Научная статья на тему 'КОНЦЕПЦИЯ ФОРМИРОВАНИЯ КОЛЛЕКЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА SYRINGA L. В КУЛЬТУРЕ IN VITRO'

КОНЦЕПЦИЯ ФОРМИРОВАНИЯ КОЛЛЕКЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА SYRINGA L. В КУЛЬТУРЕ IN VITRO Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

CC BY
137
80
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
SYRINGA / КОЛЛЕКЦИОННЫЙ ФОНД IN VITRO / КЛОНАЛЬНОЕ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЕ / ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ / РЕГУЛЯТОРЫ РОСТА / ДЛИТЕЛЬНОЕ СОХРАНЕНИЕ / IN VITRO COLLECTION FUND / CLONAL MICROPROPAGATION / CULTURE MEDIA / GROWTH REGULATORS / LONG-TERM PRESERVATION

Аннотация научной статьи по биологическим наукам, автор научной работы — Молканова О. И., Королева О. В., Крахмалева И. Л.

Исследования проводили с целью усовершенствования методики размножения и сохранения представителей рода Syringa в условиях in vitro для поддержания коллекции этой культуры. Работа по формированию коллекционного фонда in vitro начата с 2000-х гг. XX века. Коллекция in vitro рода Syringa L. Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина насчитывает 238 сортов и отборных форм, большую часть фонда (64 %) составляют сорта селекции стран бывшего СССР (Россия, Беларусь, Украина, Казахстан). На этапе собственно размножения использовали модифицированные среды Murashige и Skoog (MS), Quorin и Lepoivre (QL) с добавлением сахарозы в концентрации 30 г/л и регуляторов роста 6-BAP (6-Benzylaminopurine) - 0,5...1,0 мг/л и IAA (Indole-3-acetic acid) - 0,01 мг/л, контроль - питательная среда MS без гормонов. На этапе депонирования в условиях замедленного роста использовали модифицированную среду Murashige и Skoog с добавлением сахарозы в концентрации 40 г/л и ретарданта Chlorocholine Chloride (CCC) в концентрации 0,2.. .0,4 мг/л, контроль - среда MS с 40 г/л сахарозы без ретарданта. Для культивирования представителей рода Syringa лучше всего подходит модифицированная среда Quorin and Lepoivre, коэффициент размножения на которой был выше, чем на среде Murashige and Skoog, на 23 %. Совместное включение в составе питательной среды 6-BAP и IAA увеличивает коэффициент размножения растений на 9 % вне зависимости от генотипа и минеральной основы. Для эффективного размножения большинства сортов рекомендовано введение в питательную среду 1,0 мг/л 6-BAP и 0,01 мг/л IAA. Добавление в питательную среду на этапе сохранения 0,2...0,4 мг/л Chlorocholine Chloride значительно сокращает ростовые процессы микроклонов сирени без потери жизнеспособности (уменьшение длины междоузлий до 1.3 мм), что увеличивает период субкультивирования растений.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по биологическим наукам , автор научной работы — Молканова О. И., Королева О. В., Крахмалева И. Л.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THE CONCEPT OF FORMING A COLLECTION OF REPRESENTATIVES OF THE GENUS SYRINGA L. IN IN VITRO CULTURE

The purpose of the study was to improve the methods of in vitro reproduction and preservation of representatives of the genus Syringa to maintain the collection of this culture. The work on the formation of the in vitro collection fund began in the 2000s. In vitro collection of the genus Syringa L. of Tsytsin Main Moscow Botanical Garden includes 238 varieties and selected forms, most of which (64%) were bred in the countries of the former USSR (Russia, Belarus, Ukraine, Kazakhstan). At the stage of actual propagation, modified Murashige and Skoog (MS), Quorin and Lepoivre (QL) media were used. They were added sucrose at a concentration of 30 g/L, growth regulators 6-BAP (6-Benzylaminopurine) at a concentration of 0.5-1.0 mg/L, and IaA (Indole-3-acetic acid) at a concentration of 0.01 mg/L. The control was MS culture medium without hormones. At the stage of deposition under conditions of slow growth, a modified Murashige and Skoog media were added sucrose at a concentration of 40 g/L and the retardant Chlorocholine Chloride (CCC) at a concentration of 0.2-0.4 mg/L. The control was MS medium with 40 g/L of sucrose without retardant. The modified Quorin and Lepoivre media were best suited for the cultivation of the representatives of the genus Syringa. The multiplication factor on it was 23% higher than on the Murashige and Skoog media. The combined inclusion of 6-BAP and IAA in the nutrient medium increased the multiplication factor of plants by 9%, regardless of the genotype and mineral base. The introduction of 1.0 mg/L of 6-BAP and 0.01 mg/L of IAA into the culture medium is recommended for effective propagation of most varieties. Adding 0.2-0.4 mg/L of Chlorocholine Chloride to the nutrient medium at the stage of preservation significantly reduced the growth processes of lilac microclones without loss of viability (the length of internodes reduced to 1-3 mm) that increased the period of plant subculturing.

