислорода (АФК) РМА (форбол-12-миристат-13-ацетат) в концентрации 10-6М [2].
В работе вычисляли суммарную продукцию активных форм кислорода (АФК), как площадь под кривой ХЛ (рис. 1). Расчитывали индекс стимуляции препарата (ИС):
ИС =S ^ ,
препарата препарат контроль7
где S - интенсивность ХЛ нейтрофилов в пробе с препаратом,
препарат
S - интенсивность ХЛ в контрольной пробе.
контроль
Препаратом выбора считали иммунокорректор, индекс стимуляции которого был больше 1,1.
Рис. 1.
Инкубация с иммунологическими препаратами
В работе использовали следующие препараты:
- полиоксидоний (^оксидированное производное полиэтиленпиперозина с высоким молекулярным весом);
- имунофан (синтетический гексапептид, представляет собой 32-36 аминокислотные остатки тимопоэтина);
- циклоферон (низкомолекулярный индуктор интерферона - ^метилглюкаминовая соль карбоксиметилакридона);
- реаферон (5-2 интерферон).
Иммуномодуляторы назначались по стандартным схемам, рекомендованным в аннотациях к препаратам.
Рис. 2.
Научные статьи
Результаты. При анализе иммунного статуса пациентов с папилломой гортани до операции были выявлены следующие закономерности (табл. 1): - снижение уровня Т-лимфоцитов, преимущественно за счет Т-хелперов (СD4); - повышение функциональной активности Т-клеточного звена иммунной системы; - сдвиг формулы влево; - снижение фагоцитарной активности нейтрофилов.
Таблица 1
Динамика иммунологических показателей до лечения у больных папилломой гортани (п=56)
Иммунологические показатели До лечения (М±ш) Здоровые доноры (М±ш)
Т-лимфоциты ^3,%) 56,2±2,4 65,9>9,0
Т-хелперы ^4,%) 32,5±1,8 45,0>9,0
Т-супрессоры ^8,%) 20,4±1,3 23,0>4,0
В-лимфоциты (CD20,%) 8,1±0,7 10,0>2,0
Ж-клетки ^16,%) 15,4±1,6 13,0>6,0
HLA-DR (%) 16,9±1,7 10,0±5,0
CD25 (%) 3,8±0,7 4,0±2,0
CD71 (%) 5,7±1,1 2,0±2,0
Лейкоциты (ед) 6822,2±321,7 4000-9000
Лимфоциты 25,6±1,7 25-40
Нейтрофилы (с/я) 55,7±1,7 47-72
Нейтрофилы (п/я) 10,7±0,9 1-6
Моноциты 4,6±0,4 1-5
Эозинофилы 2,6±0,3 1-5
Фагоцитарный индекс 56,2±2,9 75,0±5,0
Фагоцитарное число 3,4±0,1 6,0±2,0
В последствие все пациенты были разделены на две группы в зависимости от результатов индивидуального подбора ИК: 1-ая группа - пациенты, получавшие ИК, который не являлся препаратом выбора в тесте индивидуального подбора (п=27); 2-ая группа - пациенты, получавшие ИК, который в тесте был определен, как препарат выбора (п=29).
Был проведен анализ иммунологического статуса обеих групп, результаты которого представлены в таблице 2.
Как видно из представленных результатов показатели в группе 1 и 2 достоверно не различались между собой до лечения. В течение 14 дней в группе 1 наблюдается повышение уровня Т-хелперов. Снизился уровень СД8- и СД20 - лимфоцитов. За это же время в группе 2 отмечается достоверное увеличение уровня Т-лимфоцитов, преимущественно за счет Т-хелперов. Также отмечается достоверное повышение фагоцитарной активности нейтрофилов.
Две недели, особенно в сочетании с проводимыми операциями является недостаточным сроком для восстановления иммунологического дисбаланса, однако стоит отметить, что по сравнению с первой группой, в группе 2 наблюдается достоверно более высокий уровень СД3, СД4 и СД8-лимфоцитов. Происходит нормализация фагоцитарной активности.
В литературе имеются данные, свидетельствующие о том, что функциональная активность нейтрофилов, выделяющих активную форму кислорода (АФК), напрямую зависит от количества СД4-лимфоцитов. Добавление anti-CD4-сыворотки в лейкоцитарную смесь приводит к резкому снижению уровня ХЛ (продукции АФК) нейтрофилами [11]. По-видимому, этим можно объяснить, что ИК, подобранный методом ХЛ, оказывает максимальный стимулирующий эффект именно на субпопуляцию Т-хелперов (табл. 2).
Таким образом, этот тест позволяет выбрать ИМ с оптимальным влиянием на клетки иммунной системы и исключить применение препаратов, вызывающих индивидуальные реакции подавления функциональной активности нейтрофилов.
