CC BY
90
УДК 616.981.71: 616.988.25-002.954.2-07
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КЛЕЩЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ С ПРИРОДНОЙ ОЧАГОВОСТЬЮ (КЛЕЩЕВОЙ РИККЕТСИОЗ,
ИКСОДОВЫИ КЛЕЩЕВОЙ БОРРЕЛИОЗ)
1Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул
2 «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва Бесхлебова О.В.1 , Гранитов В.М.1, Дедков В.Г.2
В статье представлена оценка диагностической эффективности двух современных лабораторных методов диагностики клещевых природно-очаговых инфекций - серологического и молекулярно-биологиче-ского. Сравнительное изучение информативности ИФА и ПЦР в диагностике клещевого риккетсиоза (КР) показало, что с наибольшей частотой (90,0%) подтверждало клинический диагноз КР серологическое исследование (ИФА). Диагностическая значимость ПЦР при выявлении ДНК риккетсий в кожных биоптатах составила 81,5%. Эффективность этого метода при выявлении ДНК риккетсий в сыворотке крови - 11,8%, в цельной крови - 5,5%. Метод иммуночипов для диагностики иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ) показывает максимальную диагностическую ценность на третьей неделе болезни. Его диагностическую эффективность на 30,6% повышает исследование парных сывороток, забранных с интервалом в 7-10 дней. Исследование методом ПЦР сывороток и цельной крови от больных имеет низкую диагностическую значимость и не может быть рекомендовано в качестве рутинного метода диагностики ИКБ.
Ключевые слова: клещевой риккетсиоз, иксодовый клещевой боррелиоз, иммуноферментный анализ, полимеразная цепная реакция, иммуночип.
The article presents an assessment of diagnostic efficiency of two modern methods of laboratory diagnostics of tick-borne infections - serological and molecular biological. A comparative study of information content of ELISA and PCR in diagnostics of tick-borne ricketsiosis (TBR) showed that serological method had the highest frequency (90,0 %) in confirming of clinical diagnosis TBR. The diagnostic value of PCR in the detection of DNA of Rickettsia in skin biopsy specimens was 81,5%. The effectiveness of this method in the detection of DNA of Rickettsia in serum was 11,8%, in whole blood - 5,5%. Immunochip method for the diagnosis of ixodic tick-borne borreliosis showed the maximum diagnostic value on the third week of the disease. The study of paired sera, taken with an interval of 7-10 days, increased its diagnostic efficiency by 30,6%. The study by PCR, using serum and blood from patients, had a low diagnostic value and cannot be recommended as a routine method for diagnosis of ixodic tick-borne borreliosis.
Key words: tick-borne rickettsiosis, ixodics tick-borne borreliosis, enzyme-linked immunosorbent assay, polimerase chain reaction, an immunochip.
Актуальность
С начала XXI века на территории различных регионов Российской Федерации отмечается высокий уровень заболеваемости клещевыми инфекциями с природной очаговостью [1, 2].
По данным Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека за 2016 год, в России в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями доминирует иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) с уровнем заболеваемости 4,18 на 100 тыс. населения. Далее клещевой энцефалит (КЭ) и сибирский клещевой тиф (СКТ) - 1,39 и 1,06 на 100 тыс. населения соответственно. Уровень заболеваемости «новыми» клещевыми инфекциями на территории РФ невысок (грануло-цитарный анаплазмоз человека (ГАЧ) - 0,04, моноцитарный эрлихиоз человека (МЭЧ) - 0,01 на 100 тыс. населения).
К настоящему времени более 50 субъектов России являются эндемичными по ряду клещевых инфекций [3]. Наличие регионарных особенностей распространенности и клинической картины этих заболеваний диктует необходимость их комплексного изучения в каждом из субъектов России. Несмотря на то, что имеется ряд работ, отражающих клиническую картину и лабораторную диагностику данной группы болезней в контексте регионарной патологии, остаются актуальными принципиальные вопросы, касающиеся распространенности и структуры клещевых инфекций на территории страны [3]. Для решения этих вопросов необходимо в первую очередь улучшение качества диагностики клещевых природно-очаговых инфекций.
Диагностика СКТ в эндемичных по нему регионах основывается, как правило, на клини-ко-эпидемиологических данных и в типичных
случаях не вызывает затруднения [4]. Однако возможность атипичного течения заболевания, наличие сопряженных ареалов и выраженная схожесть клинических проявлений с другими риккетсиозами группы клещевых пятнистых лихорадок (КПЛ) диктует необходимость лабораторной верификации диагноза.
