CC BY
25
УДК 612.017 : 616.643 - 002.2 Е.В. Маркелова, И.А. Юцковская
ЛОКАЛЬНЫЙ ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС У МУЖЧИН С ХРОНИЧЕСКИМ ХЛАМИДИЙНЫМ И УРЕАПЛАЗМЕННЫМ УРЕТРИТОМ
Владивостокский государственный медицинский университет, г. Владивосток
Локальному цитокиновому профилю у мужчин с уретритом посвящены единичные работы. В исследовании Я.А. Юцковской (2003) проведена оценка содержания ИЛ-la, ИЛ-8, ФНОа, ИЛ-10 и ИФНув смывах из уретры мужчин с уреаплазменной урогенитальной инфекцей, но не было сделано акцента на фокусную группу мужчин с уреаплазменным уретритом [9]. O.A. Сингур (2003) изучала состояние локального иммунитета и анализировала содержание только провоспалительных цитокинов: ИЛ-1а, ИЛ-8 и ФНОа и фагоцитарную активность ней-трофилов при хроническом гонорейном уретрите [5]. Оценка локального цитокинового профиля (с анализом комплекса оппозиционных цитокинов) при хроническом хламидийном и уреаплазменном уретрите в моно- и микст-вариантах у мужчин не проводилась. Это и определило цель нашего исследования.
Были установлены основные цитокины, способные влиять на процессы фагоцитоза (ИЛ-8, ФНОа ИЛ-10) и девиацию иммунного ответа (ИФНу и ИЛ-10), а также содержание ИЛ 12 (субъединиц р70 и р40), отражающих состояние макрофагального звена и способного влиять на соотношение Т-хелперов I и Т-хелперов II типа (Thl и Th2).
Материалы и методы
Проведено исследование отделяемого из уретры у 5 5 пациентов с хроническим уретритом. Из них у 15 чел. (27,4%) был установлен диагноз хронического хламидийного уретрита, у 20 чел. (36,3%) — хронического уреаплазменного уретрита и у 20 чел. верифицирован хронический уретрит хламидийно-уреаплазменной этиологии. Группу сравнения составили 20 практически здоровых мужчин-добровольцев. Забор отделяемого из уретры производили путем орошения ее стерильным физиологическим раствором хлорида натрия (в количестве 3 мл).
Определение уровня цитокинов ИЛ-8, ИЛ12 (р40, р70), ИЛ-10, ИФНу, ФНОа проводили с помощью специфических реактивов фирмы «R & D Diagnostics Inc.» (США) методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа согласно прилагаемой инструкции. Учет результатов осуществляли с помощью иммуноферментного анализатора «Multiscan» (Финляндия). Расчет количества цитокинов проводили путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество выражали в пг/мл.
Статистическая обработка материала проводилась методом описательной статистики и корреляционного анализа с использованием компьютерной программы «Biostat».
Резюме
Проведена оценка локального уровня цитокинов в отделяемом из уретры 55 мужчин с хроническим уретритом хламидийной, уреаплазменной этиологии и при их сочетании. Контролем служил материал, полученный от 20 здоровых добровольцев. Цитокины определяли методом ИФА с применением реактивов «R & D Diagnostics Inc.» (США). Выявлены различия локального цитокинового профиля в зависимости от этиологии уретрита. При уреаплазменном уретрите локальный цитокиновый профиль характеризуется увеличением абсолютных значений ИЛ-10, ИФНу, ФНОа, ИЛ-8 и ИЛ12р40 с относительным превалированием противовоспалительных медиаторов (ИЛ-10 и ИЛ12р40). При хламидийном, и особенно при микст-уретрите, установлена локальная гиперпродукция ФНОа и противоспалительных ИЛ-10, ИЛ12р40 с дефицитом ИЛ12р70 и ИФНу.
