Лечение острого мастита у коров с применением бактериофагов Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

8. Hernandez-Divers S. Hernandez-Divers S.H. Diagnostic imaging of reptiles. In Practice, July / August 2001. - Р. 370-390.

9. Silverman S. Diagnostic imaging in Reptile / S. Silverman, D.R. Mader // Medicine and Surgery, 2nd Edition. Saunders Elsevier, St Louis (MI) 2006. -Р. 471-489.

10. Юдина НА. Бородатая агама / Н.А. Юдина. - Екатеринбург : Биопрактика, 2010. - 142 с.

11. A review of diagnostic imaging of snakes and lizards / T. Banzato [i dr.] // Veterinary Record. -2013. - 173 - P. 43-49.

12. Wyneken J. Computed tomography and magnetic resonance imaging anatomy of reptiles / J. Wyneken // In: Douglas R. Mader. Reptile Medicine and Surgery, 2006. - Elsevier Inc. - Р. 1088-1096.

Маркова Марина Викторовна, канд. вет. наук, доцент, Омский ГАУ, т^.тагкоуа@ош-gau.org; Копылович Марина Владимировна, канд. вет. наук, доцент, Омский ГАУ, т^.ко[email protected]; Мелоненко Мария Витальевна, студент, Омский ГАУ, т^.те1опеп[email protected].

8. Hernandez-Divers S. Hernandez-Divers S.H. Diagnostic imaging of reptiles. In Practice, July / August 2001. - P. 370-390.

9. Silverman S. Diagnostic imaging in Reptile / S. Silverman, D.R. Mader // Medicine and Surgery, 2nd Edition. Saunders Elsevier, St Louis (MI) 2006. -P. 471-489.

10. Yudina NA. Borodataya agama / N.A. Yudi-na. - Ekaterinburg : Biopraktika, 2010. - 142 s.

11. A review of diagnostic imaging of snakes and lizards / T. Banzato [i dr.] // Veterinary Record. -2013. - 173 - P. 43-49.

12. Wyneken ./.Computed tomography and magnetic resonance imaging anatomy of reptiles / J. Wyneken // In: Douglas R. Mader. Reptile Medicine and Surgery, 2006. - Elsevier Inc. - P. 10881096.

Markova Marina Viktorovna, Cand. Vet. Sci., Docent, Omsk SAU, [email protected]; Kop-ylovich Marina Vladimirovna, Cand. Vet. Sci., Docent, Omsk SAU, [email protected]; Melo-nenko Maria Vitalievna, student, Omsk SAU, [email protected].

УДК 579.62

Р.А. ТАЛИПОВ, Т.И. ЛОРЕНГЕЛЬ, КВ. ПОТИЙ

Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, г. Омск

ЛЕЧЕНИЕ ОСТРОГО МАСТИТА У КОРОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ БАКТЕРИОФАГОВ

Представлены сведения о технологии получения фаголизата и его применении при лечении больных маститом коров. Цель исследования - изучить качественный и количественный состав микрофлоры молока от коров при остром мастите и выделить эффективный специфический бактериофаг для лечения больных животных. При изучении роли условно-патогенной микрофлоры в этиопатогенезе маститов у коров черно-пестрой породы, больных острой формой мастита, проведено комплексное микробиологическое исследование проб молока и экссудата молочной железы. При микробиологическом исследовании 235 проб экссудата молочной железы больных коров установлено, что в 97% случаев фактором этиологии данной патологии является условно-патогенная микрофлора, которая отмечается как в виде монокультуры, так и в смешанной форме. Только в 2% проб микроорганизмы не выделены. В микробном составе смешанные формы микроорганизмов постоянно преобладали над монокультурами и составляли соответственно 88,96 и 11,04%, при этом ассоциации микроорганизмов, как правило, состояли из двух, реже трех видов микроорганизмов. Условно-патогенная микрофлора выделена из 4,56-6,28% исследованных проб. Ведущую роль среди монокультур играли представители двух родов Staphylococcus и Streptococcus. Среди рода Staphylococcus наибольший удельный вес принадлежит Staph. aureus (47,82%) и коагулезоотрицательному эпидермальному стафилококку - Staph. epidaermidis (16,2%). Полученные сведения являются результатом анализа собственных исследований и литературы по применению бактериофагов при терапии острого клинического мастита у коров. Установлено, что бактериофаги при соче-

© Талипов Р.А., Лоренгель Т.И., Потий К.В., 2018

танном применении с антибиотиками эффективны в отношении выделенной микрофлоры при данной патологии.