На сегодняшний день на территории Российской Федерации лабораторная диагностика СКТ осуществляется на основании утвержденных методических документов [5], где регламентированы только серологические методы обследования, основанные на выявлении антигена R. sibirica. К сожалению, они непригодны для ви-доспецифической верификации других риккет-сий (например, R. heilongjiangensis), поскольку для риккетсий группы КПЛ характерны перекрестные сывороточные реакции [6; 7; 8; 9].
При наличии патогномоничного синдрома -мигрирующей эритемы, а также характерного эпидемиологического анамнеза (пребывание на эндемичной территории, факт присасывания клеща, соответствие сезона) диагноз ИКБ не вызывает сомнений [10; 11]. Тем не менее широкое распространение безэритемных форм ИКБ и возникновение клинических проявлений ИКБ в любой последовательности и комбинации диктует необходимость использования лабораторных методов диагностики. Несмотря на разнообразие лабораторных методов, в России к настоящему времени нет единых алгоритмов и критериев лабораторной диагностики ИКБ на разных стадиях болезни, что, несомненно, требует стандартизации и совершенствования верификации диагноза ИКБ.
Цель исследования
Определить особенности лабораторной диагностики клещевых природно-очаговых инфекций (сибирский клещевой тиф, иксодовый клещевой боррелиоз).
Задачи исследования
1. Верифицировать диагноз клещевых инфекций при помощи лабораторных методов с одновременным исследованием нескольких биологических материалов от больных.
2. Оценить диагностическую эффективность серологических и молекулярно-биологиче-ских методов исследования в диагностике СКТ и ИКБ.
3. Провести сравнительный анализ диагностической значимости указанных методов исследования.
Материалы и методы
В течение 2013-2016 гг. было обследовано 213 больных, госпитализированных в инфекционное отделение КГБУЗ «Городская больница №5» г. Барнаула, Алтайского края с различными за-
болеваниями, передающимися иксодовыми клещами. Исследование одобрено локальным комитетом по этике ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России.
Помимо клинического и общелабораторного обследования, всем пациентам выполнялись молекулярно-биологические и серологические исследования.
Верифицирующие методы лабораторной диагностики выполнялись на базе ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (ФБУН ЦНИИЭ), г. Москва.
Материалом для молекулярно-биологиче-ских методов исследования служили цельная венозная кровь, парные сыворотки крови больного, забранные в первые сутки поступления пациентов в стационар (4,7+0,2 день болезни) и в динамике через 7-10 дней.
Биоптаты (корочки) с места первичного аффекта, в тех случаях, когда их получение являлось возможным, забирались с помощью стерильного пинцета в среднем на 8±0,3 день болезни и до исследования хранились в 70° этиловом спирте в морозильной камере при температуре минус 20°С.
Нуклеиновые кислоты экстрагировали индивидуально из каждой пробы цельной крови и сыворотки, а также из биоптатов, используя набор «АмплиПрайм РИБО-преп» (ФБУН ЦНИИЭ) в соответствии с рекомендациями производителя [12].
Обнаружение вируса КЭ, Borellia burgdorferi sl, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia chaffeensis / Ehrlichia muris осуществлялось после предварительной экстракции нуклеиновых кислот методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с помощью набора реагентов «АмплиСенс TBEV, B.burgdorferi sl, A. phagocytophilum, E.chaffeensis/E.muris-FL» (ФБУН ЦНИИЭ) в соответствии с протоколом, рекомендуемым производителем [13].
Обнаружение риккетсий группы КПЛ проводилось методом ПЦР в режиме реального времени, предложенном J. Stenos et al. [14] в модификации ФБУН ЦНИИЭ. Последующее типирование риккетсий в положительных образцах осуществляли с помощью подтверждающей ПЦР и секвенирования двух фрагментов генов цитратсинтазы gltA и белка наружной мембраны OmpA. Секвенирование полученных фрагментов осуществляли с помощью прибора для автоматического капиллярного секвенирования «ABI-Prism 3500 XL device» (Applied Biosystems, USA). Полученные сиквенсы сравнивали с референсными последовательностями R. spp., представленными в GenBank NCBI, и на основании максималь-
ной гомологии определяли их видовую принадлежность.
