CC BY
87
a ® Оригинальные исследования
/Original Researches/
International journal of endocrinology
УДК 616.376-008.64:616-056.52:616:15 ОС1: 10.22141/2224-0721.5.77.2016.78748
САЕНКО Я.А., ЗАКК.П., ПОПОВА В.В., СЕМИОНОВА Т.А.
ГУ «Институт эндокринологии и обмена веществ им. В.П. Комиссаренко НАМН Украины», г. Киев, Украина
ЛЕЙКОЦИТАРНЫЙ СОСТАВ И ИММУНОФЕНОТИП ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ЖЕНЩИН, БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2-го ТИПА, С ОЖИРЕНИЕМ
Резюме. Введение. Существует мнение, что изменения некоторых показателей естественного и адаптивного иммунитета у больных сахарным диабетом (СД) 2-го типа с избыточной массой тела обусловлены сопровождаемым ожирением, так как жировая ткань является мощным секреторным органом, который продуцирует многие цитокины, особенно адипокины, оказывающие ключевую роль в различных иммунных реакциях. Известно, что уровень главных адипокинов, регулирующих жировую ткань, в периферической крови (ПК) человека определяется с учетом полового диморфизма. Цель исследования — выяснение вопроса о том, в какой мере наблюдаемые изменения лейкоцитарного состава и иммунофенотипа лимфоцитов крови при СД 2-го типа у женщин обусловлены ожирением ввиду значительного полового различия в секреции ряда адипокинов, участвующих в контролировании функции иммунной системы. Материалы и методы. Обследованы 24 женщины с впервые выявленным СД 2-го типа в возрасте от 40 до 65 лет, которые были распределены на две подгруппы: первую — с индексом массы тела (ИМТ) < 25 кг/м2 и вторую — с ИМТ > 30 кг/м2. Общее число лейкоцитов в ПК подсчитывали с помощью гематологического анализатора. Лейкоцитарную формулу определяли в мазках ПК на 200 клеток, окрашенных по Паппенгейму. Поверхностные антигены лимфоцитов против мембранных антигенов: СО3, СО4, СО8, С020 и СО56 — метили моноклональными антителами, маркированными флуоресцеин-изотиоцианатом или фикоэритрином. Результаты. Повышение общего количества лейкоцитов в ПК пациентов с ожирением более значительно, чем у больных с нормальным ИМТ, т.е. 23,1 % против 14,5 % (р < 0,05). Самый высокий лейкоцитоз наблюдался у больных СД 2-го типа с ожирением и в среднем достигал 7,61 х 109/л. В подгруппе здоровых и больныхженщин с нормальной массой тела абсолютное количество сегментоядерных нейтрофилов в ПК у пациенток с СД 2-го типа по отношению к таковому у нормогликемических женщин было увеличено в среднем на 20,3 %, а у тучных женщин такое соотношение составляло 29,1 % (р < 0,05). Абсолютное количество моноцитов в ПКу этих подгрупп было еще более увеличенным: соответственно в среднем на 59,2 % у худых (р < 0,05) и на 64 % у тучных женщин (р < 0,05). У большинства женщин с впервые выявленным СД 2-го типа и нормальными показателями величины массы тела отмечается только незначительное и статистически недостоверное повышение абсолютного количества СО4+ и СО8+ Т-клеток. У большинства больных СД 2-го типа с ожирением отмечалось статистически достоверное повышение абсолютного количества естественных клеток-киллеров (СО56+-клетки) в ПК. Выводы. У женщин, больных СД 2-го типа, с ожирением отмечается более значительное изменение лейкоцитарного состава (увеличение числа нейтрофилов и моноцитов) и иммунофенотипа лимфоцитов крови (увеличение числа СО4+ Т-клеток и СО56+-клеток), чем у женщин, страдающих СД 2-го типа с нормальным ИМТ, что указывает на более выраженное у них хроническое низкоградиентное воспаление и объясняет причину более тяжелого течения заболевания СД 2-го типа при ожирении. Полученные результаты сопоставимы с последними данными о том, что эффективность некоторых пероральных сахароснижающих средств, в частности метформина, во многом обусловлена их противовоспалительным действием. Ключевые слова: сахарный диабет 2-го типа, ожирение, иммунитет, лейкоцитарный состав крови, им-мунофенотип лимфоцитов.
Адрес для переписки с авторами: Саенко Яна Андреевна E-mail: y.saenko1981@gmail.com
© Саенко Я.А., Зак К.П., Попова В.В., Семионова Т.А., 2016 © «Международный эндокринологический журнал», 2016 © Заславский А.Ю., 2016
Работа выполнена в рамках НИР «Изучение прогностического значения динамики клинико-иммунологических показателей у детей и подростков, больных сахарным диабетом 1-го типа, на ранних стадиях развития заболевания».
