CC BY
22
фологический эквивалент реакции иммунологического торможения (иммунодепрессии) [1]. В связи с этим положительные экспериментальные результаты применения лейкинферона обосновывают целесообразность использования иммуномодуляторов в комплексном лечении остропрогрессирующих форм туберкулеза у больных, выделяющих микобактерии с МЛ У.
Литература
1. Васильева С.Н., Виноградова Т.И., Сухов Ю.З. // Мат-лы VII Рос. съезда фтизиатров. М., 2003. С. 64.
2. Васильева С.Н., Виноградова Т.Н., Кацер А.Р. и др. // Мат-лы VII Рос. съезда фтизиатров. М., 2003. С. 82.
3. Волкова Л.В., Кузнецов В.П. // Антибиотики и химиотерапия. 2002. Т. 47. №11. С. 30-37.
4. Голанов B.C., Богдалова В.Е., Андреев Л.П. и др. // Проблемы туберкулеза. 1991. №12. С. 27-28.
5. Стрелис А. К. // Профилактика заболеваний и укрепление здоровья. 2001. №2. С. 20, 29-30.
6. Тунгусова Н.С., Сандвен П., Марьяндышев А.О. // Экология человека. 2001. №3. С. 21-24.
7. Dye С., Williams B.G., Espinal М.А. et al. // Science. 2002. Vol. 295, P. 2042-2046.
8. Iseman M.D. // Int. J.Tuberc. Lung.Dis. 1998. Vol. 2, №1. P. 867-872.
9. Sudre P., Cohn D.L. // Int. J.Tuberc. Lung.Dis. 1998. Vol. 2, №8. P. 609-611.
□ □□
УДК 611.24-018.2-091.8
Н.П. Красавина, С.С. Целуйко, В.А. Доровских, Л.С. Корнеева
ЛОКАЛИЗАЦИЯ ЛЕКТИНОВ В СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ ПРИ ОХЛАЖДЕНИИ НА ФОНЕ ИНФРАКРАСНОГО ЛАЗЕРНОГО ОБЛУЧЕНИЯ
Амурская государственная медицинская академия, г. Благовещенск
Актуальной проблемой настоящего времени является поиск новых, качественных критериев для оценки структурных и метаболических изменений органов и тканей в условиях патологии. Один из современных методов изучения клетки — это применение меченых лектинов, специфически связывающихся с углеводными детерминантами клеточной поверхности [1, 3, 5, 6, 8]. В основе метода лежит образование молекулярных комплексов углеводов с белком, при этом специфичность взаимодействия определяется структурой активного центра лектина [2]. Все лекти-ны являются поливалентными лигандами, т.е. в молекуле имеется несколько центров связывания углеводов, что обусловливает агглютинацию клеток и частиц, а также преципитацию гликопротеидов. Обладая более широкой специфичностью, лектины дают возможность дифференцировать углеводсодержащие биополимеры в цитоплазме и цитолемме клеток, а также в остальных структурах соединительной ткани. Исходя из того, что в составе межклеточного вещества рыхлой соединительной ткани одними из основных являются Ы-ацетилглюкозамин и Ы-ацетил-галактозамин, мы в своей работе применяли специфичные к данным веществам лектины: из клубней
картофеля (STA — специфичен к N-ацетил-Д-глюко-замину), из зародышей пшеницы (WGA — специфичен к N-ацетил нейраминовой кислоте и N-ацетил-Д-глюкозамину), из виноградной улитки (HPL — специфичен к N-ацетил-Д-галактозамину).
Материалы и методы
Исследования проведены на интактных и трех группах экспериментальных животных. В первой группе проводили охлаждение в климатокамере при температуре 15° С в течение 15 дн. по 3 ч ежедневно. Вторая группа животных ежедневно подвергалась воздействию импульсного инфракрасного лазера с длиной волны 0,85-0,9 мкм, суммарная доза воздействия составила 7,8 Дж/см2. Третью группу животных на фоне общего охлаждения облучали инфракрасным лазером (методика аналогична второй группе). Материалом д ля исследования была каудальная доля правого легкого. Для выявления рецепторов к лектинам применяли непрямой метод, то есть срезы, наклеенные на стекло с помощью поли-Ь-лизина, обрабатывали лектином, а далее меткой, имеющей сродство к данному лектину (конъюгат тиреоглобулин-пероксидаза). В работе использовали препараты лектинов: клубней картофеля,
зародыша пшеницы и виноградной улитки, полученных из лектинотеста (г. Львов, Украина). Визуализацию лектиносвязывающих структур проводили с помощью диаминобензидина тетрагидрохлорида в присутствии 0,015% раствора перекиси водорода (А.Д. Лу-цик, А.Е. Котык, 1985). Контроль специфичности окраски осуществляли путем исключения лектина из схемы обработки препаратов. Результат в этом случае был отрицательный. После проведения цитохимической реакции часть препаратов была зафиксирована и заключена в эпоксидные смолы по методу Coalson, Winteret (1986) для изучения на полутонких срезах. Активность реакции и локализацию связанного с гли-коконъюгатом лектина определяли по коричневым отложениям продуктов окислительной реакции в цитоплазме и цитолемме альвеолярных макрофагов, эндо-телиальных клеток, а также в межклеточном веществе соединительной ткани. Интенсивность оценивали полуколичественно как "высокая", "низкая" и "отрицательная", в зависимости от реакции большинства структур легкого.
