CC BY
63
УДК 615.73:616.36-002-085
КОРРЕКЦИЯ ХОЛЕСТАЗА РАСТИТЕЛЬНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ НА МОДЕЛИ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПЕЧЕНИ
Л.В. Прокофьева
Ульяновский государственный университет
В исследовании на экспериментальных животных (крысах) изучалась гепатопротектор-ная активность нового препарата «Бетафит» по способности препятствовать холестазу при токсическом поражении печени туберкулостатиками (рифампицином, изониазидом, пиразинамидом). «Бетафит» - это смесь водных извлечений из растений с соком свеклы (патент № 212419 от 27.11.98 г., Катикова О.Ю., Тишкин В.С.).
Антихолестатическая активность «Бетафита» изучалась в сравнении с широко применяемыми препаратами: гептрал, галстена, тыквеол, ЛИВ -52. По убыванию выраженности антихолестатической активности препараты исследования представляются следующим образом: «Бетафит» > «Галстена» > «Гептрал» > «Тыквеол» > «ЛИВ-52».
Ключевые слова: гепатопротекторы, ксенобиотики, туберкулостатики, холестаз.
Введение. В современном обществе усиливается антигенная нагрузка на организм человека, приводя к нарушению в основных регуляторных системах, росту заболеваемости, объединенных понятием «экологическая патология» [1]. Печень, выполняя барьерную функцию в отношении ксенобиотиков, повреждается, при этом не только ослабевает ее антитоксическая функция, она сама становится источником эндогенной интоксикации, и в частности по причине холестаза. Учитывая высокую уязвимость гепатоцитов к продуктам перекисного окисления липидов (ПОЛ), целесообразно изучение возможностей использования антиоксидантов при токсических повреждениях печени [5; 18]. В роли инициатора активации ПОЛ в печени выступают, среди прочих ксенобиотиков, и ге-патотропные лекарственные средства (ЛС), особенно при длительном применении, лимитируя при этом эффективность фармакотерапии, например туберкулеза, онкологических и других заболеваний [6; 10]. Частота суб-клинического повреждения печени при применении изониазида очень велика (более 20 %). Токсическое действие изониазида усиливается при одновременном приеме с индукторами ферментов - рифампицином и другими. Побочное гепатотоксическое действие рифампицина, изониазида, пиразинамида (РИП) (наиболее часто применяемой комби-
нации для эрадикации туберкулезной инфекции), приводит к хроническому медикаментозному гепатиту, который в 66,6 % случаев имеет персистирующее течение. Кроме паренхиматозных изменений печени при этом имеется и холестаз.
Показания к назначению средств симптоматической и патогенетической терапии при лекарственных повреждениях печени указываются в литературе не конкретно и даже противоречиво. Механизмы действия имеющихся в арсенале практической медицины гепатопротекторных средств, представленных в основном зарубежными препаратами, изучены не полностью; высокоэффективные препараты этого профиля отсутствуют [2; 4; 11; 18; 22].
Растительные гепатопротекторы по сравнению с синтетическими имеют ряд преимуществ: по своей биогенетической структуре, антигенным детерминантам они имеют большое сродство с организмом, что обеспечивает более физиологичное их усваивание [17]. Рядом работ доказано: фитопрепараты малотоксичны, обладают хорошей водорастворимо-стью, что обусловливает их более легкую элиминацию из организма [14] и другие преимущества, перечисление которых не входит в задачи данной публикации.
Таким образом, поиск растительных ге-патопротекторных средств, предотвращаю-
щих лекарственное поражение печени при применении РИП, весьма актуален.
Цель исследования - экспериментально доказать наличие антихолеста- тического действия нового препарата «Бетафит» при экспериментальном поражении печени РИП в сравнении с широко используемыми ЛС: «Гептралом», «Галстеной», «ЛИВ-52», «Тык-веолом».
Задача. Провести сравнительную оценку антихолестатического действия исследуемых препаратов при токсическом повреждении печени туберкулостатиками (РИП).
Группы и
Материалы и методы. Исследование проводилось на белых беспородных крысах-самках массой 200-250 г. Интоксикацию моделировали путем 14-дневного интрагаст-рального введения РИП по модифицированной методике Н.П. Скакуна и А.Н. Олейника, 1967 г. [20]: рифампицина (50 мг/кг), изониа-зида (50 мг/кг) и пиразинамида (150 мг/кг). Экспериментальная модель воспроизводит основные патогенетические элементы воспалительного процесса в печени: активацию ПОЛ, цитолиз, холестаз, реакцию мезенхи-мально-эпителиоидной ткани, гепатоцеллю-лярную недостаточность, шунтирование крови (табл. 1).