Текст научной работы на тему «КОНЦЕПЦИЯ ФОРМИРОВАНИЯ КОЛЛЕКЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА SYRINGA L. В КУЛЬТУРЕ IN VITRO»

doi: 10.24411/0235-2451-2020-10906 УДК582.916.16:575.1/.02.082

Концепция формирования коллекции представителей рода Syringa L. в культуре in vitro*

О. И. МОЛКАНОВА, О. В. КОРОЛЕВА, И. Л. КРАХМАЛЕВА

Главный ботанический сад им. Н. В. Цицина РАН, ул. Ботаническая, 4, Москва, 127276, Российская Федерация

Резюме. Исследования проводили с целью усовершенствования методики размножения и сохранения представителей рода Syringa в условиях in vitro для поддержания коллекции этой культуры. Работа по формированию коллекционного фонда in vitro начата с 2000-х гг. XX века. Коллекция in vitro рода Syringa L. Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина насчитывает 238 сортов и отборных форм, большую часть фонда (64 %) составляют сорта селекции стран бывшего СССР (Россия, Беларусь, Украина, Казахстан). На этапе собственно размножения использовали модифицированные среды Murashige и Skoog (MS), Quorin и Lepoivre (QL) с добавлением сахарозы в концентрации 30 г/л и регуляторов роста 6-BAP (6-Benzylaminopurine) - 0,5...1,0 мг/л и IAA (Indole-3-acetic acid) - 0,01 мг/л, контроль - питательная среда MS без гормонов. На этапе депонирования в условиях замедленного роста использовали модифицированную среду Murashige и Skoog с добавлением сахарозы в концентрации 40 г/л и ретарданта Chlorocholine Chloride (CCC) в концентрации 0,2.0,4 мг/л, контроль - среда MS с 40 г/л сахарозы без ретарданта. Для культивирования представителей рода Syringa лучше всего подходит модифицированная среда Quorin and Lepoivre, коэффициент размножения на которой был выше, чем на среде Murashige and Skoog, на 23 %. Совместное включение в составе питательной среды 6-BAP и IAA увеличивает коэффициент размножения растений на 9 % вне зависимости от генотипа и минеральной основы. Для эффективного размножения большинства сортов рекомендовано введение в питательную среду 1,0 мг/л 6-BAP и 0,01 мг/л IAA. Добавление в питательную среду на этапе сохранения 0,2.0,4 мг/л Chlorocholine Chloride значительно сокращает ростовые процессы микроклонов сирени без потери жизнеспособности (уменьшение длины междоузлий до 1.3 мм), что увеличивает период субкультивирования растений.

Ключевые слова: Syringa, коллекционный фонд in vitro, клональное микроразмножение, питательные среды, регуляторы роста, длительное сохранение.

Сведения об авторах: О. И. Молканова, кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник (e-mail: molkanova@mail. ru); О. В. Королева, младший научный сотрудник; И. Л. Крахмалева, младший научный сотрудник.

Для цитирования: Молканова О. И. , Королева О. В. , Крахмалева И. Л. Концепция формирования коллекции представителей рода Syringa L. в культуре in vitro // Достижения науки и техники АПК. 2020. Т 34. № 9. С. 30-34. doi: 10.24411/0235-2451-2020-10906.

* Работа выполнена в рамках ГЗ ГБС РАН(№18-118021490111-5) и при поддержке ГКМинобрнауки России (№05.620.21.0002).

The concept of forming a collection of representatives of the genus Syringa L. in in vitro culture

0. I. Molkanova, O. V. Koroleva, I. L. Krakhmaleva

Tsytsyn Main Botanic Garden, Russian Academy of Sciences, ul. Botanicheskaya, 4, Moskva, 127276, Russian Federation