Ключевые слова: бактериофаги, фаголизат, антибиотики, резистентность, мастит.

Введение

Бактериальная контаминация молочной железы коров на сегодняшний день является наиболее актуальной проблемой. Широкое и не всегда рациональное применение различных препаратов антимикробного действия сопровождается нарушением биологического равновесия микроорганизмов в эволюционно устойчивых экологических системах микробных ассоциаций, что способствует появлению устойчивых к антибиотикам штаммов, изменяющих микробный состав молочной железы коров [1; 2; 11].

Фармакологическая индустрия постоянно направляет свои усилия на разработку новых препаратов, их комбинаций. Как правило, препараты являются токсичными и вредными для человека [3]. После термической обработки продуктов животноводства, используемых в пищу, антибиотики, содержащиеся в них, приобретают свойства сильнейших аллергенов.

Цель исследования - изучить качественный и количественный состав микрофлоры молока от коров при остром мастите и выделить эффективный специфический бактериофаг для лечения больных животных.

Материалы и методы

Бактериологические исследования с целью выделения возбудителей и подбора гомологичного бактериофага были проведены на базе БУ «Омская областная ветеринарная лаборатория». Выделение вирулентного бактериофага, комплементарного штамму микроорганизма и играющего этиологическую роль в развитии инфекционного процесса, проводили из проб сточных вод хозяйства.

Для выделения бактериофага исследуемый материал доставляли в лабораторию в течение 2-3 ч, затем готовили ряд последовательных разведений от 101 до 1010. Из приготовленных разведений производили посевы на питательные среды для культивирования различных видов микроорганизмов. При этом использовали следующие питальные среды: скошенный мясо-пептонный агар (МПА); солевой агар; энтерококкагар; агар Эндо; агар Левина и Плоскирева; агар Сабуро. Все посевы (за исключением посевов на агаре Сабуро) культивировали при 37°С в течение 24 ч и оставляли еще на 24 ч при комнатной температуре. Посевы на агаре Сабуро культивировали при 27°С в течение 5 сут с ежедневным контролем на наличие роста. Количество живых микробных клеток в 1 мл молока для каждого вида микроорганизмов рассчитывали по формуле

М = 10 • N • 10п,

где М - число живых микробных клеток в 1 мл молока; N - количество колонеобразу-ющих едениц; 10 - коэффициент перерасчета при высеве 0,1 мл бактериальной взвеси; 10п - разведение, из которого выделен данный микроорганизм.

Родовую и видовую дифференциацию выделенных микроорганизмов проводили согласно определителю бактерий Берджи (1997) и определителю зоопатогенных микроорганизмов М.А. Сидорова с соавт. (1995). Гемолитические свойства выделенных микроорганизмов определяли на КА с добавлением 5% эритроцитов барана. Патоген-ность изучали путем постановки биопробы массой 16 ± 2 г на белых мышах, которым вводили внутрибрюшинно взвесь выделенных культур в дозе 0,5 мл с концентрацией 0,25 • 109; 0,5 • 109 и 1 • 109 м.т./мл. Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 0,5 мл стерильного 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Клиническое наблюдение за животными осуществляли в течение 10 сут. Работу с лабораторными животными проводили согласно «Правилам работы с использованием экспериментальных животных» [8].

Лечение крупного рогатого скота черно-пестрой породы с острым клиническим маститом (n = 60) было проведено в молочном хозяйстве Омской области. Коровы были поделены на 3 группы. С лечебной целью в первой опытной группе животных применяли суспензию бактериофага штамма Phagum Staphylococcus aureus RA-1. Данный штамм выделен стандартным методом - путем высева образцов стоков хозяйства в суспензию бактериальной культуры Staphylococcus aureus с последующим выделением единичных пятен лизиса на агаризованной поверхности. Препарат вводили 3 раза в сутки, по 8,0 мл, в течение 20 дней, интерцистернально.

