CC BY
38
2?оз7™^тр"£Гт Оригинальные статьи
©2003, СПбРОРААКИ
КОРРЕКЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МАКРОФАГОВ ДИПЕПТИДОМ БЕСТИМОМ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТУБЕРКУЛЕЗЕ
Заболотных Н.В., Виноградова Т.И., Конусова В.Г.*
ГУ Санкт-Петербургский НИИ фтизиопулъмонологии М3 РФ;
*ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург, Россия
Резюме. Изучали действие синтетического дипептида бестима на функциональную активность перитонеальных макрофагов у мышей при экспериментальном туберкулезе различной тяжести течения. Установлено, что присоединение бестима к туберкулостатической терапии приводит к стимуляции поглотительной и переваривающей функции макрофагов, ингибированных в ходе развития инфекции и под влиянием длительной (более месяца) этиотрогшой терапии. Показано модулирующее действие бестима на генерацию супероксидных радикалов макрофагами: повышение угнетенной НСТ-акгивности при остро прогрессирующей инфекции и снижение повышенного уровня продукции супероксида при вялотекущем туберкулезе у мышей. Кроме того, у бестима отмечен активирующий эффект на содержание внеклеточной 5-нуклеотида-зы при классическом и остро прогрессирующем течении инфекции. При вялотекущем туберкулезе отмечено стимулирующее действие препарата на адгезивную активность макрофагов.
Ключевые слова: НСТ-тест, макрофаги, бестим, иммунокоррекция.
ZabolotnykhN.V., Vinogradova Т.I., Konusova V.G.
CORRECTION OF MACROPHAGE FUNCTIONS BY DIPEPTIDE BESTIM IN EXPERIMENTAL TUBERCULOSIS
Abstract. The influence of synthetic dipeptide Bestim (SCV-07) on peritoneal macrophage functions in tuberculosis infected mice was investigated. Ingestion and digestion functions of peritoneal macrophages were decreased during the infection and the long-term (more than a month) antituberculous therapy. The therapy with Bestim restored ingestion and digestion. Bestim also modulated the free radicals production by macrophages. Bestim increased the suppressed NBT reduction in rapidly progressive tuberculosis and decreased extrimely high level of superoxides in lowly progressive tuberculosis. Moreover, Bestim elevated the extracellular 5-nucleosidase levels during the moderate and rapidly progressive infection. Macrophage adhesion increasing was also found after therapy with Bestim in mice with slowly progressive tuberculosis. It was revealed, that addition of Bestim to antituberculous drugs stimulated the ingesting and digesting macrophage functions, which had been decreased by the infection and the long-term (more then month) Isoniazid therapy. Bestim also modulated the macrophage free radicals production. It was described, that Bestim increased superoxid production by macrophages, which had been suppressed by rapidly progressive experimental tuberculosis, and decreased the exponents which had been increased by slow murine tuberculosis. Moreover, Bestim stimulated extracellular 5-nucleotidase levels during classical and progressively worse experimental tuberculosis. The activating effect of Bestim on peritoneal macrophage adhesive response was marked. (Med.Immunol., 2003, vol.5, № 5-6, pp 591-598)
Развитие туберкулезной инфекции контролиру- тета, в котором основная роль отводится макрофа-
ется различными факторами, участвующими в фор- гам (Мф) и Thl клеткам, взаимно активирующими-
мировании врожденного и приобретенного иммуни- ся антигенами М. tuberculosis (МВТ) и цитокинами.
------------------------------------------ Адекватная активация МФ - ключевое событие, ве-
Адрес для переписки: Заболотных Н.В. дущее к освобождению организма от инфекции, по-
190121, г. Санкт-Петербург, скольку активированные Мф продуцируют провос-
ул. Псковскя, д.13, кв.15. палительные цитокины, простагландины, активные
Тел.: 247-86-31 (р.), формы кислорода и азота, которые способствуют
113-65-71 (д.) развитию воспалительного процесса, ведущего к эли-
минации МБТ.