Материалом для серологического исследования служили парные сыворотки, полученные из венозной крови больного. Первая сыворотка забиралась в день поступления больного в стационар (4,7+0,2 день болезни), вторая - через 7-10 дней. Обнаружение специфических антител класса IgM и IgG к возбудителям МЭЧ и ГАЧ методом иммуноферментного анализа (ИФА) проводили в коммерческих иммунофермент-ных тест-системах «МЭЧ-ИФА-IgM», «МЭЧ-И-ФА-IgG» и «ГАЧ-ИФА-IgM», «ГАЧ-ИФА-IgG» производства ООО «Омникс», (г. Санкт-Петербург).
Обнаружение специфических антител класса IgM и IgG к возбудителю КЭ осуществляли с помощью коммерческих иммунофермент-ных тест-систем «TBEvirus (FSME) IgM ELISA» и «TBEvirus (FSME) IgG ELISA» (Humburg, Germany). В связи с наличием перекрестной серологической реакции между риккетсиями группы КПЛ специфические антитела класса IgM и IgG к возбудителю КР определялись в тест-системе «Rickettsia conorii ELISA IgM/ IgG» (Vircell, Spain) в соответствии с инструкцией производителя.
Исследование сывороток на наличие антител к возбудителям клещевого боррелиоза проводили с помощью набора реагентов «Иммуно-Чип Боррелиоз» производства ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. Данный набор реагентов позволяет за одну постановку дифференцированно выявлять большой спектр антител классов IgG и IgM к антигенам боррелий Borrelia afzelii и Borrelia garinii - основным патогенным гено-видам, широко распространенным на территории России.
Критерии диагноза клещевых инфекций
В 28 (20,1%) случаях диагноз КР был установлен на основании клинико-эпидемиологиче-ских данных (присасывание и/или наползание клеща, наличие лихорадочно-интоксикационного синдрома, характерной экзантемы, первичного аффекта и регионарного лимфаденита). В остальных случаях (79,9%) диагноз КР был установлен на основании типирования ДНК риккетсий в различных биологических материалах от больных (кожный биоптат, сгусток цельной крови, сыворотка крови) и/или обнаружения антител класса Ig M методом ИФА в парных сыворотках c нарастанием коэффициента серо-позитивности, либо только во второй сыворотке при отрицательных результатах в первой. При этом у всех пациентов с КР отсутствовали маркеры других клещевых инфекций.
Диагноз ИКБ у 10 (21,7%) человек установлен на основании данных эпидемиологического анамнеза (присасывание или наползание клеща), а также наличия на теле эритемы 3-5 и более
сантиметров в диаметре. У остальных 36 (78,3%) диагноз подтвержден серологически - определением антител класса IgM на иммуночипах к различным антигенам боррелий в парных сыворотках или только во второй сыворотке при отрицательных результатах в первой. При этом у всех пациентов с ИКБ отсутствовали маркеры других клещевых инфекций.
Диагноз КЭ (4 человека), ГАЧ (1 человек) установлен на основании обнаружения антител класса Ig M методом ИФА во второй сыворотке крови от больных при условии отсутствия маркеров других клещевых инфекций.
Диагноз клещевых микст-инфекций (23 человека) установлен на основании обнаружения антител класса Ig M методом ИФА (иммуночи-пов для ИКБ) к искомым возбудителям и / или типирования ДНК возбудителей в различных биологических материалах от больных (для КР).
В работе использованы различные методы статистической обработки в зависимости от типа случайных величин и поставленной задачи исследования.
Для сравнения частот качественных признаков в независимых выборках использовали критерий х2. При наличии малых частот (менее 10) для данного критерия использовали поправку Йейтса на непрерывность. При частотах меньше 5 использовали метод четырехпольных таблиц сопряженности Фишера. Зависимость между признаками определяли при помощи метода ранговой корреляции Спирмена.
Уровень статистической значимости при проверке нулевой гипотезы принимали соответствующий p<0,05. Обработку и графическое представление данных проводили с помощью компьютерных программ Statistica 10.0 (русифицированная версия), Excel 2007.
Результаты исследования
Диагнозы госпитализированных больных: 139 (65,3%) пациентов с диагнозом «клещевой риккетсиоз», в т.ч. в одном случае КР, вызванный R. heilongjiangensis, 46 (21,6%) - с диагнозом «иксодовый клещевой боррелиоз», 4 (1,8%) -клещевой энцефалит, и у одного больного диагностирован гранулоцитарный анаплазмоз. У 23 (10,8%) больных выявлена микст-инфекция, обусловленная возбудителями этих заболеваний в различных сочетаниях.