Введение
Согласно современным представлениям, сахарный диабет (СД) 2-го типа является хроническим, полисистемным гетерогенным заболеванием воспалительной природы [15, 16]. Этиология и патогенез СД 2-го типа весьма сложны и еще недостаточно изучены. Считают, что факторы риска СД 2-го типа включают в себя ассоциацию генетической предрасположенности, ин-сулиновой резистентности, дисфункции бета-клеток и воздействия внешней среды (снижение физической активности, стиль жизни, избыточное и нездоровое питание, ожирение, стресс) [6, 20]. Особое внимание уделяется таким факторам риска, как наличие избыточной массы тела или ожирение у человека, которые рассматриваются сейчас как один из видов воспаления, иногда обозначаемого как низкоградиентное (low grade) [21]. Недавно рядом патологов при исследовании поджелудочной железы человека было обнаружено, что у больных СД 2-го типа наблюдается выраженное воспаление преимущественно в панкреатических островках Лангерганса [24].
Информация о роли иммунной системы в патогенезе СД 2-го типа, особенно сопровождаемого избыточной массой тела или ожирением, пока весьма незначительна и неоднозначна. Высказывается мнение, что описываемые изменения некоторых показателей естественного и адаптивного иммунитета у больных СД 2-го типа с избыточной массой тела обусловлены во многом не столь самим заболеванием сахарным диабетом, сколько сопровождаемым ожирением, так как в настоящее время твердо установлено, что жировая ткань (ЖТ) является мощным секреторным органом, который продуцирует многие цитокины, особенно адипокины (лептин, адипонектины и др.), играющие ключевую роль в различных иммунных реакциях [19, 32].
Вместе с тем показано, что уровень главных адипо-кинов, регулирующих ЖТ (лептина и адипонектина), в периферической крови (ПК) человека определяют с учетом полового диморфизма, т.е. более высокая их концентрация у женщин, чем у мужчин [4, 5, 7, 22]. В то же время имеющиеся исследования, посвященные выяснению роли ожирения при СД 2-го типа, единичны, противоречивы и выполнены преимущественно на лицах обоих полов [6].
Цель настоящей работы — целенаправленное выяснение вопроса о том, в какой мере наблюдаемые изменения ряда показателей иммунитета (лейкоцитарный состав и иммунофенотип лимфоцитов крови) при СД 2-го типа у женщин обусловлены ожирением ввиду значительного полового различия в секреции ряда ади-покинов, участвующих в контролировании функции иммунной системы.
Материалы и методы
Обследованы 24 женщины с впервые выявленным СД 2-го типа в возрасте от 40 до 65 лет, которые были распределены на две подгруппы: первую — с нормальной массой тела (индекс массы тела (ИМТ) < 25 кг/м2) и вторую — с ожирением (ИМТ > 30 кг/м2). Контрольную группу составили 30 практически здоровых женщин с нормогликемией такого же возраста, которые были также разделены на две подгруппы: худые — с нормальным ИМТ (< 25 кг/м2) и тучные — с ИМТ > 29,9 кг/м2. В исследование не включали пациентов с перенесенным инфарктом миокарда, инсультом, а также со злокачественными новообразованиями, острыми и хроническими респираторными заболеваниями.
Диагноз СД 2-го типа устанавливали согласно рекомендациям экспертов ADA (2006 г.). При антропометрическом исследовании у пациенток определяли рост и массу тела с последующим вычислением ИМТ путем деления массы тела в кг на квадрат роста в метрах. При ИМТ ниже 18,5 кг/м2 считали, что у пациентов имелся недостаток ЖТ тела, при ИМТ между 18,5 и 24,9 кг/м2 — нормальный вес, от 25,9 до 29,9 кг/м2 — избыточный, при 30,0—35,0 кг/м2 — признак ожирения, а еще при более высоких показателях (> 35,0 кг/м2) — патологическое ожирение.
Общее число лейкоцитов в ПК подсчитывали с помощью гематологического анализатора. Лейкоцитарную формулу определяли в мазках ПК на 200 клеток, окрашенных по Паппенгейму, при использовании ка-кодилатного буфера (рН 6,85).
Содержание лимфоцитов различных иммунологических фенотипов определяли методом проточной ци-тометрии с использованием лазерного цитофлюори-метра FAC Star Plus фирмы Becton Dickenson (США). Мононуклеары из гепаринизированной ПК выделяли методом дифференциального центрифугирования в градиенте плотности фиколла-уротраста с последующим их инкубированием в пластиковых чашках в СО2-инкубаторе в течение 1 ч для устранения моноцитов. Поверхностные антигены лимфоцитов против мембранных антигенов: CD3 (все Т-лимфоциты), CD4 (Т-индукторы/-хелперы), CD8 (Т-супрессоры/-киллеры), CD20 (В-лимфоциты) и CD56 (ЕК-клетки) — метили моноклональными антителами, маркированными флуоресцеин-изотиоцианатом или фикоэритрином фирм Becton Dickenson (США), Dako Cytomation (Дания) и отечественными.
