CC BY
54
Количественные показатели экспрессии ERCC1 в ткани серозного рака яичников и эффективность I линии химиотерапии с включением препаратов платины
*Т. А. БОГУШ, М. Б. СТЕНИНА, Е. А. БОГУШ, В. Т. ЗАРКУА, С. А. КАЛЮЖНЫЙ, И. А. МАМИЧЕВ, А. С. ТЮЛЯНДИНА, С. А. ТЮЛЯНДИН
Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина МЗ РФ, Москва
The Quantitative Indices of ERCC1 Expression in Serous Ovarian Cancer Tissue and the Efficacy of First-Line Platinum-Based Chemotherapy
*T. A. BOGUSH, M. B. STENINA, E. A. BOGUSH, V. T. ZARKUA, S. A. KALYUZHNY,
I. A. MAMICHEV, A. S. TYULYANDINA, S. A. TYULYANDIN, B. E. POLOTSKY, M. M. DAVYDOV
N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center, Moscow
Платиносодержащие препараты — это группа широко используемых в клинике противоопухолевых лекарств. Их эффективность значительно различается у разных пациентов, что может быть связано с нарушением экспрессии белка эксцизи-онной репарации ERCC1. В настоящем проспективном исследовании методом проточной иммуноцитофлуориметрии проведён строго количественный анализ белка ERCC1 в хирургических биопсийных образцах серозного рака яичников. Экспрессия ERCC1 выявлена в 100% случаев, но по уровню экспрессии маркера (количество клеток, экспрессирующих ERCC1) опухоли различались значительно: минимальное значение составило 40%, максимальное — 77%, медиана — 64,5%; среднее — 64,3+9,0%. При анализе кривых Каплана-Майера отмечена обратная зависимость между экспрессией ERCC1 и продолжительностью безрецидивного периода в течение 40 мес наблюдения после завершения I линии химиотерапии с включением препаратов платины и таксанов (р<0,0008). В группе пациенток с низким уровнем экспрессии ERCC1 (<64,5%) медиана безрецидивного периода не достигнута, тогда как при высоком уровне ERCC1 (>64.5%) составила 9 мес. Различным было и количество рецидивов в группах с высоким и низким уровнем ERCC1 в опухоли — в 26 и 79% случаев, соответственно. Аналогичные закономерности выявлены и при оценке корреляции продолжительности безрецидивного течения болезни с показателем средней интенсивности экспрессии ERCC1 в клетках исследованных опухолей. Таким образом, количественное определение показателей экспрессии ERCC1 может прогнозировать эффективность первой линии химиотерапии рака яичников с включением препаратов платины.
Ключевые слова: серозный рак яичников, ERCC1, платиносодержащая химиотерапия, проточная иитофлуориметрия.
Platinum-based drugs are widely used in clinical practice. Their efficacy varies widely among patients, which may be due to a disruption of the expression of ERCC1 — excision repair protein. In the prospective study a strictly quantitative analysis of the ERCC1 protein expression was carried out in surgical biopsy specimens of serous ovarian cancer by flow cytometry. ERCC1 expression was revealed in 100% of cases, but the expression level of the marker (the percentage of cells expressing ERCC1) varied significantly between tumors: the minimum was 40%, the maximum — 77%, the median — 64.5%; the average — 64.3+9.0%. The analysis of the Kaplan-Mayer curves showed an inverse relationship between the expression of ERCC1 and the duration of the relapse-free period during a 40-month follow-up after the first-line platinum-taxane chemotherapy (p<0.0008). The median relapse-free period was not achieved in the group of patients with the low ERCC1 expression level (<64.5%), whereas it was 9 months in the group of high ERCC1 expression level (>64.5%). The number of relapses in the groups with high and low levels of ERCC1 was different, 26% and 79% cases, respectively. Similar correlations were revealed by comparison of the average intensity of ERCC1 expression with relapse-free survival. Thus, quantitative assessment of ERCC1 expression indices may predict the efficiency of first-line platinum-based chemotherapy of ovarian cancer.
Keywords: serous ovarian cancer, ERCC1, platinum-based chemotherapy, flow cytometry.
Введение
Платиносодержащие препараты — это группа широко используемых в клинике противоопухолевых лекарств. Однако их эффективность значительно различается у разных паци-
© Коллектив авторов, 2018 *Адрес для корреспонденции: E-mail: tatbogush@mail.ru
ентов даже при одних и тех же клинико-морфо-логических показателях заболевания. В основе подобной неопределённости лежат молекулярные особенности опухоли. В частности, важнейшим фактором, определяющим противоопухолевое действие препаратов платины, является активность репарации повреждений ДНК. Участие в этом процессе БЯСС1 — белка эксцизионной репарации — доказано в много-
численных фундаментальных исследованиях, на основании которых БЯСС1 признан маркёром резистентности к платиновым препаратам. Однако клинические наблюдения не столь однозначны. В ряде работ отмечена обратная корреляция между уровнем экспрессии БЯСС1 и клинической эффективностью препаратов [1], в других — такая зависимость не выявляется [2] или отмечается прямая корреляция между показателями [3].
