CC BY
97
Дискуссии
дискуссии
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016
Удк 615.272.4.03:616.831-005.4-036.12-06].015.4
Горошко о.А.1, новиков К.н.2, Кукес В.Г.1, Воейков В.Л.2, Архипов В.В.1, Буравлева Е.В.2, Бердникова н.Г.3, жестовская А.С.3
коррекция окислительного стресса у больных хронической ишемией головного мозга
'Центр клинической фармакологии ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава РФ, 127051, г. Москва; 2ФГОУ ВПО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», 119991, Москва; 3ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, 119991, г. Москва
для корреспонденции: Горошко Ольга Александровна — канд. фармац. наук, ст. науч. сотр. отд. клин. фармакокинетики; e-mail: Olga_goroshko@mail.ru
Проведены пилотные исследования влияния антиоксидантного лекарственного средства этилметилгидроксипириди-на малата на показатели окислительного стресса у больных с хронической ишемией головного мозга. При 6-дневном курсовом введении исследуемого антиоксиданта у таких больных статистически значимо ускоряется процесс генерации супероксидного анион-радикала в цельной неразведенной крови, хорошо обнаруживаемый методом люцигенин-зависимой хемилюминесценции, что, вероятно, регулирует механизм обратной связи оксидазных систем. При этом повышается активность супероксиддисмутазы и снижается концентрация вторичного продукта перекисного окисления липидов — малонового диальдегида, что делает обоснованным использование антиоксидантов в комплексной терапии при указанном заболевании.
Ключевые слова: супероксидный анион-радикал; этилметилгидроксипиридина малат; хемилюминисценция;
люцигенин; супероксиддисмутаза. для цитирования: Горошко О.А., Новиков К.Н., Кукес В.Г., Воейков В.Л., Архипов В.В., Буравлева Е.В., Бердникова Н.Г., Жестовская А.С. Коррекция окислительного стресса у больных хронической ишемией головного мозга. Клин. мед. 2016; 94 (7): 549—553. DOI 10.18821/0023-2149-2016-94-7-549-553
Goroshko o.A.1,. Novikov K.N.2, Kukes V.G.1, Voeykov V.L.2, Buravlyova E.V.2, ZhestovskaiaA.s.3, N.G. Berdnikova,3Arkhipov V.V.1
correction oxidative stress in patients with cerebral ischemia
'Clinical Pharmacology Center Federal State Budgetary Institution « Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow; 2M.V. Lomonosov Moscow state University, Moscow; 3I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow, Russia
A pilot study of the effect of the antioxidant drug ethylmethylhydroxypyridine malate on indicators of oxidative stress in patients with chronic cerebral ischemia. At 6 day course administration investigated the antioxidant in these patients significantly accelerates the process of generation of superoxide anion radical, established by lucigenin-depended chemiluminescence that probably regulate a feedback mechanism oxidase systems. This increases the activity of superoxide dismutase, and reduced the concentration of secondary peroxidation product — malondialdehyde, making reasonable use of antioxidants in the treatment of this pathology.
Keywords: superoxide anion radical; ethylmethylhydroxypyridine malate; chemiluminescence; lucigenin; superoxide dismutase.
Citation: Goroshko O.A., Novikov K.N., Kukes V.G., Voeykov V.L., Buravlyova E.V, Zhestovskaia A.S., Berdnikova N.G., Arkhipov V.V. Correction oxidative stress in patients with cerebral ischemia. Kin. Med. 2016; 94(7): 549—553. DOI 10.18821/0023-2149-2016-94-7-549-553
Correspondence to: Olga A. Goroshko — PhD, senior researcher of the department of Clinical Pharmacokinetics; e-mail: olga_goroshko@mail.ru
Received 03.12.15 Accepted 19.04.16
Во всех живых организмах протекают окислительно-восстановительные процессы, особая роль в которых отведена образованию активных форм кислорода (АФК). АФК участвуют в поддержании жизнедеятельности организмов в окружающей среде, в адаптивных реакциях и в обеспечении надежности работы защит-
ных систем организма, в частности за счет генерации высокой плотностной энергии электрон-возбужденных состояний [1].
