CC BY
47
ТОЧКА ЗРЕНИЯ
© И. Н. Тюренков, Л. Б. Иванова, Коррекция нарушений гемостаза у самок В. И. Карамышева, С. А. Лебедева с экспериментальным гестозом с помощью
производных ГАМК
ВолгГМу г. Волгоград УДК: 618.3-008.6:616.151.47.55-092.9
■ Показано, что в условиях экспериментального гестоза, вызванного заменой питьевой воды на 1,8 % ^О у крыс с первого дня гестации до родов, наблюдаются нарушения коагуляционных свойств
и увеличение тромбогенного потенциала крови, о чем свидетельствует укорочение АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, повышение уровня фибриногена, гиперагрегация тромбоцитов. Производные ГАМК — соединения РГПУ-147, РГПУ-189 и препарат сравнения сулодексид проявляют антикоагулянтную и антиагрегантную активность в условиях экспериментального гестоза, удлиняя АЧТВ, тромбиновое и протромбиновое время, снижая уровень фибриногена, уменьшая агрегацию тромбоцитов.
■ Ключевые слова: гестоз; производные ГАМК; гиперагрегация тромбоцитов; гемостаз.
Гестоз — это довольно частое осложнение беременности (12-40 % случаев), возникающее и развивающееся при остром повреждении эндотелия сосудов и мембран эритроцитов и тромбоцитов, вследствие чего нарушаются реологические и коагуляционные свойства крови, увеличивается ее тромбо-генная активность [1, 8, 12, 14, 15].
Применяющиеся в настоящий момент в клинике антикоагулянты и антиагреганты обладают рядом неблагоприятных побочных действий и, в некоторых случаях, недостаточной эффективностью [1]. Поэтому поиск веществ с антикоагулянт-ной и антиагрегантной активностью для лечения нарушений в системе гемостаза при осложненной беременности остается актуальным.
Известно, что производные гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) снижают агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, ограничивают гиперкоагуляцию плазмы, улучшают реологию и микроциркуляцию крови [5, 8, 6, 13].
В этой связи целью данного исследования явилось изучение влияния производных ГАМК на показатели гемостаза при экспериментальном гестозе.
Материалы и методы
Существует несколько моделей воспроизведения экспериментального гестоза (ЭГ) у животных: путем коарктации аорты, введением DOCA (дезоксикортикостерона) и 0,9 % солевого раствора, использованием ингибитора NO-синтазы нитро-Ь-аргинина, заменой питьевой воды на 1,8 % NaCl и др. [9, 18, 19, 17, 16, 20]. По данным литературы, при использовании этих моделей наблюдаются эффекты, сходные с развитием гестоза: гипертензия, протеинурия, активация ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, снижение маточно-плацентарного кровотока, эндо-телиальная дисфункция, гиперкоагуляция, нарушения баланса гормонов фето-плацентарного комплекса, задержка внутриутробного развития плодов и др. Нами была выбрана легко воспроизводимая модель экспериментального гестоза — замена питьевой воды на 1,8 % р-р NaCl у беременных самок с 1-го дня гестации и до родов [9, 18, 19].
Эксперименты проведены на беременных беспородных крысах-самках массой 220-250 г. Первый день гестации определялся по наличию сперматозоидов во влагалищном мазке.
Развитие осложнения беременности определялось триадой симптомов, характерных для гестоза: повышение артериального давления (АД), протеинурия, выраженность отечного синдрома.
Измерение артериального давления проводилось у бодрствующих беременных крыс в первый и последний дни гестации с использованием компьютерной системы Power Lab/4SP с ML135 Dual Bio и MLA0112 ECG Lead Swich Box. Для измерения АД самка помещалась в домик, на хвост одевался манжет и датчик, после чего производилось измерение.
Определение концентрации белка в суточной моче осуществлялось фотометрически (спектрофотометр ПЭ -5400 В («Экрос» Россия)) по реакции с пирогаллоловым красным (набор реагентов «Ольвекс диагностикум», Россия) до и на 20-й день беременности. Для сбора мочи беременные самки помещались в метаболические камеры («Евролаб», Россия). Результаты концентрации белка рассчитывались согласно формуле: С = С станд* D образец/D станд, где С станд — концентрация белка в калибровочном растворе, D станд. и D образец — оптическая плотность стандартной и опытной проб на длине волны 600 нм, полученный результат умножался на суточный диурез животного.
