Метаболические изменения в предстательной железе и иммунный статус крыс при доброкачественной гиперплазии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ПСИХОНЕЙРОИММУНОЛОГИЯ

© И.П. ХОДЧЕНКОВА, И.В. ЗАРУБИНА, П.Д. ШАБАНОВ; 2005

Кафедра фармакологии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

Резюме

Установлено, что при экспериментальной доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной длительным введением сульпирида (40 мг/кг), в ткани простаты крыс увеличивается содержание продуктов перекисного окисления липидов и снижается активность антиоксидантных систем. При этом у животных формируется супрессия иммунного ответа.

Ключевые слова

гиперплазия простаты; иммунитет; сульпирид; перекисное окисление липидов; антиоксидантные системы

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЕ И ИММУННЫЙ СТАТУС КРЫС ПРИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИИ

ВВЕДЕНИЕ

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГП) — распространенное урологическое заболевание пациентов пожилого и старческого возраста и наблюдается более чем у 40 % мужчин в возрасте 50 лет и в 90 % случаев у мужчин старше 80 лет [1].

К факторам риска развития гиперплазии предстательной железы относятся возраст и сохранение нормальной секреции андрогенов. Среди патогенетических механизмов развития доброкачественной гиперплазии предстательной железы и формировании ее клинической картины важную роль играет увеличение количества и функциональной активности а^адреноблокаторов железы, шейки мочевого пузыря и простатического отдела мочеиспускательного канала, что обусловливает ирритативные симптомы простаты наряду с нестабильностью мочевого пузыря в результате ишемии дет-рузора [4].

Возникновение стойкого спазма гладкомышечных структур простаты, шейки мочевого пузыря и простатического отдела мочеиспускательного канала лежит в основе развития динамического компонента инфравезикальной обструкции при доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Следовательно, важнейшим патогенетическим звеном развития ДГП простаты является гипоксия паренхимы железы, которая способна активировать процессы перекисного окисления липидов и нарушать функции им-мунокомпетентных клеток, что влечет увеличение продуктов свободнорадикального окисления и развитие вторичного иммунодефицита.

Цель работы — изучение содержания продуктов перекисного окисления липидов, активности антиоксидантных систем в предстательной железе и иммунного статуса при экспериментальной доброкачественной гиперплазии простаты у крыс.

МЕТОДИКА

1082 Исследование проведено на крысах-самцах массой 200—220 г. Гиперплазию предстательной железы индуцировали внутрибрюшинным введением крысам сульпирида (эглонил, раствор для инъекций, Sanofi, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 30 дней [11]. Развитие ДГП железы контролировали гистологически. Ткани предстательной железы размером 1 х 1 см и толщиной 0,2 см фиксировали в растворе 10%-го нейтрального формалина, после чего проводили через автоматический универсальный аппарат для гистологической обработки и окраски тканей (АТ-4). Заливка осуществлялась в парафин, срезы делали на микротоме толщиной 5 мк. Окраску проводили ге-матотоксилин-эозином. Фотографировали под увеличением х100.

О процессах перекисного окисления липидов в предстательной железе судили по содержанию в предварительно замороженной в жидком азоте ткани продуктов липопероксидации гидроперекисей липидов, диеновых конъюгатов и малонового диальдегида [8]. О состоянии антиоксидантной системы — по содержанию восстановленного глута-тиона [5] и активности супероксиддисмутазы [2].

Исследование клеточного звена иммунитета включало определение реакции торможения миграции лимфоцитов (РТМЛ) с Кон-А и ФГА, характеризующее функциональное состояние субпопуляции Т-лимфоцитов [6]. Состояние механизмов неспецифической защиты организма оценивалось по уровню нейтрофильного фагоцитоза по отношению к микробной тест-культуре после их совместной инкубации [3, 9]. Определяли показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ), фагоцитарный показатель (ФП) — процент фагоцитов из числа сосчитанных нейтрофилов, фагоцитарное число (ФЧ) — среднее число микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом. Степень активности кислороднезависимых микробицидных систем фагоцита оценивали с помощью лизосомально-ка-тионного теста (ЛКТ). Кислородзависимые анти-инфекционные системы фагоцитов определяли в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НТС-тест) [7].

Выборка для каждой группы животных составила не менее 12 крыс. Математическую обработку результатов исследования проводили на персональном компьютере Pentium III 1700 мГц с использованием стандартного пакета программ Statistica for Windows методами вариационной статистики (/-критерий Стьюдента) при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В норме предстательная железа крыс представлена комплексом отдельных железок и пучков гладких мышечных клеток (рис. i). Концевые отделы железок представлены узкими разветвленными трубочками, в которых различаются два рода клеток: крупные секретирующие клетки с пузыревидным ядром и мелкие — с узким пояском цитоплазмы. Строма желез состоит из пучков гладких мышечных клеток, образующих вместе с прослойками соединительной ткани из коллагеновых и эластических волокон толстые широкие септы, которые отделяют друг от друга простатические железки.

