CC BY
69
Биомедицина • № 1, 2017, С. 52-62
ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Коррекция рекомбинантным лактоферрином человека гормонально-метаболических сдвигов возрастного гипогонадизма у крыс-самцов
Ю.А. Рудниченко, B.C. Лукашевич, И.В. Залуцкий
Институт физиологииНАНБеларуси, Минск
Контактная информация: Рудниченко Юлия Анатольевна, link060619@list.ru
На модели возрастного гипогонадизма было показано снижение в сыворотке крови экспериментальных животных уровня тестостерона и его некоторых предшественников в стероидогенезе (прогестерон и 17-ОН прогестерон). На этом фоне увеличивалось содержание эстрадиола, следствием чего явилось достоверное понижение тестостерон/эстрадиолового индекса в группе двухлетних крыс-самцов на протяжении всего эксперимента.
Системное введение per os рекомбинантного лактоферрина человека экспериментальным животным оказывало значительное стимулирующее действие на биосинтез тестостерона у двухлетних особей, восстанавливая его уровень до физиологических значений молодых крыс. При этом происходило достоверное понижение сывороточного содержания лютеинизирующего (но не фолликулостимули-рующего) гормона на 26,4% по сравнению с контрольной группой двухлетних животных.
Ключевые слова: возрастной гипогонадизм, рекомбинантный человеческий лактоферрин, тестостерон, стероидогенез, липидный и белковый обмен.
Введение
Тестостерон является основным андрогеном, циркулирующим в крови у мужчин. Он отвечает за развитие первичных и вторичных половых признаков, а также за формирование мужского фенотипа и сохранение репродуктивной функции. В то же время андрогены участвуют в подавлении процессов апоптоза, воспаления и отложения Р-амилоида, стимулируют нейрональный рост, секрецию нейротрансмиттеров, улучшают церебральный кровоток и метаболизм,
оказывают антиоксидантное и нейро-протективное действие [2]. Показана связь между повышенной активностью гормональной оси гипоталамус-гипофиз-надпочечники/половые железы и клиническими симптомами рассеянного склероза, а в 2013 г. американскими учеными установлено, что падение уровня тестостерона приводит к появлению симптомов, характерных для болезни Паркинсона [14] и увеличению риска развития болезни Альцгеймера в пожилом возрасте [9]. В 2016 г. на 65-й научной сессии
Американского колледжа кардиологии были представлены результаты, которые свидетельствуют о том, что системное (в течение трех лет) потребление тестостерона предотвращает развитие сердечно-сосудистых заболеваний (инфарктов и инсультов) у пациентов в возрасте 58-80 лет [15].
В ряде исследований было показано постепенное прогрессирующее уменьшение концентрации тестостерона в сыворотке крови мужчин с 30-ти лет. Так, после 40 лет синтез данного ан-дрогена снижается на 1-2% в год. Это явление было названо возрастным ги-погонадизмом. Из-за отсутствия идентифицируемой переломной точки, от которой уровень тестостерона начинал резко падать, многие исследователи ставят под сомнение обоснованность использования термина «андропауза», которая ошибочно предполагает резкое прекращение производства андрогенов у мужчин [21].
Развитию возрастного андрогенного дефицита могут сопутствовать др. заболевания и состояния (сахарный диабет, цирроз печени, сердечно-сосудистая патология, гипертония, гиперлипиде-мия, депрессия, нарушение питания и ожирение) [7].