Abstract. The purpose of the study was to improve the methods of in vitro reproduction and preservation of representatives of the genus Syringa to maintain the collection of this culture. The work on the formation of the in vitro collection fund began in the 2000s. In vitro collection of the genus Syringa L. of Tsytsin Main Moscow Botanical Garden includes 238 varieties and selected forms, most of which (64%) were bred in the countries of the former USSR (Russia, Belarus, Ukraine, Kazakhstan). At the stage of actual propagation, modified Murashige and Skoog (MS), Quorin and Lepoivre (QL) media were used. They were added sucrose at a concentration of 30 g/L, growth regulators 6-BAP (6-Benzylaminopurine) at a concentration of 0.5-1.0 mg/L, and IAA (Indole-3-acetic acid) at a concentration of 0.01 mg/L. The control was MS culture medium without hormones. At the stage of deposition under conditions of slow growth, a modified Murashige and Skoog media were added sucrose at a concentration of 40 g/L and the retardant Chlorocholine Chloride (CCC) at a concentration of 0.2-0.4 mg/L. The control was MS medium with 40 g/L of sucrose without retardant. The modified Quorin and Lepoivre media were best suited for the cultivation of the representatives of the genus Syringa. The multiplication factor on it was 23% higher than on the Murashige and Skoog media. The combined inclusion of 6-BAP and IAA in the nutrient medium increased the multiplication factor of plants by 9%, regardless of the genotype and mineral base. The introduction of 1.0 mg/L of 6-BAP and 0.01 mg/L of IAA into the culture medium is recommended for effective propagation of most varieties. Adding 0.2-0.4 mg/L of Chlorocholine Chloride to the nutrient medium at the stage of preservation significantly reduced the growth processes of lilac microclones without loss of viability (the length of internodes reduced to 1-3 mm) that increased the period of plant subculturing. Keywords: Syringa; in vitro collection fund; clonal micropropagation; culture media; growth regulators; long-term preservation. Author Details: O. I. Molkanova, Cand. Sc. (Agr.), leading research fellow (e-mail: molkanova@mail.ru); O. V. Koroleva, junior research fellow;

1. L. Krakhmaleva, junior research fellow.

For citation: Molkanova OI, Koroleva OV, Krakhmaleva IL. [The concept of forming a collection of representatives of the genus Syringa L. in in vitro culture]. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2020;34(9):30-4. Russian. doi: 10.24411/0235-2451-2020-10906.

В рамках проекта научно-образовательного центра (НОЦ) мирового уровня «Инновационные решения в АПК» на основе селекционно-генетическихисследова-ний в растениеводстве в Главном ботаническом садуим. Н.В. Цицина проводится работа по созданию научной методологии культивирования и сохранения ценных декоративных культур, в том числе представителей рода Syringa 1_.

Сирень - один из самых распространенных краси-воцветущих кустарников для умеренного климата, пригодных для выращивания в регионах России с зонами морозостойкости 3...6. Относительная неприхотливость, засухоустойчивость, высокая декоративность во время цветения, широкий ассортимент сортов обусловливают популярность использования культуры в городском и частном озеленении.

Род Syringa L. относится к семейству маслиновых (Oleaceae) и включает по разным классификациям от 22 до 30 видов [1, 2]. На сегодня мировой фонд сирени составляет 3485 сортов и гибридных форм, большинство из которых (2015) получены от вида S. vulgaris L. [3, 4, 5].

Одно из самых перспективных направлений сохранения биоразнообразия растений - создание банков стерильных культур. Биотехнологические методы позволяют в короткие сроки размножать ценные генотипы, что значительно повышает эффективность сохранения растений в условиях ex situ.

Генетический банк растений in vitro Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина начали формировать в 1996 г., на сегодняшний день он представлен 153 видами, 1157 сортами и отборными формами, относящимися к

183 родам и 61 семейству. Oleaceae - одно из наиболее представленных семейств в составе коллекции, к нему относится около 20 % фонда in vitro. В ГБС РАН сформирована наиболее репрезентативная в России коллекция in vitro рода Syringa, которую ежегодно пополняют не только известными и редкими сортами сирени обыкновенной (S. vulgaris) и гиацинтоцветной (S. xhyacinthiflora Rehder), но и гибридами собственной селекции.

Цель исследований - формирование коллекционного фонда рода Syringa и совершенствование методов размножения и сохранения сирени в культуре in vitro.

Условия, материалы и методы. Работу по формированию коллекционного фонда in vitro рода Syringa проводят около 20 лет (с начала 2000 гг.). Ее осуществляют по нескольким направлениям: исторические (ретро-) сорта; сорта выдающихся отечественных и зарубежных селекционеров; оригинальные сорта с необычными морфологическими признаками; современные сорта, перспективные отборные формы собственной селекции.

В качестве объектов исследований использовали наиболее уникальные и перспективные гибриды S. vulgaris и S. xhyacinthiflora. Работа проведена более чем с 320 сортами. В стерильную культуру вводили меристемы с примор-диями, изолированные из латеральных почек, или участки побегов с 1.. .2 метамерами, взятые с маточных растений в период активного роста. В качестве эксплантов на этапе собственно микроразмножения использовали участки микропобегов с 1 метамером, на этапе сохранения - участки микропобегов с 2 метамерами.