Внутрибрюшинное введение крысам сульпирида в дозе 40 мг/кг в течение 30 дней вызывало доброкачественную гиперплазию предстательной железы. Известно, что длительное применение сульпирида сопровождается увеличением содержания пролактина, что вызывает рост клеток предстательной железы [12]. При этом у животных развивается гиперплазия латеральных долей предстательной железы, которые в первую очередь подвержены данной патологии.

Гистологически ткань гиперплазированной предстательной железы представлена многочисленными железками округлой, овальной или неправильной формы, разделенными узкими прослойками стромы (рис. 2). Железки выстланы одним слоем высокого призматического эпителия с нечеткими границами, обильной мелкозернистой цитоплазмой и округлыми базально расположенными ядрами. В железках видна пролиферация эпителия с образованием сосочков и криброзных (кружевных) структур. В пространстве железок встречается много гомогенного округлой формы ацидофильного содержимого, так называемые амилоидные тельца. Строма между аденоматозными узлами представлена гладкомышечными и соединительнотканными волокнами.

Развитие доброкачественной гиперплазии у крыс сопровождалось достоверным увеличением в тканях простаты продуктов перекисного окисления липидов. Содержание первичных продуктов липопероксидации — гидроперекисей достоверно увеличивалось на 69 %, диеновых конъюгатов — на 46 %. Содержание вторичных продуктов — малонового диальдегида возросло на 32 %. Одновременно в тканях железы снижалось содержание восстановленного глутатиона, способного неферментативно инактивировать перекись водорода и активные формы кислорода. Уменьшение в содер-

■ -~:|Е

,

4

WLéOT*- у Л

т * 4 -1 * V-'

■ к. * ? * ' ■ to

\ I f -

’ ■- /■- ™

V 1 - » + Г jH т. -L • - л, *' ^

’.ЯШ

b

■%:

y

I r,

■Ä-л

., ^ V

f :•*

1 *»■*

1 V,/,

Рис. 1

Структура предстательной железы интактной крысы, увеличение х100

жании глутатиона составило 55 % от контрольных величин (р < 0,05). Изучение активности суперок-сиддисмутазы — наиболее активного антиоксидан-тного фермента, дисмутирующего активные формы кислорода до перекиси водорода, выявило достоверное ее снижение на 33 %. Более стабильной оказалась каталазная активность, которая при ДГП даже возрастала на 44 %, что можно рассматривать как адаптивные сдвиги, не успевшие перейти в стадию угнетения (р < 0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что при доброкачественной гиперплазии в

Рис. 2

Структура гиперплазированной предстательной железы крыс, увеличение х100

тканях простаты нарушается баланс между образованием и потреблением продуктов ПОЛ и преобладает генерация липидных метаболитов над скоростью их потребления. Причем, увеличение содержания продуктов ПОЛ сопровождается в целом уменьшением активности антиок-сидантных систем.

Таблица 1

Изменение показателей перекисного окисления липидов в предстательной железе крыс при доброкачественной гиперплазии (М ± т; п = 12)

Показатели Группы животных Предстательная железа

Г идроперекиси , Интактные 0,072 ± 0,001

ДГП 0,122 ± 0,003

, / Интактные 20,00 ± 0,25

ДГП 29,24 ± 0,18

, / Интактные 31,59 ± 2,12

ДГП 41,69 ± 2,11

, / Интактные 0,93 ± 0,11

ДГП 0,62 ± 0,05

, / Интактные 0,024 ± 0,002

ДГП 0,032 ± 0,002

, / Интактные 32,41 ± 0,32

ДГП 17,80 ± 0,12

Примечание: а — достоверные различия (р < 0,05) по сравнению с интактными животными.

Таблица 2

Изменение иммунологических показателей в лимфоцитах крыс при доброкачественной гиперплазии предстательной 1084 железы (М ± т; п = 12)

Показатели Интактные ДТП

- , % 84 ± 1,5 57 ± 1,2

, % 54,6 ± 2,4 37,4 ± 1,3

, % 94,5 ± 0,3 75,3 ± 1,1

, % 13,4 ± 0,5 19,8 ± 0,4

ПЗФ 22,5 ± 1,4 32,3 ± 0,7

, уел. ед. 1,44 ± 0,02 1,12 ± 0,01

, уел.ед. 0,31 ± 0,02 0,54 ± 0,02

, уел.ед. 0,61 ± 0,02 0,78 ± 0,01

Примечание: РТМЛ — реакция торможения миграции лимфоцитов; Кон-А — конкавалин А; ФГА — фитогемагглютинин; ПЗФ — показатель завершенности фагоцитоза; ФП — фагоцитарный показатель;

ФЧ — фагоцитарное число; ЛКТ — лизосомально-катионный тест; НСТ — тест восстановления нитросинего тетразолия; а — достоверные различия (р < 0,05) по сравнению с интактными животными.