Мужской гипогонадизм может быть вызван тестикулярной (первичный) или гипоталамо-гипофизарной (вторичный) дисфункцией. Первичный гипогонадизм характеризуется низким уровнем тестостерона, повышенным содержанием гонадотропных гормонов, ростом концентрации связывающего половые гормоны глобулина и сопровождается подавлением сперматогенеза. При вторичном гипогонадиз-ме происходит падение уровня тесто-
стерона, лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и нарушение сперматогенеза [7]. Возрастной гипогонадизм, как правило, имеет смешанную этиологию, т.е. характеризуется тестикулярной и гипоталамо-гипофизарной дисфункцией [7, 20]. С возрастом происходит уменьшение количества клеток Лейди-га в семенниках, снижается их реакция на ЛГ и хорионический гонадотропин по сравнению с клетками у молодых людей. Следует отметить, что наряду с угнетением биосинтеза тестостерона у пожилых мужчин, происходит падение амплитуды его пика утром, что является важным критерием в диагностике возрастного гипогонадизма [20].
Кроме этого, различные симптомы и признаки могут указывать на андро-генную недостаточность: потеря костной и мышечной массы, увеличение жировой ткани, снижение физических, сексуальных и когнитивных функций [13]. Основным методом лечения такой патологии остается заместительная ан-дрогенная терапия. В настоящее время применяются общедоступные лекарственные формы тестостерона, включающие внутримышечные и пероральные препараты кратковременного и пролонгированного действия. Хотя применение данных препаратов способствует коррекции гипогонадизма [18], главным недостатком таких средств является угнетение собственного синтеза эндогенного тестостерона или полное его прекращение в организме после отмены заместительной андрогенной терапии. В свою очередь, длительное их применение приводит к стимуляции периферической конверсии тестостерона в эстрадиол и повышению содержа-
53
БютеШете . № 1, 2017
ния последнего. В итоге переизбыток циркулирующего эстрадиола может приводить к развитию гинекомастии у мужчин [10].
В рамках выполнения программы Союзного государства «БелРосТранс-ген-2» из молока трансгенных коз получен рекомбинантный лактоферрин человека (рчЛФ) - один из основных белковых компонентов молока, не-гемовый железосвязывающий гли-копротеин, относимый к семейству трансферринов [4, 11]. Он обладает антиоксидантной активностью, противоопухолевыми и противовоспалительными свойствами, участвует в регуляции роста и дифференцировки клеток и др. [12]. Заслуживает также внимания его роль в гормональном статусе организма, а точнее - показанная способность увеличивать уровень тестостерона в сыворотке крови [4]. В литературе отсутствуют сведения о механизме воздействия рчЛФ на метаболизм стероидных гормонов, в т.ч. и при возрастных изменениях. Перспективными являются исследования, направленные на изучение возможности коррекции эндогенного уровня тестостерона в рамках профилактических мероприятий или при комплексной терапии гипогонадизма различной этиологии.
Учитывая вышесказанное, целью наших исследований стало изучение влияния рчЛФ на биосинтез тестостерона и его предшественников в стеро-идогенезе, основные показатели белкового и липидного обмена в сыворотке крови для раскрытия механизмов активации биосинтеза тестостерона в экспериментальной модели возрастного гипогонадизма крыс-самцов.
Материалы и методы
Исследования были проведены на нелинейных белых крысах-самцах (п=61) разных возрастных групп, содержащихся в стандартных условиях вивария Института физиологии HAH Беларуси.
Животные получали стандартный рацион, при свободном доступе к воде и пище, в соответствии с нормами содержания [1]. Все эксперименты выполнены с учетом рекомендаций Европейской конвенции о гуманном обращении с лабораторными животными (European Convention for the protection of vertebrate animals used for experimentation and other scientific purposes (ETS № 123, Strasbourg, 1986)).
В качестве экспериментальной модели возрастного гипогонадизма были использованы особи в возрасте двух лет массой 480±30 г, что примерно соответствует 60-летнему возрасту человека [5].
Согласно условиям эксперимента, было сформировано пять групп (n=10-14):
1-я группа - половозрелые крысы-самцы (2 мес.) массой 250±30 г, которые содержались на стандартном рационе и получали ежедневно per os изотонический р-р NaCl в объеме 0,1 мл;
2-я и 4-я группа - контроль, особи в возрасте двух лет, которые находились на опыте в течение одного и 2,5 мес. и получали ежедневнорег os изотонический р-р NaCl в объеме 0,1 мл (возрастной гипогонадизм);
3-я и 5-я группа - крысы-самцы в возрасте двух лет, которые помимо стандартного рациона питания ежедневно получали per os рчЛФ в дозе
100 мг/кг в объеме 0,1 мл на протяжении одного и 2,5 мес.
