Комплексное выявление возбудителей природно-очаговых инфекций методом ПЦР в снятых с людей переносчикахв Омской области

Березкина Галина Владимировна; Штрек Сергей Владимирович; Зеликман Светлана Юрьевна; Боброва Оксана Алексеевна; Околелова Наталья Александровна; Коломеец Анна Николаевна; Самойленко Ирина Евгеньевна; Рудакова Светлана Анатольевна; Петрова Юлия Александровна; Любенко Анастасия Федоровна; Кумпан Людмила Валерьевна

шее продолжение исследований как по распространенности эндемичных по КЭ территорий, так и по вовлеченности в циркуляцию вируса других видов клещей, кроме I. persulcatus. Учитывая, что не все образцы РНК были секвенированы, нельзя исключить возможность циркуляции и других подтипов

вируса КЭ в природных очагах Алматинской области РК.

Заключение. Данные о распространении вируса КЭ в клещах разных видов помогут улучшить эпидемиологический надзор и профилактические мероприятия по клещевому энцефалиту.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК (REFERENCES)

1. M. Schwainger, P. Casionotti Development of Quantative real-time RT PCR assay with internal control for the laboratory detection of tick borne encephalitis virus (TBEV) RNA. Journal of Clinical Virology. 2003; 27:136-145.

Благодарность. Это исследование спонсировано Программой немецкого партнерства в целях сохранения безопасности в области здравоохранения.

Карлыгаш Абдиева является Ph. D докторантом в Центре Международного Здравоохранения, Университет Людвига-Максимилиана, программа которого финансируется за счет DAAD, Exceed и BMZ.

УДК 616.036.21:614.446.2(571.13) ГРНТИ 34.25.05

КОМПЛЕКСНОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ МЕТОДОМ ПЦР В СНЯТЫХ С ЛЮДЕЙ ПЕРЕНОСЧИКАХ В ОМСКОЙ ОБЛАСТИ

12 12 12 1 1 Г.В. Березкина ' , С.В. Штрек ' , С.Ю. Зеликман ' , О.А. Боброва , Н.А. Околелова ,

А.Н. Коломеец1, И.Е. Самойленко1, С.А. Рудакова1, Ю.А. Петрова1, А.Ф. Любенко1,

Л.В. Кумпан1'2

1ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора Россия, 644080, г. Омск, просп. Мира, 7

2 ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава России Россия, 644043, г. Омск, ул. Ленина, 12

Результаты анализа комплексного молекулярно-генетическое исследования снятых с людей иксодовых клещей на территории Омской области показали микст-инфицирование возбудителями природно-очаговых инфекций (клещевого энцефалита, иксодовых клещевых боррелиозов, клещевых риккетсиозов, туляремии, грану-лоцитарного анаплазмоза человека, моноцитарного эрлихиоза человека, бартонеллезов) в 16,5 %, что еще раз подтверждает существование и активное функционирование сочетанных природных очагов и их потенциальную опасность для человека. Генетический материал одновременно двух возбудителей выявлен в 84,5 % от всех «микстов», трех - в 14,3 %, четырех - 1,2 %. Сделаны выводы о необходимости дальнейшего изучения микст-инфицирования переносчиков, межвидовых взаимодействий патогенов в них, возможности передачи комплекса возбудителей человеку и особенностей клинических проявлений.

Ключевые слова: иксодовые клещи, снятые переносчики, микст-инфицирование, Омская область.

INTEGRATED DETECTION OF NATURAL FOCAL INFECTIONS AGENTS IN THE REMOVAL VECTORS FROM PEOPLE IN OMSK REGION

G.V. Berezkina1,2, S.V. Shtrek1,2, S.Y. Zelikman1,2, O.A. Bobrova1, N.A. Okolelova1, A.N. Kolomeets1,

I.E. Samoylenko1, S.A. Rudakova1, Y.A. Petrova1, A.F. Lyubenko1, L. V. Kumpan1'2

1Omsk Research Institute of Feral Herd Infections

Russia, 644080, Omsk, prosp. Mira, 7

2Omsk State Medical University

Russia, 644043, Omsk, ul. Lenina, 12

The results of the analysis of complex molecular genetic studies of ticks removed from the people in Omsk region showed the mixed-infecting by pathogens of feral herd infections (encephalitis, Ixodes tick borreliosis, tick-borne rickettsial diseases, tularemia, human granulocytic anaplasmosis, human monocytic ehrlichiosis, bartonellesis) in 16.5 %. It confirms the existence and active functioning of complex natural focus and their potential danger to the humans. Genetic material of two pathogens simultaneously was identified in 84.5 % of all "mixed-infections", three - in 14.3 %, four - in 1.2 %. The authors conclude that it is necessary to go on further studying mixed-infection vectors, interspecies interactions of pathogens in them, the possibility of transmission pathogens to the humans and features of clinical manifestations.

