CC BY
12© Коллектив авторов, 2013
Маркеры дисфункции эндотелия (VCAM-1, vWF) при хроническом гепатите С
Т.В. АНТОНОВА, М.А. РОМАНОВА, Ю.В. ЛЫМАРЬ
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Endothelial dysfunction markers (VCAM-1, vWF) in chronic hepatitis C
T.V. ANTONOVA, M.A. ROMANOVA, YU.V. LYMAR Acad. I.P. Pavlov Saint-Petersburg State Medical University
Резюме
Цель исследования. Оценка содержания в крови эндотелиальных факторов (sVCAM-1, vWF:Ag) в зависимости от выраженности биохимических, гистологических и вирусологических характеристик хронического гепатита С (ХГС). Материалы и методы. В исследование включили 69 больных ХГС с малосимптомным течением заболевания. Средний возраст обследованных составил 33,6±7,8 года. Лабораторное обследование больных включало стандартный при хронических гепатитах набор клинико-биохимических показателей. Стадию фиброза печени (ФП), степень гистологической активности определяли по шкале METAVIR на основании гистологического исследования биоптата печени, расчетным тестом ФиброТест («BioPredictive», Франция) и методом непрямой ультразвуковой эластометрии печени (Fibroscan). Содержание растворимой молекулы адгезии сосудистых клеток 1-го типа (sVCAM-1) и антигена фактора Виллебранда (vWF:Ag) в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа.
Результаты. У 33,3% больных ХГС обнаружены повышенные уровни sVCAM-1 и/или vWF:Ag. Достоверно большее повышение содержания в крови sVCAM-1 выявлено у больных с цитолитическим синдромом по сравнению с таковым у пациентов с нормальной активностью аланинаминотрансферазы. Особенно высокие уровни sVCAM-1 зарегистрированы у больных ХГС с тяжелым ФП (F3—F4) — более чем в 2 раза выше, чем у пациентов с начальными стадиями ФП (F0— F2) — 1966,98 (1299,79; 3451,73) и 975,98 (888,94; 1226,13) нг/мл (р<0,001). Выявлено более высокое содержание в крови vWF:Ag при тяжелом ФП F3—F4 по сравнению с ранними стадиями (F0—F2) — 1,61 (1,29; 1,81) и 1,31(1,15; 1,45) ед/мл (р<0,05).
Заключение. Выявленное увеличение содержания sVCAM-1 и vWF:Ag в крови у больных ХГС, ассоциированные с биохимической активностью гепатита и в большей степени с выраженностью ФП, позволяет судить об участии дисфункции эндотелия в патогенезе хронической HCV-инфекции.
Ключевые слова: хронический гепатит С, дисфункция эндотелия, молекула адгезии сосудистых клеток VCAM-1, фактор Виллебранда.
Aim. To estimate the blood levels of endothelial factors (soluble vascular adhesion molecule 1 (sVCAM-1) and von Willebrand factor (vWF:Ag)) in relation to the magnitude of the biochemical, histological, and virological characteristics of chronic hepatitis C (CHC).
Subjects and methods. The investigation enrolled 69 patients with asymptomatic CHC. The mean age of the examined was 33.6±7.8 years. Laboratory examination included a standard set of clinical and biochemical parameters for chronic hepatitides. The stage of hepatic fibrosis (HF) and the degree of histological activity were determined by the METAVIR scale based on histological examination of liver biopsy specimens, by using the calculated FibroTest (BioPredictive, France) and indirect ultrasonic liver elastometric assay (Fibroscan). The serum content of sVCAM-1 and vWF:Ag were measured by ELISA.
Results. Elevated sVCAM-1 and/or vWF:Ag levels were found in 33.3% of the patients with CHC. There was a significantly higher increase in blood sVCAM-1 levels in patients with cytolytic syndrome than in those with normal alanine aminotransferase activity. Particularly high sVCAM-1 levels (more than twice higher) were recorded in the CHC patients with severe HF (F3—F4) than in those with milder HF (F0—F2) (1966.98 (1299.79, 3451.73) and 975.98 (888.94, 1226.13) ng/ml (p<0.001). There were higher blood levels of vWF:Ag in the patients with severe HF (F3—F4) than in those with early-stage HF (F0—F2) — 1.61 (1.29; 1.81) and 1.31 (1.15, 1.45) U/ml; p<0.05).
Conclusion. In the patients with HCH, the found elevated blood sVCAM-1 and vWF:Ag levels related to the biochemical activity of hepatitis and, to a greater extent, with the degree of HF can judge the implication of endothelial dysfunction in the pathogenesis of chronic HCV infection.
Key words: chronic hepatitis C, endothelial dysfunction, vascular adhesion molecule 1, von Willebrand factor.