В настоящее время большинством исследователей признается гипотеза о существовании двух путей активации макрофагов. Первый осуществляется Т-клетками и ключевую роль в нем играет 1РЫ-у, продукция которого находится под контролем цито-кинов, усиливающих (1Ь-12,1Ь-18) и ингибирующих (1Ь-4,1Ь-10) его экспрессию. Второй способ обеспечивается макрофагами и естественными киллерами, в нем участвуют ТЫБ-а, 1Ь-1Р и 1РМ-у. Макрофаг при взаимодействии с антигеном продуцирует цитоки-ны 1Ь-1 и ТОТ-а. Последний активирует естественные киллеры, которые начинают синтезировать №N-7- Одновременное присутствие в культуре макрофагов ШЫ-у и ТОТ-а приводит к стимуляции в клетках фермента синтазы окиси азота (N08), который окисляет аминокислоту Ь-аргинин и превращает её в Ь- цитруллин и окись азота (N0) в виде газа. Этот способ, который считают постоянно функционирующим у животных с нормальным иммунитетом, является первоначальной ступенью в антимикробном ответе макроорганизма на инфекцию [17]. Включение в иммунный ответ Т-лимфоцитов происходит позднее, в реализации его участвуют СБ4+ и в меньшей степени СБ8+ лимфоциты, привлекающиеся из периферии в очаг проникновения антигена.
N0 является одним из активных интермедиатов азота, составляющих неоксидативную систему Мф, которой в последнее время приписывается решающая роль в обеспечении их микобактерицидности [18]. Вторая цитотоксическая система макрофагов - окси-дативная включает реактивные метаболиты кислорода, считающиеся кофакторами микобактерицидного действия N0. Между двумя системами, обеспечивающими бактерицидность Мф, зарегистрировано тесное взаимодействие, подтвержденное компенсаторным характером продукции активных форм кислорода и азота [4], и, видимо, играющее существенную роль в патогенезе специфического воспаления.
Наряду с цитотоксической, реактивные интермедиаты азота проявляют также функцию регуляции активности иммунокомпетентных клеток. Так, показано ингибирующее действие N0 на пролиферацию Т-клеток на РРД, которое проявляется на пике развития туберкулеза у мышей и купируется при использовании ингибитора 1Н0Б [12]. Зарегистрировано также, что образование N0 играет ауторегуляторную роль в переводе покоящихся Мф в активные и в расширении синтеза противовоспалительных цитокинов через активациюОТкВ [7]. Выявлено действие системы N О (через аргиназу типа 1 -бло-катор синтеза N0 и ) на число, клеточный состав и размеры гранулем. При этом отмечена также регуляция активности аргиназы 1 цитокинами ТЬ-2 (1Ь-4,1Ь-10) и 1РН-у [10], причем превалирование ТЬ-2 клеточного ответа приводит к значительному возрастанию активности аргиназы и к существенному ингибированию экспрессии 1К0Б.
У ТЬ-2 цитокинов выявлена также способность подавлять секрецию 1Ь-8 и ММР, индуцированную МВТ [5,14]. Кроме того, при активном туберкулезе выявлено снижение экспрессии 1САМ-1 альвеолярными макрофагами, что, вероятно, связано с угнетением 1РК-у, являющегося самым мощным индуктором синтеза 1САМ-1 [8], на фоне развившейся инфекции, и восстановление показателя после 6 месяцев лечения [19]. Возможно, именно регулирующим влиянием 1РЫ-уиТЬ2 на систему N0 и обусловлены различия в экспрессии 1М05, обнаруженные в ходе развития туберкулеза у мышей: на ранних стадиях инфекции - повышение экспрессии iNOS и метаболитов азота в Мф; на поздних при прогрессировании и возникновении некротического компонента - уменьшение [9]. При обострении персисти-рующего туберкулеза у животных также зафиксировано снижение экспрессии [11].
Эти данные служат обоснованием целесообразности использования в терапии туберкулеза иммунокорректоров, способствующих переключению иммунного ответа на ТЫ для активации Мф, являющихся главными элиминаторами МВТ.