Keywords: ixodic ticks, removed vectors, mixed infecting, Omsk region.

Территория Омской области эндемична по ряду природно-очаговых болезней. Специфическими переносчиками некоторых возбудителей бактериальных, вирусных и прото-зойных инфекций и инвазий человека и животных являются кровососущие членистоногие, в частности иксодовые клещи. В Западносибирском регионе, в том числе Омской области, в иксодовых клещах, собранных в природных стациях, выявлены возбудители клещевого энцефалита (КЭ), омской геморрагической лихорадки (ОГЛ), иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ), клещевых риккетсио-зов (КР), гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ), моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ), коксиеллеза, туляремии (Т), бартонеллезов (Б), бабезиоза [1-8]. Установлено существование сочетанных природных очагов вирусных, бактериальных и протозой-ных инфекций и инвазий, а также различные формы их проявления у людей (моно- и микст-инфекции) [3, 4].

Наибольшее число молекулярно-генетических исследований снятых с людей переносчиков в Омской области направлено на выявление в них вируса КЭ и боррелий. В последние годы добавилось изучение клещей на наличие анаплазм и эрлихий. До начала наших исследований не проводили тестирование снятых с людей переносчиков на наличие ДНК возбудителей туляремии и бартонеллезов.

Цель работы - расширить спектр выявляемых патогенов в одном переносчике и оценить инфицированность клещей, снятых с людей на территории Омской области, одновременно возбудителями нескольких природно-очаговых инфекций (КЭ, ИКБ, КР, ГАЧ, МЭЧ, туляремии, бартонеллезов) с помощью молеку-лярно-биологических методов исследования.

Материалы и методы. Проведено комплексное исследование 510 экземпляров иксо-довых клещей, снятых с людей в различных районах Омской области и поступивших в Омский НИИ природно-очаговых инфекций в весенне-летние периоды 2014-2016 гг. Исследование проведено в полимеразной цепной реакции (ПЦР) на наличие ДНК/РНК возбудителей природно-очаговых инфекций (КЭ, ИКБ, КР, туляремии, бартонеллезов), 179 из них были также исследованы на наличие ДНК возбудителей ГАЧ и МЭЧ.

Выделение нуклеиновых кислот (НК) проводили из индивидуальных экземпляров клещей, отмытых [9] и гомогенизированных на аппарате TissueLyser LT («Qiagen», Германия), наборами «АмплиПрайм РИБО-преп» компании «ИнтерЛабСервис» (Россия) и набором реагентов «РеалБест экстракция 100» ЗАО «Вектор-Бест» (Россия).

Выявление НК возбудителей КЭ, ИКБ, ГАЧ, МЭЧ проводили методом ПЦР в режиме реального времени на амплификаторах

«CTX96» («Bio-Rad», США), «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) и «RotorGene 6GGG» («Qiagen», Германия), при этом использовали наборы: «АмплиСенс TBEV, B. Burgdorferi sl, A. phagocytophilum, E. chaffeensis/E. muris-FL», применяя предварительно для проведения обратной транскрипции комплект «Реверта-L» компании «ИнтерЛабСервис» и наборы «РеалБест ДНК Borrelia burgdorferi s.l./РНК ВКЭ» и «РеалБест ДНК Anaplasma phagocytophilum/Ehrlichia muris, Ehrlichia chaffeensis» ЗАО «Вектор-Бест».