По минимальным оценкам, в состоянии покоя при дыхании у животных и человека на продукцию АФК уходит от 10 до 30% молекулярного кислорода [2]. Для
активации молекулярного кислорода, получаемого с дыханием, и дальнейшего усвоения его организмом нужна соответствующая активность оксидазных систем организма (NADPH-оксидазы, ксантиноксидазы, цитохром Р450-оксигеназы и др.). В результате восстановления кислорода образуются его активные формы, в первую очередь супероксидный анион-радикал (О;-) и перекись водорода (Н2О2). Для нормального функционирования организма необходим некий физиологический уровень в органах и тканях генерации АФК, и особенно О;-, который в норме весьма низок (порядка 10-10—10-11 М) из-за распространенности в них мощной ферментативной и неферментативной систем регуляции накопления и устранения АФК [3, 4].
Вместе с тем при ряде нарушений цепи переноса электронов АФК могут индуцировать патогенетические состояния. При недостаточной продукции АФК, обусловленной некоторыми генетическими дисфункциями NADPH-оксидазы, последняя теряет способность генерировать О;-, что приводит к развитию патологических процессов [5]. Одним из методов определения активности оксидазных систем является метод люцигенинзависимой хемилюминесценции (ЛЦ-ХЛ).
Известно, что интенсивность ЛЦ-ХЛ коррелирует со скоростью генерации О;- в крови [6, 7], поскольку люцигенин окисляется и люминесцирует только под влиянием О;-, который определяется как первичная АФК и синтезируется в системе NADPH-оксидазы и ксантиноксидазы. Кроме того, люцигенин может выступать как флюорофор, переходя в возбужденное состояние при поглощении энергии высокой плотности. Следовательно, ЛЦ-ХЛ цельной крови опосредованно отражает состояние активности этих систем [3].
К развитию заболеваний приводит также чрезмерное накопление окисленных продуктов — перекисных соединений, диеновых конъюгатов и малонового диаль-дегида (МДА), сопровождающееся снижением активности ферментов антиоксидантной системы клеток — супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы. Доказано, что это происходит при развитии сердечно-сосудистых заболеваний, ишемии головного мозга, хронической об-структивной болезни легких и др. [8—11]. Окислительный стресс при ишемической болезни сердца (ИБС) приводит к накоплению недоокисленных продуктов в крови и тканях, которые, являясь цитотоксическими, разрушают клеточные мембраны, провоцируя гибель клетки. Поэтому и необходимо корректировать окислительный стресс у пациентов с ИБС.
В этой связи перспективным дополнением к фармакотерапии ишемических и сердечно-сосудистых заболеваний может оказаться использование антиок-сидантов, в том числе производных 3-оксипиридина [12], например соли яблочной кислоты, производного 3-оксипиридина этилметилгидроксипиридина малата (ЭМГПМ).
Таким образом, целью настоящей работы является исследование влияния антиоксидантного лекарствен-
Clinical Medicine, Russian journal. 2016; 94(7)
_DOI 10.18821/0023-2149-2016-94-7-549-553
Discussions
ного средства ЭМГПМ на показатели окислительного стресса у больных с хронической ишемией головного мозга.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Проведено пилотное исследование влияния ЭМГПМ на показатели окислительного стресса. В исследование включено 35 пациентов (средний возраст 78,2±9,3 года) с хронической ишемией головного мозга II и III степени и цереброваскулярной болезнью. Исследование было одобрено Медицинским этическим комитетом (Москва, клиническая больница N° 23 «Mедсантруд»), и все пациенты дали информированное согласие. Основную группу составили 25 пациентов, получавших дополнительно к основной терапии ЭМГПМ. При этом в основной группе у 5 пациентов в анамнезе было острое нарушение мозгового кровообращения с развитием гемипа-реза. Пациенты были госпитализированы в стационар бригадой скорой медицинской помощи или планово в связи с декомпенсацией цереброваскулярной болезни. У всех пациентов имелись сопутствующие сердечнососудистые заболевания: хроническая сердечная недостаточность, артериальная гипертензия и /или ИБС, у 2 пациентов отмечались нарушение сердечного ритма, мерцательная аритмия, что согласуется с данными других исследований [11]. Контрольную группу составили 10 пациентов (средний возраст 68,5±7,2 года) с перечисленными заболеваниями, получавшие только основную терапию. Для определения нормальных показателей исследовали кровь 8 условно здоровых пациентов (средний возраст 66,2±5,3 года) без сердечно-сосудистых заболеваний.