Результаты и обсуждение
У интактных животных в соединительной ткани стенки бронхов и в межальвеолярных перегородках реакция на лектины зародыша пшеницы и клубней картофеля чаще всего была отрицательная или крайне низкая. Лектин виноградной улитки давал в этих структурах слабоположительную реакцию.
При облучении инфракрасным лазером выявляются в умеренном количестве продукты реакции на лектин зародыша пшеницы в стенке сосудов микро-циркуляторного русла слизистой оболочки бронхов в виде мелких гранул, контурирующих некоторые эндотелиальные клетки. Низкая активность сохранялась в структурах соединительной ткани на лектин клубней картофеля. Применение лектина виноградной улитки позволило обнаружить в межальвеолярных перегородках и в просвете альвеол клетки, располагающиеся чаще всего группами и содержащие различные по размеру гранулы продуктов реакции преципитата окисленного диаминобензидина. Гранулы располагались по контуру оболочки клетки, а также в виде локальных скоплений различного размера в цитоплазме (рис. 1).
После охлаждения в течение 15 дн. реакция на лектины зародыша пшеницы и клубней картофеля во всех структурах рыхлой соединительной ткани легкого оставалась низкой. В соединительной ткани бронхиального дерева возрастает количество продуктов реакции на лектин виноградной улитки по ходу волокнистых структур, а также в межальвеолярных перегородках, где выявляются локальные скопления гранул реакции. В то же время в ряде альвеол отмечены абсолютно ареактивные зоны. В просвете альвеол присутствовали единичные клетки, имеющие в цитоплазме высокое содержание продуктов реакции на лектин виноградной улитки (рис. 2).
Лазерное облучение на фоне общего охлаждения привело к выявлению небольших скоплений гранул в рыхлой соединительной ткани бронхов при реакции на лектин клубней картофеля. В межальвеолярных перегородках реакция на данный лектин мозаич-
Резюме
Наличие большого количества углеводсодержащих биополимеров в соединительной ткани органов дыхания послужило основой для изучения локализации лектинов в эксперименте. Резко положительная реакция на лектин виноградной улитки выявляется в клетках межальвеолярных перегородок при применении инфракрасного лазерного облучения у интактных животных и особенно после воздействия на их организм низких температур. Реакция на лектин клубней картофеля имеет тецденцию к очаговому усилению после применения инфракрасного лазера на фоне охлаждения. Лектин зародыша пшеницы позволил выявить положительную реакцию в эн-дотелиальных клетках кровеносных сосудов, чаще на фоне применения лазерного облучения.
N.P. Krasavina, S.S. Tseluyko, V.A. Dorovskikh, L.S. Korneeva
LOCALIZATION LECTINS IN A CONNECTING TISSUE OF ORGANS OF RESPIRATION AT COOLING ON A BACKGROUND OF AN INFRARED LASER IRRADIATION
Amur state medical academy, Blagoveshchensk Summary
Presence of a plenty Carbohydrate biopolymers in a connecting tissue of a respiratory organs has formed a basis for studying localization lectins in experiment. Sharply positive reaction on lectin a helix pomatia is taped in cells of inter-alveolar septum's at application of an infrared laser irradiating at intact animals and especially after influence on their organism of low temperatures. Reaction on lectin tubers of a solanum tuberosum to focal magnification after application of the infrared laser on a background of refrigerating. Lectin a triticum vulgaris of wheat has allowed to tap positive reaction in endothelial cells of blood vessels, more often on a background of application of a laser irradiating.