Животных, лишенных утреннего кормления, выводили из эксперимента декапитацией под эфирным наркозом, осуществляли забор крови, образцов гипоталамуса (п=9-12) и семенников (п=9-11). После получения сыворотки определяли уровни стероидных гормонов и некоторые показатели белкового и липидного обмена.
Ткань гипоталамуса помещали в среду, состоявшую из 0,25 М сахарозы, 0,5 мМ ЭДТА, 10 мМ Трис (рН 8,0) в соотношении 1:10 (вес/объем), которую затем гомогенизировали и центрифугировали при 12000 g в течение 10 мин. Семенники помещали в 0,01 М K,Na-фосфатный буфер (рН 7,4) с 1,15% KCl в соотношении 1:10 (вес/объем), затем гомогенизировали и центрифугировали при 12000 g в течение 20 мин.
Содержание общего и свободного тестостерона, эстрадиола, прогестерона и 17-ОН прогестерона, ЛГ и ФСГ определяли методом иммунофермент-ного анализа с использованием диагностических наборов фирмы «Хема» (Россия), в соответствии с прилагаемыми инструкциями.
Уровень общего холестерина, три-глицеридов, холестерина липопротеи-нов высокой и низкой плотности (ХС ЛПВП и ХС ЛПНП), общего белка и альбумина изучали с помощью соответствующих наборов НТПК «Анализ Х» (Беларусь), ЧПУП «Диасенс» (Беларусь), RANDOX (Великобритания). Отношение тестостерон/эстрадиол в сыворотке крови устанавливали расчётным путём.
Экспериментальные данные обработаны с помощью программ Microsoft
Excel, Origin 6.1и представлены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (25-й; 75-й процентили - 25%; 75%). Нормальность распределения показателей проверяли при помощи теста Шапиро-Уилка. Для сравнения групп по одному признаку применяли U-кри-терий Манна-Уитни для независимых выборок с использованием пакета программ Statistica 6.0. Достоверным считали уровень значимости р<0,05.
Результаты и их обсуждение
Анализ результатов проведенных исследований показал, что уровень общего тестостерона в сыворотке контрольной группы двухлетних крыс был достоверно ниже через 1 и 2,5 мес. на 88% и 70,9% соответственно по отношению к двухмесячным особям (рис. 1А).
Содержание общего тестостерона в сыворотке крови двухлетних крыс спустя 1 и 2,5 мес. получения рчЛФ достоверно возрастало в 3,4 и 5,1 раза по сравнению с контрольными «возрастными» особями. Аналогичные изменения происходили и с уровнем свободного тестостерона в сыворотке. Концентрация анализируемого показателя статистически значимо увеличивалась во всех опытных группах на 61,2% и 119,1% (3-я и 5-я группа соответственно) по отношению к контрольной группе двухлетних животных, что указывает на возрастающую долю именно биологически активного андрогена (рис. 1Б). Курсовое кормление рчЛФ на протяжении 2,5 мес. стимулировало значительный рост концентрации свободного тестостерона (на 171,3%) в сыворотке крови по отношению к молодым особям.
Рис. 1. Уровень общего (А) и свободного тестостерона (Б) в сыворотке, гомогенате тканей гипоталамуса (В) и семенников (Г) крыс после перорального введения рекомбинантного лактоферрина человека в течение 1 и 2,5 мес.
Примечание: 1 - контрольная группа (двухмесячные крысы); 2 и 4 - контрольная группа (двухлетние крысы); 3 и 5 - опытная группа (двухлетние крысы), получавшая рчЛФ per os в концентрации 100 мг/кг на протяжении 1 и 2,5 мес. соответственно.
