CC BY
18
УДК 615.375:612.017.1
КОМПЛЕКСНОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ СК И БАЛИЗ-2 ДЛЯ ИММУНОКОРРЕКЦИИ ПОСТСТРЕССОВЫХ НАРУШЕНИЙ
© 2007 г. А.Я. Шурыгин, Э.И. Злищева, В.П. Крылов, Т.В. Андросова, Л.В. Шурыгина, Л.И. Злищева
Comparative analysis of SK's, Balysum-2 and complex usage of SK and Balysum-2 effect on functional condition of neutrophilic granulocytes in peripheral blood of experimentally stressed mice has been carried out. It was established that complex usage of immu-nomodulatory SK medication and balysum-2 medical product causes a strongly pronounced stress protective effect, rather than when SK and balysum-2 are used separately.
В обеспечении антибактериальной защиты организма важная роль принадлежит фагоцитам - циркулирующим в крови гранулоцитам (микрофагоцитам), и тканевым макрофагам [1]. В настоящей работе исследовано влияние комплексного применения имму-номодулирующего препарата полипептидной природы СК (Стимулятор Кубанский) и лекарственного препарата бализ-2 на функциональное состояние ней-трофильных гранулоцитов в периферической крови экспериментальных животных. При оценке стресс-протекторных свойств СК и бализа-2, а также их комплексного применения учитывали способность этих препаратов стимулировать лейкопоэз, корригировать функциональную гипертрофию надпочечников, центральных лимфоидных органов.
Ранее нами было установлено, что СК оказывает зависимое от дозы стимулирующее действие на регенерацию кроветворения, стимулирует гуморальный иммунитет, естественную резистентность организма, повышает специфические и неспецифические функции Т-клеток в организме [2, 3]. Антистрессорное и антиок-сидантное свойства бализа-2 обусловлены содержани-
ем в нем коменовой кислоты, являющейся его основным компонентом [4].
Нами проведено сравнительное исследование действия СК, бализа-2 и комплексного применения СК и бализа-2 на функциональное состояние (фагоцитарную и метаболическую активность) нейтрофиль-ных гранулоцитов в периферической крови мышей с экспериментальным стрессорным воздействием.
Методы исследования
Нелинейных мышей-самцов массой 23-25 г делили на 6 групп по 7-10 животных в каждой: 1-я - ин-тактные; 2-я - стресс-контроль; 3-я - стрессирован-ные и получавшие СК в дозе 0,2 мкг в 0,2 мл физиологического раствора в/б за 24 часа до стрессирова-ния; 4-я - в течение 3 дней животные ежедневно получали per os по ОД мл препарат бализ-2; 5-я - животным в течение 3 дней per os вводили бализ-2 и за 24 ч до стрессирования СК в вышеуказанных дозах. В исследованиях использован коммерческий лекарственный препарат бализ-2, разрешенный Минздравом РФ для применения в клинической практике.
Стрессорное воздействие осуществляли методом иммобилизации, путем подвешивания мышей за шейную складку в течение 3 ч. Глубину стрессорного воздействия оценивали по лейкограмме крови, изменению массы иммуннокомпетентных органов (тимус, селезенка) и надпочечников. Для оценки фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов их инкубировали с суточной культурой Staphylococcus aureus 209-Р при 37 °С. Активность фагоцитоза оценивали по показателям: 1 - процент активных нейтро-филов (% клеток, вступивших в фагоцитоз от общего их числа); 2 - поглотительная способность (фагоцитарное число - среднее число бактерий, находящихся внутриклеточно, т.е. частное от деления общего числа поглощенных бактерий на число клеток, вступивших в фагоцитоз). Оба показателя рассчитывали на мазках после 30 и 120-минутной (завершенный фагоцитоз) инкубации; 3 - индекс бактерицидности нейтрофилов (ИБН). ИБН= Чу/Чп • 100, где Чу - число убитых внутри фагоцитов микробов; Чп - общее число поглощенных фагоцитами микробов [5]. Кислородзависимый метаболизм нейтрофилов определяли по восстановлению нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [6]. Достоверность статистических различий в опыте и контроле оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.
Результаты исследования
Влияние иммобилизационного стресса на массу иммуннокомпетентных органов и надпочечники, гематологические показатели и функциональная активность нейтрофилов представлены в таблице.
После 3-часовой иммобилизации мышей состояние
вышеуказанных показателей, представленных в таблице, можно характеризовать как стресс умеренной интенсивности. На фоне повышения массы надпочечников достоверно уменьшается масса тимуса, селезенки, значительно увеличивается в периферической крови число нейтрофильных гранулоцитов, отмечается лимфопения. Усиливается после стресса кислородный метаболизм нейтрофилов. При этом отмечается статистически значимое увеличение числа нейтрофилов, способных восстанавливать НСТ. Однако повышенный уровень кислородного метаболизма не способствовал обеспечению высокого потенциала, микробоцидности нейтрофильных гранулоцитов у стрессированных мышей. Выявлено угнетение фагоцитарной активности ней-трофилов. При этом статистически достоверно снижается доля активных нейтрофилов, их поглотительная способность и индекс бактерицидности. Значительно снижены у стрессированных животных и показатели завершенности фагоцитоза (аналогичные показатели после 120-минутной инкубации).