Таблица 1
ы исследования
№ Название группы, число крыс Способ и среднесуточные дозы введения лекарственных средств на lGG г массы тела животного Курс (дни). Курсовая доза на 100 г массы тела
1. Контрольная (РИП); п=12 Внутрижелудочно (РИП): рифам-пицин 5 мг («Акрихин», Россия в сотр. Ірса Laboratories Ltd, Индия), изониазид 5 мг («Акрихин», Россия), пиразинамид 15 мг (Ірса Labora-tories Ltd, Индия) с водой 14; РИП: рифампицин 70 мг, изониазид 70 мг, пиразинамид 210 мг. Вода - 16 дней
2. Интактная; п = 21 Внутрижелудочно вода в эквивалентных количествах Вода - 16 дней
3. РИП + «Гептрал»; п = 12 РИП + «Гептрал» (Knoll, Германия) 20 мг внутрижелудочно 16; РИП + «Гептрал» 320 мг
4. РИП + «Галстена»; п = 12 РИП + «Галстена» («Рихард Биттнер ГмбХ», Австрия) 0,05 мл внутрижелудочно 16; РИП + «Галстена», 0,8 мл
5. РИП + «Тыквеол»; п =12 РИП + «Тыквеол» (ЗАО «Европа-Биофарм», Волгоград, Россия) 0,15 мл внутрижелудочно РИП + «Тыквеол» 2, 4 мл
б. РИП + «ЛИВ-52»; п =20 РИП + «ЛИВ-52» (Himalaya Drug Co, Индия) 13,3 мг внутрижелудочно 16; РИП + «ЛИВ-52» 212,8 мг
7. РИП + «Бетафит»; п = 22 РИП + «Бетафит» 0,5 мл внутрижелудочно 16; РИП + «Бетафит» 8 мл
Состав фитокомпозиции «Бетафит»: свежеприготовленного сока корнеплода свеклы обыкновенной (Beta vulgaris) - 90 частей, настоев: кукурузных рыльцев (Zea maus L.) -2,5 части, мяты перечной (Mentha piperita) наземной части хвоща полевого (Eguisetum arvense L.) - 2,5 части, отвара плодов шипов-
ника (Rosa cinnamomea L.) - 2,5 части. Водные извлечения исследуемых растений готовились по общим правилам технологии приготовления настоев и отваров. Сок свеклы получали соковыжималкой, соединяли с охлажденными настоями и отваром шиповника, фильтровали для очистки от механических примесей.
«Бетафит» изготавливался ежедневно и хранился в холодильнике при 1° +4-5 °С.
Включение в исследование фитокомплекса «Бетафит» (патент №212419 от
27.11.98 г., Катикова О.Ю., Тишкин В.С.) исходит из доказанной целесообразности применения его в комплексной терапии хронических диффузных заболеваниях печени вирусного и токсического генеза [7; 8].
Введение препаратов осуществлялось в лечебно-профилактическом режиме с началом за два дня до введения РИП, затем параллельно с введением туберкулостатиков в течение 14 дней. Токсиканты и препараты коррекции вводились в суточной дозе однократно. Суточная доза исследуемых препаратов установлена с помощью изотерапевтиче-ского, а не изотоксического подхода, исходя из терапевтической дозы для человека с поправкой для применения у животных и увеличения в 10 раз. Внутрижелудочное введение осуществлялось с помощью закругленной толстой металлической иглы с затупленным плоским концом в виде оливы, насаженной на шприц. Животных, предварительно наркотизированных диэтиловым эфиром, забивали декапитацией через 24 часа после заключительного введения РИП и опытного средства.
Кровь центрифугировалась при 3000 об. / мин в течение 15 минут. Объектом исследования избрана сыворотка крови. Полученная сыворотка использовалась для определения биохимических показателей, свидетельствующих о развитии токсического поражения печени, в том числе холестаза.
Способность препаратов препятствовать холестазу изучалась по активности ферментов: щелочной фосфатазы (ЩФ), гамма-глутаматтранспептидазы (ГГТП) и содержанию билирубина (общего и прямого) в сыворотке крови, являющихся индикаторами синдрома холестаза.