# - достоверные отличия (р<0,05) от контрольной группы двухмесячных крыс;
* - достоверные отличия от контрольной группы двухлетних крыс (Me, 25%;75%).
Содержание общего тестостерона в гипоталамусе статистически значимо уменьшалось в 4-й группе на 24,4% по сравнению с контрольными двухмесячными крысами (рис. 1В). Также наблюдалась тенденция к снижению данного показателя в семенниках на 46,8% и 23,8% (2-я и 4-я группа соответственно) по отношению к молодым особям (рис. 1Г). Эти результаты являются свидетельством развития возрастной андрогенной недостаточности в группе двухлетних крыс, за счет ослабления синтезирующей и/или се-кретирующей способности эндокри-ноцитов семенников.
Напротив, количество общего тестостерона в гипоталамусе и семенниках двухлетних крыс, получавших рчЛФ на протяжении 2,5 мес., статистически значимо увеличивалось на 17,1% и 37,2% соответственно по сравнению с контрольными «возрастными» особями (рис. 1Г). Рост уровня изучаемого андрогена в семенниках может свидетельствовать об активации биосинтеза тестостерона в клетках Лейдига. Отмеченное повышение уровня общего тестостерона в гипоталамусе связано, возможно, с активацией механизмов регуляции синтеза тестостерона по типу обратной связи на гипоталамическом уровне.
Содержание прогестерона и 17-ОН прогестерона в сыворотке крови двухлетних крыс (4-я группа) значимо снижалось на 60,7% и 21,8% соответственно по отношению к контрольной группе двухмесячных крыс (рис. 2А, Б), что может происходить из-за уменьшения активности или синтеза соответствующих ферментов метаболического пути образования тестостерона (ЗР-гидроксистероиддегидрогеназы и 17а-гидроксилазысоответственно) в клетках Лейдига с возрастом [7].
После курсового приема рчЛФ двухлетними особями не было обнаружено существенных изменений содержания прогестерона и 17-ОН прогестерона в сыворотке крови.
Концентрация эстрадиола значимо возрастала во всех контрольных группах на 24,7% и З6% (2-я и 4-я группа соответственно) по сравнению с молодыми особями (рис. 2В). Указанные изменения, возможно, связаны с возрастным увеличением активности или синтеза ароматазы, которая конвертирует тестостерон в эстрадиол.
При анализе уровня эстрадиола в сыворотке экспериментальных животных после одного и 2,5 мес. пе-рорального введения рчЛФ было выявлено, что данный показатель имел тенденцию к снижению на 9,1% и 14,6% соответственно по сравнению с контрольными «возрастными» крысами.
Рис. 2. Содержание прогестерона (А), 17-ОН прогестерона (Б), эстрадиола (В) и отношение тестостерон/эстрадиола (Г) в сыворотке крови крыс после перорального введения рекомби-нантного лактоферрина человека в течение 1 и 2,5 мес. Примечания - как на рис. 1.
57
Бюте&ете . № 1, 2017
Тестостерон/эстрадиоловый индекс двухлетних животных достоверно уменьшался через 1 и 2,5 мес. (в 11,4 и 4,7 раза соответственно) по отношению к молодым особям (рис. 2Г). Напротив, данный показатель возрастал (р<0,05) в группе, получавшей анализируемый белок на протяжении 2,5 мес., в 5,5 раза по сравнению с контрольной группой двухлетних крыс, восстанавливаясь до значений молодых особей.
Изучение содержания гонадотроп-ных гормонов в сыворотке крови показало, что уровни ФСГ и ЛГ значимо не изменялись во всех контрольных «возрастных» группах по отношению к двухмесячным животным (табл. 1). Полученные результаты согласуются с литературными данными, в которых указывается, что при возрастном гипогонадизме концентрация сывороточного ЛГ растет незначительно или не меняется вовсе, что связано со снижением чувствительности клеток
Лейдига к данному гонадотропину [18].