Для культивирования in vitro применяли общепринятые и разработанные в лаборатории биотехнологические методы [6, 7]. На этапе собственно размножения использовали модифицированные среды Murashige и Skoog (MS) [8] и Quorin и Lepoivre (QL) [9] с добавлением сахарозы в концентрации 30 г/л и регуляторов роста 6-BAP (6-Benzylaminopurine) - 0,5.1,0 мг/л и IAA (Indole-3-acetic acid) - 0,01 мг/л, контроль - питательная среда MS без гормонов. На этапе депонирования в условиях замедленного роста использовали модифицированную среду Murashige и Skoog с добавлением сахарозы в концентрации 40 г/л и ретарданта Chlorocholine Chloride (CCC) в концентрации 0,2.0,4 мг/л, контроль - среда MS с 40 г/л сахарозы без ретарданта.

В ходе экспериментов изучали влияние минерального и гормонального состава питательной среды на морфогенез растений различных сортов сирени, влияние ретардантов (Chlorocholine Chloride) на ростовые процессы и жизнеспособность эксплантов при длительном сохранении при пониженных температурах. Все опыты проводили в трех повторностях, в каждой из которых отбирали не менее 30 эксплантов. Период субкультивирования эксплантов составлял 28.30 суток. Регенеранты культивировали при освещении 2000.3000 лк, фотопериоде 16 ч день и 8 ч ночь, температуре 23.25 °С и влажности воздуха 70 %. В процессе исследований измеряли длину побегов, подсчитывали число междоузлий, вычисляли коэффициент размножения (Кр). На этапе долговременного сохранения в условиях замедленного роста экспланты культивировали при температуре 5.7 °С и освещенности 500.1500 лк, проводили оценку их жизнеспособности и измеряли длину прироста и междоузлий.

Обработку данных проводили общепринятыми методами статистического анализа (многофакторный дисперсионный анализ) [10] с использованием программного обеспечения Microsoft Office Excel 2010.

Результаты и обсуждение. Основной целью при формировании коллекционного фонда in vitro было наи-

более репрезентативное представление достижений отечественной селекции. За годы проведения исследований в коллекцию in vitro рода Syringa было введено 323 генотипов, и на сегодняшний день успешно сохраняется 23B сортов и отборных форм селекции разных стран. Больше половины (б4 %) генофонда составляют сорта стран бывшего СССР, в том числе из России - 42 %, из Белоруссии и Латвии - по 7 %, из Казахстана - 5 %, из Украины - 3 %. На долю сортов из Франции приходится 20 % коллекции, из США - 9 %, из Нидерландов - 3 %, из других стран - 4 %.

Созданные ведущими отечественными селекционерами сорта представляют национальное достояние страны. К их числу можно отнести сорта сирени селекции Л. А. Колесникова, Н. Л. Михайлова, Н. К. Вехова. В ГБС РАН находится наиболее полная коллекция сохранившихся сортов выдающегося советского ученого Л. А. Колесникова, основоположника отечественной селекции сирени. Она насчитывает около 40 сортов и гибридов, в том числе такие известные сорта, как Красавица Москвы, Красная Москва, Мечта, Галина Уланова, Радж Капур, Сумерки и раритетный сорт Ветка Мира.

Кроме того, в коллекции ГБС РАН представлены отечественные сорта селекции Н. Л. Михайлова, работавшего в Главном ботаническом саду (Школьница, Мулатка, Век, Ариа, Нина, Николай Михайлов, Скромница), и Н. К. Вехо-ва, известного ученого-дендролога и селекционера, работавшего на Лесостепной опытно-селекционной станции (Белая Ночь, Память о Вавилове, Память о Вехове, Русь, Елена Вехова, Русская Песня, Аэлита).

Среди сортов сирени, созданных в других республиках бывшего СССР, представлены сорта, выведенные в Центральном ботаническом саду АН Казахстана - Лиловая Пирамида, Розовая Пирамида, Снежный Ком, Байконур, Самал и др. (селекционеры А. Ф. Мельник, В. Г. Рубаник, Б. К. Дягилев); Республики Беларусь -Лебедушка, Минчанка, Защитникам Бреста, Жемчужина, Лунный Свет и др., выведенные Н. В. Смольским и В. Ф. Бибиковой в Центральном ботаническом саду АН; украинские сорта, созданные в Национальном ботаническом саду им. М. М. Гришко НАН - Огни Донбасса, Тарас Бульба и др. (селекционеры Л. И. Рубцов, В. Г. Жо-голева, Н. А. Ляпунова, В. К. Горб). Латвийская селекция представлена наиболее интересными сортами П. Упи-тиса (Jaunkalsnavas Nakts, Imants Ziedonis, Vita, Dobeles Meitene, Mate Ede Upitis, Dobeles Sapnotajs, Mazais Princis, Têvzeme) и Л. Карклинса (Perle).