Результаты
Проведенными нами исследованиями, как видно из табл. 1 и рис. 1, установлено, что при избыточной массе тела как у практически здоровых нормоглике-мических женщин, так и особенно у женщин, больных СД 2-го типа, наблюдается статистически достоверное изменение общего количества лейкоцитов, лейкоцитарного состава и некоторых видов иммунофенотипа лимфоцитов ПК. Так, при сравнении средних данных, полученных при гематологическом обследовании двух
подгрупп женщин (худых и тучных), больных СД 2-го типа, было обнаружено, что повышение общего количества лейкоцитов в ПК пациентов с ожирением более значительно, чем у больных с нормальным ИМТ, т.е. 23,1 % против 14,5 % (р < 0,05).
Кроме того, общее количество лейкоцитов в ПК у нормогликемических худых женщин против полных составляло 25,1 % (р < 0,05), а у больных СД 2-го типа с ожирением против тучных нормогликемических женщин — 37,5 % (р < 0,05). Самый высокий лейкоцитоз наблюдался у больных СД 2-го типа с ожирением, т.е. в среднем достигал 7,61 х 109/л.
В подгруппе здоровых и больных женщин с нормальной массой тела (ИМТ < 25 кг/м2) абсолютное количество сегментоядерных нейтрофилов (без сдвига влево) в ПК у пациентов с СД 2-го типа по отношению к таковому у нормогликемических женщин было увеличенным в среднем на 20,3 %, а у тучных женщин такое соотношение составляло 29,1 % (р < 0,05). Абсолютное количество моноцитов в ПК у этих подгрупп обследуемых было еще более увеличенным соответственно в среднем на 59,2 % (р < 0,05) у худых и на 64 % у тучных (р < 0,05). Особенно значительные изменения наблюдались со стороны количества моноцитов — в виде моноцитоза. Причем относительное количество моноцитов в ПК больных СД 2-го типа с наиболее высоким уровнем ИМТ достигало 15—17 %, а абсолютное их количество — 1,1—1,3 х 109/л клеток. Полученные нами данные согласуются с единичными сообщениями других авторов.
При цитологическом исследовании моноцитов в мазках ПК, окрашенных по Паппенгейму, эти клетки у таких больных выглядели увеличенными в размере с повышенным числом вакуолей, что согласуется
с предыдущими нашими исследованиями моноцитов под электронным микроскопом [1, 6].
Хорошо известна важная функциональная роль этих двух видов лейкоцитов (нейтрофилы и моноциты), принадлежащих к естественному иммунитету, в организме здорового и больного человека, в том числе и при СД 2-го типа. Нейтрофилы, с одной стороны, благодаря фагоцитозу и нетозу являются главными защитниками организма от патогенов, а с другой стороны, при изменении иммунологической толерантности могут участвовать в деструкции и дисфункции бета-клеток путем апоптоза и нетоза [3]. Как известно, моноциты/макрофаги, в большом количестве мигрирующие и заселяющие ЖТ при ожирении [17], являются главными клетками, секретирующими целый спектр провоспалительных и антивоспалительных цитокинов и хемокинов с адипоцитами, в том числе интерлейкин-1р, -6 и фактор некроза опухоли а в ЖТ, образуя функциональные комплексы, и, таким образом, играют кардинальную роль в патогенезе как СД 2-го типа, так и в отношениях между собой [2, 13, 30]. Интересно отметить, что недавно было показано значительное увеличение числа инфильтрирующих моноцитов/макрофагов в островках Лангерганса больных СД 2-го типа по сравнению со здоровыми лицами [24]. Проведенные нами исследования также подтверждают существующее сейчас мнение, что клетки естественного иммунитета играют важнейшую роль в патогенезе СД 2-го типа и ожирения [15].
Так как почти для 80 % больных СД 2-го типа характерно ожирение [8, 28], а само ожирение, являющееся также воспалительным заболеванием [20], сопровождается лейкоцитозом [9, 31], то, естественно, возникает вопрос: в какой мере повышение количест-
Таблица 1. Общее количество лейкоцитов, лейкоцитарный состав и иммунофенотип лимфоцитов ПК здоровых женщин, больных СД 2-го типа (худых (ИМТ < 25 кг/м2) и полных (иМт > 25 кг/м2)), и больных с впервые выявленным СД 2-го типа (худых (ИМТ < 25 кг/м2) и с ожирением (ИМТ > 30 кг/м2))
Вид клеток Здоровые худые Больные худые Здоровые полные Больные полные
Абс. ч. Абс. ч. Абс. ч. Абс. ч.