В отделении проводилась терапия ингибиторами ан-гиотензинпревращающего фермента, ß-блокаторами, антиагрегантами (антикоагулянтами), вазоактивны-ми (вазобрал, циннаризин), ноотропными (глитиалин, фенотропил) и противопаркинсоническими (праноран) препаратами. никто из пациентов ранее антиоксидант-ные лекарственные средства не получал.
Согласно утвержденной Минздравом России инструкции по применению ЭМГПМ, препарат вводили внутривенно капельно по 100 мг 1 раз в сутки в течение 5 дней на фоне описанной выше терапии. Для определения изучаемых показателей первый — исходный забор крови — осуществляли утром натощак в пробирки с ЭДТА и гепарином. Контрольный забор крови производили утром натощак на 6-й день после курсового введения препарата.
Скорость генерации О^- измеряли методом ЛЦ-ХЛ. Кинетику лЦ-Хл цельной неразведенной крови пациентов регистрировали на люминометре «Биотокс-7» (Россия). Показатели окислительного стресса — активность эритроцитарной Cu, Zn-СОД — определяли по скорости аутоокисления адреналина [13] в хлоро-форм-этанольных вытяжках из лизатов эритроцитов, концентрацию общих перекисей в плазме крови — методом иммуноферментного анализа с помощью набора
Дискуссии
OxyStat фирмы Biomedica (Германия), концентрацию МДА в плазме — по реакции с тиобарбитуровой кислотой [14].
Статистическую обработку и анализ полученных результатов проводили с использованием программных пакетов Microsoft Excel 7.0, Statistica 6.0. Достоверность различий рассчитывали по парному t критерию Стьюдента и по ^-критерию Манна—Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимостир < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В результате проведенного исследования в основной и контрольной группах мы отмечаем низкую активность антиоксидантного фермента (СОД), повышенные показатели окислительного стресса, что свидетельствует о его наличии у пациентов с ИБС, и достаточно низкий по сравнению с показателем у условно здоровых пациентов уровень хемилюминесценции.
После курса введения ЭМГПМ в основной группе установлено статистически значимое повышение скорости продукции О2- в цельной крови (по увеличению светосумм ЛЦ-ХЛ) и активности СОД, а также уменьшение количества вторичных продуктов перекисного окисления липидов (МДА), тогда как количество общих перекисных соединений имеет лишь тенденцию к уменьшению. У пациентов контрольной группы только активность СОД имеет тенденцию к повышению, тогда как индукции оксидазных систем не происходит и концентрация окисленных продуктов остается без изменения.
Полученные данные представлены в таблице.
ОБСУЖДЕНИЕ
Учитывая то, что у условно здоровых людей уровень ЛЦ-ХЛ значительно выше, чем у больных, можно сделать вывод, что для нормального протекания окислительно-восстановительных реакций в организме у пациентов с хронической ишемией головного мозга и цереброваскулярной болезнью не хватает энергии электронного возбуждения, которую дает молеку-
лярный кислород в процессе восстановления до О;-, о чем свидетельствует повышение уровня ЛЦ-ХЛ у пациентов с ИБС после курса лечения антиоксидант-ным лекарственным средством. Поскольку скорость генерации О;- характеризует активность NADPH-оксидазной и ксантиноксидазной систем, мы отмечаем снижение активности основных рабочих оксидаз-ных систем в исследуемых группах при ишемических поражениях органов и при сниженном парциальном давлении кислорода, которое, как правило, сопутствует ишемическим заболеваниям [10]. В оксидазной форме ксантиндегидрогеназа в качестве акцептора электронов использует молекулярный кислород, в результате чего образуются О;- и Н;О;. Чем выше парциальное давление кислорода, тем больше образуется О;- и меньше — Н;О;, а следовательно, в результате восстановления меньше образуется последую-
щих цитотоксических радикалов, таких как ОН' .