E.V. Markelova, LA. Yutskovskaya
LOCAL CYTOKINE STATUS BY MALES
WITH CHRONIC CHLAMYDIA AND UREAPLASMATIC URETHRITIS
Vladivostok State medical University, Vladivostok Summary
We estimated cytokine level of urethra secret by 55 males with urethritis of chlamydia, ureaplasma and combined aethiology. As a pattern the assay samples of 20 healthy volunteers were used. Cytokines were determined by IFA method with reagents produced by «R & D Diagnostics Jnc.» USA. The differences of local cytokine profile depended on urethritis aethiology. Local cytokine spectrum in samples from ureaplasmatic urethritis males is characterised by rising of IL-10, IFNy, TNFa, IK-8 and IL12p40 absolute index. Antiinflammatory mediators i.e. IL-10 and IL12p40 prevailed. Local hyperproduction of INF a and anti inflammatory IL-10, IL12p40 with IL12p70 and IFNy deficiency were detected in chlamydia and mixed urethritis patients.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований установлено, что локальный цитокиновый профиль у мужчин с хроническим уретритом существенно отличался от показателей мужчин контрольной группы (табл. 1). Нами зарегистрировано значительное увеличение (в 5-20
Таблица 1
Содержание цитокинов в отделяемом из уретры у пациентов с хроническим уретритом
Цитокины (М±т) пг/мл Больные с уретритом Здоровые мужчины, ' п=20
и.игеа1уисит, п=20 и.игеа1у1!сит С^гасЬота^, п=20 С 1гасЬота113, п=15
ФНОа 64,36 ±7,64** р,,<0,001 362,26 ±18,26*** р, ,<0,01 200,0 ±10,56*** Р,. ,<0,001 12,16 ±0,52
ИЛ-8 48,84 ±4,32** р, ,<0,01 116,46 ±10,25*** <0,05 67,73 ±6,69*** Р,.,<0,05 29,64 ±1,05
ИЛ12р70 7,94 ±1,21 р, ,<0,05 3,05 ±0,41*** р,. <0,01 6,11 ±0,14** Р,з>0,05 11,32 ±1,31
ИЛ12р40 106,42 ±10,64** р, .,<0,001 274,37 ±20,16*** р, 3>0,05 251,13 ±9,22*** р, ,<0,001 38,64 ±4.72
ИЛ-10 27,17 ±0,88*** р,.,<0,01 58,16 ±7,02*** р, ,<0,05 39,02 ±4.12*** Р„<0,05 1,0 ±0,04
ИФН-7 26,07 ±1,06** р, ,<0,001 6,24 ±1,16*** Р, ,>0,05 8,48 ±0,63*** Р„<0,01 18,22 ±1,24
Примечания. * — р<0,05; ** — р<0,01, *** — р<0,001, статистическая достоверность различий с контрольной группой; р, , — сравниваемые группы больных уретритом мужчин.
раз) ФНОа в смывах из уретры мужчин с хроническим уретритом. При анализе локального уровня ФНОа у мужчин с уретритом разной этиологии были выявлены определенные особенности. Если при уреаплазменном уретрите количество ФНОа, по сравнению со здоровыми людьми, увеличивалось в среднем в 2-7 раз, то при хламидийном уретрите его содержание возрастало в 5-15 раз (200,0±10,56 пг/мл; р<0,001), а при микст-инфекции — в 10-25 раз (362,26± 18,26 пг/мл; р<0,001). Известно, что местная продукция ФНОа вызывает хемотаксис гранулоцитов и макрофагов, усиление фагоцитоза и микробицидности фагоцитов, обеспечивает их повышенную цитотоксичность, опосредованную перекисью водорода [8] и оксида азота [3], а также активирует ТИ 1 типа [10]. Однако ФНОа при длительном, хроническом воспалении и при его гиперпродукции служит одним из медиаторов, способных как прямо, так и опосредованно вызывать деструкцию тканей [4, 7]. При взаимодействии ФНОа с рецептором р55 и РАБ-рецептором (СБ95) на клетках-мишенях включаются дополнительные пути трансдукции сигнала, ведущие к активации каскада кас-паз и апоптозу клеток [1]. Повышение уровня ФНОа у пациентов с уретритом уреаплазменной этиологии можно рассматривать в качестве защитно-приспособительного механизма, участвующего в регуляции и усилении локального клеточного иммунитета, тогда как при хламидийном уретрите зафиксирована гиперпродукция ФНОа, которая, по-нашему мнению, имеет важное патогенетическое значение. Он может участвовать в повреждении клеток слизистой оболочки урогенитального тракта, опосредуя некробиотические и апоптотические процессы.
Как известно, ФНОа является одним из индукторов ИЛ-8 — мощного хемоаттрактанта для нейтрофилов [6].