При изучении диагностической значимости ПЦР и серологического метода (ИФА) использованы данные результатов обследования больных, имевших лабораторно верифицированный диагноз КР (110 человек). Всего от этих пациентов было забрано и исследовано методом ПЦР в режиме реального времени, предложенном J. Stenos et al. (2005), в модификации ФБУН ЦНИИЭ с последующим типирующим секвенированием полученных ампликонов 27
биоптатов с места первичного аффекта (корочек), 110 образцов цельной крови (сгустки) и 110 парных сывороток, забранных с интервалом в 7-10 дней.
У «ПЦР-позитивных» больных ДНК Rickettsia sibirica sensu stricto была обнаружена в различных биологических материалах: биоп-тат с места первичного аффекта, сыворотка крови, сгусток крови.
При исследовании образцов кожных биоптатов, забранных на 8,0+0,3 день болезни (на фоне антибиотикотерапии), получено 22 положительных и 5 отрицательных результатов. Диагностическая значимость ПЦР при выявлении ДНК риккетсий в кожных биоптатах составила 81,5%.
При исследовании образцов сыворотки получено 13 положительных и 97 отрицательных результатов, при исследовании сгустка цельной крови - 6 и 104 результатов соответственно. Эффективность метода при выявлении ДНК риккетсий в сыворотке крови - 11,8%, в цельной крови - 5,5%. Одновременное исследование образцов цельной крови и сывороток у больных КР позволило повысить выявляемость ДНК риккетсий лишь до 17,3%. Стоит отметить, что ДНК риккетсий обнаруживались только в первой сыворотке, забранной на 4,7+0,2 день болезни до начала этиотропной терапии. Наличие достоверных различий частоты положительных результатов при исследовании методом ПЦР биоптата с места первичного аффекта и первой сыворотки крови (p<0,05) свидетельствует о высокой диагностической значимости метода ПЦР при исследовании биоптатов с места первичного аффекта. Несомненным достоинством ПЦР является и возможность последующего типирующего секвенирования полученных ам-пликонов патогена с целью его видовой диф-ференцировки, что является актуальным для регионов, в которых одновременно встречаются различные риккетсии из группы возбудителей КПЛ.
При исследовании образцов сыворотки методом ИФА антитела класса Ig M к риккет-сиям группы КПЛ определялись в 99 пробах, и 11 образцов дали отрицательные результаты. Таким образом, эффективность метода ИФА при выявлении антител к риккетсиям группы КПЛ у больных КР составила 90,0%. У 44 человек (44,4%) антитела класса Ig M к риккетсиям группы КПЛ определялись в первой сыворотке. Исследование же парных сывороток, забранных с интервалом 7-10 дней, позволило повысить выявляемость антител класса Ig M на 55,6%.
Сравнительный анализ результатов ИФА и ПЦР сыворотки крови у пациентов с верифицированным диагнозом КР показал, что совпадение положительных результатов имело место лишь в 10 (9,1%) случаях. При этом имеются
достоверные отличия частоты положительных результатов при использовании ИФА в сравнении с ПЦР и отсутствует корреляционная связь между ними (г=0,1).
Полученные данные свидетельствуют о том, что метод ИФА в диагностике КР является достаточно эффективным при условии исследования парных сывороток, забранных с интервалом в 7-10 дней.
Особенности лабораторной диагностики ик-содового клещевого боррелиоза
В период с 2013 по 2016 год под наблюдением находилось 46 пациентов с иксодовым клещевым боррелиозом, в т.ч. 10 человек с безэри-темной формой (21,7%).
Выявление ДНК боррелий в сыворотках крови больных осуществлялось методом ПЦР в режиме реального времени с помощью набора реагентов «АмплиСенс ТВЕУ B.burgdorferi sl, А. phagocytophilum, E.chaffeensis/E.muris-FL» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии). Исследования сывороток у всех больных дали отрицательные результаты, что не противоречит литературным данным о низкой чувствительности ПЦР при исследовании данного биологического материала [15; 16].
С учетом наличия безэритемных форм заболевания, а также низкой чувствительности ПЦР, установление диагноза ИКБ только на основании клинико-эпидемиологических данных представляет определенные трудности и требует обследования пациентов серологическими методами.
Серологическое обследование пациентов включало в себя исследование парных сывороток, забранных в первый день поступления больных в стационар и в дальнейшем в динамике - через 7-10 дней, методом иммуночипов с использованием диагностической системы «ИммуноЧип Боррелиоз» производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Данный метод позволяет выявлять антитела класса ^ М и ^ G к различным антигенам бор-релий.