Для определения наличия отечного синдрома у декапитированных животных забирались кусочки жировой, мышечной тканей и мозга, инкубировались в термостате при t=37 °С в течение 24 часов, по разнице массы препаратов до и после инкубации судили о степени выраженности отеков.
Изучено влияние производных ГАМК — соединений под лабораторными шифрами РГПУ-189 в дозе 15 мг/кг (n=6), РГПУ-147-50 мг/кг (n=6) и препарата сравнения сулодексида — 30 МЕ/кг (n=6) на показатели гемостаза в условиях экспериментального гестоза (ЭГ). Исследуемые вещества вводились перорально, один раз в сутки ежедневно с 1 до 20 дня гестации. Группой позитивного контроля служили беременные самки, принимавшие обычную воду (n=6), в группу негативного контроля входили беременные самки с экспериментальным гестозом (n=7), получавшие физ. р-р в аналогичном с опытными группами режиме.
Забор крови для исследования гемостаза проводился из брюшного отдела аорты беременных крыс с экспериментальным гестозом на 20-й день гестации. Кровь стабилизировали 3,8%-м раствором цитрата натрия в соотношении 9 : 1. Определение показателей осуществлялось на программируемом оптико-механическом коагулометре — Минилаб 701 с использованием наборов для определения про-тромбинового времени, тромбин-теста, фибриноген-теста, активированного частичного тромбопластино-вого времени (производство НПО РЕНАМ, Россия) [2]. Антиагрегантная активность исследовалась на двухканальном лазерноманализатореагрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-производственной фирмы «Биола» (г. Москва, Россия) по методу Born G. В модификации Габбасова З. А. и соавт. (1989) [10]. В качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали АДФ («Renal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкМ.
Статистическую обработку результатов проводили в электронной таблице Exel 5.0 с использованием t-критерия Стьюдента, q-критерия Ньюмена-Кейлса
при помощи пакета статистических программ Microsoft Exel 2006. Статистически достоверными различия считали при значимости р < 0,05.
Результаты исследования
У самок, получавших во время беременности обычную воду, артериальное давление к 20-му дню гестации не изменялось, концентрация белка в моче увеличивалась в 1,4 раза по сравнению с исходными показателями. Масса препаратов мозга, мышц и сальника снижалась после инкубации при 37 °С в течение 24 часов на 69,7; 73,8 и 17 % соответственно (табл. 1).
В группе самок, принимавших во время беременности вместо питьевой воды 1,8 % р-р NaCl, на 20-й день гестации наблюдалось повышение АД на 18,2 %, увеличение концентрации белка в моче в 6,2 раза по сравнению с исходными данными, уменьшение массы препаратов мозга, мышц и сальника на 74,6; 76,3; 25,3 % соответственно (табл. 1). Полученные результаты свидетельствуют о выраженном повышении АД, белка в моче и отека тканей, что указывает на развитие экспериментального гестоза у животных этой группы, что согласуется с литературными данными [9, 18].
Самки, получавшие во время беременности вместо питьевой воды 1,8 % р-р NaCl и производные ГАМК — соединения РГПУ-147 и РГПУ-189, а также препарат сравнения суло-дексид перорально, один раз в день ежедневно уменьшали выраженность экспериментального гестоза, о чем свидетельствует отсутствие изменений АД, снижение концентрации белка в моче и отеков у животных опытных групп по сравнению с контрольной группой с ЭГ (табл. 1).
Исследование гемостаза показало, что в контрольной группе животных с осложненной беременностью наблюдается укорочение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) на 14,6 % (р < 0,05) по сравнению с показателем группы беременных самок без ЭГ (табл. 2), что свидетельствует об активации процессов свертывания крови.