Таблица 2
Показатели соотношения про- и противовоспалительных цитокинов в смывах из уретры у мужчин разных групп
Показатель Мужчины с уретритом Здоровые мужчины, п=20
и.игеа1уисиш, п=20 и.игеа1уПсит СггасИотайз, п=20 СигасИотаНз, п=15
ФНОа/ ИЛ-10 2,6 ±0,08*** р, ,<0,001 7,1 ±0,34** р, ,<0,05 5,4 ±0,2*** Р, .,<0,001 10,0 ±0,2
ИЛ-8/ ИЛ-10 1,85 ±0,2*** Р, ,>0,05 2.0 ±0,09*** р, ,<0,05 1,61 ±0.1*** р, ,>0,05 25,2 ±0,5
ИФНу/ ИЛ-10 0,9 ±0,05*** р. ,<0,001 0,13 ±0,03*** Р, ,>0,05 0,21 ±0,05*** Р, ,<0,01 15,5 ±0,1
Примечания. * — р<0,05; ** — р<0,01; *** — р<0,001 статистическая достоверность различий с контрольной группой, Р! 2 , — сравниваемые группы больных уретритом мужчин.
Нами установлено, что у мужчин изучаемых клинических групп содержание ИЛ-8 изменяется однонаправленно с уровнем ФНОа. Максимальный уровень ИЛ-8 выявлен в группе мужчин с микст-уретритом (116,46±10,45 пг/мл против 48,84±4,32 и 67,67±6,69 пг/мл, р<0,05 при микст-, моно-уреаплазменном и хламидийном уретрите соответственно). Установлена корреляционная зависимость локального уровня ФНОа и ИЛ-8 при хламидийной и микст-формах уретрита (г=0,64 и 0,78; р<0,05). Учитывая, что цитокины преимущественно продуцируются локально, определенный вопрос вызвал у нас тот факт, что средние значения уровня ИЛ-8 в смывах из уретры оказались ниже, чем в сыворотке крови обследуемых пациентов. Низкие локальные значения ИЛ-8 можно объяснить тем, что значительная часть нейтрофилов покидает ткани и мигрирует на поверхность слизистых оболочек, на их мембране экспрессируется рецептор к ИЛ-8 (СО \vl28), и, вероятно, часть цитокина связывается с собственным рецептором, что приводит к снижению определяемого в биологической жидкости уровня цитокина.
Биологическая функция ИЛ-12 заключается в активации синтеза ИФНу ТЫ типа и 1\!К-клетками. Этим эффектом обладает только ИЛ12р70 (димер р35 и р40 ИЛ-12). Тогда как образующиеся гомодимеры ИЛ12р40 конкурентно связываются с рецептором ИЛ-12, но не проявляют биологической активности [8]. Нами установлено снижение локального содержания ИЛ12р70 у мужчин с хроническим уретритом. Но если при уреаплазменном уретрите выявлена лишь тенденция к снижению (7,94±1,21 против 11,32±1,31 пг/мл у здоровых, р>0,05), то при хламидийном уретрите у всех мужчин зафиксирован статистически достоверно низкий уровень ИЛ12р70 в смыве из уретры (6,11±0,14 пг/мл; р<0,05). Количество ИЛ12р70 в уретральном смыве мужчин с микст-формой уретрита было минимальным и расценено нами как его дефицит. СЬ.Вшт., К.СаггшеПу (1995) показали, что механизмы антимикробной защиты против внутрикле-точно паразитирующих ОтасИоташ являются ИЛ-12 зависимыми [11]. Поэтому снижение локального уровня ИЛ12р70 при моно-и микст-хламидийном уретрите может оказать влияние на уровень продукции ИФНу клетками мукозоассоциированной лимфоидной ткани их уретры.
Нами был выявлен существенный рост содержания ИЛ12р40 в смывах из уретры у мужчин всех клинических групп. Только у 2 мужчин (10,0%) с уреаплазменным уретритом значения ИЛ12р40 не отличались от показателей контрольной группы. Важным, по нашему мнению, является факт двукратного увеличения ИЛ12р40 в смывах из уретры у мужчин с хламидийным и микст-хламидийно-уреаплазменным уретритом по сравнению с пациентами с уреаплазменным уретритом (251,13*9,22 и 274,37±20,16 пг/мл против 106,42+10,64; р<0,001). Это позволяет считать, что антигены хламидии и продукты ее жизнедеятельности являются мощными индукторами синтеза ИЛ12р40. Выявленные различия количества субъединиц ИЛ-12 отразились на уровне их соотношения. Если в норме у здоровых людей соотношение ИЛ12р70 к ИЛ12р40 равно 1:3, то при хронических уретритах — 1:25. При этом выявлены различия в зависимости от этиологии уретрита. Максимальное превалирование ИЛ12р40 зафиксировано при микст-уреаплазменно-хламидийном уретрите (80:1; р<0,001) несколько меньше — при хламидийном уретрите (30:1). При уреаплазменном уретрите коэффициент ИЛ12р40/ИЛ12р70 составил 13:1 и также был значительно выше, чем у здоровых мужчин. Это свидетельствует о существенном увеличении (абсолютном и/или относительном) локальной продукции ИЛ12р40 у мужчин с хроническим уретритом. Значительное нарастание продукции ИЛ12р40 при микст-инфекции свидетельствует о синергичном эффекте U.urealyticum и С.trachomatis в отношении индукции данного цитокина.