Во второй опытной группе животных применяли «Мастиет Форте» производства Intervet International B.V., предварительно определив чувствительность выделенной микрофлоры к данному препарату, согласно инструкции, в течение 20 дней. Препарат вводили интерцистернально. После введения препаратов производили легкий массаж пораженных долей вымени.

Лечение коров с маститом в третьей опытной группе проводили по схеме соче-танного применения бактериофага штамма Phagum Staphylococcus aureus RA-1 и препарата «Мастиет Форте», в течение 20 дней.

Контроль выздоровления осуществляли, используя препарат «Кенотест» (CID LINES) и результаты бактериологическх посевов молока.

Результаты и их обсуждение

При изучение роли условно-патогенной микрофлоры в этиопатогенезе маститов у коров черно-пестрой породы, больных острой формой мастита, проведено комплексное микробиологическое исследование проб молока и экссудата молочной железы.

При микробиологическом исследовании 235 проб экссудата молочной железы больных коров установлено, что в микробном составе смешанные формы микроорганизмов постоянно преобладали над монокультурами и составляли соответственно 88,96 и 11,04%, при этом ассоциации микроорганизмов, как правило, состояли из двух, реже трех видов микроорганизмов.

■ Ассоциации ■ Монокультуры

Рис. 1. Микрофлора молока и экссудата молочной железы коров, больных острой клинической формой мастита

Условно-патогенная микрофлора выделена из 4,56-6,28% исследованных проб. Ведущее место среди монокультур занимали представители двух родов - Staphylococcus и Streptococcus. Среди рода Staphylococcus наибольший удельный вес принадлежит Staph. aureus (47,82%) и коагулезоотрицательному эпидермальному стафилококку -Staph. epidaermidis (16,2%).

Второе место по частоте выделения микроорганизмов из экссудата молочной железы больных маститом в острой форме коров занимали стрептококки (Str. agalactiae -

12,6%). Стрептококки (Str. agalactiae) составляли 2,38% от общего числа исследованных проб секрета молочной железы коров с острой формой мастита.

■ Staph. aureus Staph. epidaermidis

■ Str. agalactiae

■ Escherichia coli

■ Ps. auruginosae

■ P. vulgaris

Рис. 2. Представители микрофлоры молока коров, больных маститом в острой форме

Микроорганизмы рода Escherichia (E. coli), Pseudomonas (Ps. auruginosae) и Proteus (P. vulgaris) изолированы в 9,8; 7,98 и 5,6% случаев от общего числа исследованных проб соответственно. При исследовании 182 проб молока, полученных из клинически здоровых долей молочной железы коров, выделена схожая условно-патогенная микрофлора.

Гемолитической активностью обладали пять изолированных культур, у которых была также определена патогенность при постановке биопробы. Так, культуры P. vulgaris, Str. agalactiae, E. coli и Ps. auruginosae были патогенны для белых мышей в дозе 0,5 • 109 м.к./мл; Staph. aureus - в дозе 0,25 м.к./мл, вызывая гибель более 50% зараженных животных.

При заражении культурой Staph. epidaermidis в дозе 0,5 • 109 м.т./мл гибель лабораторных животных не регистрировали (табл. 1).

Таблица 1

Патогенность культур микроорганизмов, выделенных из молочной железы больных коров

№ п/п Культура микроорганизмов Доза Данные

заражения, x109 м.к. Выжило Пало Летальность, %

1 Staph. aureus 0,5 - 6 100

0,25 3 3 50

2 Staph. epidaermidis 1,0 4 2 33,3

0,5 - - -

3 Str. agalactiae 1,0 1 5 83,3

0,5 3 3 50

4 E. coli 1,0 - 6 100

0,5 3 3 50

5 Ps. auruginosae 1,0 - 6 100

0,5 3 3 50

6 P. vulgaris 1,0 - 6 100

0,5 3 3 50

В группе мышей, зараженных ß-гемолитической культурой E. coli в дозе 0,5 • 109 м.к./мл, на 5-6-е сутки погибло три особи (50%), а при заражении 1 • 109 м.к./мл -все в течение первых сут. При бактериологическом посеве на МПА из печени, почек, селезенки и брыжеечных лимфоузлов животных была выделена исходная культура E. coli.