Активность ЩФ - кинетический УФ анализ с применением п-нитрофенилфосфа-та. Активность ГГТП - колориметрический кинетический метод по Зейц - Персин (82а82). Содержание билирубина общего колориметрическим методом с 2,4-дихлорани-лином (Д.С.А-метод). Активность ферментов
(ЩФиГГТП) и билирубина общего определялась на интегральной лабораторной системе Н1ТАСН1-911 фирмы Воепг^аг МагпЬат, Германия со стандартными наборами реактивов ЬаеЬеша Германия.
Результаты и обсуждение. Антихоле-статическое действие исследуемых препаратов оценивали по степени их влияния на активность ферментов (ЩФ, ГГТП) и содержание веществ (билирубина общего и прямого), являющихся индикаторами синдрома холе-стаза в сыворотке крови [9; 18; 19].
Незначительное повышение активности ЩФ в сыворотке крови животных контрольной группы (на 60,4 %, Р< 0,01) (табл. 2) свидетельствует в большей степени о печеночноклеточной патологии, нежели об обструктив-ных повреждениях внутрипеченочных желчевыводящих путей [13]. Рост активности этого фермента обусловлен повышенным выделением его в синусоиды через плазматические мембраны гепатоцитов [20], структура которых повреждена действием токсического фактора. Кроме того, не исключается увеличение синтеза ЩФ гепатоцитами в связи с повышением образования белка и РНК, обусловленным активацией механизмов физиологической регенерации [16]. Применение растительных гепатопротекторных средств «Галстена» и «Бетафит» выявило сдерживание роста активности ЩФ (27 %, 2 % и 31,4 %) соответственно, применение препарата «Геп-трал» препятствовало росту активности ЩФ, но не так выраженно (50,9 %) по сравнению с группой контроля. Применение препаратов «Тыквеол» незначительно снизило активность фермента (58,5 %), при применении «ЛИВ-52» отмечается нарастание активности ЩФ (83,3 %) по сравнению с группой контроля, что может отражать не только паренхиматозную патологию, но и развитие внут-рипеченочного холестаза [18; 21].
ГГТП является ферментом более чувствительным к повреждению клеток печени (особенно токсической этиологии), чем другие ферменты: ЩФ, АСТ, АЛТ, ЛДГ [13]. Активность ГГТП, являющейся признаком гепатотоксичности, в контрольной группе оказалась повышенной на 551,0 % (р# <0,001) по сравнению с интактной группой. Исполь-
зование препарата «Галстена» недостоверно снизило активность ГГТП. При заболеваниях печени, сопровождающихся холестазом и печеночной энцефалопатией, с высокой степенью эффективности используется «Гептрал» [3; 15]. В данном эксперименте препарат «Гептрал» действительно продемонстрировал способность препятствовать росту активностей ЩФ и ГГТП. Однако способности пре-
паратов «Бетафит» и «Галстена» по содержанию роста активностей ЩФ и ГГТП превосходили антихолестатический эффект препарата «Гептрал» (табл. 2). Применение с кор-регирующей с целью препаратов «Тыквеол» и «ЛИВ-52» в меньшей степени по сравнению с другими опытными группами способствовало сдерживанию роста активности ГГТП.
Таблица 2
Влияние исследуемых препаратов на активность щелочной фосфатазы, гаммаглутаматтранспептидазы и содержание билирубина общего и прямого сыворотки крови крыс при индуцированном туберкулостатиками повреждении печени
Группа Активность ЩФ, ед/л, % изменений Активность ГГТП, ед/л, % изменений Содержание билирубина общего, мкмоль/л, % изменений Содержание Билирубина прямого, мкмоль/л, % изменений
Интактная п = 21 259±31 0,70±0,48 1,17±0,3 0,64±0,5
Контрольная (РИП) N=12 415±21# 60,5 4,56±0,53# 551,0 Не было реактива 6,67±0,71# 942,2
«Гептрал» + РИП п = 12 391±69* 50,9 1,4±0,51* 100,0 2,77±0,44* 137,0 2,0±0,53* 213,0
«Галстена» + РИП п = 12 329±43* 27,2 0,67±0,65* -4,3 7,0±0,72* 490,0 1,4±0,52* 119,0
«Бетафит» + РИП п = 12 340±62* 31,4 1,00±0,63* 42,9 1,7±0,24* 41,0 1,27±0,65* 98,4
«Тыквеол» + РИП п =22 410±46* 58,5 2,57±0,53* 267,0 4,8±1,0* 309,0 1,0±0,7* 56,3
«ЛИВ-52» +РИП N = 20 475±69* 83,3 3,67±1,50* 424,0 Не было реактива 6,67±2,7* 942,0
Примечание. * - достоверность различий по сравнению с группой контроля (<0,05); # - достоверность различий по сравнению с интактными животными (< 0,05).
