CC BY
25
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
ботана кандидатная рекомбинантная живая коклюшная вакцина (рЖКВ) для интраназального применения. Ранее нами было показано, что количество и сроки регистрации специфических антител в крови обезьян после иммунизации рЖКВ и экспериментального инфицирования вирулентными бактериями B. pertussis475 не коррелировали с показателями защитного противококлюш-ного иммунитета. Вероятно, именно клеточно-опосре-дованный иммунный ответ необходим для обеспечения длительной защиты от возбудителя коклюша и быстрого бустер-эффекта при контакте с возбудителем. Нами была изучена спонтанная и индуцированная продукция цито-кинов клетками крови обезьян, как одна из достоверных характеристик местной защитной реакции и иммуномо-дулирующего эффекта от инвазии бактерий B. pertussis. Поскольку коклюш — это антропонозное заболевание, обезьяны представляются наиболее адекватной моделью. Иммунизация рЖКВ и экспериментальное инфицирование вирулентными бактериями B. pertussis475 обезьян вида макак-резус сопровождались однотипной цито-кин-секреторной пролиферацией клеточного иммунного ответа по типу Th1/Th17 с формированием защитной реакции, препятствующей размножению возбудителя в носоглотке с ускоренными темпами его элиминации. Инфекционная провокация у иммунизированных обезьян рЖКВ сопровождалось выраженным бустерным эффектом. Сравнительная характеристика иммуномо-дулирующего действия рЖКВ и вирулентных бактерий B. pertussis475подтвердила общие механизмы формирования долгосрочного защитного иммунитета.
КОМБИНИРОВАННАЯ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ, АНТИОКСИДАНТНАЯ И МЕМБРАНОПРОТЕКТОРНАЯ ТЕРАПИЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ОСТРОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПАНКРЕАТИТА
Микаелян П.К., Локтионов А.Л., Караулов А.В., Назаренко П.М., Тарасов О.Н.
Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия
Введение. Экспериментальное изучение заболеваний и разработка методов лечения являются способом подтверждения существующих и предполагаемых гипотез и механизмов развития болезни, помогает обозначить точки приложения для эффективного воздействия фармакологической коррекции установленных нарушений в системах регуляции. Достаточно сложной в клиническом плане проблемой является острый панкреатит, имеющий несколько форм с большим количеством осложнений.
Цель и задачи. На экспериментальных моделях различных форм острого панкреатита оценить характер и степень иммунных нарушений, выявить корригирующие эффекты сочетания полиоксидоний, эмоксипин и эссенциале Н.
Материалы и методы. Эксперименты проведены на 118 здоровых половозрелых крысах Вистар, массой 150200 г, с соблюдением всех правил работы с лабораторными животными. Моделирование острой отечной формы панкреатита (ООП) осуществляли путем дозированного криогенного воздействия жидкого азота на одну из долей поджелудочной железы. Острый деструктивный панкреа-
тит (ОДП) воспроизводили перевязкой протоков поджелудочной железы и трехкратной через 60 мин стимуляцией прозерином в дозе 0,2 мг/кг. Животных с ООП и ОДП делили на 2 равные группы: без введения препаратов и с применением комбинации полиоксидония (0,03 мг внутримышечно через 24 часа, № 10), эмоксипина (1 мл 1% раствора разводили в 20 мл 0,9% раствора натрия хлорида; 0,5 мл готового раствора вводили внутримышечно, через 24 часа, № 10) и эссенциале Н (0,03 мл внутрибрюшин-но через 24 часа, № 10). В качестве контроля использовали 15 животных без внешних признаков заболеваний. Формирование гуморального иммунного ответа (ГИО) оценивали на пятые сутки после иммунизации эритроцитами барана, подсчитывая в селезенке число иммунных антителообразующих клеток (АОК). Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) определяли по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов (РМ) и по разнице количества в них кариоцитов (РК) после введения разрешающей дозы антигена — эритроцитов барана. Фагоцитарная активность нейтрофилов циркулирующей крови оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ). Кислородзависимую метаболическую активность полиморфно-ядерных лейкоцитов оценивали по НСТ-тестам спонтанному (НСТ-сп.) и стимулированному опсонизированным и неопсонизи-рованным зимозаном (НСТ-ст. н/з, НСТ-ст. о/з), коэффициентам активации на опсонизированный и неопсо-низированный зимозан и коэффициенту опсонизации (Кан, КАо, КО).
Результаты. В группе животных с ООП установлена супрессия формирования ГИО и ГЗТ (снижение всех исследованных показателей), снижение показателей фагоцитоза с одновременным повышением метаболической активности нейтрофилов периферической крови. У экспериментальных животных с ОДП выявлено более выраженное, по сравнению с отечной формой, снижение количества иммунных АОК в селезенке, РМ и РК регионарного и контралатерального лимфатических узлов, фагоцитирующих кариоцитов и поглощенных ими частиц, повышение показателей, характеризующих кислородза-висимую активность нейтрофилов на фоне снижения резервов гранулоцитов (КАн, КАо, КО). Применение при ООП комбинации полиоксидония, эмоксипина и эссен-циале Н нормализовало формирование ГИО, ГЗТ и фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и корригировало, но не до параметров контроля, их метаболическую активность. В условиях ОДП введение комбинации полиоксидония, эмоксипина и эссенциале Н нормализовало развитие ГИО, показатели фагоцитоза (ФП, ФЧ и ИАФ), корригировало, но не до уровня нормы, формирование ГЗТ (РК и РМ) и показатели кисло-родзависимой активности нейтрофилов циркулирующей крови.