К таким препаратам относится синтетический дипептид бестим, который усиливает созревание ТЬ (экспрессию антигена ЬЗТ4), стимулирует дифференциацию ТЬ 1, продукцию 1Ь-2 и экспрессию рецептора 1Ь-2 [3].
В наших предыдущих исследованиях показано, что бестим существенно повышает эффективность этиотропной терапии экспериментального туберкулеза у мышей; восстанавливает пролиферативную активность спленоцитов и продукцию ими 1Ь-2, ингибированных при туберкулезной инфекции; повышает индуцированную КонА секрецию 1Р^у и снижает индуцированную продукцию 1Ь-4 спленоцитами [1].
Задачей настоящей работы явилась оценка влияния бестима на функциональную активность Мф при его включении в комплексную терапию генерализованного туберкулеза у мышей.
Материалы и методы
Работа выполнена на 400 беспородных белых мышах (питомник «Рапполово») при моделировании классического, вялотекущего, и остро прогрессирующего туберкулеза путем введения в боковую хвостовую вену взвеси трехнедельной культуры М.боагз Ьоютиь 8 в дозе 0,1 мг полувлажной бактериальной массы в 0,2 мл физиологического раствора. Этиотропную терапию (изониазид 10 мг/кг, либо изониазид 10 мг/кг+ рифампицин 10 мг/кг + пира-зинамид 25 мг/кг, либо изониазид 25 мг/кг+ рифампицин 25 мг/кг + пиразинамид 25 мг/кг) начинали при обнаружении в легких мышей выраженных очагов специфического поражения. Бестим (0,1 мкг/кг внутрибрюшинно, 5 или 10 инъекций) - при разви-
тии угнетения пролиферативной активности спле-ноцитов и продукции ими 1Ь-2 на фоне противотуберкулезных препаратов. Группами сравнения являлись незараженные мыши (интактные), зараженные нелеченные и животные, получавшие только этиот-ропную терапию (контроль лечения).
Фагоцитоз исследовали в культуре перитонеальных Мф (1х 106 клеток), полученных из лаважа брюшной полости мышей, на пластиковых одноразовых чашках Петри (с!=40 тт) в отношении клеточной взвеси дрожжей рода Басс/гаготусе5 сегегжше (1х107 клеток), опсонизированных сывороткой мышей. По полученным данным вычисляли: фагоцитарную активность Мф (ФА) - процент Мф, вовлеченных в фагоцитоз; фагоцитарное число (ФЧ)- среднее количество дрожжей, поглощенных одной фагоцитирующей клеткой; показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - количество дрожжей, переваренных макрофагами за 1,5 часа культивирования; индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) - отношение фагоцитарного числа за 1 час культивирования к фагоцитарному числу за 2,5 часа культивирования. На каждом сроке определения число животных в каждой группе было равным пяти.
Определение способности Мф (1х106/мл) к восстановлению нитросинего тетразолия (НСТ), отражающую генерацию супероксидных радикалов [15], и адгезивной активности Мф [21], проводилось на 96-луночных культуральных платах («Costar»). Клетки ресуспензировали в среде 199, содержащей 10% сыворотки крупного рогатого скота, помещали в С02 инкубатор (1 час).
В реакции восстановления НСТ использовали 0,1% раствор НСТ («Serva»), в стимулированные пробы добавляли опсонизированный зимозан (3 мг/мл, «Sigma»), инкубировали в течении часа, осадок высушивали, фиксировали метанолом, элюировали 1Н раствором КОН и ДМСО. Результаты оценивали при 640 нм и выражали в единицах экстинции.