Выявление ДНК риккетсий, франциселл и бартонелл проводили в ПЦР с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза в агарозном геле. Для обнаружения ДНК франциселл в 2G14-2G16 гг. и риккетсий в 2G16 г. использовали наборы реагентов «GenePak® DNA PCR test» производства ООО «Лаборатория Изоген» (Россия). Для выявления ДНК бартонелл и риккетсий (2G14-2G15) использовали комплект реагентов для амплификации «АмплиСенс® PCR» производства Центрального НИИ эпидемиологии (Россия). Для амплификации ДНК риккетсий использовали праймеры: RP877p (GGG GAC CTG CTC ACG GCG G), RP1258n (ATT GCA AAA AGT ACA GTG AAC A) и/или CS4G9d (CCT ATG GCT ATT ATG CTT GC), RP1258n, амплифи-цирующие фрагменты гена цитратсинтазы (gltA), и/или праймеры 19G.7G (ATG GCG AAT ATT TCT CCA AAA), 19G.1SG (GCA GCG ATA ATG CTG AGT A), 19G.7G1 (GTT CCG TTA ATG GCA GCA TCT), амплифицирую-щие фрагмент гена ompA, производства ООО «Агентство Химэксперт» (Россия). Для амплификации ДНК бартонелл использовали праймеры UrBarto1 (CTT CGT TTC TCT TTC TTC A) и UrBarto2 (CTT CTC TTC ACA ATT TCA AT), комплементарные участкам 16S-23S межгенной спейсерной области (ITS), специфичной для этой группы возбудителей, синтезированные ЗАО «Евроген» (Россия). Амплификацию фрагментов ДНК риккетсий, фран-циселл и бартонелл проводили в амлификато-рах «Терцик» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) и «Bio-Rad» (США). Электрофорез ПЦР-продуктов проводили в агарозном геле, приготовленном на трис-боратном буфере с бромистым этидием (комплект реагентов «ЭФ» производства ЦНИИЭ, Россия), на обо-

рудовании для электрофореза с системой гель-документирования «Bio-Rad» (США).

С целью идентификации риккетсий и бартонелл часть положительных ПЦР-продуктов была секвенирована с использованием тех же праймеров. Секвенсовая реакция проводилась с использованием реагентов BigDyeТеrmiпаtоr v. 1.1. Ready Reaction Сус1е Sequencing Kit (Applied Biosystems, США). Секвенирование очищенных фрагментов проводилось на генетическом анализаторе 3500xL, (Applied Biosystems, США). Сравнение установленных нуклеотидных последовательностей по степени гомологии с данными, представленными в базе данных GenBank, проводили с помощью поисковой системы BLAST.

Статистическая обработка полученных результатов исследования проводилась общепринятым методом: вычислялась доля и ошибка доли (P±m) [10] в программе Microsoft Excel 2010.

Результаты и обсуждение. Территория Омской области протянулась от хвойных лесов подзоны южной тайги на севере до степной зоны на юге Западной Сибири. Большая часть исследованных клещей (87,3 %) была получена из районов, расположенных в ландшафтной зоне (округе) лесостепи; 7,8 % - из округа южной тайги и округа мелколиственных лесов (зона подтайги); 4,9 % - из округа разнотравно-злаковых степей (степная зона).

Среди исследованных клещей определено 385 экземпляров имаго Dermacentor reticu-latus (Koch, 1844), 121 экземпляр Ixodes persulcatus (Schulze, 1930) и 4 нимфы (вид не определялся). В результате ПЦР-анализа установлена суммарная инфицированность клещей искомыми возбудителями в 64,6 % (табл. 1). Чаще всего выявляли ДНК F. tularensis: из 169 положительных проб 162 (95,9 %) были получены из клещей D. reticulatus, 7 (4,1 %) проб -из клещей I. persulcatus. ДНК возбудителей клещевых риккетсиозов выявлена в 117 пробах, из них D. reticulatus - 79 (67,5 %), I. persulcatus

- 37 (31,6 %), 1 проба из нимфы. ДНК возбудителей ИКБ выявлена в 98 клещах: I. persulcatus

- 72 (73,5 %), D. reticulatus - 26 (26,5 %). РНК вируса КЭ - в 18, из них D. reticulatus - 14 (77,8 %), I. persulcatus - 4 (22,2 %). ДНК бартонелл выявлена только в клещах D. reticulatus, а ДНК эрлихий и аннаплазм - только в клещах

sG

I. persulcatus. Нуклеиновые кислоты возбудителей искомых заболеваний в одном переносчике были выявлены как в моно-, так и в микст-вариантах (табл. 2). Генетический материал одновременно нескольких инфекционных агентов в различных сочетаниях был выявлен в 84 пробах (16,5 %), при этом ДНК/РНК двух возбудителей выявлены в 71 пробе (84,5 % от всех «микстов»), трех - в 12 (14,3 %), четырех - в 1 пробе (1,2 %). Среди «микстов» чаще всего встречались сочетания КР+Т (42,9 %), ИКБ+КР (20,2 %), ИКБ+КР+Т (8,3 %).