на. Есть зоны, где многочисленные гранулы продукта реакции выстилают поверхность альвеол, либо они диффузно распылены по ходу коллагеновых и эластических волокон. Продукты реакции на лектин зародыша пшеницы выявляются на поверхности клеток, выстилающих просвет мелких кровеносных сосудов, что, вероятно, маркирует их локализацию в эндотелиоцитах. Применение лектина виноградной улитки позволило выявить в составе межальвеолярных перегородок клетки двух типов. В цитоплазме клеток первого типа - многочисленные гранулы, которые неравномерно распределены по контуру оболочки клетки. В других клетках их поверхность кон-турируется только частично (рис. 3). Уровень реакции в данном случае варьирует.
Известно, что для клетки, способной к морфоге-нетическим преобразованиям, характерно более высокое содержание на поверхности углеводных остатков [ 1, 3, 5,7]. Увеличение числа клеток в межальвеолярных перегородках и в просвете альвеол, имеющих значительное число гранул продуктов реакции на лектин виноградной улитки, дает основание предположить (с учетом данных общей морфологии) о
Респираторный отдел легкого крысы Реакция на лектин виноградной улитки, докраска метиленовьгм синим. Полутонкие срезы. Увеличение х 520.
Рис. 1. Облучение инфракрасным лазером в течение 15 дн. Гранулы продукта реакции располагаются на поверхности клетки и в виде скопления в цитоплазме (Т)
Рис. 2. Охлаждение по 3 ч ежедневно в течение 15 дн. Единичные гранулы выявляются в стенке альвеол. В просвете альвеолы локализуется клетка (Т), содержащая большое число гранул продуктов реакции
Рис. 3. Охлаждение по 3 ч ежедневно в течение 15 дн. на фоне облучения инфракрасным лазером. В стенке альвеол локализуются группы клеток с большим числом гранул продуктов реакции, некоторые из клеток заполнены гранулами только частично (Т)
появлении молодых альвеолярных макрофагов, число которых возрастает при действии инфракрасного лазера. В условиях общего охлаждения применение лазерного облучения позволило при использовании лектина четко дифференцировать две группы клеток в межальвеолярных перегородках. Можно предположить, что в ходе созревания макрофагов происходит сиалирование детерминант, а это проявляется потерей сродства к лектину [1]. Интенсивность реакции на лектин клубней картофеля в основном была низкой в соединительной ткани легкого, хотя некоторое увеличение было отмечено только на поверхности ряда альвеол в условиях общего охлаждения на фоне лазерного облучения, что позволяет предположить о качественных изменениях и перераспределении рецепторов к данному углеводному биополимеру. Лектин зародыша пшеницы наиболее активно взаимодействует в зонах локализации эндотелиальных клеток мелких сосудов. Лазерное облучение усиливает нео-васкулогенез, способствует появлению новых эндотелиальных клеток с высоким сродством к лектину зародыша пшеницы, что, вероятно, связано с наличием в эндотелии рецепторов к N-ацетил нейраминовой кислоте. Это косвенно подтверждается отрицательной реакцией в эндотелиальных клетках на лектин клубней картофеля.
Полученная информация о составе и свойствах гликоконъюгатов в структурах соединительной ткани органов дыхания недостаточна для аргументации характера изменений углеводных биополимеров в условиях действия низких температур и прогнозирования результатов коррекции при применении инфракрасного лазера. В то же время анализ полученных данных может служить в качестве обоснования целесообразности применения реакции на лектины виноградной улитки и зародышей пшеницы как критерий в оценке состояния соединительной ткани легкого при морфологических исследованиях.
Литература
1. Караганов Я.Л., Луцин М.Д., Миронов В.А. и др. // Архив анатомии. 1986. № 3. С. 83-94.
2. Луцик А.Д., Детюк Е.С. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1987. № 6. С. 74-89.
3. Луцик А.Д., Зербино Д.Д. // Архив патологии. 1988. №3. С. 77-82.
4. Целуйко С.С., Доровских В.А., Красавина Н.П. Морфологическая характеристика соединительной ткани органов дыхания при общем охлаждении. Благовещенск, 2000. 254 с.
5. Goldstein I. // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 1978. Vol. 35, P. 127-340.
6. Mazzuca M., Lhermitte M., Lafitte J. et al. // J.Histochem. Cytochem. 1982. Vol. 30, №9. P. 956-966.
7. Mitchell E. //Nature Structural Biology. 2002. Vol. 9, P. 918-921.
8. Paulsen F.P. // Thorax. 2001. Vol. 56, P. 223-227.
9. WhitehouseJ.L. //Thorax. 2005. Vol. 60, P. 168-170.
□ □□