Заключение. Таким образом, при отечной и деструктивной формах острого панкреатита развиваются различные по степени выраженности нарушения адаптивного и врожденного иммунитета, что, вероятно, связано с масштабом поражения тканей железы. Комбинированная иммуномодулирующая, мембранопротекторная и антиоксидантная терапия оказалась эффективной при деструктивной, в большей степени при отечной, форме
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
острого панкреатита, что обосновывает ее применение в клинике.
ЦИТОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ NK-КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В ОТНОШЕНИИ КЛЕТОК ТРОФОБЛАСТА
Михайлова В.А., Баженов Д.О., Хохлова Е.В., Сельков С.А., Соколов Д.И.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург, Россия
ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. NK—клетки, присутствующие в эндометрии матки, играют важную роль в процессе имплантации и в дальнейшем развитии плаценты. В течение про-лиферативной фазы менструального цикла NK-клетки матки представляют собой небольшую популяцию клеток, однако их количество в эндометрии значительно возрастает в секреторную фазу цикла. После имплантации зародыша в ходе децидуализации в эндометрии матки появляется большое количество децидуальных NK-клеток, составляющих до 70% всех лейкоцитов, присутствующих в децидуальной оболочке и примерно 30% всех клеток децидуальной оболочки. Данные литературы указывают на возможность формирования популяции NK-клеток децидуальной оболочки из NK-клеток периферической крови. В настоящее время малоизученным остается вопрос об изменении цитотоксической функции NK-клеток при контакте с клетками трофобласта при беременности. Для определения цитотоксической активности NK-клеток наиболее распространенным является метод, в котором оценивается гибель клеток-мишеней перевиваемой линии К562 после культивирования с NK-клетками. Данная система in vitro не учитывает особенностей межклеточных взаимодействий, которые могут происходить в децидуальной оболочке и плаценте, что не позволяет полноценно оценить вклад NK-клеток в развитие беременности. Поэтому целью настоящей работы была разработка и апробация нового метода оценки ци-тотоксической функции NK-клеток.
Материалы и методы. В исследование включено 89 пациентов, среди которых было 54 здоровые небеременные женщины без предшествующих беременностей в анамнезе, 14 здоровых мужчин и 21 здоровая женщина с физиологически протекающей беременностью на сроке 6-7 недель.
NK-клетки периферической крови оценивали в составе мононуклеаров, выделенных из периферической крови пациентов при помощи стандартного метода центрифугирования в градиенте плотности Histopaque®-1077 (Sigma, США). После выделения мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубировали в культуральной среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ пирувата натрия в течение 4 суток в присутствии IL-2 («Ронколейкин», ООО «НПК Биотех») и без него. Затем мононуклеары периферической крови в течение 4 часов инкубировали с клетками трофобласта линии Jeg-3, воспроизводящих основные морфологические, фено-
типические и функциональные характеристики инва-зивного трофобласта первого триместра беременности. Часть клеток трофобласта инкубировали в аналогичной культуральной среде без добавления мононуклеаров для определения базовой гибели клеток трофобласта. После этого оценивали количество нежизнеспособных клеток трофобласта. Полученные данные были статистически обработаны с помощью программы Statistica 10. Для сравнения полученных данных использовался U-критерий Манна—Уитни, являющийся непараметрическим аналогом t-критерия Стьюдента. Статистически значимыми признавались различия при p < 0,05.
Результаты. Установлено, что цитотоксическая активность NK-клеток в отношении клеток трофобласта была повышена в присутствии IL-2 по сравнению с цитоток-сической активностью NK-клеток, инкубированных без IL-2, во всех обследованных группах пациентов. Группа здоровых небеременных женщин не отличалась от группы здоровых мужчин по цитотоксическому эффекту NK-клеток в отношении клеток трофобласта как в присутствии IL-2, так и без него. Цитотоксическая активность NK-клеток в отношении клеток трофобласта была снижена в группе женщин с физиологической беременностью на сроке 6-7 недель по сравнению с группой здоровых небеременных женщин как в присутствии IL-2, так и без него.
Заключение. Таким образом, способность NK-клеток периферической крови повышать цитотоксическую активность в присутствии активатора (IL-2) в используемой нами системе свидетельствует о возможности применения данной модели для оценки изменений функционального состояния NK-клеток. Установленные различия цитотоксической активности NK-клеток в отношении трофобласта в группах беременных и небеременных женщин, вероятно, связаны прошедшей успешной имплантацией при физиологической беременности, и возможными контактами NK-клеток данных пациенток с клетками трофобласта in vivo, что приводит к снижению цитотоксической активности NK-клеток и преобладанию их регуляторной функции.
ИНТЕРНАЛИЗАЦИЯ ПРОЛИН-БОГАТЫХ ПЕПТИДОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА В КЛЕТКИ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO
Назаров А.С.1, 2, Кудрявцев И.В.1, Филатенкова Т.А.1, Копейкин П.М.1, Баландин С.В.3, Овчинникова Т.В.3, Артамонов А.Ю.1, Орлов Д.С.1, 2, Шамова О.В.1, 2
1 ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
3 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия
Поиск соединений, обеспечивающих доставку лекарственных соединений в опухолевые клетки, является актуальной задачей биомедицинских исследований. Известно, что ряд пептидов, объединенных в группу Cell-Penetrating Peptides (CPP — проникающие в клетки пептиды), обладают способностью к интернализации в эукариотические клетки, а также могут переносить соединения различной природы через клеточные мембраны. Наиболее известные представители СРР — пенетратин,