Для регистрации адгезии Мф платы трехкратно отмывали теплой средой 199 для удаления не прилипших клеток, высушивали, фиксировали и одновременно окрашивали 0,3% раствором кристалл-ви-олетта («Sigma») на 30% метаноле. Избыток красителя отмывали, платы высушивали и, после растворения клеточного осадка 3% раствором додецила сульфата, спектрофотометрировали при длине вол-
Табл.1 .ПОКАЗАТЕЛИ ФАГОЦИТОЗА У МЫШЕЙ С ВЯЛОТЕКУЩИМ ТУБЕРКУЛЕЗОМ
Интактные Зараженные нелеченные
Фагоцитарная активность(%) 64,2±1,3 4,6±0,9**
Фагоцитарное число (кол-во дрожжей) 8,15±1,4 3,89±0,8*
Показатель завершенности фагоцитоза (кол-во дрожжей) 196,4±38,6 14,4±7,3**
Индекс завершенности фагоцитоза (усл.ед.) 1,34±0,13 1,31 ±0,5
Примечание: *-отличия по сравнению с интактной группой: * -Р<0,05; ** -Р<0,01.
Табл. 2. ВЛИЯНИЕ БЕСТИМА НА ПОКАЗАТЕЛИ ФАГОЦИТОЗА У МЫШЕЙ С КЛАССИЧЕСКИМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ТУБЕРКУЛЕЗОМ
Группа животных Интактные Изониазид 25 мг/кг+ рифампицин 25 мг/кг + пиразинамид 25 мг/кг Изониазид+рифампицин+ пиразинамид+ бестим 0,1 мкг/кг
Сроки от окончания курса бестима 6 день 51 день 6 день 51 день 6 день 51 день
Фагоцитарная активность(%) 61,0±3,6 58,4±10,3 50,8±0,86* 29,4±5,6* 63,2±4,7° 47±6,4
Фагоцитарное число (кол-во дрожжей) 7,54±0,87 7,4±1,0 4,47±0,2‘* 6,1±1,1 6,2810,24°°° 7,61 ±1,1
Показатель завершенности фагоцитоза (кол-во дрожжей) 305,3+3,4 205,0±18,2 115,8±21,2*** 113,6±32,2* 270,4±24,5°о 155,6±28,3
Индекс завершенности фагоцитоза (усл.ед.) 1,96±0,11 2,12±0,3 1,13±0,1** 1,86±0,1 1,82±0,1°° 1,88±0,2
Примечание: *-отличия по сравнению с интактной группой: * -Р<0,05; ** -Р<0,01; *** -Р<0,001. отличия по сравнению с группой мышей, леченнных изониазидом + рифампицином + пиразинамидом:0 -Р<0,05;00 —Р<0,01;000 —Р<0,001.
ны 595 нм. Результаты выражали в единицах экстин-ции.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием параметрического теста Стьюден-та-Фишера и непараметрического метода Вилкоксо-на-Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
Развитие туберкулезного процесса у мышей в наших опытах вызывало существенное угнетение
фагоцитоза клеточной взвеси дрожжей перитонеальными Мф на фоне распространенного специфического поражения легочной ткани при всех формах инфекции, что зарегистрировано на 26-47 дни после инокуляции инфекта, на первом сроке оценки действия бестима. В качестве иллюстрации приведены данные опыта с вялотекущим экспериментальным туберкулезом, где к 28 дню после заражения отмечено достоверное угнетение поглотительной (по ФА, и ФЧ) и переваривающей (по ПЗФ) способности Мф (табл.1).
а)
б)
П интактные □ изониазид ■ изониазид+бестим
Рис.1. Влияние бестима на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов при вялотекущем (а) и остро прогрессирующем (б) туберкулезе. По оси ординат - средние значения фагоцитарной активности в %, по оси абсцисс - срок от начала курса бестима в днях. *- достоверность различий по сравнению с группой мышей, леченных изониазидом (10 мг/кг).
Табл.З. ВЛИЯНИЕ БЕСТИМА НА ПРОДУКЦИЮ СУПЕРОКСИДНЫХ РАДИКАЛОВ У МЫШЕЙ ПРИ ОСТРО ПРОГРЕССИРУЮЩЕМ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
Условия опыта Восстановление НСТ (ед.экстинции)
Нестимулир. культура Зимозан 1 мг/мл
Интактные 0,112±0,004 0,216+0,018
Зараженные нелеченные 0,092±0,008 0,158+0,012*
Изониазид 10 мг/кг 0,118±0,002 0,255+0,023”
Изониазид +бестим 0,1 мкг/кг 0,135±0,001*°~# 0,26510,083
Примечание: "-отличия по сравнению с интактной группой: * -Р<0,05; ** -Р<0,01; *** -Р<0,001. отличия по сравнению с зараженными нелеченными мышами:0 -Р<0,05; °°-Р<0,01; ооо-Р<0,001’‘“отличия по сравнению с группой мышей, леченных изониазидом (10 мг/кг):%
- Р<0,05; %%-Р<0,01; %%%-Р<0,001.