Пять из шести мышей, зараженных Str. agalactiae в дозе 1 • 109 м.к./мл, погибли в течение двух суток. При заражении в дозе 0,5 • 109 м.к./мл регистрировали гибель трех животных в течение 6-7 сут. При посеве из паренхиматозных органов и брыжеечных лимфатических узлов мышей также была выделена культура Str. agalactiae.

В группе животных, зараженных культурой Staph. aureus в дозе 0,25 • 109 м.к./мл, погибло три особи, а в дозе 0,5 • 109 м.к./мл - пало шесть мышей через восемь суток. При посеве из паренхиматозных органов выделили исходную культуру Staph. aureus.

В сравнении с данными, полученными при исследовании проб до начала лечения, установили, что после проведенной терапии состав микрофлоры молока претерпел существенные изменения. В первой опытной группе, где животные получали терапию препаратом бактериофага, в пробах не регистрировали выделение Staph. aureus. Всего было выделено 5 видов микроорганизмов, а именно Staph. epidaermidis (32,7%), Str. agalactiae (27,3%), E. coli (16,5%), Ps. auruginosae (14,1%), P. vulgaris (9,4%).

Во второй опытной группе, где проводили лечение мастита с применением «Ма-стиет Форте», в пробах секрета молочной железы выделяли Staph. aureus (58,2%) и Staph. epidaermidis (41,8%).

В третьей опытной группе на фоне применения суспензии бактериофага штамма Phagum Staphylococcus aureus RA-1 и «Мастиет Форте» у всех больных животных были выделены культуры микроорганизмов - Staph. epidaermidis.

Таблица 2

Микрофлора молока коров с острым маститом при сочетанном лечении («Мастиет Форте» и бактериофаги штамма Phagum Staphylococcus aureus RA-1)

До лечения 3-и сут 7-е сут 20-е сут

Доля

Вид микроорганизма отдельных видов в микрофлоре (в % от ОМЧ) lg КОЕ/мл lg КОЕ/мл lg КОЕ/мл lg КОЕ/мл

Staph. aureus 47,82 9,44 ± 6,80 5,37 ± 3,35 - -

Staph. epidaermidis 16,2 4,65 ± 3,24 3,6 ± 3,24 5,47 ± 3,99 5,47 ± 3,99

Str. agalactiae 12,6 2,45 ± 1,52 2,45 ± 1,52 - -

E. coli 9,8 7,47 ± 5,40 2,9 ± 3,60 5,47 ± 3,99 -

Ps. auruginosae 7,98 6,93 ± 5,01 2,85 ± 3,32 5,39 ± 3,93 -

P. vulgaris 5,6 6,54 ± 4,48 2,71 ± 2,71 4,30 ± 3,15 -

Ср. кол-во видов

микроорганизмов, выделенных из одной 5,5 ± 0,5 5,0 3,5 ± 0,5 1,0

пробы

ОМЧ:

КОЕ/мл 3,3 • 109 3,48 • 106 3,5 • 106 1,08 • 107

lg КОЕ/мл 9,51 ± 6,74 6,53 ± 4,40 6,54 ± 4,60 7,03 ± 4,77

Заключение

Элиминация патогенных и условно-патогенных возбудителей (Staph. aureus Str. agalactiae, E. coli, Ps. auruginosae, P. vulgaris) из микрофлоры молока и экссудата молочной железы под воздействием комплексного применения препаратов проходила в среднем на 11-е сутки.

Полученные микробиологические показатели свидетельствуют о положительном терапевтическом эффекте сочетанного применения антибиотикотерапии с бактериофагом.