В случаях постановки диагноза на основании клинико-эпидемиологических данных (21,7%) первые сыворотки крови были забраны в день поступления пациентов в стационар, что соответствовало 2,0+0,3 дню болезни и в динамике на 7-10-й день стационарного лечения (9,6+0,5 день болезни).
У 36 человек (78,3%) диагноз подтвержден серологически - определением антител класса ^ М к различным антигенам боррелий: в парных сыворотках крови - у 25 человек (64,4%), и у 11 человек (30,6%) - только во второй сыворотке. У пациентов, у которых антитела класса ^ М определялись уже в первой сыворотке, она была забрана на 8,1+1,1 день болезни (т.е. на второй неделе заболевания). При отсутствии антител
класса ^ М в первой сыворотке крови, но наличии их во второй сыворотке первая сыворотка была забрана на первой неделе заболевания (2,6+0,3 день болезни) (р<0,05). Вторая сыворотка крови у больных с серологическим подтверждением диагноза была забрана на 21,4+1,4 день болезни (т.е. в конце третьей недели заболевания), т.е. позже, чем у пациентов без серологического подтверждения диагноза (9,6+0,5 день болезни), (р<0,05). Это обусловлено длительностью пребывания больных в стационаре.
Таким образом, серологическая диагностика ИКБ с определением антител к различным антигенам боррелий методом иммуночипов эффективна при заборе биологического материала со второй недели болезни. При соблюдении этого условия метод парных сывороток позволяет повысить выявляемость ^ М на 30,6%. Наибольшая частота положительных результатов наблюдается в конце третьей недели болезни (21,4+1,4 день болезни).
Обсуждение полученных результатов
Комплексный подход к проведению обследования больных клещевыми инфекциями с одновременным использованием молеку-лярно-генетических и серологических методов исследования позволил верифицировать диагноз клещевых инфекций у всех 213 пациентов. Также благодаря комплексному обследованию больных на весь спектр клещевых инфекций установлено, что одновременное инфицирование лиц при нападении клещей несколькими возбудителями составляет 10,8%.
Сравнительное изучение информативности двух современных лабораторных методов диагностики - ИФА и ПЦР - в диагностике КР показало, что с наибольшей частотой (90,0 %) подтверждало клинический диагноз КР серологическое исследование (ИФА). При этом исследование парных сывороток, забранных с интервалом 7-10 дней, позволило повысить выявляемость антител класса ^ М на 55,6%.
Низкая эффективность метода ПЦР при выявлении ДНК риккетсий в сыворотке крови (11,8%) и в цельной крови (5,5%), возможность обнаружения возбудителя только в первой сыворотке, забранной до начала этиотропной терапии, не позволяет рекомендовать этот метод в качестве рутинной диагностики КР.
Диагностическая значимость ПЦР при выявлении ДНК риккетсий в кожных биоптатах составила 81,5%. Наличие достоверных различий частоты положительных результатов при исследовании методом ПЦР биоптата с места первичного аффекта и первой сыворотки крови (р<0,05) свидетельствует о высокой диагностической значимости метода ПЦР при исследовании биоптатов даже на фоне проведения этио-тропной терапии на 8,0+0,3 день болезни. 54
Серологическое подтверждение диагноза было у 78,3% всех пациентов с ИКБ. Исследование парных сывороток позволило повысить выявляемость ^ М на 30,6%. При этом у пациентов, у которых антитела класса ^ М определялись уже в первой сыворотке, она была забрана достоверно позже (на 8,1+1,1 день болезни), чем у пациентов без серологического подтверждения диагноза (на 2,0+0,3 день болезни). Во всех случаях ИКБ в сыворотке, забранной в конце третьей недели болезни (21,4+1,4 день болезни), были обнаружены специфические антитела класса ^ М к боррелиям.
Ни у одного из пациентов с серологически подтвержденным диагнозом ИКБ методом ПЦР в режиме реального времени в сыворотке крови не была обнаружена ДНК боррелий. Таким образом, метод иммуночипов может быть рекомендован в качестве основного метода подтверждения диагноза ИКБ. Данный метод показывает свою эффективность при исследовании сывороток начиная со второй недели заболевания. Максимальная диагностическая ценность серологического обследования наблюдается на третьей неделе болезни. Исследование методом ПЦР сывороток и цельной крови от больных не может рекомендоваться в качестве рутинного метода диагностики ИКБ.