Лейкоциты 4,80 ± 0,32 5,52 ± 0,32* 6,18 ± 0,32 7,81 ± 0,35*
Палочкоядерные нейтрофилы 0,16 ± 0,03 0,19 ± 0,03 0,14 ± 0,01 0,22 ± 0,04*
Сегментоядерные нейтрофилы 3,00 ± 0,21 3,61 ± 0,23* 3,55 ± 0,23 4,58 ± 0,23*
Базофилы 0,0100 ± 0,0001 0,03 ± 0,01 0,020 ± 0,001 0,05 ± 0,02
Эозинофилы 0,16 ± 0,03 0,05 ± 0,02* 0,14 ± 0,02 0,10 ± 0,02
Моноциты 0,27 ± 0,03 0,43 ± 0,05* 0,50 ± 0,05 0,82 ± 0,06*
Лимфоциты 1,77 ± 2,14 1,70 ± 0,12 1,70 ± 0,12 2,12 ± 0,23
CD3+-лимфоциты 0,87 ± 0,12 0,87 ± 0,06 0,91 ± 0,11 1,23 ± 0,12
CD4+-лимфоциты 0,52 ± 0,07 0,58 ± 0,04 0,61 ± 0,05 0,92 ± 0,09*
CD8+-лимфоциты 0,37 ± 0,05 0,42 ± 0,03 0,37 ± 0,05 0,52 ± 0,049*
CD20+-лимфоциты 0,16 ± 0,02 0,18 ± 0,02 0,16 ± 0,02 0,23 ± 0,03
CD56+-лимфоциты 0,14 ± 0,02 0,16 ± 0,02 0,14 ± 0,02 0,22 ± 0,03*
Примечание: * — p < 0,05 — отношение худых здоровых женщин к худым больным СД 2-го типа и полных здоровых женщин к больным СД 2-го типа с ожирением.
109/л
8,—
Здоровые О Больные СД 2-го типа
о (И
о о
ю <
ш 4 о
5,52
3,61
3,0 i
1,0
0,6
0,4
0,2
J 0,0
0,43
■ 0,27| □
А Лейкоциты Сегментоядерные Моноциты нейтрофилы
8
6,18
7,61
1,0 0,8
4,58
3,55
j 0,0
0,82
Лейкоциты Сегментоядерные Моноциты нейтрофилы
Рисунок 1. Общее количество лейкоцитов, абсолютное число нейтрофилов и моноцитов в ПК: А) у худых здоровых и худых больных СД 2-го типа женщин; Б) у полных здоровых и больных СД
2-го типа женщин с ожирением
7
ва лейкоцитов за счет нейтрофилов и моноцитов в ПК у многих больных при СД 2-го типа обусловлено самим заболеванием, а в какой мере — сопутствующим повышением массы тела?
Согласно полученным нами данным, повышение числа лейкоцитов у больных с впервые выявленным СД 2-го типа во многом обусловлено наличием ожирения, особенно выраженным у женщин. Вместе с тем оно служит подтверждением существующей гипотезы, что СД 2-го типа является воспалительным заболеванием [20], так как нейтрофилез и моноцитоз являются главными маркерами низкоградиентного воспаления [21].
У большинства женщин с впервые выявленным СД 2-го типа и нормальными показателями величины массы тела (ИМТ < 25 кг/м2), как видно из табл. 1 и рис. 2, имеется только незначительное и статистически недостоверное повышение абсолютного количества CD4+ и CD8+ Т-клеток, что согласуется с публикациями других авторов, касающимися проведенных исследований на общей популяции без учета пола больных [12, 29].
В то же время, как видно из табл. 1 и рис. 2Б, у женщин, болеющих СД 2-го типа, с отягощенным ожирением были обнаружены более выраженные статистически достоверные изменения абсолютного количества различных субпопуляций Т-лимфоцитов в ПК по сравнению с таковыми у подгруппы нор-могликемических тучных женщин, т.е. более высокое абсолютное количество CD3+ Т-клеток (в среднем на 35,1 %, р < 0,05), CD4+ Т-клеток (в среднем на 50,8 %, р < 0,05) и CD8+ Т-клеток (в среднем на 40 %, р > 0,05). Недостоверность данных о CD8+ Т-клеток, по-видимому, связана с большими колебаниями показателей в пределах ряда. Полученные нами результаты близки к данным других авторов, показав-
шим значительное увеличение абсолютного количества CD4+ Т-клеток у здоровых нормогликемических женщин с очень высоким патологическим ИМТ [10, 25, 27]. Некоторые расхождения полученных нами результатов с данными приведенных выше авторов, по-видимому, объясняются тем, что обследуемые этими авторами больные имели более высокую степень ожирения (ИМТ в среднем > 35,0 кг/м2), чем обследуемые нами (в среднем < 29,9 кг/м2).
У некоторых больных СД 2-го типа с ожирением по сравнению со здоровыми полными женщинами имелось также повышенное содержание абсолютного количества CD8+ Т-клеток в ПК, но при обработке средних данных оно оказалось недостоверным.
У большинства больных СД 2-го типа с ожирением отмечалось статистически достоверное повышение абсолютного количества естественных клеток-киллеров (CD56+-клетки) в ПК, что подтверждается и другими авторами, обнаружившими повышение их цито-токсической функции [6, 11, 26]. Этот вопрос требует дальнейших специальных исследований.
Обсуждение
Количество имеющихся публикаций других авторов, касающихся вопроса содержания лейкоцитов ПК у больных СД 2-го типа, небольшое и неоднозначное. При этом такие исследования проводились преимущественно на общей популяции больных СД 2-го типа без учета их пола и степени ожирения [2].