Этиотропная терапия, причем как монотерапия изониазидом (10 мг/кг), так и полихимиотерапия в средних и высших терапевтических дозах, постепенно снижающая тяжесть течения туберкулезного процесса, частично восстанавливала фагоцитоз примерно до 30 дня от начала лечения (рис.1, 2, табл.2). Однако после месячного курса всех использованных схем противотуберкулезных препаратов вновь отмечено значимое угнетение активности фагоцитоза Мф при каждом варианте течения инфекции. При классическом и остро прогрессирующем процессах наблюдалась ингибиция и поглотительной и переваривающей функций Мф, при вялотекущей инфекции - только переваривающей по ПЗФ.
Действие бестима на активность фагоцитоза наиболее отчетливо проявилось при ее снижении у мышей из группы контроля лечения. При классическом экспериментальном туберкулезе на фоне достоверного угнетения фагоцитоза у мышей, получавших только этиотропную терапию, использование бес-
тима привело: на 6-й день от окончания его курса - к восстановлению всех четырех показателей фагоцитарной активности (до 83,3%-103% от уровня интак-тной группы); на 51 день - к увеличению ФА и ПЗФ (до 80,5% и 76% соответственно, табл.2.).
При вялотекущем процессе стимулирующее действие терапии с бестимом отмечено на 9-й и на 29 дни от его назначения (рис.1.а, 2.а). На последнем сроке наблюдения курс использования изониазида составил 37 дней. При остро прогрессирующем туберкулезе восстанавливающее действие бестима на поглотительную и переваривающую функцию клеток при их угнетении также проявилось на 8 и 30 дни от начала курса бестима (рис 1.6, 2.6). Последний срок наблюдения соответствовал 35-у дню лечения изониазидом. На фоне частичной нормализации фагоцитоза под влиянием противотуберкулезных препаратов (до месяца терапии) у мышей, дополнительно получавших бестим, наблюдалось лишь некоторое, в основном недостоверное, повышение сни-
300
200
100
а)
б)
□ интактные
□ изониазид
■ изониазид+бестим
Рис.2. Влияние бестима на показатель завершенности фагоцитоза перитонеальных макрофагов при вялотекущем (а) и остро прогрессирующем (б) туберкулезе. По оси ординат - средние значения ПЗФ (число дрожжей), по оси абсцисс -срок от начала курса бестима в днях. *- достоверность различий по сравнению с группой мышей, леченных изониазидом (10 мг/кг).
женных показателей, часто до уровня интактной группы (рис.1., 2). Исключение составило стимулирующее действие бестима на переваривающую активность Мф на фоне неизмененных показателей при остро прогрессирующем туберкулезе (рис. 26).
Следовательно, восстанавливающее действие бестима на поглотительную и переваривающую функцию макрофагов (по фагоцитозу клеточной взвеси дрожжей) выявлено при их ингибиции в ходе развития экспериментального туберкулеза и в результате длительной этиотропной терапии при всех исследованных вариантах течения инфекции.