АЧТВ у животных с ЭГ, получавших во время гестации соединения РГПУ-189, РГПУ-147 и суло-дексид, увеличилось на 24,1; 20,3; 59,5 % (р < 0,05) соответственно, по сравнению с группой позитивного контроля, что позволяет предположить наличие у них антикоагулянтных свойств (табл. 2).
Протромбиновое время (ПВ) у самок с осложненной беременностью уменьшилось по сравнению с аналогичным показателем животных группы позитивного контроля на 15,3 % (р < 0,05), что отражает активацию внешнего пути образования тромбина на фоне моделируемой патологии. Введение животным с ЭГ соединения РГПУ-189 повышало ПВ на 32,2 %,
Таблица 1
Влияние производных ГАМК на проявления экспериментального гестоза:
артериальное давление, концентрацию белка в моче и выраженность отечного синдрома у беременных крыс
Регистрируемый показатель
Исследуемые группы АД систолическое, мм рт. ст. (в скобках % Концентрация белка Отеки (снижение
прироста относительно исходных данных) в моче, г/л массы препарата в %
До беременности 20-й день гестации До беременности 20-й день гестации относительно исходных данных)
Беременные самки без ЭГ мозг -69,7 ± 5,4
113,8 ± 11,4 114,7 ± 10,7 0,005 ± 0,002 0,007 ± 0,003 мышцы -73,8 ± 4,1
сальник -16,9 ± 6,0
Самки с ЭГ+физ р-р 130,3 ± 12,5* (18,2 %) мозг -74,6 ± 5,4
110,7 ± 12,4 0,004 ± 0,002 0,025 ± 0,02* мышцы -76,3 ± 4,1
сальник -25,3 ± 8,1*
Самки 114,5 ± 5,7** (3,4 %) мозг -73,8 ± 8,8
с ЭГ+РГПУ- 110,6 ± 6,1 0,006 ± 0,002 0,020 ± 0,01 мышцы -73,3 ± 4,5
147 сальник -22,9 ± 13,1
Самки 114,6 ± 10,4** (2 %) мозг -67 ± 12,6
с ЭГ+РГПУ- 112,4 ± 11,2 0,005 ± 0,003 0,015 ± 0,01** мышцы -73 ± 4,2
189 сальник -18,1 ± 4,2**
Самки с ЭГ+ сулодексид 112,3 ± 10,9** (1,1 %) мозг -68,3 ± 2,9
111,1 ± 11,7 0,004 ± 0,002 0,019 ± 0,02 мышцы -74,7 ± 2,9
сальник -25,0 ± 6,1
* — данные статистически достоверны по ^критерию Стьюдента, q-критерию Ньюмена-Кейлса при р < 0,05 по сравнению с беременными самками без ЭГ; ** — данные статистически достоверны по ^критерию Стьюдента, q-критерию Ньюмена-Кейлса при р < 0,05 по сравнению с беременными самками без ЭГ
РГПУ-147 — на 49,3 % (р < 0,05), сулодекси-да — 40,2 на % (р < 0,05) (табл. 2).
О преобладании процессов гиперкоагуляции при ЭГ свидетельствует также укорочение тром-бинового времени, которое наблюдалось у животных группы негативного контроля (13,5 ± 4,02 сек) по сравнению с самками с неосложненной беременностью (21,8 ± 4,4) (р < 0,05). Введение соединений РГПУ-147, РГПУ-189 и препарата сравнения сулодексида беременным самкам с ЭГ, приводило к удлинению ТВ на 30,1; 17,1; 52,4 % соответственно, по сравнению с группой негативного контроля (табл. 2).
По результатам проведенного исследования в группе животных с осложненной беременностью наблюдается увеличение концентрации фибриногена на 20,2 % (р < 0,05) по сравнению с животны-
Изменения показателей гемостаза самок с ЭГ под влиянием
ми без ЭГ, что свидетельствует о повышении свертываемости крови и риске образования тромбов в группе негативного контроля (табл. 2).
У животных, получавших соединения РГПУ-189, РГПУ-147 и препарат сравнения сулодексид концентрация фибриногена в плазме крови была снижена на 18,5; 16,7; 19,1 % (р < 0,05) соответственно по сравнению с группой животных с ЭГ (табл. 2).