При экзогенном стимулировании выработки О;- начинается транскрипция ксантиндегидрогеназы с последующим переходом ее в оксидазную форму, что запускает процесс эндогенной продукции О;'- и регуляции редокс-потенциала организма [5] при повышении парциального давления кислорода, как было показано ранее [15].
Другая причина увеличения образования свобод-норадикальных форм кислорода (О;-) и общих пере-кисных соединений во время ишемических стимулов предполагает их полезное, а не повреждающее действие, т. е. их энергосберегающий эффект, что связано с ингибированием активности АТФаз и ферментов, использующих АТФ [16].
Следует отметить, что системы оксигеназных ферментов — это системы с так называемой обратной связью. Если уровень антиоксидантов по каким-то причинам повышается, то ферментативная активность и процессы окисления в клетках замедляются. Увеличение окисляемости ведет в свою очередь к более быстрому расходованию антиоксидантов, и все параметры возвращаются к норме. Мы предполагаем, что воздействие
изменение интенсивности лц-Хл цельной крови и параметров окислительно-восстановительных процессов в крови при введении ЭмгПм (М±т)
Показатель Светосумма ЛЦ-ХЛ, имп/300 с-103 Активность СОД, ед. на 1 мг гемоглобина Общие перекиси, мкмоль/мл МДА, нмоль/мл
Основная группа
До лечения 43,5±10,3 8,33±2,53 1,22±0,25 1,38±0,23
На 6-й день 103,2±28,3 10,41±1,52 1,05±0,17 1,09±0,21
Р 0,029 0,012 0,15 0,016
Контрольная группа
До лечения 44,3±14,4 8,87±0,9 0,97±0,13 1,03±0,17
На 6-й день 41,5±21,5 12,81±1,08 1,05±0,18 1,03±0,25
Р > 0,05 0,049 > 0,05 > 0,05
Условно здоровые пациенты
Норма 998,9±158,6 15,17±2,1 0,54±0,13 0,65±0,09
Clinical Medicine, Russian journal. 2016; 94(7) DOI 10.18821/0023-2149-2016-94-7-549-553
ЭМГПМ регулирует обратную связь оксидазных систем и способствует их нормализации.
Увеличение продукции АФК, модифицирующих структуру белка и повышающих окислительную деструкцию, является одним из факторов, стимулирующих усиление синтеза ключевых ферментов антиокси-дантной защиты (СОД, каталазы, глутатионпероксида-зы). В настоящем исследовании отмечено, что в ответ на увеличение генерации О2- повышается и активность СОД, дисмутирующей О2- (см. таблицу) и поддерживающей стационарную концентрацию О2- на определенном уровне, защищая тем самым клеточные структуры от его повреждающего действия.
В клетках ферменты, вырабатывающие Н2О2, находятся в пероксисомах. Их можно индуцировать, например, гиполипидимическими лекарственными средствами — перфторатами, клофибратом, ацетилсалициловой кислотой и др. При этом процессы пе-рекисного окисления липидов интенсифицируются с одновременной индукцией ряда антиоксидантных ферментов [17], что мы и наблюдаем в настоящем исследовании. В то же время в большинстве случаев не учитывается, что реакции метаболизма АФК являются энергогенерирующими; поэтому в настоящем исследовании мы наблюдаем, что в результате дисму-тации супероксидных радикалов О2- (реакция, катализируемая СОД) генерируется энергия электронного возбуждения, выраженная в увеличении хемилюми-несценции крови, которая интенсифицирует все биохимические процессы в организме, включая процессы детоксикации, в частности устранения недоокислен-ных продуктов, таких как МДА.
Действительно, хотя при повышенной скорости генерации О2- концентрация первичных продуктов — общих перекисных соединений —в плазме крови достоверно не снижается, отмечено достоверное снижение концентрации вторичных недоокислен-ных продуктов (МДА) более чем на 20%. Уменьшение количества вторичных продуктов перекисного окисления липидов имеет важное значение, поскольку не допускает образования конечных полимерных долго-живущих макромолекул, таких как шиффовы основания, которые являются токсичными для клетки. Полученные результаты согласуются с данными других исследований [10—12].