АлАТ — аланинаминотрансфераза
ДЭ — дисфункция эндотелия
ИФА — иммуноферментный анализ
ФП — фиброз печени
ХГС — хронический гепатит С
ЦП — цирроз печени
HCV — вирус гепатита С
ICAM — молекулы межклеточной адгезии
sVCAM — растворимая форма молекулы адгезии сосудистых
клеток
VCAM — молекулы адгезии сосудистых клеток
vWF — фактор Виллебранда
vWF:Ag — антиген фактора Виллебранда
Эндотелий сосудов является органом внутренней секреции, вырабатывающим широкий спектр вазодилатиру-ющих, ангиопротективных, протромботических, проли-феративных факторов, дисбаланс между продукцией которых сопровождается нарушением функций эндотелия. По направленности функциональных нарушений выделяют несколько типовых форм дисфункции эндотелия (ДЭ): адгезионную, гемостатическую, ангиогенную и вазомоторную. Молекулы адгезии эндотелиальных клеток, к числу которых относят молекулы межклеточной адгезии (1САМ 1, 2 и 3-го типов) и молекулы адгезии сосудистых клеток 1-го типа (УСАМ-1), отвечают за адгезионную функцию эндотелия, нарушение которой имеет существенное значение в развитии воспалительного процесса.
В связи с тем что экспрессия молекулы УСАМ-1 в отличие от других молекул эндотелиальной адгезии наступает только при патологической активации эндотелия, ее растворимая форма §УСАМ-1 служит общепризнанным маркером адгезионной ДЭ [1, 2].
Фактор Виллебранда (у^Г) также относят к индикаторам ДЭ. Высвобождение у^Г из поврежденных, в частности при воспалении, участков сосудистой стенки обеспечивает адгезию тромбоцитов к субэндотелиальным тканям [3].
Хронический гепатит С (ХГС) представляет одну из наиболее актуальных проблем инфектологии и практики здравоохранения. Инфекция, вызванная вирусом гепатита С (ИСУ), имеет тенденцию к прогрессированию и развитию цирроза печени (ЦП). В изучении ее патогенеза важным аспектом остается уточнение механизмов развития фиброза печени (ФП), от темпов и выраженности которого зависит прогноз течения инфекции. При ХГС описаны признаки ДЭ, однако сведения малочисленны и фрагментарны. Так, обнаружено повышение функциональной активности уWF [4], увеличение экспрессии УСАМ-1 как в синусоидальных эндотелиальных, так и портальных дендритных клетках, что обеспечивает инфильтрацию печении цитотоксическими Т-лимфоцитами [5] и, следовательно, активность патологического процесса. Связь ДЭ с некровоспалительными процессами и ФП при этой инфекции нуждается в дальнейшем изучении.
Цель работы — оценка содержания в крови эндотелиальных факторов ^УСАМ-1, антиген фактора Виллебранда — vWF:Ag) в зависимости от выраженности биохимических, гистологических и вирусологических характеристик ХГС.
Материалы и методы
В исследование включили 69 больных (38 мужчины и 31 женщина) ХГС с малосимптомным течением заболевания. Средний возраст обследованных составил 33,6+7,8 года. Диагноз ХГС установлен на основании обнаружения в крови маркеров вируса: антитела к ИСУ-АЬ, РНК ИСУ, а также по совокупности клини-ко-анамнестических, эпидемиологических, биохимических, инструментальных данных согласно классификации хронических гепатитов (Лос-Анджелес, 1994). У 44,9% больных давность гепа-
Сведения об авторах:
Антонова Тамара Васильевна — д.м.н., проф. каф. инфекционных болезней и эпидемиологии с курсом ВИЧ-медицины Лымарь Юлия Владимировна — ст. лаборант каф. инфекционных болезней и эпидемиологии с курсом ВИЧ-медицины
тита С составила более 8 лет, у 30,4% — от 3 — 8 лет, у 14,5% — менее 3 лет, у 10,1% продолжительность заболевания установить не удалось. У 41,7% пациентов гепатит вызван вирусом генотипа 1b, у 58,3% — генотипа 3а. Критериями исключения при подборе пациентов были признаки субкомпенсированного и декомпен-сированного ЦП (по Child—Pugh, 1973), возраст старше 55 лет, хронические заболевания печени другой этиологии (в том числе вирусный гепатит В), употребление наркотических средств, хронический алкоголизм, тяжелая сопутствующая соматическая патология.
Лабораторное обследование больных включало стандартный при хронических гепатитах набор клинико-биохимических показателей.