Исследование уровня ФСГ в сыворотке животных 5-й группы показало тенденцию к уменьшению изучаемого показателя на 42,3%, а содержание ЛГ достоверно падало на 26,4% по сравнению с контрольной группой двухлетних крыс.
Наши результаты свидетельствуют о том, что рчЛФ оказывает влияние на центральные механизмы регуляции уровня циркулирующего тестостерона. Существует вероятность того, что рассматриваемый белок может участвовать в восстановлении чувствительности эндокриноцитов двухлетних крыс к ЛГ.
Показано, что уровень общего холестерина в сыворотке крови достоверно увеличивался во 2-й группе на 12,2% по сравнению с молодыми особями (табл. 2), что является характерным для стареющего организма [17].
Таблица 1
Уровень ФСГ и ЛГ в сыворотке крови крыс после перорального введения рекомбинантного лактоферрина человека в течение 1 и 2,5 мес.
Гормон Контроль, двухмесячные крысы (1-я группа) Экспериментальная модель возрастного гипогонадизма (двухлетние крысы)
через 1 мес. через 2,5 мес.
Контроль (2-я группа) рчЛФ, 100 мг/кг (3-я группа) Контроль (4-я группа) рчЛФ, 100 мг/кг (5-я группа)
ФСГ, МЕ/мл 0,37 (0,28;0,90) 0,50 (0,19;0,89) 0,45 (0,16;0,58) 0,52 (0,17;0,66) 0,30 (0,13;0,57)
ЛГ, МЕ/мл 0,50 (0,28;0,63) 0,36 (0,30;0,61) 0,40 (0,25;0,57) 0,53 (0,35;1,00) 0,39* (0,15;0,49)
Примечание: * - достоверные отличия от контрольной группы двухлетних крыс, р<0,05 (Ме, 25%;75%).
Таблица 2
Уровень некоторых показателей липидного и белкового обмена в сыворотке крови крыс после перорального введения рекомбинантного лактоферрина человека в
течение 1 и 2,5 мес.
Гормон Контроль, двухмесячные крысы (1-я группа) Экспериментальная модель возрастного гипогонадизма (двухлетние крысы)
через 1 мес. через 2,5 мес.
Контроль (2-я группа) рчЛФ, 100 мг/кг (3-я группа) Контроль (4-я группа) рчЛФ, 100 мг/кг (5-я группа)
Общий холестерин, ммоль/л 1,34 (1,20;1,45) 1,50 (1,38;1,58)# 1,47 (1,34;1,67)# 1,40 (1,24;1,46) 1,52 (1,39;1,70)*#
Триглицериды, ммоль/л 1,21 (1,13;1,46) 1,13 (0,89;1,42) 1,09 (0,99;1,11)# 1,30 (1,06;1,63) 1,20 (0,92;1,41)
ХС ЛПНП, ммоль/л 0,69 (0,40;0,78) 0,90 (0,69;1,08) 0,91 (0,69;0,96)# 0,63 (0,53;0,77) 0,91 (0,71;1,11)*#
ХС ЛПВП, ммоль/л 0,18 (0,17;0,21) 0,12 (0,11;0,17)# 0,13 (0,12;0,14)# 0,10 (0,09;0,12)# 0,10 (0,09;0,12)#
Альбумин, г/л 37,43 (35,71;39,60) 37,32 (29,76;40,41) 36,74 (32,39;39,83) 32,22 (29,65;4,68)# 35,14 (29,42;38,80)
Общий белок, г/л 73,02 (70,00;75,62) 75,87 (73,91;77,39) 76,30 (72,61;77,83) 71,30 (70,22;73,48) 73,04 (70,87;73,91)
Примечание: # - достоверные отличия от контрольной группы двухмесячных крыс; * - достоверные отличия от контрольной группы двухлетних крыс, р<0,05 (Ме, 25%;75%).