В этих работах прежде всего следует все же отметить данные, полученные при выполнении в течение двадцати лет проспективной программы National Health and Nutrition Examine Survey Epidemiology, включающей 8352 пациента, из которых у 878 человек был диагностирован СД 2-го типа. В группе участников, у которых развился СД 2-го типа, отмечался
Рисунок 2. Абсолютное количество CD3+-, CD4+- и CD8+ Т-лимфоцитов в ПК: А) у здоровых худых женщин и худых женщин, больных СД 2-го типа; Б) у полных здоровых женщин и женщин, больных СД
2-го типа, с ожирением
109/л 1,4
о 1,2 ш
о а> т S
ц о
а>
0
1 I-
2 ц
о о
ю <
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
Здоровые □ Больные СД 2-го типа
0,87 0,87 0,52 11 1,2 0,8 Г^ 0,6-1 0,38 0,42 * \ 1 1 00 Н ГГ 0,61 1 0,88 0,52 0,37 1
CD3+
CD4+
CD8+
CD3+
CD4+
CD8+
статистически достоверный (р < 0,001) лейкоцитоз, по сравнению с группой лиц, у которых это заболевание не развилось. По мнению автора публикации [18], полученные данные подтверждают гипотезу о том, что воспаление является одним из важных факторов этиологии и патогенеза СД 2-го типа.
В то же время только S.G. Wаnnаmethee й а1. (2012), анализируя данные, полученные при обследовании 7529 человек обоих полов, обнаружили, что у лиц с СД 2-го типа по сравнению с лицами без диабета отчетливый лейкоцитоз имелся как у мужчин, так и у женщин, но был более выраженным у женщин, что сопоставимо с нашими результатами [14].
К сожалению, в большинстве публикаций, в которых сообщается о лейкоцитозе у больных СД 2-го типа, не приводятся сведения о лейкоцитарной формуле, т.е. за счет какого именно вида лейкоцитов он происходит. Приводимые нами выше данные (рис. 1 а и б), безусловно, показывают, что лейкоцитоз у больных женщин с впервые выявленным СД 2-го типа, как у худых, так и у полных, обусловлен главным образом увеличением абсолютных чисел нейтрофилов и моноцитов.
Следовательно, полученные данные наводят на мысль, что ожирение играет особую роль в патогенезе и естественном течении СД 2-го типа, которое опосредуется различными цитокинами, секретируе-мыми моноцитами/макрофагами ЖТ. Особенность лейкоцитарного состава ПК у женщин, болеющих СД 2-го типа, с отягощенным ожирением объясняется, по-видимому, тем, что у женщин по сравнению с мужчинами отмечается более высокая продукция провоспалительных цитокинов, и прежде всего ади-покинов — лептина и адипонектина [6, 23]. Полученные нами данные дают основание считать, что наблюдаемое изменение лейкоцитарного состава ПК у больных СД 2-го типа является следствием синер-
гизма, т.е., по-видимому, одновременно следствием двух факторов — самого заболевания и избыточной массы тела. Этот чрезвычайно важный вопрос требует специального изучения.
Выводы
У женщин, больных СД 2-го типа, осложненным ожирением, имеются более выраженные нарушения лейкоцитарного состава ПК и иммунофенотипа лимфоцитов по сравнению с женщинами, больными СД 2-го типа, без ожирения, что наводит на мысль о наличии у них более выраженного хронического системного и низкоградиентного воспаления и объясняет причину более тяжелого течения СД 2-го типа при ожирении.
Некоторое отличие ряда показателей иммунитета у женщин, больных СД 2-го типа, по сравнению с мужчинами, по-видимому, обусловлено половым различием в секреции адипокинов ЖТ.
Полученные данные дают основание предполагать, что эффективность используемых в настоящее время пероральных сахароснижающих средств во многом обусловлена их противовоспалительным действием.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов при подготовке статьи.
Список литературы
1. Вмкт, ультраструктура та функця моноцuтiв кровi у хворих на цукровий дiабет 2 типу i метаболiчний синдром / В.В. Афанасьева, К.П. Зак, 1.М. Кондрацька, Т.А. Семенова // Ендокринологiя. — 2009. — Т. 14, № 2. — С. 201-208.
2. Зак К.П. Иммунная интервенция в терапии сахарного диабета (аналитический обзор) / К.П. Зак, В.В. Попова // Диабет. Ожирение. Метаболический синдром. — 2015. — № 6(1У). — С. 31-44.
3. Зак К.П. Роль нейтрофильных лейкоцитов в патогенезе сахарного диабета 1-го типа у человека (аналитический обзор с включением собственных данных) / К.П. Зак // МИжнародний ендокринологiчний журнал. — 2016. — № 2(74). — С. 130-139.
4. Иммунитет у больных сахарным диабетом 2 типа с сопутствующим метаболическим синдромом/ожирением. Сообщение 1. Лейкоцитарный состав крови, иммуно-фенотип лимфоцитов и ультраструктура нейтрофилов / К.П. Зак, Б.Н. Маньковский, И.Н. Кондрацкая [и др.] // Ендокринолог1я. — 2013. — Т. 18, № 1. — С. 27-36.