Стадию ФП определяли по шкале METAVIR на основании гистологического исследования биоптата печени у 8 пациентов, расчетным тестом ФиброТест («BioPredictive», Франция) — у 15 пациентов и методом непрямой ультразвуковой эластометрии печени (Fibroscan) — у 19. Степень гистологической активности определяли по шкале METAVIR у 6 больных ХГС при исследовании биоптата печени и у 15 больных по данным АктиТест («BioPredictive», Франция)). У 60 больных методом полимераз-ной цепной реакции определен генотип НСУ.
Содержание sVCAM-1 в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-системы Human sVCAM-1 BMS232TEN («Bender MedSystems», Австрия). За норму принимали значения 400,6—1340,8 нг/мл. Определяли vWF:Ag в сыворотке крови методом ИФА с использованием тест-системы TECHOZYM vWF:Ag ELISA («Technoclone», Австрия). За нормальные принимали значения в пределах от 0,5 до 1,5 ед/мл.
Полученные данные обрабатывали в статистической программе SPSS 16.0 for Windows. Использовали непараметрические методы сравнения независимых выборок, а также критерий х2 для анализа качественных признаков. Изучали корреляционную зависимость между признаками. Значимыми считали различия при р<0,05.
Результаты и обсуждение
У 23 (33,3%) из 69 больных ХГС обнаружены повышенные уровни sVCAM-1 или vWF:Ag, при этом в 5 (7,2%) случаях повышены оба показателя. Связи маркеров ДЭ с продолжительностью инфицирования установить не удалось.
Достоверные изменения уровня sVCAM-1 выявлены у больных с разными биохимическими и вирусологическими характеристиками ХГС. Известно, что ХГС отличается скудными клиническими проявлениями, в связи с чем важную роль в оценке активности патологического процесса играют биохимические показатели, отражающие состояние функциональной способности печени. Как видно из табл. 1, содержание в крови sVCAM-1 у больных ХГС с повышенными активностью АлАТ (маркером цитолиза гепатоцитов) и уровнем тимоловой пробы (косвенно отражающей выраженность мезенхимально-воспалительной реакции) выше, чем у пациентов с нормальными показателями. Это подтвердили положительные корреляции между содержанием в крови sVCAM-1 и активностью АлАТ (^=0,386; _р<0,01), содержанием sVCAM-1 и уровнем тимоловой пробы (г=0,405; ^<0,01). Полученные данные об увеличении содержания в крови sVCAM-1 при повышенной биохимической активности ХГС согла-
Контактная информация:
Романова Мария Александровна — асс. каф. инфекционных болезней и эпидемиологии с курсом ВИЧ-медицины; тел./факс: +7(812)499-7058; e-mail: mromanova81@mail.ru
Т.В. Антонова и соавт.
Таблица 1. Содержание в крови больных ХГС sVCAM-1 и vWF:Ag в зависимости от биохимических и вирусологических характеристик
sVCAM-1, нг/мл
vWF:Ag, ед/мл
Показатель
Ме (25-й процентиль; 75-й процентиль)
Ме (25-й процентиль; 75-й процентиль)
АлАТ, ед/л: N
>2N
Тимоловая проба, ед.: N
>1,5N Генотип HCV: 1b 3а
926,50 (627,40; 1237,01) 1093,33 (931,81;1434,39)
986,35 (851,85; 1205,55) 1959,75 (1196,60; 3229,93)
939,45 (868,12; 1078,80) 1111,35 (893,45; 1333,20)
<0,05
<0,01
<0,05
1,27 (0,78; 1,45) 1,40 (1,23; 1,54)
1,35 (1,22; 1,47) 1,50 (1,10; 1,81)
1,29 (1,07; 1,42) 1,34 (1,22; 1,54)
>0,05
>0,05
>0,05
Примечание. АлАТ — аланинаминотрансфераза; N — норма.
Таблица 2. Содержание sVCAM-1, vWF:Ag в крови больных ХГС в зависимости от гистологических характеристик
sVCAM-1, нг/мл vWF:Ag, ед/мл
Показатель Ме (25-й процентиль; 75-й процентиль) Р Ме (25-й процентиль; 75-й процентиль) р
Степень гистологической активности
(шкала МЕТАУЖ):
А0—А1 965,60 (814,10; 1195,35) >0,05 1,31 (0,70; 1,44) >0,05
А2—А3 1069,23 (893,15; 1322,06) 1,30 (1,11; 1,51)
Стадия ФП (шкала МЕТАУЖ):
Б0—Р2 975,98 (888,94; 1226,13) <0,001 1,31 (1,15; 1,45) <0,05
Р3—Р4 1966,98 (1299,79; 3451,73) 1,61 (1,29; 1,81)
суются с результатами других исследований [6, 7]. Нами обнаружено, что содержание в крови sVCAM-1 у больных ХГС, инфицированных HCV генотипа 3а, более высокое, чем у больных, инфицированных HCV генотипа 1b, в то время как C. Bruno и соавт. [6] не выявили связи между уровнем sVCAM-1 и генотипом HCV.