Ранее нами было установлено влияние ЭМГПМ на улучшение кислородообмена у пациентов с хронической сердечной недостаточностью путем регуляции процесса гликолиза [15]. В результате настоящего исследования можно отметить связь скорости образования О2- (т. е. активации ксантин- и NADPH-оксидазы, за счет которой включается процесс гликолиза), повышение активности СОД и регуляции образования фосфатного метаболита — 2,3-дифосфоглицерата, способствующего отделению кислорода от гемоглобина и поступлению его в ткани, и как результат— повышение парциального давления кислорода.
Discussions
Выводы
1. Использование этилметилгидроксипиридина ма-лата вызывает усиление скорости генерации супероксидного анион-радикала у пациентов с хронической ишемией головного мозга.
2. Уже через 5 дней курсового введения этилметил-гидроксипиридина малат индуцирует антиоксидант-ную систему защиты организма и снижает концентрацию вторичных продуктов перекисного окисления липидов, что свидетельствует об успешной коррекции окислительного стресса у пациентов с ишемической болезнью сердца.
ЛИТЕРАТУРА
1. Voeikov V.L. Reactive oxygen species-(ROS) pathogens or sources of vital energy: Part 1. ROS in normal and pathologic physiology of living systems. J. Alternat. Complement. Med. 2006; 12 (2): 111—8.
2. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б.С., Уголев А.Т. Кислородзависи-мые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М.: Наука; 1982.
3. Sheppard F.R., Kelher M.R., Moore E.E. et al. Structural organization of the neutrophil NADFH-oxidase: phosphorilation and translocation during priming and activation. J. Leukoc. Biol. 2005; 78: 1025—42.
4. Новиков К.Н., Котелевцев С.В., Козлов Ю.П. Свободно-радикальные процессы в биологических системах при воздействии факторов окружающей среды. М.: РУДН; 2011.
5. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика»; 2001.
6. Afanas'ev I.B., Ostrachovitch E.A., Korkina L.G. Lucigenin is a mediator of cytochrome C reduction but not of superoxide production. Arch. Biochem. Biophys. 1999; 366: 267—74.
7. Владимиров Ю.А., Проскурнина Е.В. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция. Успехи биологической химии. 2009; 49: 341—88.
8. Singal P.K., Khaper N., Palace V. et al. The role of oxidative stress in the genesis of heart disease. Cardiovasc. Res. 1998; 40: 426—32.
9. Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. NHBLI/WHO Workshop Report. Bethesda: National Heart, Lung and Blood Institute: updated 2014 (www.gold.copd.com).
10. Кукес В.Г., Горбач Т.В., Ромащенко О.В., Румбешт В.В. Энергосберегающая активность антиоксиданта ЭМГПМа при моделированной ишемии миокарда. Лекарственные препараты и рациональная фармакотерапия. 2014; (1): 16—20.
11. Палаткина Л.О. Корнеева О.Н., Драпкина О.М. Окислительный стресс — роль в патогенензе хронической сердечной недостаточности, возможности коррекции. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2012; 11 (6): 91—4.
12. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Проблемы фармакопрофилактики и коррекции окислительного стресса. М.; 2013.
13. Сирота Т.В. Новый подход к исследованию автоокисления адреналина исследования и его использование для измерений активности супероксиддисмутазы. Вопросы медицинской химии. 1999; 45 (3): 263—72.
14. Ланкин В.З., Гуревич С.М., Бурлакова Е.Б. Изучение аскорбат-зависимого переокисления липидов тканей при помощи теста с 2-тиобарбитуровой кислотой. Труды МОИП. 1975; 52: 73—8.
15. Кукес В.Г., Прокофьев А.Б., Горошко О.А. Чеча О.А. Возможности медикаментозной коррекции напряжения кислорода в крови у пациентов с хронической сердечной недостаточностью. Биомедицина. 2014 (2): 114—9.