5. Иммунитет у больных сахарным диабетом 2 типа с сопутствующим метаболическим синдромом. Сообщение 2. Роль адипонектинов (интерлейкина-6, фактора некроза опухолей альфа, лептина и адипонектина) / К.П. Зак, Б.Н. Маньковский, И.Н. Кондрацкая [и др.] // Ендокрино-логiя. — 2013. — Т. 18, № 2. — С. 26-32.
6. Сахарный диабет. Иммунитет. Цитокины / К.П. Зак, М.Д. Тронько, В.В. Попова, А.К. Бутенко. — К.: Книга-плюс, 2015. — 488 с.
7. Уровень циркулирующего лептина в крови у больных с метаболическим синдромом и сахарным диабетом 2-го типа / И.Н. Кондрацкая, К.П. Зак, Б.Н. Маньковский [и др.] // Укратський кардiологiчний журнал. — 2009. — № 2. — С. 30-33.
8. Abdominal obesity in type 1 and type 2 diabetes patients / R. Lichiardopol, L.D. Popescu, I. lonescu [et al.]// Diabetologia. — 2008. — Vol. 51, Suppl. 1. — P. S335.
9. Adipokines and risk of type 2 diabetes in older men / S.G. Wannamethee, G.D.O. Lowe, A. Rumbley [et al.] // Diabetes Care. — 2007. — Vol. 30, № 5. — P. 1200-1205.
10. Alterations in peripheral blood lymphocyte cytokine expression in obesity / R.W. O'Rourke, T. Kay, E.A. Lyle [et al.] // Clin. Exp. Immunol. — 2006. — Vol. 146, № 1. — P. 39-46.
11. Altered natural killer (NK) cell frequency and pheno-type in Latent Autoimmune Diabetes in Adults (LADA) prior to insulin deficiency / C. Akesson, K. Uvebrant, C. Oderup [et al.] // Clin. Experim. Immunol. — 2010. — Vol. 161, № 1. — P. 48-56.
12. Chang F.Y. Decreased cell-mediated immunity in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus / F.Y. Chang, M.F. Shaio // Diabetes Res. Clin. Pract. — 1995. — Vol. 28, № 2. — P. 137-146.
13. Dinarello C.A. Role of IL-1beta in type 2 diabetes / C.A. Dinarello, M.Y. Donath, T. Mandrup-Poulsen // Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. — 2010. — Vol. 17, № 4. — P. 314-321.
14. Do women exhibit greater differences in established and novel risk factors between diabetes and non-diabetes than men? The British Regional Heart Study and British Women's Heart Health Study/S.G. Wannamethee, O. Papacosta, D.A. Lawlor [et al.]// Diabetologia. — 2012. — Vol. 55, № 1. — P. 80-87.
15. Donath M.Y. Multiple benefits of targeting inflammation in the treatment of type 2 diabetes / M.Y. Donath // Diabetologia. — 2016. — Vol. 59, № 4. — P. 679-682.
16. Donath M.Y. Targeting inflammation in the treatment of type 2 diabetes: time to start / M.Y. Donath // Nat. Rev. Drug Discov. — 2014. — Vol. 13. — P. 465-476.
17. Fernández-Real J.M. Innate immunity, insulin resistance and type 2 diabetes / J.M. Fernández-Real, J.C. Pickup // Diabetologia. - 2012. - Vol. 55, № 2. - P. 273-278.
18. Ford E.S. Leukocyte count, erythrocyte sedimentation rate, and diabetes incidence in a national samples of US adults / E.S. Ford// Am. J. Epidemiol. - 2002. - Vol. 155, № 1. -P. 57-64.
19. Harwood H.J. The adipocyte as an endocrine organ in the regulation of metabolic homeostasis / H.J. Harwood // Neuropharmacology. — 2012. — Vol. 63, № 1. — P. 57-75.
20. Inflammation in obesity and diabetes: islet dysfunction and therapeutic opportunity / M.Y. Donath, É. Dalmas, N.S. Sauter, M. Boni-Schnetzler// Cell. Metab. - 2013. - Vol. 17, № 6. -P. 860-872.
21. Kolb H. An immune origin of type 2 diabetes? / H. Kolb, T. Mandrup-Poulsen // Diabetologia. - 2005. - Vol. 48, № 6. - P. 1038-1050.
22. Kondratska I. Plasma levels of leptin and adiponectin in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) with and without metabolic syndrome (MS) / I. Kondratska, K. Zak,
B. Mankovsky // J. Diabetes. - 2009. - Vol. 1, Suppl. 1. -A-172.
23. Leptin independently predicts diabetes in Swedish men / M. Lilja, O. Rolandsson, M. Norberg [et al.]// Diabetologia. — 2010. - Vol. 53, Suppl. 1. - A-394.
24. Marchetti P. Islet inflammation in type 2 diabetes / P. Marchetti // Diabetologia. - 2016. - Vol. 59, № 4. -P. 668-672.
25. Morbidly obese human subjects have increased peripheral blood CD4+ T cells with skewing toward a Treg- and Th2-dominated phenotype/K. Van der Weerd, W.A. Dik, B. Schrijver [et al]// Diabetes. - 2012. - Vol. 61, № 2. - P. 401-408.