Учитывая известные особенности ХГС, при которых длительное субклиническое течение заболевания может сопровождаться воспалительно-некротическими процессами в ткани печени с неуклонным прогрессированием ФП вплоть до развития ЦП, объективно судить об активности гепатита возможно при оценке морфологических характеристик.
Как видно из табл. 2, особенно высокие уровни sVCAM-1 зарегистрированы у больных ХГС с тяжелым ФП (F3—F4) — более чем в 2 раза выше, чем у пациентов с начальной стадией ФП (F0—F2). Если среди пациентов со стадией ФП F0—F2 уровень sVCAM-1 выше нормы был у 33,3%, то среди пациентов со стадией ФП F3—F4 — у 66,7% (р<0,001). Найдена положительная корреляция между концентрацией sVCAM-1 и стадией ФП (^=0,584; ^<0,001).
Концентрация в крови sVCAM-1 у больных с разной степенью гистологической активности гепатита достоверно не различалась. Полученные данные согласуются с ре-
зультатами других исследований, в которых также показано, что при ХГС содержание в сыворотке крови 8УСАМ-1 прежде всего отражает выраженность фибротического процесса, а не некровоспалительной активности; при этом некоторые авторы рекомендуют расценивать повышение уровня $УСАМ-1 как маркер тяжелого ФП [6, 8, 9].
Достоверных различий по уровню у^Г в зависимости от биохимической активности ХГС и генотипа вируса (см. табл. 1) не обнаружено, при этом найдена прямая корреляция слабой силы между концентрацией в крови и активностью АлАТ (г=0,246; р<0,05).
Выявлено более высокое содержание в крови (см. табл. 2) при тяжелом ФП Б3—Р4 по сравнению с ранними стадиями ХГС (Б0—Б2), получена положительная корреляция между концентрацией у^Г^ и стадией ФП (г=0,323; р<0,05). На повышение уровня у^Г при тяжелом ФП и ЦП указывают и другие авторы [10, 11].
Заключение
Выявленное увеличение содержания 8УСАМ-1 и vWF в крови у больных ХГС, ассоциированное с биохимической активностью гепатита и в большей степени с выраженностью ФП, позволяет судить об участии ДЭ в патогенезе хронической НСУ-инфекции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Петрищев Н.Н., Васина Л.В., Власов Т.Д. и др. Типовые формы дисфункции эндотелия. Клин лаб консилиум 2007; 18: 31—35.
2. Ley K, Huo Y. VCAM-1 is critical in atherosclerosis. J Clin Invest 2001; 107 (10): 1209—1210.
3. Blann A.D. Von Willebrand factor as a marker of injury to the endothelium in inflammatory vascular disease. J Reumatol 1993; 20: 1469—1471.
4. Булатова И.А., Щёкотов В.В., Щекотова А.П. Функциональное состояние эндотелия при хроническом гепатите С. РЖГГК 2009; 3: 42—46.
5. Volpes R., Van den Oord J.J., Desmet V.J. Immunohistochemical study of adhesion molecules in liver inflammation. Hepatology 1990; 12 (1): 59—65.
6. Bruno C.M., Sciacca C., Cilio D. et al. Circulating adhesion molecules in patients with virus-related chronic diseases of the liver. World J Gastroenterol 2005; 11 (29): 4566—4569.
7. Radu C, Dejica D., Grigorescu M. et al. Correlation of sICAM-1 and sVCAM-1 level with biochemical, histological and viral find-
ings in chronic hepatitis C after interferon-alpha + ribavirin therapy. Rom J Gastroenterol 2003; 12 (2): 91—95.
8. Lo Iacono O., García-Monzón C., Almasio P. et al. Soluble adhesion molecules correlate with liver inflammation and fibrosis in chronic hepatitis C treated with interferon-alpha. Aliment Pharmacol Ther 1998; 12 (11): 1091—1099.
9. Fukuda Y., Nakano I., Katano Y. et al. Serum levels of soluble intercellular adhesion molecule-1 and soluble vascular cell adhesion molecule-1 in asymptomatic carriers of hepatitis C virus. J Int Med Res 1998; 26 (6): 313—318.
10. Ferro D., Quintarelli C, Lattuada A. et al. High plasma levels of von Willebrand factor as a marker of endothelial perturbation in cirrhosis: relationship to endotoxemia. Hepatology 1996; 23: 1377—1383.
11. Albornoz L, Alvarez D, Otaso J.C. et al. Von Willebrand factor could be an index of endothelial dysfunction in patients with cirrhosis: relationship to degree of liver failure and nitric oxide levels. J Hepatol 1999; 30: 451—455.
Поступила 14.12.2012