Учитывая важную роль ИЛ-12 в активации синтеза ИФНу NK-клетками, а особенно CD4+ Th2 типа, и разную направленность биологических функций исследуемых субъединиц ИЛ-12, считаем, что нарастание гомодимера ИЛ12р40, способного конкурентно связываться с рецепторами ИЛ-12 на иммунекомпетентных клетках, усугубляет дефицит продукции ИЛ12р70 и нарушает процесс активации иммуноцитов, синтезирующих ИФНу.
Это мнение было подтверждено нами при оценке ИФНу. При хламидийном и хламидийно-уреаплазмен-ном уретрите установлен дефицит ИФНу на локальном уровне. Его содержание было в 2-2,5 раза ниже, чем в контрольной группе, и в 3-5 раз ниже, чем у пациентов с уреаплазменным уретритом. Это свидетельствует о депрессии Thl типа и нарушении функции макрофагов при моно- и микст-хламидийных уретритах. Было показано, что высокие дозы ИФНу полностью подавляют рост хламидий, тогда как низкое его содержание индуцирует развитие морфологически аберрантных форм включений, что способствует развитию персистенции хламидий [11]. У мужчин с уретритом, ассоциированным с U.urealyticum, локальное содержание ИФНу повышено (26,07±1,06 против 18,22±1,24 пг/мл у здоровых, р<0,01). Содержание противовоспалительного медиатора ИЛ-10 в смывах из уретры мужчин с хроническим уретритом было существенно выше, чем в группе здоровых (табл. 1). Максимальный его локальный уровень был зафиксирован в группе мужчин с микст-U.urealyticum и С.trachomatis уретритом (58,16±7,02 пг/мл; р<0,05-0,001).
Имеются сведения, что этот цитокин продуцируется моноцитами, макрофагами и активированными Т-клетками,
преимущественно Th2 типа. Считают, что ИЛ-10 ингиби-рует продукцию ИФНу Т-лимфоцитами и NK-клетками и продукцию макрофагами всех провоспалительных ци-токинов, особенно ИЛ-12 [2]. Для подтверждения этих данных нами проведен корреляционный анализ локального содержания противо- и провоспалительных цитокинов. Выявлена обратная корреляционная зависимость ИЛ 12р40 и ИФНу при хламидийном и хламидийно-уреаплазмен-ном уретрите (г=-0,7 и -0,74; р<0,05 соответственно), тогда как у больных с уреаплазменным уретритом такой связи выявлено не было. Установлена также обратная зависимость ИЛ-10 и ИЛ12р70 во всех группах больных: -0,59;-0,68;-0,79 при р<0,05 при уреаплазменном, хламидийном и микст-уретритах соответственно. Однако нами не зафиксировано значимых корреляционных зависимостей ИЛ-10 с ИЛ-8 и ФНОа, напротив, складывается впечатление о взаимопотенцирующем влиянии этих медиаторов. Для уточнения нашего предположения были рассчитаны коэффициенты ФНОо(/ИЛ-Ю; ИЛ-8/ИЛ-10; ИФНу/ИЛ-10. Полученные результаты представлены в табл. 2. Как оказалось, у здоровых мужчин при невысоких абсолютных значениях цитокинов превалируют медиаторы с провоспалительной функцией, активирующие клеточный компонент резистентности. При уретрите соотношение оппозитных пулов цитокинов изменяется в пользу противоспалительного ИЛ-10. Степень выраженности дисбаланса при разных этиологических вариантах уретрита варьирует.
Выводы
1. При уреаплазменном уретрите локальный цитокино-вый профиль характеризуется увеличением абсолютных значений ИЛ-10, ИФНу, ФНОа, ИЛ-8 и ИЛ12р40 с относительным превалированием противовоспалительных медиаторов (ИЛ-10 и ИЛ12р40) и отражает процессы активации клеток мукозоассоциированной лимфоидной ткани.
2. При хламидийном, и особенно при микст-уретрите, установлена локальная гиперпродукция ФНОа и противоспалительных ИЛ-10, ИЛ12р40 с дефицитом ИЛ12р70 и ИФНу, что свидетельствует о развитии недостаточности клеточно-опосредованного иммунитета по Th 1 типу.