Среди иностранных культиваров доминируют сорта выдающихся французских селекционеров Виктора и Эмиля Лемуан (около 30 из 214 выведенных), давно ставшие классикой для коллекционеров, в том числе знаменитые Monique Lemoine, Ami Schott, Buffon, Paul Hariot, Belle de Nancy, Charles Joly. Также в генетическом банке in vitro ГБС РАН сохраняются сорта немецкой (Andenken an Ludwig Späth, Fürst Bülow (L. Späth) и др.), бельгийской (Mme Florent Stepman (Fl. Stepman-Demessemaeker)), голландской (Flora, Sensation, Peerless Pink (E. Maa^), Primrose (G. Maa^) и др.) селекции. Среди американских сортов можно назвать Rochester (Al.R. Grant, США), Fantasy, Sweetheart (W.B. Clarke, США), Lavender Lady (W.E. Lam-merts, США), Anne Shiach, Lady Lindsay (T.A. Havemeyer, США), Wedgwood Blue, Wonderblue, Porcelain Blue (J.L. Fiala, США), Dresden China, Virginia Becker (H.T. Klager, США)) Frank Paterson (S.I. Paterson, Канада) Maiden's Blush (F.L. Skinner, Канада) и др.

Важная составляющая коллекции - оригинальные сорта с такими ценными морфологическими признаками,

как окаймление по краю лепестков (Sensation), пестро-листность (Aucubafolia), многолепестность (Rochester, Pat Pesata, Porcelain Blue) и др. Коллекционный фонд сирени Главного ботанического сада включает разнообразные по окраске, форме и строению цветка сорта, а также гибриды всех цветовых групп, как с махровыми, так и с простыми цветками.

В 200б г. в лаборатории биотехнологии растений ГБС РАН была начата работа по направленной гибридизации сортов по признаку многолепестности и отбор растений, полученных от свободного опыления наиболее оригинальных сортов. В 2019 г. 3 наиболее перспективные много-лепестные формы под названиями Акварель, 75 Лет ГБС, Памяти Михайлова были переданы на Госсортоиспытание в качестве новых сортов [11]. В 2013 г. в ООО «Заокские Питомники» высажено более 1500 сеянцев, полученных от свободного опыления. В 2019-2020 гг. выбрано около 50 перспективных отборных форм для последующей регистрации в реестре селекционных достижений.

Современные биотехнологические методы открывают принципиально новые возможности для сохранения и воспроизводства генофонда растений. Однако их можно рационально применять только к тем культурам, для которых разработаны легко воспроизводимые методики клонального микроразмножения.

Известно, что регенерационный потенциал растений зависит от их биологических особенностей. При изучении представителей рода Syringa прослеживается корреляция между динамикой роста в условиях in vivo и in vitro: высокорослые, активно растущие сорта в коллекциях открытого грунта (Buffon, Mme Kasimir Perier) сохраняют это свойство в условиях in vitro (быстрый рост и развитие, высокий коэффициент размножения), а низкорослые сорта (Rochester, Mme Charles Souchet, Школьница) и в стерильной культуре имеют меньшую высоту микропобегов и низкий коэффициент размножения [7].

Развитие сортов сирени в условиях in vitro зависит не только от биологических особенностей, но и от возраста маточных растений: по мере увеличения возраста экс-планта происходит затухание органогенного потенциала. Поэтому для успешного введения в стерильную культуру целесообразно использовать маточники не старше 5.7 лет [12].

Поскольку основная цель при клональном микроразмножении - поддержание геромоплазмы в стабильном состоянии, для культивирования сирени выбран один из методов, минимизирующий риск сомаклональных вариаций - метод активации уже существующих меристем, который считают надежным в плане генетической стабильности регенерантов [б, 13]. Морфолого-анатомический анализ эксплантов сирени показал, что микропобеги развиваются из пазушных меристем растений. Для успешной регенерации меристем, и, следовательно, введения в культуру in vitro, эффективно использовать экспланты, собранные с маточников во время активного роста, так как в этот период конус нарастания увеличивается, по сравнению с периодом первоначальной фазы роста [7].

У представителей рода Syringa способность к реализации морфогенетического потенциала в большей степени

определяется генотипом и варьирует в пределах нормы под воздействием других факторов (например, состав питательной среды) [14]. По величине этого показателя сорта сирени можно условно разделить на 3 группы: с низким коэффициентом размножения (Кр<3,00) - сорта Rochester, Lady Lindsay, Mme Charles Souchet, Школьница, Мулатка, Романс, Flora; со средним коэффициентом размножения (Кр= 3,00...7,00) - Monique Lemoine, Primrose, Маресьев, Marechal Lannes, Ami Schott, Суворовец, Кремлевские Куранты, Индия, Мирабо и с высоким коэффициентом размножения (Кр<7,00) - Андрюша Громов, Валентина Гризодубова, Virginia Becker, Защитникам Бреста, Мин-чанка, Русь, Сумерки, Sensation. Большая часть сортов (67 %) отнесена к группе со средним коэффициентом размножения.