26. Natural killer cells from children with type 1 diabetes have defects in NKG2D-dependent function and signaling / H. Qin, I.-F. Lee, C. Panagiotopoulos [et al.] // Diabetes. — 2011. — Vol. 60, № 3. - P. 857-866.
27. Obesity and immune cell counts in women / J. Womack, P.C. Tien, J. Feldman [etal.]//Metabolism. - 2007. - Vol. 56, № 7. - P. 998-1004.
28. Obesity is associated with poorer clinical outcomes following insulin initiation for patients with type 2 diabetes / S. Kumar, B. Wilson, L. Watson, J. Alsop // Diabetologia. — 2009. - Vol. 52, Suppl. 1.
29. Pro-atherogenic alterations in T-lymphocyte subpopulations related to acute hyperglycaemia in type 2 diabetic patients/ M. Dworacka, H. Winiarska, M. Borowska [et al.]// Circ. J. - 2007. - Vol. 71, № 6. - P. 962-967.
30. The ghrelin O-acyltransferase-ghrelin system reduces TNF-a-induced apoptosis and autophagy in human visceral adipocytes / A. Rodríguez, J. Gómez-Ambrosi, V. Catalán [et al.] // Diabetologia. - 2012. - Vol. 55, № 11. - P. 3038-3050.
31. The implication of obesity and central fat on markers of chronic inflammation: The ATTICA study / D.B. Panagiotakos,
C. Pitsavos, M. Yannakoulia [et al.] // Atherosclerosis. — 2005. - Vol. 183, № 2. - P. 308-315.
32. Turer A.T. Adiponectin: mechanistic insights and clinical implications / A.T. Turer, P.E. Scherer // Diabetologia. — 2012. - Vol. 55, № 9. - P. 2319-2326.
OTpuMaHO 15.07.16 ■
Саенко Я.А., ЗакК.П., ПоповаВ.В., Сем'юнова Т.А.
ДУ«Нститут ендокринолоп! та обмнуречовин ¡м. В.П. Комсаренка НАМН Украни», м. Кив, Украна
ЛЕЙКОЦИТАРНИЙ СКЛАД ТА iМУНОФЕНОТИП ^МФОЦИШ KPOBi В ЖШОК, ХВОРИХ НА ЦУКРОВИЙ ДiАБЕТ 2-го ТИПУ, З ОЖИИННЯМ
Резюме. Вступ. 1снуе думка, що змiни деяких показникiв природного та адаптивного шуттету у хворих на цукровий дабет (ЦД) 2-го типу з надм1рною масою тiла зумовлен1 ожиршням, що його су-проводжуе. Жирова тканина е потужним секреторним органом, що продукуе чимало цитоюнгв, особливо адппоюнгв, що вщлрають ключову роль у р1зних iмунних реакцiях. Вiдомо, що ршень головних адипокiнiв, що регулюють жирову тканину, у периферичнтй кров1 (ПК) людини визначаеться з урахуванням статевого диморф1зму. Мета доЫдження — з'ясування питання про те, якою мрою змъ ни лейкоцитарного складу та iмунофенотипу лiмфоцитiв кров1, що спостертаються при ЦД 2-го типу в жнок, обумовлен1 ожирiнням, з огляду на значн1 статев1 вщмшносп в секрецп низки адипокiнiв, яю беруть участь у контролi функцii iмунноi системи. Матерiалu та методи. Обстежено 24 жнки з вперше виявленим ЦД 2-го типу вжом вщ 40 до 65 рокiв, яю були розподiленi на двi пщгрупи: першу — з щдексом маси тиа (1МТ) < 25 кг/м2 ^угу—з 1МТ > 30 кг/м2. Загальну ыльюсть лейкоцитiв у ПК пiдраховували за допомогою гематолопчного аналiзатора. Лейкоцитарну формулу визначали в мазках ПК на 200 клгтин, що забарвленi за Папенгеймом. По-верхневi антигени л1мфоципв проти мембранних антигенiв: CD3, CD4, CD8, CD20 i CD56 — штили моноклональними антитiлами, маркованими флуоресцеш^зотющанатом або фгкоеритрином. Результаты. Щдвищення загально'1 кiлькостi лейкоцитiв у ПК пащен-т1в з ожиршням було значншим, нiж у хворих iз нормальним 1МТ, тобто 23,1 % проти 14,5 % (р < 0,05). Найвищий лейкоцитоз спо-стертався у хворих на СД 2-го типу з ожиршням i у середньому до-
сягав 7,61 х 109/л. У подгрут здорових i хворих жгнок iз нормальною масою тша абсолютна кiлькiсть сегментоядерних нейтрофшв у ПК у пацiенток iз ЦД 2-го типу вiдповiдно до тако'1 в нормоглiкемiчних жгнок була збiльшена в середньому на 20,3 %, а в огрядних жгнок таке спгввщношення становило 29,1 % (р < 0,05). У бшьшосп жгнок iз вперше виявленим ЦД 2-го типу та нормальними показниками величини маси тiла спостерталося тшьки незначне та статистич-но невiроIiдне пiдвищення абсолютно'1 кiлькостi CD4+ та CD8+ Т-клшн. Абсолютна кiлькiсть моноципв у ПК у цих щдгруппах була ще биьш збиьшеною вщповщно в середньому на 59,2 % у ху-дих (р < 0,05) i на 64 % в огрядних жшок (р < 0,05). У бшьшосп хворих на ЦД 2-го типу з ожиршням вщтчалося статистично вг-рогщне щдвищення абсолютно'1 ылькосп природних клпин-ылергв (CD56+-клiтини) у ПК. Висновок. У жшок, хворих на ЦД 2-го типу, з ожиршням спостертаються биьш значт змгни в лейкоцитарному склад (збшьшення числа нейтрофiлiв i моноцит1в) та 1мунофеноти-пi лiмфоцитiв (збиьшення числа CD4+ Т-клiтин i CD56+-клiтин) кров^ нiж у жгнок, яю страждають вiд ЦД 2-го типу, iз нормальним 1МТ, що вказуе на биьш виражене у них хрошчне низькоградiентне запалення i пояснюе причину бшьш тяжкого перебну ЦД 2-го типу при ожиршт. Отриманi результати сп1впадають з останнiми дани-ми про те, що ефективнiсть деяких пероральних цукрознижуваль-них засоб1в, зокрема метформ1ну, багато в чому зумовлена '1х проти-запальною дею.