R.A. Talipov, T.I. Lohrengel, K. V. Potiy

Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, city of Omsk

Treatment of acute mastitis with the use of bacteriophages in cows

The article presents information about the technology of phage lysate and its application in the treatment of mastitis in cows. The aim of the study was to study the qualitative and quantitative composition of milk microflora from cows with acute mastitis and to identify an effective specific bacteriophage for the treatment of sick animals. In the study of the role of conditionally pathogenic microflora in the etiopathogenesis of mastitis in cows of black-and-white breed, a comprehensive microbiological study of milk samples and exudates of udder of the cow with acute form of mastitis was carried out. There was found that in 98% of cases the etiological factor of this pathology is a non-specific opportunistic microflora in microbiological study of 235 samples of udder secretion of sick cows, which is released both in the form of monoculture and mixed form. Only in 2% of the samples were not identified microorganisms. In microbial composition mixed forms of microorganisms constantly prevailed over monocultures and were, respectively, 88.96 and 11.04%, while associations of microorganisms, as a rule, consisted of two, less often than three species of microorganisms. Opportunistic microflora was isolated in 4.56-6.28% of the studied samples. The dominant position among isolated monocultures was occupied by the representatives of the two genera Staphylococcus and Streptococcus. Staphylococcus has the highest proportion. aureus (47.82%) and coagulation features epidermal Staphylococcus - Staph. epidaermidis (16.2%) among the genus Staphylococcus. The obtained data were the result of the analysis of our own study and literature data on the use of bacteriophages in the treatment of acute clinical mastitis in cows. There was found that the bacteriophages combined with antibiotics are effective against the isolated microflora of this pathology.

Keywords: bacteriophages, mastitis, phagolysate, treatment.

Список литературы

1. Багманов М.А. Болезни репродуктивных органов и молочной железы у сельскохозяйственных животных : метод. пособие для студентов факультета ветеринарной медицины / М.А. Багманов. - Ульяновск, 2001. - С. 47-56.

2. Камалутдинов Ф.Ю. Профилактика и лечение диареи новорожденных телят поливалентным бактериофагом : дис. ... канд. вет. наук / Ф.Ю. Камалутдинов. - М., 1992. - С. 90.

3. Кононенко И.Д. Сравнительная оценка методов диагностики скрытых маститов / И.Д. Кононенко // Вопросы этиопатогенеза, лечения и профилактики незаразных болезней крупнорогатого скота в условиях Поволжья : сб. науч. тр. ССХИ. -Саратов, 1986. - С. 55-58.

4. Модин А.Н. Профилактика мастита коров в сухостойный период / А.Н. Модин, Н.Т. Климов, Л.И. Ефанова // Зоотехния. - 2010. - № 10. -С. 27-28.

5. Никульшина Ю.Б. Комплексный метод лечения различных форм мастита коров : дис. ... канд. вет. наук / Ю.Б. Никульшина. - Саратов, 2004. - С. 168.

6. Мастит у коров (профилактика и терапия) / В.А. Париков [и др.] // Ветеринария. - 2000. -№ 11. - С. 34-37.

References

1. Bagmanov M.A. Bolezni reproduktivnyh or-ganov i molochnoj zhelezy u sel'skohozyajstvennyh zhivotnyh : metod. posobie dlya studentov fakul'teta veterinarnoj mediciny / M.A. Bagmanov. -Ul'yanovsk, 2001. - S. 47-56.

2. Kamalutdinov F.Yu. Profilaktika i lechenie diarei novorozhdennyh telyat polivalentnym bakterio-fagom : dis. ... k.v.n. / F.Yu. Kamalutdinov. - M., 1992. - S. 90.

3. Kononenko I.D. Sravnitel'naya ocenka me-todov diagnostiki skrytyh mastitov / I.D. Kononenko // Voprosy ehtiopatogeneza, lecheniya i profilaktiki nezaraznyh boleznej krupnorogatogo skota v usloviyah Povolzh'ya : sb. nauch. tr. SSKHI. - Saratov, 1986. -S. 55-58.

4. Modin A.N. Profilaktika mastita korov v suhostojnyj period / A.N. Modin, N.T. Klimov, L.I. Efa-nova // Zootekhniya. - 2010. - № 10. - S. 27-28.

5. Nikul'shina Yu.B. Kompleksnyj metod lecheniya razlichnyh form mastita korov : dis. ... k.v.n. / Yu.B. Nikul'shina - Saratov, 2004. - S. 168.

6. Mastit u korov (profilaktika i terapiya) / V.A. Parikov [i dr.] // Veterinariya. - 2000. - № 11. -S. 34-37.

7. Лечение сальмонеллеза цыплят с применением бактериофагов и нано серебра / В.И. Плешакова [и др.] // Птицеводство. - 2017. - № 4. -С. 43-49.