Изучение агрегационной активности тромбоцитов показало, что индуцированная АДФ скорость их агрегации у беременных самок с экспериментальным гестозом была выше на 41,4 % (р < 0,05) по сравнению с таковыми без ЭГ. Все исследуемые вещества снижали скорость агрегации тромбоцитов: РГПУ-147 — на 14, 5 %, РГПУ-189 — на 41,7 % (р < 0,05), сулодексид — на 42,8 % (р < 0,05) (табл. 2).
Таблица 2
производных ГАМК
Показатели Самки без ЭГ Самки с ЭГ+физ. р-р ЭГ+ РГПУ147 ЭГ+ РГПУ189 ЭГ+ сулодексид
АЧТВ,с 15,4 ± 1,7 13,2 ± 1,0* 15,8 ± 4,0 16,4 ± 4,8 21,0 ± 4,0*
ПВ, с 13,9 ± 1,18 11,7 ± 1,3* 17,6 ± 5,7* 15,6 ± 5,1 16,5 ± 4,1*
ТВ, с 21,8 ± 4,5 12,9 ± 3,1* 16,8 ± 5,2* 15,1 ± 2,1 19,7 ± 2,4*
Фибриноген, г/л 2,7 ± 0,3 3,22 ± 0,3* 2,7 ± 0,5* 2,6 ± 0,3* 2,6 ± 0,35*
Скорость агрегации тромбоцитов, ус. ед. 22,5 ± 3,9 31,8 ± 3,5* 27,2 ± 4,1 18,5 ± 4,3* 18,2 ± 3,6*
*данные достоверны относительно беременных самок без ЭГ по t-критерию Стьюдента при р < 0,05 # данные достоверны относительно контрольной группы животных по t-критерию Стьюдента при р < 0,05
Таким образом, замена питьевой воды на 1,8 % р-р NaCl с первого дня гестации до родов вызывает развитие ЭГ, на что указывает наличие триады симптомов: гипертензия, протеинурия, отеки. Кроме того, в другой серии экспериментов нами были зафиксированы случаи неразвивающейся беременности, мертворожденного потомства, гибели самок с ЭГ в период гестации и после родов [11].
Выявлено, что ЭГ вызывает выраженные сдвиги в сторону гиперкоагуляции и гиперагрегации в плазменно-коагуляционном и сосудисто-тромбоцитарном звеньях гемостаза, о чем свидетельствует укорочение АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, повышение концентрации фибриногена и скорости агрегации тромбоцитов.
Производные ГАМК — соединения РГПУ-147, РГПУ-189 и препарат сравнения сулодексид ограничивают проявления ЭГ на что указывает отсутствие изменений АД за период гестации, в меньшей степени выраженные протеинурия и отеки по сравнению с контрольной группой самок с ЭГ, снижение числа случаев мертворождения, неразвивающейся беременности, гибели самок во время беременности и в послеродовом периоде [3,11]. Исследуемые соединения снижают повышенный коагуляционный и тромбогенный потенциал крови животных с ЭГ, что проявляется в увеличении АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, снижении концентрации фибриногена и уменьшении скорости агрегации тромбоцитов в группах животных, получавших вещества.
В настоящее время одним из ключевых факторов, лежащих в основе патогенеза гестоза, является дисфункция эндотелия сосудов. В норме эндотелий обладает высокой антиагрегантной, антикоагуляционной и фибринолитической активностью, обусловленной синтезом дезагрегантов и антикоагулянтов (простациклина, оксида азота, антитромбина III и активаторов плазминогена). Очевидно, при ЭГ в результате нарушения функции эндотелия равновесие между его анти- и про-коагулянтными влияниями сдвигается в сторону последних, что приводит к возникновению и развитию изменений в системе гемостаза [1].