Введение СК за сутки до стрессирования животных способствовало восстановлению массы тимуса, стимулировало лейкопоэз и практически не оказало влияния на массу селезенки и надпочечников. Увеличилась у этих животных в сравнении со стресс-контролем фагоцитарная активность. При этом достоверно увеличились поглотительная способность, индекс бактерицидности и завершенность фагоцитоза. Показатели завершенности фагоцитоза достоверно превысили аналогичные показатели не только у стрессированных мышей, но и у интактных. У животных, получавших СК, нормализовался процесс окислительного метаболизма, процент НСТ-позитивных
Сравнительное исследование стресс- протекторного действия комплексного применения СК и бализа-2 (М±т)
Параметры Группа животных
1-я 2-я 3-я 4-я 5-я
Относительная масса
органов, мг %:
тимус 0,23±0,025 0,15±0,005* 0,18±0,014** 0,25±0,032** 0,18±0,014
селезенка 0,41±0,036 0,37±0,022 0,34±0,016 0,42±0,015 0,37±0,018
надпочечники 0,022±0,001 0,029±0,001* 0,028±0,002 0,036±0,002** 0,025±0,001*
нейтрофилы, % 30,54±1,26 60,94±3,96* 46,0±3,84*** 51,25±0,92*** 38,5±1,27***
лимфоциты, % 66,1±2,0 37,83±3,85* 53,56±3,12 48,08±0,73*** 59,05±1,98***
Фагоцитарная
активность нейтрофилов:
активные нейтрофилы, % 66,8±6,33 55,1±7,60* 60,86±5,75 78,5±5,62 81,4±2,58
поглотительная способность, % 9,9±0,59 7,75±0,35* 9,68±0,08** 10,7±1,07** 10,5±1,72
индекс
бактерицидности, ед. 19,96±2,19 10,47±1,11* 35,34±2,28*** 34,31±1,88*** 39,04±3,52***
Показатели завершенности
фагоцитоза:
активные нейтрофилы, % 84,4±1,63 73,0±1,62* 92,5±1,04*** 77,16±6,23 91,25±1,93***
поглотительная способность, % 12,32±1,26 9,2±0,33* 17,22±1,30*** 15,2±3,31** 14,96±0,94**
индекс
бактерицидности, ед. 36,13±1,04 23,62±2,89* 42,37±2,23*** 49,48±4,59*** 55,39±1,71***
НСТ-позитивные нейтрофилы, % 4,39±0,47 12,67±0,60* 5,78±1,34** 8,49±0,67*** 20,58±1,50***
Примечание. р < 0,05: * - по сравнению с интактным контролем, ** - по сравнению со стресс-контролем.
нейтрофилов практически не отличается от этого показателя у интактных животных.
При дострессовом (в течение трех дней) введении лекарственного препарата бализ-2 восстанавливается масса центральных иммунных органов (тимуса и селезенки) до уровня у интактных животных, усиливается гипертрофия надпочечников. Бализ-2 оказывает довольно слабое стимулирующее действие на лейкопоэз, в периферической крови отмечаются нейрофилез и лимфопения. Число НСТ-позитивных нейтрофилов достоверно ниже, чем у стресс-контроля, в то же время почти в 2 раза превосходит число таковых у интактных животных. Повышается у этих животных и фагоцитарная активность: увеличиваются процент активных нейтрофилов, их поглотительная способность, бактерицидная активность и завершенность фагоцитоза.
Комплексное применение бализа-2 и СК способствовало нормализации лейкопоэза, корригировало массу надпочечников. Усиленно стимулировало кислоро-дозависимый метаболизм нейтрофилов, при этом число НСТ-позитивных нейтрофилов почти вдвое превысило их число в стресс-контроле. Более высокие, чем у стрессированных животных и получавших СК, отмечались показатели фагоцитоза. Увеличился процент активных нейтрофилов и их бактерицидная активность. После 120-минутной инкубации такие показатели завершенности фагоцитоза, как процент активных нейтрофилов и их поглотительная способность, остались на уровне аналогичных показателей у стрес-сированных и получавших СК мышей, в то время как
бактерицидная активность превысила аналогичный показатель у вышеназванных животных.
Таким образом, установлено, что комплексное применение иммуномодулирующего препарата СК и лекарственного препарата бализ-2 оказывает более выраженное стресс-протекторное действие, чем отдельно взятые СК и бализ-2. Комплексное применение этих препаратов способствует нормализации лей-копоэза, корригирует гипертрофию надпочечников, увеличивает метаболическую активность кислородо-зависимых процессов нейтрофильных гранулоцитов, способствует повышению их фагоцитарной активности. При этом повышение потенциала бактерицидно-сти под влиянием СК и бализа-2 обусловлено не только усилением индукции кислородного метаболизма, но и, возможно, опосредованным действием СК на систему комплемента, на что указывают ранее полученные нами данные [3, 7].
Литература
1. Петров Р.В. Иммунология. М., 1982.
2. Шурыгин А.Я. и др. //Бюл. эксперим. биол. 1995. № 11. С. 511-514.
3. Шурыгин А.Я. и др. Использование молочнокислых микроорганизмов и продуктов их метаболизма. Краснодар, 1996.
4. Шурыгин А.Я. Препарат бализ. Краснодар, 2002.
5. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред.
B.В. Меньшикова. М., 1987.
6. Ваксман М.Е., Маянский А.Н. //Казан, мед. журн. 1977. Т. 58. №5. С. 99-100.
7. Злищева Э.И. и др. // Бюл. эксперим. биол. 1993. № 3.
C. 278-281.
Кубанский государственный университет,
Кубанская научно-производственная лаборатория физиологически активных веществ,
г. Краснодар_5 декабря 2006 г.