кп<>чов1 слова: цукровий дабет 2-го типу, ожиргння, iмунiтет, лейкоцитарний склад кров^ 1мунофенотип л1мфоцит1в.
Saienko Ya.A., ZakK.P., Popova V.V., Semionova T.A.
State Institution «Institute of Endocrinology and Metabolism named after V.P. Komisarenko of the National Academy of Medical Sciences of Ukraine», Kyiv, Ukraine
LEUKOCYTE COMPOSITION AND IMMUNOPHENOTYPE OF THE BLOOD LYMPHOCYTES IN WOMEN WITH TYPE 2 DIABETES MELLITUS AND OBESITY
Summary. Background. There is an opinion that changes in some indicators of natural and adaptive immunity in patients with type 2 diabetes mellitus (DM) and overweight are caused by concomitant obesity, as the adipose tissue is the potent secretory organ that produces many cy-tokines, particularly adipokines playing a key role in various immune responses. It is known that the level ofthe main adipokines, which regulate the adipose tissue, in the human peripheral blood (PB) is determined on the basis ofhuman sexual dimorphism. Purpose of the study — to elucidate the question ofthe extent, to which the observed changes in the leukocyte composition and lymphocyte immunophenotype in type 2 DM in women are determined by obesity, due to the significant sex differences in the secretion of some adipokines involved in controlling the function of the immune system. Materials and methods. The study included 24 women aged 40 to 65 years with newly diagnosed type 2 DM, who were divided into 2 subgroups: the first one — with a body mass index (BMI) < 25 kg/m2 and the second one — with BMI > 30 kg/m2. The total number ofleukocytes in the PB was counted using hematology analyzer. Leucocyte vomposition was determined in smears of the PB per 200 cells stained by Pappenheim. Surface antigens of lymphocytes against membrane antigens: CD3, CD4, CD8, CD20 and CD56 — were labelled by monoclonal antibodies marked with fluorescein isothiocyanate or phy-coerythrin. Results. The increase in the total number ofleukocytes in the PB of obese patients was more significant than in patients with a normal BMI, i.e. 23.1 versus 14.5 % (p < 0.05). The highest leukocytosis was
observed in patients with DM type 2 and obesity, reached 7.61 x 109/L on the average. In the subgroup of healthy women and female patients with normal body mass, the absolute number of segmented neutrophils in the PB of patients with DM type 2 in relation to that of normoglyce-mic women had increased on average by 20.3 %, while in obese women this ratio was 29.1 % (p < 0.05). The absolute number of monocytes in the PB in these subgroups was increased by an average of 59.2 % in lean (p < 0.05) and 64 % in obese (p < 0.05). The majority of women with newly diagnosed DM type 2 and normal values ofbody weight have only a slight and statistically non-significant increase in the absolute number of CD4+T- and CD8+T-cells. The majority ofpatients with type 2 DM and obesity showed a statistically significant increase in the absolute number of natural killer cells (CD56+-cells) in the PB. Conclusions. In female patients with DM type 2 and obesity, there is a more significant change in the composition of leukocytes (increased number of neutrophils and monocytes) and immunophenotype ofblood lymphocytes (increasing the number ofCD4+T- and CD56+-cells) than in women with DM 2 type and a normal BMI, which indicates a more significant low-grade chronic inflammation in them and explains the cause of a more severe course of DM type 2 in obesity. The findings are consistent with the recent data where efficiency ofsome oral hypoglycemic drugs, such as metformin, is largely due to their anti-inflammatory action.
Key words: type 2 diabetes mellitus, obesity, immunity, leukocyte composition of the blood, lymphocyte immunophenotype.