Моделируемая у крыс доброкачественная гиперплазия предстательной железы сопровождалась повышенной фагоцитарной активностью лимфоцитов, угнетением Т-лимфоцитарной функции и активности кислороднезависимых микро-бицидных систем фагоцитов (табл. 2).

Лимфокинпродуцирующая функции лимфоцитов в тесте с Кон-А достоверно снижалась при ДГП на 32 %, а в тесте с ФГА — на 32 %. Фагоцитарная активность лимфоцитов при ДГП возрастала на фоне снижения активности кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов на 28 % (р < 0,05). Увеличивались показатели кислородзависимых антиинфекционных систем лимфоцитов, характеризующих степень активации гексозомонофосфатного шунта и связанное с этим образование свободных радикалов. Так, при ДГП показатели спонтанного НСТ-теста возрастали на 74 %, а индуцированного НСТ-теста — на 135% (р< 0,05).

Таким образом, внутрибрюшинное введение крысам сульпирида в дозе 40 мг/кг массы тела вызывает доброкачественную гиперплазию предстательной железы, что подтверждается гистологически характерными аденоматозными изменениями ткани железы. При этом, в ткани предстательной железы активируются свободнорадикальные процессы, приводящие к увеличению продуктов перекисного окисления липидов и угнетению активности антиоксидантных систем. На фоне развития доброкачественной гиперплазии предстательной железы у крыс формируется суп-

рессия иммунного ответа. Полученные данные свидетельствуют о необходимости иммунокорре-гирующей и антиоксидантной терапии при фармакокоррекции доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гориловский Л.М. Современные представления о диагностике и лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Русс. мед. журн. — 1997. — Т. 5, № 23. — С. 1509-1513.

2. Дубинина Е.Е., Сальникова Л.А., Ефимова Л.Ф. Активность и изоферментный спектр су-пероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови человека. — Лаб. дело. —1983. — № 10. — С. 30-33.

3. Иммунологические методы исследований: пер. с англ. / Под ред. И. Лефковитса, Б. -Перника. — М.: Мир, 1988. — 530 с.

4. Лопаткин Н.А. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы. — М., 1999. — 222 с.

5. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен). / Ред. М.И. Прохорова. — Л.: ЛГУ, 1982.

6. Морозов В.Т., Хавинсон В.Х. Методические рекомендации по проведению иммунологических исследований (методы оценки Ти В-систем иммунитета). — Л.: ВМедА, 1980. — 44 с.

7. Пинегин Б.В. Методы иммунодиагностики при иммунологических обследованиях насе-

ления // Гематология и трансфузия. — 1992. — Т. 37, № 9-10. — С. 36-40.

8. Современные методы в биохимии. / Ред. В.Н. Ореховича. — М., 1977.

9. Федосеева В.Н., Порядин Г.В., Ковальчук Л.В. и соавт. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. — М., 1993. — 319 с.

10. Barry M.J., Beckley S., Boyle P. et al. Importance of understanding the epidemiology and natural history of BPH. In: Proceedings of the International Consultation on BPH. — WHO, 1997. — P. 25.

11. Van Coppenole F., Le Bourhis X., Carpen-tier F. et al. Pharmacological effects of the lipidosterolic extract of Serenoa repens (Permixon) on rat prostate hyperplasia induced by hyperprolactinemia: comparison with finasteride // Prostate. — 2000. —Vol. 43 [1]. — P. 49-58.

12. Van Coppenole F., Slomianny C., Carpen-tier F et al. Effect of hyperprolactinemia on rat prostate growth: evidence of androgeno-

dependence // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. — 2001. — Vol. 280 [1]. — E. 120-129.

Ходченкова И.П., Зарубина И.В., Шабанов П.Д. Метаболические изменения в предстательной железе и иммунный статус крыс при доброкачественной гиперплазии // Психофармакол. биол. наркол —2005. — Т. 5, № 4. — С. 1081-1085. Военно-медицинская академия им С.М. Кирова, Санкт-Петербург, 194044, Лебедева ул., 6

Khodchenkova I.P., Zarubina I.V., Shabanov P.D. Metabolic changes in prostate and immune status in innocent hyperplasia in rats // Psychopharmacol. Biol. Narcol. — 2005. — Vol. 5, N 4. — P. 1081-1085. Military Medical Academy, Saint-Petersburg 194044, Lebedeva str., 6

Summary: In experimental innocent hyperplasia of prostate produced by chronic administration of sulpiride (40 mg/kg), the contents of lipid peroxidation grew higher but the activity of antioxidant systems was reduced in the gland tissue. At the same time, the suppression of immune response was registered in rats.

Key words: innocent hyperplasia of prostate; immunity; sulpiride; lipid peroxidation; antioxidant systems activity