Эффективность клонального микроразмножения во многом определяет состав питательной среды [15]. Содержание в ней отдельных компонентов в большинстве случаев оказывает значительное влияние на морфоге-нетический потенциал растений. Для сирени на этапе собственно микроразмножения лучше всего подходят модифицированные среды Murashige и Skoog, Quorin и Lepoivre. Для увеличения интенсивности побегообразования представителей рода Syringa эффективно использовать питательную среду с минеральной основой QL, на которой рост коэффициента размножения, по сравнению с MS, достигает 23 % (рис. 1, 2). У некоторых сортов сирени минеральная основа среды не влияет на морфогенез растений, однако у большинства генотипов повышение эффективности размножения на среде QL может достигать от 8.10 % (Лебедушка - 9,1 %, Красавица Москвы - 8,8 %) до 28.30 % (сорт Buffon - 28,8 %).

Рис. 1. Влияние минерального состава питательной среды на регенерационный потенциал

сортов сирени (НСР=0,21)

l-MS; -QL.

Для повышения коэффициента размножения проводят подбор фитогормонов и их концентраций. Установлено, что на этапе собственно микроразмножения коэффициент размножения у растений, культивируемых на среде с совместным применением 6-BAP и IAA (Кр=4,41), выше, чем на среде только с 6-BAP (Кр=4,05), на 9 % вне зависимости от генетических особенностей и используемой минеральной основы (в контроле величина этого показателя составляет 1,39, НСР05=0,10).

Высокий коэффициент размножения большинства сортов сирени обеспечивает добавление в питательную среду 1,0 мг/л 6-BAP и 0,01 мг/л IAA (рис. 3, 4). На среде с 1,0 мг/л 6-BAP (Кр=4,27) коэффициент размножения выше, чем при более низкой концентрации (на среде с 0,5 мг/л 6-BAP Кр=3,84). При дальнейшем повышении концентрации (более 1,0 мг/л) увеличивается длина междоузлий, что снижает эффективность микроразмножения. В целях уменьшения негативного воздействия фитогормонов следует чередовать циклы культивирования сирени

Рис.2. Стадия собственно микроразмножения сортов Лебедушка (1) и Бюффон (2) на средах Murashige и Skoog (А) и Quorin и Lepoivre (Б).

на средах с низким и высоким содержанием (от 0,3 до 1,5 мг/л) регуляторов роста и добавлением 0,01 мг/л IAA.

Для стабильного воспроизводства растений важны сроки вступления регенерантов в фазугенеративного развития. Регенеранты сирени, прошедшие цикл культивирования in vitro, быстрее переходят к репродуктивной фазе, по сравнению с растениями, размноженными другими способами: после высаживания в открытый грунт 20 % саженцев, адаптированных к условиям exsitu, при соблюдении агротехники зацветают на 2.3 год (в зависимости от биологических особенностей сорта), в то время как размноженные обычными методами - только на 4.5 год.

5,00

£ №

В £1,00 Я 3,00

-I- |Ь,00

"f!" 5 1,00 §. 2.0,00

3,84 4,27

2,73

0,5ВАР+0,0 ] IAA 1 ВАР-0.011АА

Концентрация регуляторов роста

контроль

Рис. 3. Влияние концентрации регуляторов роста (BAP - 6-Benzylaminopurine; IAA - Indole-3-acetic acid) на регенерационный потенциал сортов сирени (НСР05=0,24).

Основная задача при работе с коллекцией in vitro заключается в сохранении жизнеспособности эксплантов в сочетании с максимальным увеличением длительности субкультивирования. Сроки и спецификуусловий хранения растительного материала определяют биологические особенности таксона [16]. В лабораторных условиях (t=23.. .25 °C, освещенность 2000.3000лк) в зависимости от генотипа сирень может храниться без потери жизнеспособности

Рис. 4. Побегообразование у сорта Маршал Ланн на средах с разной концентрацией регуляторов роста: QL 0,5ВАР+0,011АА (А); QL 1ВАР+0,011АА (Б); контроль (В).

от 3 до 12 месяцев (без пересадки). Однако большое количество сортов в коллекции затрудняет контроль состояния растений с коротким периодом субкультивирования, что вынуждает искать другие подходы.