Нормализующее действие производных ГАМК на проявления гестоза связано, вероятно, с их эндотелиопротективной активностью, что показано в ряде работ и проявляется в улучшении эндотелий-зависимой вазодилатации, повышении стабильности и мощности функционирования системы синтеза NO, снижении сопротивления и увеличении эластичности сосудов при различных экспериментальных патологиях [4, 13]. В этих же исследованиях выявлено повышение под действием РГПУ-147 и РГПУ-189 АЧТВ, протромбинового и тромбино-вого времени, снижение концентрации фибриноге-
на, что свидетельствует об их антикоагулянтной активности. Ранее получены доказательства наличия у производных ГАМК прямого и опосредованного антиагрегантного действия, связанного, вероятно, с изменением концентрации внутриклеточного Са2+ в тромбоцитах посредством ингибирования кальмо-дулина [7] и с индукцией синтеза в эндотелиоцитах дезагрегантов [4, 5, 13].
Выводы
При экспериментальном гестозе наблюдается повышение коагуляционного и тромбогенного потенциала крови, что проявляется в укорочении АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, увеличении концентрации фибриногена и скорости агрегации тромбоцитов,
Производные ГАМК — соединения РГПУ-147 и РГПУ-189 в значительной степени предупреждают нарушения гемостаза у животных, получавших производные ГАМК и препарат сравнения сулодексид, о чем свидетельствует увеличение АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, снижение уровня фибриногена и уменьшение скорости агрегации тромбоцитов. По эффективности исследуемые соединения сопоставимы с препаратом сравнения сулодексидом.
Литература
1. Баев О. Р., ЧургановаА.А. Профилактика и лечение нарушений в системе гемостаза при гестозе // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. — 2008. — № 5. — С. 59-67
2. Баркаган З. С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза.—М.: Ньюдиамед, 2008.—292 с.
3. Влияние соединений РГПУ-147 на микроциркуляцию в условиях хронической алкогольной интоксикации / Пер-филова В. Н. [и др.] // Региональное кровообращение и микроциркуляция. — 2006. — № 2, (18). — С. 78-81
4. ВоронковА.В. Эндотелиальная дисфункция и пути ее фармакологической коррекции: автореф. дис... д-ра. мед. наук. — Волгоград, 2011. — 46 с
5. ЕдигароваЛ.В., АкопянВ.П. Антиагрегантная активность сосудистой стенки и возможность ее корреции ГАМК-ергическими средствами в условиях гипокинезии // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2000. — № 5.— С. 41-43
6. Изменения функционирования системы микроциркуляции под влиянием нового производного ГАМК — соединения РГПУ-147 при хроническом стрессорном воздействии / Перфилова В. Н. [и др.] // Региональное кровообращение и микроциркуляция. — 2007. — № 4. — С. 64-67
7. ЛедяевМ. я. Влияние новых соединений — производных гамма-аминомасляной кислоты на агрегацию тромбоцитов и свертывание крови: автореф. дис. канд. мед. наук. — М., 1986. — 23 с.
8. МурашкоА.В., Кумыкова З.Х. Роль антиагрегантов в акушерской практике // Consilium Medicum. — 2006. — Т. 8, № 6. — С. 12-16.
9. Нарушение в системе легкие-плацента в условиях экспериментального гестоза у крыс / Мясникова В. В. [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2005. — Т. 140, № 7. — С. 24-27
10. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов / Габбасов З. А. [и др.] // Лабораторное дело. — 1989. — № 10. — С. 15-18
11. ПерфилоеаВ.Н., ИвановаЛ.Б. Влияние производных ГАМК на родоразрешение крыс с экспериментальным гестозом // Всероссийская научно-практическая конференция «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты». — Саратов, 2011. — С. 227-229
12. Прогностические критерии тяжести течения гестоза / Сидорова И. С. [и др.] // Проблемы беременности. — 2007. — № 17. — С. 49-54.
13. РобертусА.И., ВоронковА.В. Оценка взаимосвязи между уровнем фибриногена и скоростью тромбообразования у животных с недостаточностью половых гормонов на фоне введения производного ГАМК РГПУ-189 // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сборник трудов межвузовской научной конференции, посвященной памяти профессора Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ. — Курск, 2009. — С. 308-309.
14. Сидорова И. С., Галиноеа И. Л. Эндотелиальная дисфункция в развитии гестоза // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. — 2006. — № 1. — С. 75-81.