Сдвиги генерации супероксидных радикалов при экспериментальном туберкулезе имели явную зависимость от характера его течения. При вялотекущей инфекции на 28 день после заражения не выявлено отличий продукции супероксида Мф зараженных мышей от интактной группы. При классическом течении инфекции на 47 день после заражения показатель в нестимулированной культуре имел тенденцию к снижению, а при индукции зимозаном был достоверно ниже, чем у интактных мышей (0,086 ед.экстинции против 0,123 ед.экстинции, Р<0,05). При остро прогрессирующем туберкулезе на 19 день после инокуляции инфекта отмечено значимое повышение НСТ-активности клеток перитонеального лаважа (до 0,174±0,02 ед.экстинции при 0,097 ±0,009 ед.экстинции в интактной группе, Р<0,01), а на 22-й день после заражения, перед гибелью практически всех нелеченных мышей - тенденция к снижению спонтанной и достоверное уменьшение индуцированной зимозаном активности (до 0,158±0,01 ед.экстинции против 0,216+0,02 ед.экстинции, Р<0,05). Из этих данных следует, что при прогрессировании экспериментальной туберкулезной инфекции существенная первоначальная активация генерации супероксидных радикалов сменяется угнетением перед гибелью мышей (22 день - при остро прогрессирующем туберкулезе, 47 - при классическом варианте течения).
Направленность действия бестима на характер продукции супероксида имело явную взаимосвязь с тяжестью течения инфекции и фоновыми изменениями показателя. При классическом экспериментальном туберкулезе отмечена лишь тенденция к повышению спонтанной и индуцированной продукции супероксида (0,121±0,02 ед.экстинции и 0,169+0,02 ед.экстинции соответственно против 0,098±0,01 ед.экстинции. и 0,143±0,01 ед.экстинции в группе контроля лечения). При остро прогрессирующей инфекции на фоне угнетения индуцированной продукции супероксида у зараженных нелеченных мышей под влиянием бестима зарегистрировано достоверное повышение уровня спонтанной НСТ-активности (Р<0,001, рис.З).
При вялотекущем туберкулезе терапия с бести-мом привела к нормализации спонтанной НСТ-ак-
тивности, достоверно повышенной у мышей, леченных изониазидом (до 0,244±0,02 ед.экстинции против 0,369±0,03 ед.экстинции. Р<0,02, при 0,287±0,01 ед.экстинции у интактных мышей). Следовательно, действие бестима на генерацию супероксидных радикалов имело модулирующий характер, поскольку проявлялось в стимуляции НСТ-активности Мф при ее угнетении, либо в снижении показателя на фоне его повышения.
При оценке уровня внеклеточной 5-нуклеотида-зы, снижение которой является биохимическим критерием стимуляции Мф, обнаружен активирующий эффект бестима. Действие препарата при остро прогрессирующей инфекции на фоне достоверно повышенного содержания фермента после 28-ми дневного курса изониазида характеризовалось снижением показателя до 2,03±0,26 ед.экстинции при 3,95±0,44 ед.экстинции. в контроле лечения (Р<0,01). При классическом течении процесса на фоне тенденции к повышению показателя в контроле лечения (2,9±0,41 ед.экстинции при 2,24+0,19 ед.экстинции в интактной группе) под влиянием бестима наблюдалось уменьшение уровня фермента до 0,9±0,18 ед. экстинции (Р<0,01), то есть ниже уровня интактных мышей.
В наименьшей степени бестим изменял адгезивную способность Мф, что вероятно обусловлено некоторой активацией этой функции Мф самой инфекцией. Адгезия клеток к пластику была достоверно повышена бестимом только при вялотекущем туберкулезе, на 29 день его использования в 1,6 раза при сравнении с мышами, леченными изониазидом (до
0,383 ед.экстинции против 0,240 ед.экстинции, Р<0,05).
Полученные результаты, указывающие на угнетение функциональной активности фагоцитирующих клеток при активном туберкулезе, полностью согласуются с литературными данными [16,20]. Ингибиция фагоцитов на высоте развития заболевания сменяет их первоначальную активацию на ранних стадиях инфекции [9,13], что, возможно, обусловлено переключением иммунного ответа при прогрессировании инфекции на ТЬ2, а также влиянием поглощенных МВТ [6]. В наших опытах угнетение активности фагоцитоза зарегистрировано на фоне распространенного специфического поражения легких (26-47 дни после заражения), сопровождающегося при генерализованном туберкулезе у мышей существенной ингибицией продукции ТЫ цитоки-нов [2].