Наиболее эффективный и вместе с тем простой способ сохранения генбанка - культивирование в условиях замедленного роста. В процессе исследований установлено, что сочетание оптимальных физических условий культивирования (температуры и интенсивности освещения), состава питательной среды, концентрации осмотиков снижает интенсивность ростовых процессов, что позволяет значительно увеличить период субкультивирования,

а также жизнеспособность эксплантов, находящихся на депонировании в течение длительного периода времени (12.24 месяцев и более). Для долговременного сохранения регенерантов сирени в условиях in vitro рекомендуется использовать питательную среду MS с уменьшенным содержанием минеральных солей (1/2) и добавлением 40 г/л сахарозы [17]. Установлена эффективность использования при долговременном сохранении растений в условиях in vitro ретардантов: после 6 месяцев хранения было отмечено сокращение длины междоузлий по мере увеличения концентрации Chlorocholine Chloride (CCC) с 0,2 до 0,4 мг/л. На среде ос 0,2 мг/л ССС длина междоузлий варьировала в зависимости от сорта в пределах 2. 4 мм, с 0,4 мг/л ССС - 1.3 мм, а на контрольной среде -

5... 15 мм. Следовательно, добавление ретарданта сни-жаетинтенсивностьростовых процессов, что может быть использован для увеличения периода субкультивирования при хранении эксплантов в условиях in vitro.

Для контроля сортового соответствия микроклонов сортов сирени маточным растениям был проведен анализ их RAPD-спектров по критерию величины относительных генетических расстояний между исследуемыми образ- 33

цами. У микроклонов, сохраняемых в коллекции in vitro в течение длительного времени, отмечено сохранение сортовых признаков на уровне сортов-образцов из полевых коллекций [18].

Выводы. На основе высокоэффективной технологии клонального микроразмножения в ГБС РАН сформирован генетический банк in vitro рода Syringa, включающий на сегодняшний день 238 генотипов.

Для эффективного культивирования большинства сортов сирени на этапе собственно микроразмножения лучше всего подходит модифицированная среда QL, при использовании которой коэффициент размножения воз-

растает, по сравнению со средой MS, на 23 %. Кроме того, целесообразно добавлять в питательную среду 1,0 мг/л 6-BAP и 0,01 IAA.

Регенеранты сирени быстрее проходят этапы онтогенеза и вступают в генеративную фазу на 1.3 года раньше, чем размноженные традиционными способами.

Для долговременного сохранения растений в условиях in vitro целесообразно использование ретардантов. Добавление в питательную среду 0,2 и 0,4 мг/л Chlorocholine Chloride приводит к значительному снижению ростовых процессов, в частности длина междоузлий уменьшается до 2.4 мм и 1...3 мм соответственно.

Литература

1. Fiala J. L., Vrugtman F. Lilacs: Gardener's encyclopedia. Portland, Oregon, USA: Timber Press, 2008.416p.

2. Debard ML. An updated taxonomy of genus Syringa (Lilacs) // Lilacs. Quarterly Journal of the International Lilac Society. 2019. Vol. 48. No. 4. P. 153-167.

3. Debard ML. Lilac register: registar's 2020 report//Lilacs. Quarterly Journal of the International Lilac Society. 2020. Vol. 50. No. 1. P. 8-10.

4. Debard ML. International registerand checklist ofcultivar names for the genus Syringa L. (Oleaceae). [Электронный ресурс]. URL: https:// wmw.internationallilacsociety.org/public-register/(дата обращения 25.06.2020).

5. Круглова К. Н. Использование сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L.) в озеленении городов//Syringa L.: коллекции, выращивание, использование (сб. научн. статей). 2020. C. 76-79.

6. Бутенко Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. 160 с.

7. Комплексное изучение интродуцированных видов и сортов рода Syringa L. в ГБС РАН и ЦБС НАН Беларуси / О. И. Молканова, Е. В. Спиридович, Л. Н. Коновалова и др.// Вестник Удмуртского университета. 2011. Вып. 2. С. 66-73.

8. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. Vol. 15. P. 473-497.

9. Quoirin M., Lepoivre P. Improved medium for in vitro culture of Prunus sp. // ActaHortic. 1977. Vol. 78. P. 437-442.

10. Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. 352 с.

11. Бюллетень № 254 от 16.06.2020 г. [Электронный ресурс]//Государственная комиссия по испытанию и охране селекционных достижений(ФГБУ «Госсорткомиссия»). URL: https://gossortrf.ru/bullets/bull_254_1.html(дата обращения30.06.2020).

12. Биотехнологические и молекулярно-генетические методы для сохранения и воспроизводства полезных и редких растений / О. И. Молканова, О. Г. Васильева, Н. А. Мамаева и др.// История науки и техники. 2010. № 5. С. 74-79.

13. Молканова О. И., Коновалова Т. Ю., Стахеева Т. С. Особенности размножения и сохранения коллекции ценных и редких видов растений в условиях in vitro // Бюллетень ГНБС. 2016. Вып. 120. С. 17-23.

14. Molkanova O., Koroleva O. Biotechological methods of Syringa L. collection propagation and preservation//In Vitro. Cellular & Developmental Biology. 2018. Vol. 54. P. 545-546. doi: 10.1007/s11627-018-9927-9.