Интересной оказалась динамика содержания билирубина в сыворотке крови. Уровень билирубина прямого в группе контрольных животных оказался повышенным на 942,2 % (р#<0,001) (табл. 2). Это является отражением развития паренхиматозной желтухи, наступающей вследствие деструкции ге-патоцитов, при которой нарушается экскреция конъюгированного билирубина в желчные капилляры и он попадает непосредственно в кровь [20; 21]. При токсической альтерации печеночных клеток снижается их способность синтезировать билирубин-глю-курониды, вследствие чего содержание об-
щего билирубина повышается также за счет его непрямой фракции [13]. В группе использования препарата «Бетафит» и, в меньшей степени, препарата «Гептрал» отмечается незначительное увеличение содержания билирубина общего, преимущественно за счет конъюгированной фракции (табл. 2). Это может свидетельствовать о недостаточности глюкуронизирующей фракции гепатоцитов, но, вероятнее всего, в данном случае приемлемо говорить о варианте поражения печени с билирубин-аминотрансферазной диссоциацией, при котором выраженная гипербилиру-бинемия сочетается с относительно низкой
активностью аминотрансфераз [13]. Активность аминотрансфераз в аналогичных группах животных определялась нами ранее. При этом влияние исследуемых препаратов на активность индикаторов цитолитического синдрома по убыванию гепатопротекторной активности выразилось следующим образом: «Галстена» > «Бетафит» > «Гептрал» > «Ты-квеол» > «ЛИВ-52».
Не исключено, что повышение уровня билирубина, являющегося эндогенным антиоксидантом, является защитной реакцией организма, направленной на подавление ПОЛ и стабилизацию мембран гепатоцитов при остром гепатите [6].
Выводы
1. При экспериментальном поражении печени крыс, вызванном комбинацией тубер-кулостатиков (рифампицин, изониазид, пира-зинамид), препа раты «Бетафит» и «Галсте-на» оказывали более выраженное гепато-протекторное (антихолестатическое действие), чем «Гептрал», «Тыквеол» и «ЛИВ-52».
2. Экспериментально доказана целесообразность клинического изучения препарата «Бетафит» для профилактики и лечения поражений печени, возникающих при применении туберкулостатиков.
3. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о необходимости дифференцированного выбора гепатозащитных средств при профилактике и лечении медикаментозных и токсических поражений печени.
1. Азизова, О.А. Роль свободнорадикальных процессов в патогенезе атеросклероза / О.А. Азизова // Материалы национальной науч.-практи-ческой конф. «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека». Смоленск, 2001. -С. 102-103.
2. Буеверов, А.О. Адеметионин: биологические функции и терапевтические эффекты / А.О. Буеверов // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. - 2001. - №3. - С. 16-20.
3. Буеверов, А.О. Лекарственные поражения печени / А.О. Буеверов // Рус. мед. журн. - Т. 3. -№1. - С. 16-18.
4. Буеверов, А.О. Место гепатопроекторов в лечении заболеваний печени / А.О. Буеверов //
Болезни органов пищеварения. - 2001. - Т. 3. -№1. - С. 16-18.
5. Буеверов, А. О. Общие представления о лекарственных поражениях печени / А. О. Буе-веров // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. - 2002. - №4. - С. 7-11.
6. Буеверов, А. О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени / А. О. Буеверов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и коло-проктологии. - 2002. - Т. 12. - №4. - С. 25.
7. Катикова, О.Ю. Эффективность и безопасность гепатопротекторов растительного происхождения / О.Ю. Катикова, В.С. Тишкин // Ученые записки Ульяновского гос. ун-та, сер. «Биология и медицина» ; под ред. действительного члена РАЕН д.б.н. проф. Сыча В.Ф. - Вып. 1 (4). -Ульяновск, 2000. - С. 31-40.
8. Катикова, О.Ю. Применение фитокомплекса «Бетафит» при поражениях печени
токсического и вирусного генеза / О.Ю. Катикова, Р.И. Ягудина // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 2000. - Т. 10. -№1. - С. 10.