Существуют убедительные доказательства того, что снижение уровня тестостерона с возрастом связано с угнетением транспорта холестерина в митохондрии, где и происходит основной биосинтез стероидных гормонов. Подавление транспорта в клетках Лей-дига происходит за счет уменьшения экспрессии двух белков-переносчиков (стероидогенного острого регуляторно-го белка (STAR) и белка-транслокатора (TSPO)), играющих важную роль в перемещении холестерина к внутренней мембране митохондрий [8].
Количество общего холестерина достоверно повышалось на 8,7% в группе
двухлетних крыс, получавших рчЛФ на протяжении 2,5 мес. Напротив, содержание триглицеридов уменьшалось (р<0,05) в 3-й группе на 9,6% по отношению к молодым особям, свидетельствуя о проявлении тестостероном анаболических свойств, посредством усиления гидролиза триглицеридов, за счет изменения активности гормон-чувствительной липазы [16].
Известно, что липопротеины плазмы являются одним из главных источников холестерина, задействованного в биосинтезе стероидных гормонов [6]. При изучении влияния рчЛФ на уровень ХС ЛПНП было показано, что кон-
центрация данного показателя достоверно увеличивалась (на 43%) в группе крыс, получавших изучаемый белок в течение 2,5 мес., по отношению к двухлетним животным. Вместе с тем содержание ХС ЛПНП возрастало (р<0,05) во всех экспериментальных группах, получавших рчЛФ, по сравнению с молодыми крысами.
Также было выявлено статистически значимое снижение уровня ХС ЛПВП во 2-й и 4-й группах (на 37,9% и 48,1% соответственно) по отношению к двухмесячным крысам, что может быть следствием возрастных нарушений ли-пидного обмена.
Определение содержания основных показателей белкового обмена показало, что количество альбумина в 4-й группе уменьшалось на 13,9% (р<0,05). Возможно, указанные альтерации связаны с возрастными изменениями белоксин-тезирующей функции печени, и, хотя уровень общего белка, по нашим результатам, существенно не изменился по отношению к молодым особям, данный факт можно объяснить возрастным увеличением глобулинов и белков острой фазы, которые нивелируют уменьшение уровня альбумина [3].
Уровень общего белка и альбумина в группах, получавших рчЛФ, существенно не изменялся, хотя и имел тенденцию к повышению по сравнению с контрольной группой двухлетних крыс.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что с возрастом наблюдается снижение (р<0,05) уровня тестостерона и некоторых его предшественников (прогестерон и 17-ОН прогестерон). На фоне описанных процессов происходил рост (р<0,05) содержания эстрадиола в сыворотке
крови, следствием чего являлось достоверное понижение тестостерон/эстра-диолового индекса в группе двухлетних крыс на протяжении всего эксперимента. В свою очередь, в указанной экспериментальной модели андрогенного дефицита наблюдались сопутствующие метаболические сдвиги в белковом и ли-пидном обмене.
Содержание гонадотропных гормонов (ФСГ и ЛГ) в сыворотке двухетних крыс не изменялось по отношению к молодым животным. Полученные результаты согласуются с проведенными ранее исследованиями, в которых указывается, что при возрастном гипогона-дизме концентрация сывороточного ЛГ практически не изменяется [19]. Известно, что количество сайтов связывания данного гормона значительно уменьшается с возрастом. Такое изменение может способствовать угнетению гормонального индуцированного синтеза цАМФ. В результате происходит подавление процесса стероидогенеза уже на первом его этапе (отщепление боковой цепи холестерина). Показано, что сокращение продукции цАМФ является результатом дефекта связи рецептора ЛГ с аденилатциклазой через G-белок [8].
Исходя из вышеизложенного, можно заключить, что возрастные изменения продукции тестостерона, возможно, связаны, во-первых, с нарушением транспорта холестерина к митохондриям, из-за уменьшения экспрессии специфических белков-переносчиков (STAR и TSPO), во-вторых, происходит снижение активности или синтеза ферментов стероидогенеза, или, в-третьих, наблюдается дефицит ЛГ рецепторов на эндокриноцитах. Любой из этих дефектов объясняет снижение способности
клеток Лейдига синтезировать тестостерон в ответ на ЛГ.