Часть образцов ДНК из представленной выборки за 2014 год, давших положительный результат в ПЦР на риккетсии и бартонеллы, была исследована методом секвенирования. Всего было идентифицировано 8 образцов ДНК, из них Rickettsia raoultii - 5, Candidatus Rickettsia tarasevichiae - 1, Rickettsia slovaca -1, Bartonella henselae - 1, причем в одной пробе были идентифицированы два патогена: R. raoultii + B. henselae. Генетический матери-

ал Candidatus R. tarasevichiae был выявлен в клеще I. persulcatus из Тарского района (зона подтайги), остальные идентифицированные пробы были получены из клещей D. reticulatus: R. raoultii - в клещах из Называ-евского и Нижнеомского (подзона лесостепи), Павлоградского и Русско-Полянского (степная зона), и Тарского районов; R. slovaca - из Нижнеомского района; R. raoultii + B. henselae - из Называевского района.

Результат секвенирования образцов ДНК, в том числе не вошедших в анализируемую выборку комплексного исследования переносчиков, но также выделенных из снятых с людей иксодовых клещей в г. Омске и Омской области в 2014-2015 гг., показал генетическое разнообразие риккетсий: из 42 проб подавляющее большинство идентифицировано как R. raoultii - 38 (90,5 %), Candidatus R. tarasevichiae - 2 (4,8 %), R. slovaca - 1 (2,4 %), Candidatus R. uralica - 1 (2,4 %); а 8 образцов ДНК бартонелл идентифицированы как B. henselae.

Таблица 1

Результаты комплексного исследования снятых с людей (жителей г. Омска и Омской области) иксодовых клещей в 2014-2016 гг. в ПЦР на наличие ДНК/РНК возбудителей КЭ, ИКБ, КР, ГАЧ, МЭЧ, туляремии, бартонеллезов

Наименование показателя 2014 2015 2016 Итого

Всего исследовано клещей 155 176 179 510

Всего

абс 79 116 134 329

%±т 51,0±4,0 65,9±3,6 74,9±3,3 64,5±2,1

КЭ

абс 10 2 6 18

%±т 6,5±2,0 1,1±0,8 3,4±1,4 3,5±0,8

ИКБ

абс 29 31 38 98

%±т 18,7±3,1 17,6±2,9 21,2± 3,1 19,2±1,8

КР

абс 32 2 83 117

%±т 20,7±3,3 1,1±0,8 46,4±3,7 22,9± 1,9

Туляремия абс 13 80 76 169

%±т 8,4±2,2 45,5±3,8 42,5±3,7 33,1±2,1

Бартонеллезы абс 12 6 0 18

%±т 7,7±2,2 3,4±1,4 0+2,1 3,5±0,8

ГАЧ

абс н/и н/и 3

%±т 1,7±1,0

МЭЧ

абс н/и н/и 4

%±т 2,2±1,1

Примечание: н/и - не исследовано.

Всем пострадавшим от укуса клеща с положительными результатами исследования переносчика даны рекомендации обратиться к врачу-инфекционисту для назначения экстренной профилактики специфическим иммуноглобулином (при выявлении РНК вируса КЭ) или экстренной антибиотикопрофилакти-ке (при выявлении ДНК боррелий, риккетсий, эрлихий, анаплазм).

Исследование снятых переносчиков на наличие ДНК франциселл, бартонелл и рик-кетсий в 2014-2015 гг. проводили ретроспективно, результаты пострадавшим от укуса клеща не выдавали и клиническое наблюдение за ними не проводили. Мы не располагаем также данными о приеме пострадавшими антибиотиков с профилактической целью, при

этом роста заболеваемости туляремией и клещевым сыпным тифом (клещевым риккетсио-зом) в Омской области в эти годы не отмечено. Причин, объясняющих этот факт, может быть несколько. Во-первых, не все снятые переносчики имели длительный контакт с пострадавшим (или вовсе не успели присосаться), и заражения не произошло. Во-вторых, из известных видов риккетсий в Омской области преобладает Я. гаоикп, которой свойственна низкая вирулентность [11]. Кроме того, возможно, что использованные нами наборы реагентов для обнаружения ДНК франциселл и риккетсий выявляют не только ДНК возбудителей туляремии и клещевых риккетсиозов, но и ДНК апатогенных близкородственных микроорганизмов [12].