Выводы
1. Лабораторная диагностика клещевых инфекций требует обязательного использования одновременно нескольких методов исследования.
2. Для лабораторной диагностики КР ведущим методом является ИФА, позволяющий подтвердить диагноз у 90,0% больных.
3. Метод ПЦР при диагностике КР показывает наибольшую диагностическую эффективность при исследовании кожных биоптатов с места первичного аффекта (81,5%).
4. Метод иммуночипов является эффективным лабораторным методом диагностики ИКБ при условии его использования со второй недели болезни.
Список литературы
1. Аитов К. Природно-очаговые трансмиссивные клещевые инфекции Прибайкалья: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Иркутск, 2005.
2. Иксодовые клещевые боррелиозы у детей и взрослых: методические рекомендации для врачей. Под ред. Ю.В. Лобзина и др. СПб.; 2010.
3. Малеев В.В. Обзор европейских рекомендаций по диагностике клещевых бактериальных инфекций. Клинич. микробиология, антимикробная химиотерапия. 2005; 7(2): 130-153.
4. Granitov V., Shpynov S., Beshlebova O.et al. New evidence on tick-born rickettsioses in the Altai region of Russia using primary lesion, serum and blood clots of molecular and serological study. Microbes and Infection. 2015; 17: 862-865.
5. Ястребов В.К. и др. Эпидемиологический надзор за клещевым риккетсиозом. Иммунодиагностика заболевания и методы выявления возбудителя: методические рекомендации. Омск, 1992.
6. Абрамова Н.В., Рудаков Н.В., Пеньевская Н.А. и др. Апробация иммунофермент-ного анализа для серологической диагностики инфекций, вызываемых рик-кетсиями группы клещевой пятнистой лихорадки. Эпидемиология и вакцинопро-филактика. 2010; 1(50): 17-21.
7. Шпынов С.Н., Рудаков Н.В., Самойленко И.Е. и др. Генетическая идентификация риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки, изолированных в очагах клещевого риккетсиоза. Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2004; 5: 43-48.
8. Медянников О.Ю. Клинико-эпиде-миологическая характеристика клещевого риккетсиоза, вызываемого R. heilongjiangensis на Дальнем Востоке : автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2004.
9. Brouqui P., Parola P., Fournier P.E., Raoult D. Spotted fever rickettsioses in southern and eastern Europe. FEMS Immunol Med Microbiol. 2007; 49(1): 2-12.
10. Липов А.В., Товмасян В.Э., Корой П.В. Болезнь-Лайма: обзор литературы и клинический случай. Вестник молодого ученого. 2017; 2: 39-47.
11. Dessau R.B., A.P. van Dam, Fingerle V. et al. To test or not to test? Laboratory support for the diagnosis of Lyme borreliosis. Clin Microbiol Infect. 2017; - pii: S1198-743X(17)30488-3. - doi: 10.1016/j. cmi.2017.08.025.
12. Инструкция по применению комплекта реагентов для экстракции РНК/ДНК из клинического материала «Ампли-Прайм РИБО-преп». 2012.
13. Инструкция по применению набора реагентов для выявления РНК/ДНК возбудителей инфекций, передающихся иксодо-выми клещами TBEV, Borellia burgdorferi sl, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia chaffeensis / Ehrlichia muris, в биологическом материале методом полимераз-ной цепной реакции (ПЦР) с гибриди-зационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс» TBEV, B. burgdorferi sl, A. phagocytophilum, E. chaffeensis / E. muris-FL» АмплиСенс [электронный ресурс]. ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» РФ. М., 2012.
14. Stenos J., Graves S.R., Unsworth N.B. A highly sensitive and specific real-time PCR assay for the detection of spotted fever and typhus group rickettsiae. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005; 73 (6): 1083-1085.
15. Goodman J.L., Bradley J.F., Ross A.E. et al. Bloodstream invasion in early Lyme disease: results from a prospective, controlled, blinded study using the polymerase chain reaction. Am. J. Med. 1995; 99: 6-12.
16. Benach J.L., Bosler E.M., Hanrahan J.P. et al. Spirochetes isolated from the blood of two patients with Lyme disease. N. Engl. J. Med. 1983; 308: 740-742.
Контактные данные
Автор, ответственный за переписку: Бесхлебова Ольга Васильевна, ассистент кафедры инфекционных болезней и фтизиатрии, Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. Тел: 9-961-995-04-80. E-mail: olg.deriglazova@yandex.ru