Активирующий эффект бестима на функциональное состояние Мф, вероятно, является следствием его стимулирующего действия на дифферен-цировку и функциональную активность ТЫ, которые, продуцируя ^N-7, реализуют один из важнейших путей активации Мф в ходе развития туберкулезной инфекции. Именно поэтому для достижения
максимальной эффективности бестим был включен в терапию туберкулеза у мышей на сроках развития ингибиции пролиферативной активности им-мунокомпетентных клеток и продукции ими цито-кинов ТЫ [2].
Эффективность иммунокорректоров в терапии туберкулеза в значительной мере определяется состоянием иммунного статуса, связанным со стадией развития и тяжестью течения заболевания. Вследствие этого особенно ценным представляется способность бестима стимулировать активность Мф при всех исследованных вариантах течения экспериментального туберкулеза. Для фтизиатрии важным также является восстанавливающее действие бестима на фагоцитоз, угнетенный при длительном использовании туберкулостатиков, поскольку лечение больных туберкулезом часто требует 4-6 месячных курсов этиотропной терапии.
Заключение
Таким образом, исследование действия бестима на функциональную активность Мф при экспериментальном туберкулезе показало:
- восстанавливающий эффект на поглотительную и переваривающую функцию макрофагов (по фагоцитозу клеточной взвеси дрожжей) при ее ингибиции в ходе развития инфекции и под влиянием длительной (более месяца) терапии противотуберкулезными препаратами при всех исследованных вариантах течения экспериментального туберкулеза;
- модулирующее действие на генерацию суперок-сидных радикалов макрофагами: повышение угнетенной НСТ-активности при остро прогрессирующей инфекции и снижение повышенного уровня продукции супероксида при вялотекущем туберкулезе;
- активирующее влияние на содержание внеклеточной 5-нуклеотидазы Мф при классическом и остро прогрессирующем течении инфекции;
- стимулирующий эффект на адгезивную активность перитонеальных макрофагов при вялотекущем туберкулезе.
Список литературы
1. Заболотных Н.В., Виноградова Т.И., Пигарева Н.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Иммунокоррекция бестимом при экспериментальном туберкулезе // Мед. иммунология. - 2001. - Т.З. - С.317.
2. Заболотных Н.В., Пигарева Н.В., Прокопьева Е.Д., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Цитокиновый ответ спленоцитов и перитонеальных макрофагов в ходе течения экспериментального туберкулеза // Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. -2001. -т.5. - С.54.
3. Пигарева Н.В., Симбирцев А.А., Колобов А.А., Калинина Н.М., Кауров О.А., Кетлинский С.А. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения бестима // Иммунология. -2000. -N 1. - С.33-35.
4.Adams L., Dinauer М., Morgenstern D., Krahen-buhl J. Comparison of the roles or reactive oxygen and nitrogen intermediates in the host response to Mycobacterium tuberculosis using transgenic mice // Tuber. Lung. Dis. -1997,- V78, N.5-6.- P.237-246.
5. Ameixa C., Friedland J.S. Down-regulation of in-terleukin-8 secretion from Mycobacterium tuberculo-sis-infected monocytes by interleukin-4 and -10 but not by interleukin-13 //Infect. Immun. - 2001. - V.69,N4.
- P.2470-2476.
6.Beltan E., Horgen L., Rastogi N. Secretion of cytokines by human macrophages upon infection by patho-genic and non-pathogenic mycobacteria //Microb. Pathog. -2000. - V.28, N5. - P.313-318.
7. Ehrt S, Schnappinger D, Bekiranov S., Drenkow J., Shi S., Gingeras T.R., Gaasteriand Т., Schoolnik G., Nathan C. Reprogramming of the macrophage transcrip-tome in response to interferon-gamma and Mycobacterium tuberculosis: signaling roles of nitric oxide synthase-2 and phagocyte oxidase //J. Exp. Med. - 2001.
- V.194.N8. - P.l 123-1140.
8. Fattal-German М., Le Roy Ladurie F.,Cerrina J., Lecerf F„ Berrih-Aknin S. Expression and modulation of ICAM-1, TNF-alpha and RANTES in human alveolar macrophages from lung-transplant recipients in vitro // Transplant Immunol. - 1998. -V.6,N.3. - P.183-192.