Таблица 2

Результаты выявления нуклеиновых кислот возбудителей инфекций в одном переносчике, распределение положительных проб по видам клещей

Возбудитель/сочетание нескольких возбудителей в одном переносчике (инфекция) Всего исследовано клещей Всего положительных проб (клещей) Распределение по видам клещей

Dermacentor гейсиШш Ixodes persulcatus Нимфа

абс %±m

КЭ 510 11 2,2±0,6 10 1 -

ИКБ 510 61 12,0±1,4 11 50 -

КР 510 45 8,8±1,3 30 14 1

Т 510 117 22,9±1,9 113 4 -

Б 510 10 2,0±0,6 10 - -

МЭЧ 179 0 0+2,1 - - -

ГАЧ 179 1 0,6±0,6 - 1 -

КЭ+ИКБ 510 3 0,6±0,3 3 - -

КЭ+КР 510 1 0,2±0,2 1 - -

ИКБ+КР 510 17 3,3±0,8 2 15 -

ИКБ+Т 510 5 1,0±0,4 4 1 -

КР+Б 510 4 0,8±0,4 4 - -

КР+Т 510 36 7,1±1,1 34 1 1

Т+Б 510 3 0,6±0,3 3 - -

КР+МЭЧ 179 1 0,6±0,6 - 1 -

КЭ+ГАЧ 179 1 0,6±0,6 - 1 -

КР+ИКБ+Т 510 7 1,4±0,5 6 1 -

КЭ+ИКБ+КР 510 1 0,2±0,2 1 - -

КР+Т+Б 510 1 0,2±0,2 1 -

ИКБ+МЭЧ+КР 179 3 1,7±1,0 - 3 -

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

КЭ+ИКБ+ГАЧ+КР 179 1 0,6±0,6 - 1 -

Всего 329 233 94 2

Исследование снятых с людей иксодо-вых клещей в 2016 г. проводили, руководствуясь санитарно-эпидемиологическими правилами СП 3.1.3310-15 «Профилактика инфекций, передающихся иксодовыми клещами» и

Постановлением главного государственного санитарного врача по Омской области № 60 от 22.03.2016 г. «О совершенствовании мероприятий по выявлению, диагностике и профилактике инфекций, передаваемых клещами в

Омской области в сезон 2016 года». Обратившимся по поводу присасывания клеща предлагалось комплексное исследование, включающее изучение переносчика на наличие в нем возбудителей пяти заболеваний (КЭ, ИКБ, ГАЧ, МЭЧ, КР). Дополнительно, в рамках научно-исследовательской работы, проводили исследование клещей на наличие возбудителей туляремии и бартонеллезов.

В задачи данного исследования не входило клиническое наблюдение за пострадавшими от укуса клеща. Однако в рамках оказания диагностических услуг лечебным учреждениям нами были получены положительные результаты серологических и молекулярно-генетических исследований материала от больных. В одном случае после присасывания клеща, в котором выявлены НК вируса КЭ и возбудителя туляремии, у пострадавшего диагностирован менингит, несмотря на проведенные профилактические мероприятия (введение иммуноглобулина и прием доксициклина). В сыворотке крови выявлены в ИФА иммуноглобулины класса М и G к вирусу КЭ,

в РНГА - антитела к возбудителю туляремии. В другом случае после присасывания клеща у больного выявлены антитела в РСК с антигеном R. sibirica в диагностическом титре.

Заключение. Комплексное молекулярно-генетическое исследование показало микст-инфицирование снятых с людей иксодовых клещей на территории Омской области возбудителями природно-очаговых инфекций (КЭ, ИКБ, КР, ГАЧ, МЭЧ, туляремии, бартонеллезов) в 16,5 %, что еще раз подтверждает существование и активное функционирование соче-танных природных очагов и их потенциальную опасность для человека. Генетический материал одновременно двух возбудителей выявлен в 84,5 % от всех «микстов», трех - в 14,3 %, четырех - 1,2 %. Среди «микстов» чаще всего встречались сочетания КР+Т (42,9 %), ИКБ+КР (20,2 %), ИКБ+КР+Т (8,3 %).

Требуется дальнейшее изучение микст-инфицирования переносчиков, межвидовых взаимодействий патогенов в них, возможность передачи комплекса возбудителей человеку и особенности клинических проявлений.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИИ СПИСОК

REFERENCES

1. Рудаков Н.В., Самойленко И.Е., Березкина Г.В., Коломеец А.Н., Танцев А.К., Шпынов С.Н., Мурзина О.П., Хорошавина Л.В., Белов В.Н. Первые результаты изучения бартонеллезов в Омской области // Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения: материалы VII межрегион. научно-практ. конф. с между-нар. участием. Омск, 2007. Том 1. С. 340-344.

2. Рудаков Н.В., Красиков А.П., Наконечный О.И., Танцев А.К., Березкина Г.В. Дикие грызуны и клещи как резервуар возбудителя коксиеллеза в Омской области // Матер. VIII межрегион. науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвящ. 70-летию мед.-проф. ф-та ОГМА. Омск, 2008. Т. 1. С. 365-368.