Таблица 2
Динамика иммунологических показателей в группе 1 и 2, при лечении ИК, в течение 14 дней
Иммунологические Группа 1 до лечения (M±m) Группа 2 до лечения (M±m) Группа 1 после лечения (M±m) Группа 2 после лечения (M±m)
показатели
Т-лимфоциты ^3,%) 61,7±3,1 57,9±3,4 65,2±2,1 69,1±2,4*+
Т-хелперы ^4,%) 33,4±1,6 31,2±2,9 38,6±2,6* 46,8±2,5*+
Т-супрессоры ^8,%) 20,7±1,5 16,6±2,1 17,6±1,2* 22,75±2,1*+
В-лимфоциты (CD20,%) 8,2±1,4 7,3±1,2 6,4±0,9* 8,4±1,2
КК-клетки ^16,%) 12,7±2,6 17,7±2,8 10,5±1,2 16,3±2,7
^А^ (%) 16,7±2,6 17,7±2,2 13,3±1,5 16,4±1,6
CD25 (%) 4,9±1,2 3,8±0,9 4,2±1,1 5,3±1,5
CD71 (%) 5,2±1,2 8,5±2,0 6,5±1,7 9,9±2,8
Лейкоциты (ед) 6633,3±334,2 7038,1±580,4 7728,7±626,2 7854,5±967,7
Лимфоциты 24,4±2,6 27,2±2,2 24,2±1,9 24,0±2,0
Нейтрофилы (с/я) 55,5±2,3 56,0±2,8 56,3±1,9 62,3±2,6
Нейтрофилы (и/я) 13,2±1,5 8,0±0,7 11,0±1,4 10,0±1,3
Моноциты 4,0±0,6 5,3±0,7 4,6±0,8 2,6±0,5
Эозинофилы 3,0±0,6 2,4±0,5 3,8±0,6 2,1±0,6
Фагоцитарный индекс 56,4±2,7 52,3±2,6 51,1±3,6 61,7±4,3*+
Фагоцитарное число (ед) 3,4±0,4 3,3±0,3 3,2±0,2 3,7±0,3
Примечание: * - Достоверное различие по сравнению с исходным уровнем (р<0,05); + - Достоверное различие по сравнению с группой 1 (р<0,05)
ЛИТЕРАТУРА
1. Авдеев Г. И. Иммунотерапия опухолей / Г. И. Авдеев. М. М. Вядро, З. Д. Кадагидзе. //Итоги науки и техники. Сер. Онкология. Т. 14. - М., 1985. - 2l5 с.
2. Владимиров Ю. А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев // Итоги науки и техники: Биофизика, ВИНИТИ, 1989, Т. 24, С. 52-99.
3. Галактионов В. Г. Иммунология / В. Г. Галактионов. - Издательство Московского университета, 1998. -С. 350-353.
4. Герайн В. Молекулярно-биологические аспекты юношеского респираторного папилломатоза и его комбинированное лечение / В. Герайн, Д. Г. Черешкин // Вестн. оторинолар. - 1996. - №4. - С. 3-8.
5. Исследование интерферонового статуса и применение препаратов интерферона и его индукторов у больных
папилломатозом гортани / Г. Ф. Иванченко, К. Н. Прозоровская, С. С. Григорян и др. Вопросы практической
фониатрии: Мат. междунар. симпоз., 27-29 мая 1997 г. М. - 1997. - C. 83-87.
6. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология / Л. Йегер. - М., 1986. - Т. 2. - С. 425-458.
7. Папілломатоз гортані як об-лігатний предрак (імунологічні та вірусологічні аспекти) / В. Антонів, I. Матьола, Т. Антонів. Українські медичні вісті. VIII конгрес світової федерації українських лікарських товариств 16-20 серпня 2000 року, Львів, Україна, С. 100
8. Пат. 2320991 Российская Федерация. Способ индивидуального подбора иммунокоррегирующих препаратов у больных папилломатозом гортани / И. И. Матёла, А. А. Темнов, Т. В. Антонив, В. В. Темнова.; заявитель и патентообладатель И. И. Матёла, А. А. Темнов. - №2006114325; заявл. 27.04.06; опубл. 27.03.08, Бюл. №9. - 7 с.
9. Показатели антиинфекционной резистентности у детей, больных респира-торным папилломатозом / З. М. Ашуров, К. И. Савицкая, Е. В. Русанова и др. // Вестн. оторинолар. 1996. - №4. - С. 28-31.
10. Современные достижения в лечении ювенильного папилломатоза гортани у детей / Т. И. Гаращенко, Т. П. Маркова, Ф. И. Ершов и др. // Новости оторинолар. и логопатол. 1997; 3; 62-63.
11. Хемилюминесцентный анализ закономерности формирования механизмов иммунного статуса у детей при развитии патологического процесса: системные заболевания и постинфекционно-аллергические состояния / Я. И. Пухова, Л. А. Соловьёва, Т. Н. Меньшикова и др. // Иммунология. - 1997. - №4. - С. 49-52.
12. Цветков Э. А. Структура иммунологического дефекта при папилломатозе у детей / Э. А. Цветков, И. В. Савенко // Вестн. оторинолар. 1996. - №4. - с. 9-11.
13. Caruso C., Modka M. A., Lw D., CHlan E. // Clrn. Immunol. Immunopat. - 1987 - Vol. 44, №1. - P. 160-166.