15. Стрижакое А.Н., МакацарияА. Д., ИгнаткоИ. В. Система гемостаза у беременных с гестозом и плацентарной недостаточностью // Вопросы гинекологии, акушерства и пе-ринатологии. — 2007. — № 3. — С. 5-12.
16. Beneficial Effects of Metolazone in a Rat Model of Preeclampsia / Pridjian G. [et al.] // J. Pharmacol. Exp. Therapeutics. — 2006. — Vol. 318, N 3. — P. 1027-1032
17. HenzelM., AlsipN. Systemic vascular reactivity in an aortic coarctation model of preeclampsia in the rat // Pathophysiol-ogy. — 2001. — Vol. 8, N 2. — P. 133-140
18. High-sodium intake prevents pregnancy-induced decrease of blood pressure in the rat / Beausejour A. [et al.] // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. — 2003. — Vol. 285. — P. 375-383
■ Адреса авторов для переписки-
Тюренкое Иван Николаевич — д. м. н., проф, зав. каф. фармакологии и биофармации ФУВ, ВолгГМУ, Волгоград, ул. Пугачевская 3, 400066. E-mail: fibfuv@mail.ru.
Иванова Людмила Борисовна — асс. кафедры фармакологии и биофармации ФУВ, ВолгГМУ, г Волгоград, ул. Пугачевская 3, 400066. E-mail: lusi_662_@list.ru.
Карамышева Виктория Игоревна — соискатель кафедры фармакологии и биофармации ФУВ, ВолгГМУ, г. Волгоград, ул. Пугачевская 3, 400066. E-mail: vikulenka86@mail.ru.
Лебедева Светлана Александровна — к. б. н., м. н. с. НИИ фарма-кологии, ВолгГМУ, г. Волгоград, ул. Пугачевская, 3, 400066
19. Monoclonal antibody to an endogenous bufadienolide, marinobufagenin, reverses preeclampsia-induced Na/K — ATP-ase inhibition and lowers blood pressure in NaCl-sensitive hypertension / Fedorova O. V. [et al.] // J. Hyper-tens. — 2008. — Vol. 26, N 12. — P. 2414-2425
20. Pre-eclampsia-like conditions produced by nitric oxide inhibition: effects of L-arginine, D-arginine and steroid hormones / Buhimschi I. [et al.] // Human Reproduction. — 1995. — Vol. 10, N10. — P. 2723-2730.
Статья представлена Константиновой Н. Н., ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН, Санкт-Петербург
change of indicators of a hemostasis at females with experimental gestosis under the influence of gaba derivatives
Tyurenkov I. N., Ivanova L. B., Karamysheva V. I., Lebedeva S. A.
■ Summary: It is shown that in the conditions of experimental gestosis, induced by replacing drinking water of 1.8% sodium chloride at rats from the first day of gestation until birth, observes disturbances of coagulative properties and augmentation of thrombogenic potential of a blood to what shorting APTT, prothrombin and thrombin time, rising of level of a fibrinogen, hyperaggregation of thrombocytes testifies. GABA-derivative compounds WPC-147, WPC-189 and comparator drug sulodexide show anticoagulant and antiplatelet activity in the conditions of experimental gestosis, extending APTT, thrombin and a prothrombin time, reducing fibrinogen level, reducing platelet aggregation.
■ Key words: gestosis; GABA-derivative; hyperaggregation of thrombocytes; haemostasis.
Tyurenkov Ivan N. — Sec. Doctorate Degree, Full Professor, Head of Pharmacology and Biopharmacy Department Volgograd State Medical University, Volgograd, street Pugachevsky 3. E-mail: fibfuv@mail.ru.
Ivanova Ludmila B. — Assistant Professor of Pharmacology and Biopharmacy Department Volgograd State Medical University, Volgograd, street Pugachevsky 3. E-mail: lusi_662_@list.ru.
Karamysheva Victorija I. — Junior Scientist Researcher of Pharmacology Research Institute, Volgograd State Medical University, Volgograd, street Pugachevsky 3. E-mail: vikulenka86@mail.ru.
Lebedeva Svetlana A. — Ph.D., Junior Scientist Researcher of Pharmacology Research Institute, Volgograd State Medical University, Volgograd, street Pugachevsky 3,