В свою очередь, при длительном пе-роральном введении рчЛФ происходила активация биосинтеза тестостерона у двухлетних особей, с восстановлением его уровня до физиологических показателей двухмесячных животных. При этом наблюдалось достоверное снижение содержания ЛГ, что указывает на непосредственное и/или опосредованное влияние изучаемого белка на центральные механизмы регуляции циркулирующего андрогена по принципу обратной связи. Возможно, рчЛФ участвует в восстановлении чувствительности эндо-криноцитов двухлетних крыс к ЛГ.
Заключение
Системное введение per os рекомби-нантного лактоферрина человека экспериментальным животным оказывало значительное стимулирующее действие на биосинтез тестостерона у двухлетних особей, нормализируя его уровень до физиологических значений молодых крыс. При этом происходило достоверное понижение сывороточного содержания лютеинизирующего (но не фоллику-лостимулирующего) гормона на 26,4% по сравнению с контрольной группой двухлетних животных.
Таким образом, впервые показана возможность нормализации рекомби-нантным лактоферрином человека гормональных изменений, связанных с возрастным андрогенным дефицитом. По предварительным данным авторов, принципиальным отличием от существующих препаратов на основе андроге-нов (как натуральных, так и синтетических) для коррекции данной патологии является то, что после прекращения по-
требления лактоферрина не происходит подавления синтеза эндогенного тестостерона.
Наблюдаемые эффекты изучаемого трансферрина являются основанием для проведения дальнейших экспериментальных исследований с целью выяснения механизмов действия лактоферрина, его возможного использования не только для коррекции андрогенного дефицита при возрастном гипогонадизме, но и при патологиях ЦНС, связанных с нарушением стероидогенеза (болезнь Альцгеймера, Паркинсона и рассеянный склероз).
Работа выполнена при поддержке Белорусского Фонда фундаментальных исследований (договор № M15-1O5 от 4 мая 2O15 г).
Список литературы
1. Зanaднюк A.n. u др. Лабораторные животные: разведение, содержание, использование в эксперименте. - Киев: Вища школа. - l983. - 383 с.
2. Kaлuнчeнкo СЮ., ^3urne И..A. Практическая андрология. - M.: Практическая медицина. - 2009. - 399 с.
3. Kuшкyн A.A. Руководство по лабораторным методам диагностики. - M.: Издат. группа ГЭОТАР-Медиа. - 2007. - 822 с.
4. Лyкaшeвuч B.C., Бyдeвuч A.И., Ceмaк И.В. u др. Получение рекомбинантного лактоферрина человека из молока коз-продуцентов и его физиологические эффекты // Доклады HAH Беларуси. - 2016. - Т. 60. -№ l. - С. 72-8l.
5. Andreollo N.A., Santos E.F., Araújo M.R., Lopes L.R. Rat's age versus human's age: what is the relationship? // Arq. Bras. Cir. Dig. - 20l2. -Vol. 25. - P. 49-5l.
6. Azhar S., Reaven E. Scavenger receptor class BI and selective cholesteryl ester uptake: partners in the regulation of steroidogenesis // Mol. oell endocrinol. - 2002. - Vol. l95. - P. l-26.
7. Basaría S. Male hypogonadism // Lancet. -20l4. - Vol. 383. - P. l250-63.
8. Chen H., Ge R.S., Zirkin B.R. Leydig cells: From stem cells to aging // Mol. cell endo-crinol. - 2009. - Vol. 306. - P. 9-16.
9. Chu L.W., Tam S., Wong R.L., et at. Bio-available testosterone predicts a lower risk of Alzheimer's disease in older men // J. Alzheimers Dis. - 2010. - Vol. 21. - P. 1335-45.