16. Лямина Н.П., Карпова Э.С., Котельникова Е.В. Адаптация к гипоксии и ишемическое прекондиционирование: от фундаментальных исследований к клинической практике. Клин. мед. 2014; (2): 23—9.
17. Оковитый С.В. Клиническая фармакология антиоксидантов. ФАРМиндекс-Практик. 2003; (5): 85—111.
Дискуссии
REFERENCES
1. Voeikov V.L. Reactive oxygen species-(ROS) pathogens or sources of vital energy: Part 1. ROS in normal and pathologic physiology of living systems. J. Alternat. Complement. Med. 2006; 12 (2): 111—8.
2. Luk'yanova L.D., Balmukhanov B.S., Ugolev A.T. Oxygen-dependent Processes in the Cell and its Functional State. Moscow: Nauka; 1982. (in Russian)
3. Sheppard F.R., Kelher M.R., Moore E.E. et al. Structural organization of the neutrophil NADFH-oxidase: phosphorilation and translocation during priming and activation. J. Leukoc. Biol. 2005; 78: 1025—42.
4. Novikov K.N., Kotelevtsev S.V., Kozlov Yu.P. Free-radical Processes in Biological Systems under the Influence of Environmental Factors. Moscow: RUDN; 2011. (in Russian)
5. Zenkov N.K., Lankin V.Z., Men'shchikova E.B. Oxidative Stress: the Biochemical and Pathophysiological Aspects. Moscow: MAIK «Nauka/Interperiodika»; 2001. (in Russian)
6. Afanas'ev I.B., Ostrachovitch E.A., Korkina L.G. Lucigenin is a mediator of cytochrome C reduction but not of superoxide production. Arch. Biochem. Biophys. 1999; 366: 267—74.
7. Vladimirov Yu.A., Proskurnina E.V. Free radicals and cellular chemiluminescence. Uspekhi biologicheskoy khimii. 2009; (49); 341—88. (in Russian)
8. Singal P.K., Khaper N., Palace V. et al. The role of oxidative stress in the genesis of heart disease. Cardiovasc. Res. 1998; 40: 426—32.
9. Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. NHBLI/WHO Workshop
Report. Bethesda: National Heart, Lung and Blood Institute: updated 2014 (www.gold.copd.com).
10. Kukes V.G., Gorbach T.V., Romashchenko O.V., Rumbesht V.V. Energy-saving antioxidant activity EMHPMa during simulated ischemia. Lekarstvennyepreparaty i ratsional'naya farmakoterapiya. 2014; (1): 16—20. (in Russian)
11. Palatkina L.O., Korneeva O.N., Drapkina O.M. Oxidative stress — role in the pathogenesis of chronic heart failure, the possibility of correction. Kardiovaskulyarnaya terapiya i profilaktika. 2012; 11 (6): 91—4. (in Russian)
12. Sernov L.N., Gatsura V.V. Problems Pharmacoprevention and Correction of Oxidative Stress. Moscow; 2013. (in Russian)
13. Sirota T.V. A new approach to the study of auto-oxidation of adrenaline research and its use for measuring the activity of superoxide dismutase. Voprosy meditsinskoy khimii. 1999; 45 (3): 263—72. (in Russian)
14. Lankin V.Z., Gurevich S.M., Burlakova E.B. Study ascorbate lipid peroxidation dependent tissues using the test with 2-thiobarbituric acid. Trudy MOIP. 1975; 52: 73—8. (in Russian)
15. Kukes V.G., Prokofev A.B., Goroshko O.A. Checha O.A. Features drug correction of oxygen tension in the blood in patients with chronic heart failure. Biomeditsina. 2014 (2): 114—9. (in Russian)
16. Lyamina N.P., Karpova E.S., Kotel'nikova E.V. Adaptation to hypoxia and ischemic preconditioning: from basic research to clinical practice. Klin. med 2014; (2): 23—9. (in Russian)
17. Okovityy S.V. Clinical pharmacology antioxidants. Farmindeks-Praktik. 2003; (5): 85—111. (in Russian)
Поступила 3.12.15 Принята в печать 19.04.16