Литература
1. Кетлинский С.А. // Иммунология. 2001. Т.23. №2-3. С. 85-90.
2. Кетлинский С.А., Ищенко A.M. // Мед. иммунология. 1999. Т.1. №3-4. С. 16.
3. Проскуряков С.Я., Бикетов С.И., Ивашинов А.И. и др. // Иммунология. 2000. №4. С. 9-11.
4. Симбирцев A.C. // Цитокины и воспаление. 2002. Т.1. №1. С. 9-17.
5. Сингур O.A. Цитокиновое обеспечение фагоцитарной защиты и ее коррекция, микробиологические особенности хронической гонореи у мужчин: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Владивосток, 2003. 23 с.
6. Соколов Д.И., Котов А.Ю., Симбирцев A.C. и др. // Иммунология. 2002. №1. С. 32-37.
7. Фрейдлин И.С. //Тихоокеанский мед. журн. 1999. №З.С. 13-19.
8. Фрейдлин И.С., Тотолян A.A. Клетки иммунной системы. СПб.: Наука, 2001. 390 с.
9. Юцковская Я.А. Клинико-эпидемиологические и иммунологические аспекты и роль ассоциаций возбудителей при инфекциях мочевого тракта в условиях Приморского края: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 2003.48 с.
10. Ярилин A.A. //Мед. иммунология. 1999. Т.1. №1-2. С. 37-46.
11. Biron Ch., Gazzinelly R. // Current opinion in immunology. 1995. Vol. 7. P. 485-495.
УДК 617.735: 616.379.64
EJI. Сорокин, B.B. Егоров, M.B. Пшеничное, O.B. Коленко
ОЦЕНКА ИСХОДНОГО состояния МАКУЛЯРНОЙ ЗОНЫ У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ II ТИПА ПРИ ИХ ПЕРВИЧНОМ НАПРАВЛЕНИИ НА ЛАЗЕРНОЕ ЛЕЧЕНИЕ ПО ПОВОДУ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ; ПЕРСПЕКТИВЫ СОХРАННОСТИ ЗРИТЕЛЬНЫХ ФУНКЦИЙ
Хабаровский филиал ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росздрава»; Дальневосточный государственный медицинский университет, г. Хабаровск
В России насчитывается свыше 10 млн больных, страдающих сахарным диабетом (СД), причем их количество непрерывно растет. В Хабаровском крае более 20 тыс. чел. страдают этим недугом [7]. В структуре СД около 85% случаев составляет его II тип.
Одним из практически неизбежных осложнений СД является диабетическая ретинопатия, занимающая второе место в структуре причин неустранимой слепоты [6, 11, 12]. Ведущей причиной потери центрального зрения при данной патологии является диабетический макулярный отек (ДМО) [8]. Согласно данным международной исследовательской группы Early Treatment Diabetic Retinopathy Study [9], умеренно тяжелая потеря зрения при клинически значимом макулярном отеке достигает 32% случаев в течение пяти лет наблюдения. При длительности СД от 10 до 15 лет ДМО развивается у 95% больных [6].
Единственным методом лечения ДМО, эффективность которого доказана, является лазерная коагуляция сетчатки, проведение которой вдвое снижает риск значительной потери остроты зрения в течение 3 лет [8]. Важен тот факт, что эффективность существующих методик лазерной коагуляции сетчатки прогрессивно снижается по мере «запущенности» ДМО и практически отсутствует
в его далекозашедших стадиях [1, И]. Поэтому весьма остро стоит проблема своевременной, ранней диагностики даже не ДМО, а лишь наличия высокого риска его формирования. Это намного повысило бы возможности лазерного хирурга по сохранению зрительных функций у больных СД.
Цель работы — выяснение частоты и структуры ДМО среди пациентов, страдающих СД II типа, впервые направленных участковыми окулистами на лечение в отдел лазерной хирургии.
Материалы и методы
Работа выполнена в Хабаровском филиале ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова Росздрава». В своем исследовании мы стремились сопоставить уровень зрительных функций, субъективных ощущений пациентов с объективными показателями их макулярной зоны (МЗ), используя современную диагностическую аппаратуру. Проведено углубленное офтальмологическое обследование 258 пациентов с СД II типа (516 глаз). Среди них мужчин было 92. женщин — 166 чел., средний возраст 64,3 г. Всем пациентам выполнялось стандартное офтальмологическое обследование. Проводилось также детальная биомикроскнша