3. Рудакова С.А., Коломеец А.Н., Самойленко И.Е., Кузьминов А.М., Рудаков Н.В. Экспресс-индикация трансмиссивных патогенов как основа дифференцированного подхода к профилактике инфекций, передающихся иксодовыми клещами // Сибирский научный медицинский журнал. 2007. Т. 27. № 4. С. 116-119.

4. Рудаков Н.В., Рудакова С.А. Лабораторная диагностика трансмиссивных инфекций человека в сочетанных природных очагах // Клиническая лабораторная диагностика.2015. Т. 60. № 5. С. 51-53.

5. Коломеец А.Н., Абрамова Н.В., Шпынов С.Н., Рудаков Н.В., Арсеньева И.В. Выявление про-теобактерий (бартонелл и риккетсий), спирохет (бор-релий) и вируса клещевого энцефалита у иксодовых клещей, мелких млекопитающих, в клиническом материале пациентов // Актуальные проблемы сохранения здоровья населения Сибири: матер. 7 межрег.

1. Rudakov N.V., Samoylenko I.E., Berezkina G.V., Kolomeets A.N., Tantsev A.K., Shpynov S.N., Murzina O.P., Horoshavina L.V., Belov V.N. Pervye rezul'taty izucheniya bartonellezov v Omskoy oblasti // Aktual'nye problemy obespecheniya sanitarno-epidemiologicheskogo blagopoluchiya naseleniya: mate-rialy VII mezhregion. nauchno-prakt. konf. s mezhdu-nar. uchastiem. Omsk, 2007. Tom 1. S. 340-344.

2. Rudakov N.V., Krasikov A.P., Nakonechny

0.1., Tantsev A.K., Berezkina G.V. Dikie gryzuny i kleschi kak rezervuar vozbuditelya koksielleza v Om-skoy oblasti // Mater. VIII mezhregion. nauch.-prakt. konf. s mezhdunar. uchastiem, posvyasch. 70-letiyu med.-prof. f-ta OGMA. Omsk, 2008. T. 1. S. 365-368.

3. Rudakova S.A., Kolomeets A.N., Samoylenko

1.E., Kuz'minov A.M., Rudakov N.V. Ekspress-indikatsiya transmissivnyh patogenov kak osnova differ-entsirovannogo podhoda k profilaktike infektsiy, peredayuschihsya iksodovymi kleschami // Sibirskiy nauchny meditsinskiy zhurnal. 2007. T. 27. № 4. S. 116-119.

4. Rudakov N.V., Rudakova S.A. Laboratornaya diagnostika transmissivnyh infektsiy cheloveka v so-chetannyh prirodnyh ochagah // Klinicheskaya labo-ratornaya diagnostika.2015. T. 60. № 5. S. 51-53.

5. Kolomeets A.N., Abramova N.V., Shpynov S.N., Rudakov N.V., Arsen'eva I.V. Vyyavlenie pro-teobakteri (bartonell i rikketsi), spirohet (borreli) i virusa kleschevogo enctsfalita u iksodovyh kleschey, melkih mlekopitayuschih, v klinicheskom materiale patsientov // Aktual'nye problemy sohraneniya zdorov'ya naseleniya Sibiri: mater. 7 mezhreg. nauchno-prakt. konf. s mezhdu-

научно-практ. конф. с междунар. участием, посвящ. 70-летию мед.-проф. ф-та ОмГМА. Т. 1. Омск, 2008. С. 228-231.

6. Бондаренко Е.И., Тимофеев Д.И., Фоменко Н.В., Якименко В.В., Танцев А.К., Рар В.А. Комплексный подход к выявлению возбудителей инфекций, переносимых клещами, с помощью ПЦР-анализа с детекцией в режиме реального времени // Сибирский медицинский журнал, 2012. № 4. С. 33-36.

7. Рар В.А., Епихина Т.И., Тикунова Н.В., Бондаренко Е.И., Иванов М.К., Якименко В.В., Малькова М.Г., Танцев А.К. Выявление ДНК переносимых иксодовыми клещами патогенов в крови мелких млекопитающих из лесной зоны среднего прииртышья (Омская область, Западная Сибирь). Паразитология. 2014. Т. 48, № 1. С. 37-53.

8. Дунаев Н.Б. Смешанная инфекция туляремии и Омской геморрагической лихорадки в эксперименте на водяных полёвках // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1976. № 8. С. 118-122.

9. Якименко В.В., Малькова М.Г., Шпынов С.Н. Иксодовые клещи Западной Сибири: фауна, экология, основные методы исследования // Омск: ООО ИЦ «Омский научный вестник», 2013. 240 с.