15. Biotechnological methods of propagation for some rare endemic plant species of the southern Russian flora / I. V. Mitrofanova, N. P. Lesnikova-Sedoshenko, V. A. Brailko, etal.//ActaHorticulturae. 2020. Vol. 1285. P. 177-184. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.28.

16. Basics of long-term conservation and micropropagation of valuable plant species and cultivars in genepool collections of MBG RAS / O. Molkanova, O. Koroleva, I. Shirnina, et al. //Journal of Biotechnology. 2019. Vol. 305. P. 55. doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.05.194.

17. Молканова О. И., Королева О. В. Формирование и сохранение генетического банка рода Syringa L. в культуре in vitro//Syringa L.: коллекции, выращивание, использование (сб. научн. статей). 2020. С. 98-101.

18. Мельникова Н. В., Борхерт Е. В., Мартынов С. П. и др. Использование молекулярно-генетических маркеров для верификации коллекции in vitro сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L.) // Генетика. 2009. Т. 45. № 1. С. 97-103.

References

1. Fiala JL, Vrugtman F. Lilacs: Gardener's encyclopedia. Portland, Oregon (USA): Timber Press; 2008.416p.

2. Debard ML. An updated taxonomy of genus Syringa (Lilacs). Lilacs. Quarterly Journal of the International Lilac Society. 2019;48(4):153-

67.

3. Debard ML. Lilac register: registar's 2020 report. Lilacs. Quarterly Journal of the International Lilac Society. 2020;50(1):8-10.

4. Internationallilacsociety.org [Internet]. Debard ML. International registerand checklist of cultivar names for the genus Syringa L. (Oleaceae); c2020[updated2020 Jun 19; cited2020 Jun 25]. Available from: https://www.internationallilacsociety.org/public-register/.

5. Kruglova KN. [The use of common lilac (Syringa vulgaris L.) in urban landscapes]. In: Syringa L.: kollektsii, vyrashchivanie, ispol'zovanie [Syringa L.: collection, cultivation, using]; 2020. p. 76-9. Russian.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

6. Butenko RG. Biologiya kletokvysshikh rasteniy in vitro i biotekhnologiya na ikh osnove [Biology of cells ofhigherplants in vitro and biotechnology based on them]. Moscow: FBK-Press; 1999. 160p. Russian.

7. Molkanova OI, Spirydovich EV, Konovalova LN, et al. [Complex observation ofintroduction species and varieties of Syringa L. in Main Botanical Garden of the RAS and in the Central Botanical Garden of the NAS of Belarus]. Vestnik Udmurtskogo universiteta. 2011;2:66-73. Russian.

8. Murashige T, Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 1962;15:473-97.

9. Quoirin M, Lepoivre P. Improved medium for in vitro culture of Prunus sp. ActaHortic. 1977;78:437-42.

10. Lakin GF. Biometriya [Biometrics]. Moscow: Higher school; 1980. 352p. Russian.

11. Gossortrf.ru [Internet]. Newsletter № 254 from 16.06.2020; c2020 [cited 2020 Jun 30]. Available from: https://gossortrf.ru/bullets/ bull_254_1.html.

12. Molkanova OI, Vasilyeva OG, Mamaeva NA, et al. [Biotechnological and molecular genetic methods for the preservation and reproduction of useful and rare plants]. Istoriya nauki I tekhniki. 2010;5:74-9. Russian.

13. Molkanova OI, Konovalova LN, Stakheyeva TS. [Propagation and conservation characteristics of valuable and rare species collection in vitro]. Byulleten'GNBS. 2016;120:17-23. Russian.

14. Molkanova O, Koroleva O. Biotechological methods of Syringa L. collection propagation and preservation. In Vitro. Cellular & Developmental Biology. 2018;54:545-6. doi: 10.1007/s11627-018-9927-9.

15. Mitrofanova IV, Lesnikova-Sedoshenko NP, Brailko VA, et al. Biotechnological methods of propagation forsome rare endemic plant species of the southern Russian flora. ActaHorticulturae. 2020;1285:177-84. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.28.

16. Molkanova O, Koroleva O, Shirnina I, et al. Basics of long-term conservation and micropropagation of valuable plant species and cultivars in genepool collections of MBG RAS. J. Biotechnol. 2019;305:55. doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.05.194.

17. Molkanova OI, Koroleva OV. [The formation and conservation of the genus Syringa L. in vitro gene bank]. In: Syringa L.: kollektsii, vyrashchivanie, ispol'zovanie [Syringa L.: collection, cultivation, using]; 2020. p. 98-101. Russian.

18. Melnikova NV, Borhert EV, Martynov SP, et al. [Molecular genetic marker-based approaches to the verification of lilac Syringa vulgaris L. in vitro germplasm collections]. Rus. J. Genet. 2009;45(1):97-103. Russian.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.