9. Логинов, А.С. Оценка холестаза по активности антиоксидантных ферментов и составу ли-попротеидов плазмы крови больных с патологией печени / А.С. Логинов, Б.Н. Матюшин, С.М. Че-банов и др. // Терапевтический архив. - 1998. -№4. - С. 40-42.
10. Макарьянц, М.Л. Оценка влияния парацетамола на морфологическую картину печени и слизистой оболочки желудка у крыс / М.Л. Макарьянц, С.Ю. Виноградов и др. // Тез. докл. УШ Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 2-6 апреля 2001 г., Москва. - С. 588.
11. Масевич, Ц.Г. Особенности тактики терапии хронических гепатитов различной этиологии / Ц.Г. Масевич, Л.Г. Ермолаева // Гастробюллетень. - 2000. - №1-2. - Прил. №1. Материалы 2-й Объединенной Всероссийской и Всеармейской науч. конф. «Санкт-Петербург - Гастро-2000», 20-22 сентября 2000. - 210. - С. 55.
12. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике : справ. / В.В. Меньшиков. - М. : Медицина, 1987. - С. 354.
13. Назаренко, Г. И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А. А. Кишкун. - М. : Медицина, 2000.
14. Петухов, А.Б. Антиоксидантная система и энтеросорбция при патологии органов пищеварения / А.Б. Петухов, Г.Ю. Мальцев, А.К. Шаховская // Гастробюллетень. - 2000. - №2. - С. 73.
15. Подымова, С. Д. Болезни печени /
С. Д. Подымова. - М. : Медицина, 1998.
16. Подымова, С.Д. Оценка эффективности препарата «Гептрал» у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени с синдромом внутрипеченочного холестаза / С.Д. Подымова, М. Ю. Надинская // Клиническая медицина. -1998. - №10. - С. 45-48.
17. Рыженкова, М.А. Сравнительная оценка антиоксидантной активности некоторых лекарственных растений in vitro и in vivo / М.А. Рыженкова, Р.Р. Фархутдинов, Ж.З. Загидуллин и др. // Биоантиоксидант. - 1997. - C. 47.
18. Садовникова, И.В. Теоретическое обоснование патогенетической терапии токсических Гепатитов / И.В. Садовникова, В.В. Садовникова, Н.А. Бобылева и др. // Тез. докл. УШ Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 2-6 апреля 2001 г., Москва. - С. 613.
19. Скакун, Н.П. Коррекция гепатотоксич-ности противотуберкулезных препаратов токоферола ацетатом и рибоксином / Н.П. Скакун,
Ю.И. Сливка // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1992. - Т. 55. - №3. - С. 52-54.
20. Шерлок, Ш. Заболевания печени и желчных путей / Ш. Шерлок, Дж. Дули. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 1999.
21. Яковенко, Э.П. Внутрипеченочный холес-таз - от патогенеза к лечению / Э.П. Яковенко, П.Я. Григорьев, Н.А. Агафонова, А.В. Яковенко // Практикующий врач. - 1998. - №13(2). - С. 20-23.
22. Pessayre, D. Non-alcoholic steatohepatitis: potential causes pathogenic mechanisms /
D. Pessayre, A. Mansouri, B. Fromenty // Yn: Hepatology 2000. Falk symposium 117. - Kluwer Academic Publishers. - 2000. - P. 57-76.
CORRECTION OF CHOLESTASIA BY PLANT PREPARATIONS ON THE MODEL OF DRUG DEMAGE OF A LIVER
L.V. Prokofieva
Ulyanovsk State University
In this research hepatoprotective activity of a new preparation «Betafitum» in its ability to prevent cholestasia in toxic affection of a liver by tuberculostatics («Rifampicinum», «Isoniazidum», «Pyrazinamidum») was studied in experimental animals (rats).
«Betafitum» is a mixture of water extracts from plants with beet juice (patent № 212419,27.11.98, Katikova O. U.)
Anticholestatic activity of «Betafitum» was studied in comparison of widely used preparations «Heptralum», «Ademetioninum», «Galstena», «Tycveolum», «Liv-52».
Conclusion Dicrease of manifestation of anticholestatic activity in researched preparations is represented as follows «Betafitum» > «Galstena» > «Heptralum» > «Tycveolum» > «Liv 52».
Keywords: hepatoprotective, tuberculostatics, cholestasia.