10. Савилов Е.Д., Мамонтова Л.М., Астафьев

B.А., Жданова С.Н. Применение статистических методов в эпидемиологическом анализе // М.: МЕД-пресс-информ, 2004. 111 с.

11. P. Parola, C. Rovery, J. M. Rolain, P. Brou-qui, B. Davoust, and D. Raoult Rickettsia slovaca and R. raultii in Tick-born Rickettsioses // Emerging Infectious Diseases /www.cdc.gov/eid/ Vol. 15, No. 7, July 2009. P. 1105-1108.

12. Осина Н.А., Сеничкина А.М., Бугоркова Т.В., Щербакова С.А. Разработка амплификационных тест-систем для выявления возбудителя туляремии // Проблемы особо опасных инфекций. 2015. Вып. 2.

C. 54-57.

Березкина Галина Владимировна - канд. мед. наук, заведующий лабораторией зоонозных инфекций отдела природно-очаговых бактериальных зоонозов (ПОБЗ) Омского НИИ природно-очаговых инфекций (ОНИИПИ), ассистент Омского государственного медицинского университета (ОмГМУ).

Штрек Сергей Владимирович - младший научный сотрудник лаборатории зоонозных инфекций отдела природно-очаговых бактериальных зооно-зов ОНИИПИ, аспирант ОмГМУ.

Зеликман Светлана Юрьевна - младший научный сотрудник лаборатории зоонозных инфекций отдела ПОБЗ ОНИИПИ, ассистент ОмГМУ.

Боброва Оксана Алексеевна - младший научный сотрудник лаборатории зоонозных инфекций отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Околелова Наталья Александровна -младший научный сотрудник лаборатории молекулярной диагностики отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Коломеец Анна Николаевна - канд. мед. наук, врач-бактериолог ОНИИПИ.

Самойленко Ирина Евгеньевна - канд. мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории зо-онозных инфекций отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

nar. uchastiem, posvyasch. 70-letiyu med.-prof. f-ta OmGMA. T. 1. Omsk, 2008. S. 228-231.

6. Bondarenko E.I., Timofeev D.I., Fomenko N.V., Yakimenko V.V., Tantsev A.K., Rar V.A. Kom-pleksny podhod k vyyavleniyu vozbuditeley infektsiy, perenosimyh kleschami, s pomosch'yu PCR-analiza s de-tektsiey v rezhime real'nogo vremeni // Sibirskiy med-itsinskiy zhurnal, 2012. № 4. S. 33-36.

7. Rar V.A., Epihina T.I., Tikunova N.V., Bondarenko E.I., Ivanov M.K., Yakimenko V.V., Mal'kova M.G., Tantsev A.K. Vyyavlenie DNK pereno-simyh iksodovymi kleschami patogenov v krovi melkih mlekopitayuschih iz lesnoy zony srednego priirtysh'ya (Omskaya oblast', Zapadnaya Sibir'). Parazitologiya. 2014. T. 48, № 1. S. 37-53.

8. Dunaev N.B. Smeshannaya infektsiya tulyare-mii i Omskoy gemorragicheskoy lihoradki v ekspe-rimente na vodyanyh polyovkah // Jurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 1976. № 8. S. 118-122.

9. Yakimenko V.V., Mal'kova M.G., Shpynov S.N. Iksodovye kleschi Zapadnoy Sibiri: fauna, eko-logiya, osnovnye metody issledovaniya // Omsk: OOO IC «Omskiy nauchny vestnik», 2013. 240 s.

10. Savilov E.D., Mamontova L.M., Astafev V.A., Zhdanova S.N. Primenenie statisticheskih metodov v epidemiologicheskom analize // M.: MEDpress-inform, 2004. 111 s.

11. P. Parola, C. Rovery, J. M. Rolain, P. Brou-qui, B. Davoust, and D. Raoult Rickettsia slovaca and R. raultii in Tick-born Rickettsioses // Emerging Infectious Diseases /www.cdc.gov/eid/ Vol. 15, No. 7, July 2009. P. 1105-1108.

12. Osina N.A., Senichkina A.M., Bugorkova T.V., Scherbakova S.A. Razrabotka amplifikatsionnyh test-sistem dlya vyyavleniya vozbuditelya tulyaremii // Problemy osobo opasnyh infektsiy. 2015. Vyp. 2. S. 54-57.

Berezkina Galina Vladimirovna - Cand. Sc. {Medicine},Head of (the) Laboratory, Head of (the) Laboratory of Zoonotic Infections at the department of natural focal bacterial zoonoz (NFBZ) of Omsk Scientific Research Institute of Feral Herd Infections (SRIFHI), Assistant of the Omsk State Medical University (OmSMU)

Shtrek Sergey Vladimirovich - Junior Researcher of the Laboratory of Zoonotic infections at the Department of natural focus bacterial zoonoz of SRIFHI, Postgraduate of OmSMU.