9. Hernandez-Pando R., Schon Т., Oronco E.H. Expression of inducible nitric oxide synthase and nitroty-rosine during the evolution of experimental pulmonary tuberculosis // Exp. Toxicol. Pathol. - 2001. - V.53, N4. - P.257-265.
10. Hesse М., Modolell М., La Flamme A.C. Differential regulation of nitric oxide synthase-2 and argin-ase-1 by type 1/type 2 cytokines in vivo: granulomatous pathology is shaped by the pattern of L-arginine metabolism //J. Immunol. - 2001. - V.167, N11. -P.6533-6544.
11. Mohan V.P., Scanga C.A., Yu K., Scott H.M., Tanaka K.E., Tsang E., Tsai M.M., Flynn J.L., Chan J. Effects of tumor necrosis factor alpha on host immune response in chronic persistent tuberculosis: possible role for limiting pathology // Infect. Immun. - 2001. - V.69, N3. - P.1847-1855.
12. Nabeshima S., Nomoto М., Matsuzaki G., Kishi-hara K., Taniguchi H., Yoshida S., Nomoto K. T-Cell hyporesponsiveness induced by activated macrophages through nitric oxide production in mice infected with Mycobacterium tuberculosis // Infect. Immun. - 1999.
- V.67,N7. - P.3221-3226.
13. Noss E.H., Pai R.K., Sellati T.J., Radolf J.D., Be-lisle J., Golenbock D.T., Boom W.H., Harding C.V. Toll-
like receptor 2-dependent inhibition of macrophage class II MHC expression and antigen processing by 19-kDa lipoprotein of Mycobacterium tuberculosis //]. Immunol. - 2001. - V.167, N2. - P.910-918.
14. Quiding-Jorbrink M„ Smith D.A., Bancroft G.J. Production of matrix metalloproteinases in response to mycobacterial infection // Infect. Immun. - 2001. - V. 69, N 9, - P.5661-5670.
15. Pick E., Charon J., Mizel D. A rapid densitomet-ric microassay for nitroblue tetrazolium reduction and application of the microassay to macrophages //J. Retic-uloendothel. Soc. -1981. - V.30, N 6. - P. 581-593.
16. Ragno S., Romano M., Howell S., Pappin D.J., Jenner P.J., Colston M.J. Changes in gene expression in macrophages infected with Mycobacterium tuberculosis: a combined transcriptomic and proteomic approach // Immunology. - 2001. - V.104, N 1. - P. 99-108.
17. Rogers H.W., Sheehan K.C., Brunt L.M., Dower
S.K., Unanue E.R., Schreiber R.D. Interleukin 1 participates in the development of anti-Listeria responses in
normal and SCID mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1992. - V.89, N 3. - P.1011-1015.
18. Scanga C.A., Mohan V.P,, Tanaka K., Alland D., Flynn J.L., Chan J. The inducible nitric oxide synthase locus confers protection against aerogenic challenge of both clinical and laboratory strains of Mycobacterium tuberculosis in mice // Infect. Immun. - 2001. - V.69, N12.-P.7711-7717.
19. TalrejaJ., Bhaatnagar A., Jindal S.K.,Ganguly N.K. Reduced expression of CD54 in tuberculosis patients // Int. J. Tuberc. And Lung. Disease. - 1998. -V.2, N11. Suppl. N2. - P.242-243.
20. Tunctan B., Okur H., Calisir C.H., Abacioglu H., Cakici I„ Kanzik I., Abacioglu N. Comparison of nitric oxide production by monocyte/macrophages in healthy subjects and patients with active pulmonary tuberculosis // Pharmacol. Res. - 1998. - V.37, N3,- P.219-226.
21. Yukuva N., Ivone Т., Tadashi E.A. A novel neu-trofil adherence test effectively reflects the activated state of neutrophils // Microbiol.a. Immunol. - 1989. - V.33.
- P.834-852.
поступила в редакцию 15.03.2003 принята к печати 15.10.2003