8. Ruegg P.L. The relationship between antibiotic residue violations 1 somatic cell counts in Wis-consing dary herds / P.L. Ruegg, T.J. Tabone // Journal Dairy Sci. - 2000. - № 83(12). - P. 2805-2809.

9. Clinical mastitis in dairy cattle in Ontario: frequency of occurrence and bacteriological isolates / J.M. Sargeant [et al.] // Canadian Vet. J. - 1998. -№ 39(1). - P. 33-38.

10. Wenz J.R. Bacteremia associated with naturally occurring acute coliform mastitis in dairy cows / J.R. Wenz, G.B. Barington // Journal American Veterinary Medicine assoc. - 2001. - № 219(7). -P. 976-979.

11. Combined effect of ampicillin, Colistin and dexamethasone administered intramuscularly to dairy cows on the clinico-pathological course of E.coli-endotoxin mastitis / G. Ziv [et. al.] // Vet. Research. - 1998. - № 29(1). - P. 89-98.

Талипов Рахат Аманжолович - аспирант, Омский ГАУ, ra.talipov36.06.01@ omgau.org; Ло-ренгель Татьяна Иосифовна - канд. вет. наук, Омский ГАУ, [email protected]; Потий Константин Витальевич - практикующий ветеринарный врач, [email protected].

7. Lechenie sal'monelleza cyplyat s primene-niem bakteriofagov i nano serebra / V.I. Pleshakova [i dr.] // Pticevodstvo. - 2017. - № 4. - S. 43-49.

8. Ruegg P.L. The relationship between antibiotic residue violations 1 somatic cell counts in Wis-consing dary herds / P.L. Ruegg, T.J. Tabone // Journal Dairy Sci. - 2000. - № 83(12). - P. 2805-2809.

9. Clinical mastitis in dairy cattle in Ontario: frequency of occurrence and bacteriological isolates / J.M. Sargeant [et al.] // Canadian Vet. J. - 1998. -№ 39(1). - P. 33-38.

10. Wenz J.R. Bacteremia associated with naturally occurring acute coliform mastitis in dairy cows / J.R. Wenz, G.B. Barington // Journal American Veterinary Medicine assoc. - 2001. - № 219(7). -P. 976-979.

11. Combined effect of ampicillin, Colistin and dexamethasone administered intramuscularly to dairy cows on the clinico-pathological course of E.coli-endotoxin mastitis / G. Ziv [et. al.] // Vet. Research. - 1998. - № 29(1). - P. 89-98.

Talipov Rahat Amanzholovich - Postgraduate Student, Omsk SAU, ra.talipov36.06.01 @omgau.org; Lorengel Tatyana Iosifovna. - Cand. of Vet. Sci., Omsk SAU [email protected]; Potiy Konstantin Vitalievich - practicing veterinarian, konstantin-potij@ yandex.ru.

УДК 619:611.83.617-089.578.16:636.8

ОН. ШУШАКОВА, О.Р. СКУБКО, М.А. БРИТУН, А.В. ИВАНЧЕНКО

Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина, г. Омск

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРОМЕЖНОСТНОГО ДОСТУПА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПАРАЦЕРВИКАЛЬНОЙ БЛОКАДЫ У СОБАК И КОШЕК ПРИ ГИПЕРПЛАЗИИ СЛИЗИСТОЙ ВЛАГАЛИЩА

В результате проведенных морфологических исследований установлено, что источниками иннервации влагалища собак и кошек служат каудальный брыжеечный узел, тазовое сплетение и срамной нерв. Гистоструктурно околоорганные нервы тела, шейки матки и влагалища собаки и кошки представлены пучками миелинизированных нервных волокон, значительным количеством мультиполярных нервных клеток с тенденцией к модульной агрегации. Эти образования покрыты капсулой, сформированной из коллагеновых волокон окружающей волокнистой соединительной ткани. Анатомо-топографической особенностью данных нервов служит их локализация на медиальной поверхности висцерального листка тазовой фасции. Анализ морфологии внебрюшинного отдела тазового сплетения домашних собаки и кошки свидетельствует: при использовании промежностного доступа для парацервикальной блокады

© Шушакова О.Н., Скубко О.Р., Бритун М.А., Иванченко А.В., 2018