Zelikman Svetlana Yur'evna - Junior Researcher of the Laboratory of Zoonotic infections at the Department of natural focus bacterial zoonoz of SRIFHI, Assistant of OmSMU.

Bobrova Oksana Alekseevna Junior Researcher of the Laboratory of Zoonotic infections at the Department of natural focus bacterial zoonoz of SRIFHI.

Okolelova Natal'ya Aleksandrovna - Junior Researcher of the Laboratory of Molecular Diagnostics at the Department of SRFHI

Kolomeets Anna Nikolaevna - Cand. Sc. {Medicine}, Bacteriologist of SRIFHI.

Samoylenko Irina Evgen'yevna - Cand. Sc. {Medicine}, Leading Researcher of the Laboratory of Zoonotic Infections at the Department of Natural Focus Bacterial Zoonoz of SRIFHI

Рудакова Светлана Анатольевна - д-р мед. наук, заведующий отделом ПОБЗ, главный научный сотрудник группы клещевых боррелиозов отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Петрова Юлия Александровна - младший научный сотрудник группы клещевых боррелиозов отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Любенко Анастасия Федоровна - канд. ве-терин. наук, старший научный сотрудник группы клещевых боррелиозов отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Кумпан Людмила Валерьевна - канд. мед. наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМУ, старший научный сотрудник лаборатории зоонозных инфекций отдела ПОБЗ ОНИИПИ.

Rudakova Svetlana Anatol'yevna - Doctor of Medicine, Head of the Department of NFBZ, Chief Researcher of the Tick-Borne Borreliosis Group at the department of SRIFHI.

Petrova Yulia Aleksandrovna - Junior Researcher of The Tick-Borne Borreliosis Group at the department of NFBZ, SRIFHI.

Lyubenko Anastasia Fiodorovna - Candidate Sc. {Veterinary}, Senior Research associate of the tickborne borreliosis group at the department of NFBZ, SRIFHI.

Kumpan Lyudmila Valer'yevna - Cand. Sc. {Medicine}, Associate Professor of OMGMU, Senior Researcher Associate of the Laboratory of Zoonotic of Infections at the Department of POBZ, SRIFHI.

УДК 579.61 ГРНТИ 34.25.29

ВЫЯВЛЕНИЕ ДНК RICKETTSIA RAOULTII И RICKETTSIA SIBIRICA В КРОВИ И ЛИКВОРЕ ПАЦИЕНТОВ В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

Я.П. Иголкина, В.А. Рар, Т.И. Епихина, А.Ю. Тикунов, Е. И. Краснова1'2, В.В. Проворова12, Н.И. Хохлова12, М.В. Савельева12, Н.В. Тикунова

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН

Россия, 630090, г. Новосибирск, пр. Ак. Лаврентьева, 8 1ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Российской Федерации, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52 2ГБУЗ Новосибирской области «Городская инфекционная клиническая больница № 1» Россия, 630090, г. Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8

Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта РНФ № 15-14-20020

Методом двухраундовой ПЦР было проанализировано255образцов крови и 57 образцов ликвора от пациентов, госпитализированных в городскую инфекционную клиническую больницу № 1 города Новосибирска с признаками инфекционных заболеваний после присасывания клещей в период с апреля по август 2016 г. В образцах биоматериалов десяти пациентов была обнаружена ДНК риккетсий. Определенные нуклеотидные последовательности фрагментов гена gltA в образцах крови семи пациентов соответствовали последовательности Rickettsia sibirica, а в двух образцах крови и в одном образце ликвора - последовательности Rickettsia raoultii генотипа DnS14. Это первый случай выявления ДНК R. raoultii в образцах биоматериалов пациентов в Российской Федерации.

Ключевые слова: риккетсии, ликвор, R raoultii, ДНК.

REVEALING OF RICKETTSIA RAOULTII AND RICKETTSIA SIBIRICA DNA IN BLOOD AND CEREBROSPINAL FLUID IN THE PATIENTS OF WESTERN SIBERIA

INTEGRATED DETECTION OF NATURAL FOCAL INFECTIONS AGENTS IN THE REMOVAL VECTORS FROM PEOPLE IN OMSK REGION

Текст научной работы на тему «Комплексное выявление возбудителей природно-очаговых инфекций методом ПЦР в снятых с людей переносчикахв Омской области»