10. Coss C.C., Jones A., Hancock M.L., et at. Selective androgen receptor modulators for the treatment of late onset male hypogonadism // Asian J. Androl. - 2014. - Vol. 16. - P. 256-261.
11. Gotdman I.L., Georgieva S. G., Gurskiy Y.G., et at. Production of human lactoferrin in animal milk // Biochem. cell biol. - 2012. - Vol. 90. - P. 513-519.
12. Inamori M., Togawa J., Matsumoto S., et at. Protective effect of lactoferrin on acute acid reflux-induced esophageal mucosal damage // Hepatogastroenterology. - 2014. - Vol. 61. -P. 1595-1600.
13. Jia H., Suttivan C.T., McCoy S.C., et at. Review of health risks of low testosterone and testosterone administration // World J. Clin. cases. - 2015. - Vol. 3. - P. 338-344.
14. Khasnavis S., Ghosh A., Roy A., Pahan K. Castration induces Parkinson disease pathologies in young male mice via inducible nitric-oxide synthase // J. Biol. chem. - 2013. - Vol. 288. -P. 20843-55.
15. Ktoner R.A., Carson C. 3rd, Dobs A., et at.
Testosterone and cardiovascular disease // J. Am. coll. cardiol. - 2016. - Vol. 67. - P. 545-557.
16. Langfort J., Jagsz S., Dobrzyn P., et al.
Testosterone affects hormone-sensitive lipase (HSL) activity and lipid metabolism in the left ventricle // Biochem. biophys. res. commun. -2010,-Vol. 399. - P. 670-676.
17. Parini P., Angelin B., Rudling M. Cholesterol and lipoprotein metabolism in aging: reversal of hypercholesterolemia by growth hormone treatment in old rats // Arterioscler. thromb. vasc. biol. - 1999. - Vol. 19.-P. 832-839.
18. Saad F., Yassin A., Haider A., et al. Elderly men over 65 years of age with late-onset hypogonadism benefit as much from testosterone treatment as do younger men // Korean J. Urol. -2015. - Vol. 56. - P. 310-317.
19. Surampudi P.N., Wang C., Swerdloff R. Hypogonadism in the aging male diagnosis, potential benefits, and risks of testosterone replacement therapy // Int J Endocrinol. - 2012. -Vol. 2012. - P. 1-20.
20. Wang C., Nieschlag E., Swerdloff R., et al. Investigation, treatment and monitoring of late-onset hypogonadism in males: ISA, ISSAM, EAU, EAA and ASA recommendations // Eur. J. Endocrinol. -2008. - Vol. 159. - P. 507-514.
21. WuF.C., TajarA., PyeS.R., etal. Hypothalamic-pituitary-testicular axis disruptions in older men are differentially linked to age and modifiable risk factors: the European male aging study // J. Clin. endocrinol. metab. - 2008. - Vol. 93. -P. 2737-45.
Correction of hormonal and metabolic changes of age-specific hypogonadism in male rats with recombinant human lactoferrin
Yu.A. Rudnichenko, V.S. Lukashevich, I.V. Zalutskiy
Our study of the rat model of age-related hypogonadism revealed reduced serum levels of testosterone and some its predecessors in steroidogenesis (progesterone and 17-OH progesterone). Against this background, there was an increase of estradiol, resulting in a significant decrease of testosterone/estradiol index in 2-year rats during the experiment.
Systemic administration_per os of recombinant human lactoferrin to experimental animals had a significant stimulatory effect on testosterone biosynthesis in 2-year-olds, restoring it to the level of physiological values in young rats. Alongside with this, there also occurred a significant decrease in serum levels of luteinizing (not follicle stimulating) hormone - by 26,4% as compared with the control group of 2 year old animals.
Key words: age-related hypogonadism, recombinant human lactoferrin, testosterone, steroidogenesis, lipid and protein metabolism.
EnoMeAHu;HHa • № 1, 2017 62