В полной мере это относится и к исследованиям экспрессии БЯСС1 в ткани рака яичников, в лечении которого платиносодержащие препараты занимают ведущую позицию, но прогнозирование эффективности химиотерапии остаётся до конца нерешённой задачей, поэтому до настоящего времени этот маркёр рутинно в клинике не используется [4].
Причин такой ситуации видится несколько. Во-первых, методические неточности, в частности, разнообразие методов, несущих разную информацию (от полиморфизма генов до экспрессии белка), разнообразие объектов исследования (от крови до опухолевой ткани), субъективизм полуколичественной иммуногистохими-ческой оценки результатов и исследование локальных участков опухоли, несмотря на её гетерогенность.
Во-вторых, неопределённость в оценке вклада БЯСС1 в клиническую эффективность препаратов платины может быть связана с разнообразием критериев при проведении такой оценки. В частности, очевидна неправомочность использования показателя общей выживаемости для определения предиктивной значимости маркёра в оценке эффективности препаратов платины, которые в большинстве случаев применяются только на начальных этапах лечения.
Учитывая несомненную важность молекулярного прогнозирования эффективности препаратов платины при лечении рака яичников, настоящая работа выполнена в условиях, максимально нивелирующих описанные недостатки. Иммунофлуоресцентным методом с привлечением проточной цитофлуориметрии проведена строго количественная интегральная оценка БЯСС1 по большому образцу опухоли, что позволило минимизировать внутриопухолевую гетерогенность показателей экспрессии маркёра. Клиническая значимость БЯСС1 исследована на основании проспективной оценки корреляции показателей экспрессии БЯСС1 с продолжительностью безрецидивного течения болезни после завершения I линии химиотерапии с включением препаратов платины и таксанов в группах, соответствующих стандарту разделения опухолей на резистентные, условно чувствительные и чувствительные.
Материал и методы
Работа проведена на суспензиях опухолевых клеток серозного рака яичников, полученных из хирургических био-псийных образцов 38 пациенток, находящихся на лечении в «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Средний возраст пациенток составил 53 (34—66) лет. В 74% случаев диагностирована III стадия заболевания, в 13, 8 и 5% — I, II и IV стадии болезни, соответственно. В соответствии с результатами гистологического исследования высокодифференциро-ванные опухоли диагностированы в 21% случаев, умеренно и низкодифференцированные опухоли встречались с одинаковой частотой — в 39% случаев.
Все пациентки в качестве I линии стандартной химиотерапии получали 6 курсов цисплатина или карбоплатина с пак-литакселом. Для оценки корреляции экспрессии ERCC1 с эффективностью I линии терапии, образцы опухолей были разделены на три группы в соответствии с проспективными клиническими данными о продолжительности безрецидивного периода после окончания лечения: до 6 мес — резистентные опухоли (n=6); от 6 до 12 мес — условно чувствительные (n=12), более 12 мес (n=22) — чувствительные опухоли. Сравнение групп проведено по трём показателям, характеризующим экспрессию ERCC1.
1. Уровень экспрессии ERCC1 — количество специфически флуоресцирующих клеток в % по отношению к контролю (инкубация с вторичными антителами).
2. Интенсивность экспрессии маркера (усл. ед.) — отношение средней интенсивности специфической флуоресценции клеток к аналогичному показателю в контроле.
3. Интегральный индекс экспрессии ERCC1 — произведение уровня и интенсивности экспрессии маркера, деленное на 100.
Оценка количественных показателей экспрессии ERCC1 проведена иммунофлуоресцентным методом с привлечением проточной цитофлуориметрии, который адаптирован для исследования опухолевых маркёров в плотных тканях, лишён субъективизма и позволяет провести строго количественный анализ более 10 тыс клеток из образцов опухолей до 2 и более см в диаметре [5].
После получения одноклеточных суспензий клетки инкубировали в течение 30 мин с первичными моноклональными антителами, специфичными к ERCC1 (клон 8F1, ab2356, «Abcam», Великобритания) в конечном разведении 1:800. Далее в течение 30 мин проводили инкубацию с вторичными антителами, конъюгированными с флуоресцентным красителем DyLight650 (ab98729, «Abcam», Великобритания) в конечном разведении 1:1000. Выбор рабочей концентрации антител, соответствующей выходу специфического окрашивания клеток на плато, проведён в соответствии с калибровочной кривой зависимости специфической флуоресценции клеток от концентрации антител при заданных условиях инкубации.
Измерение флуоресценции проводили на проточном ци-тофлуориметре Navios («Beckman Coulter», США). Для возбуждения флуоресценции использовали твёрдотельный диодный лазер с длиной волны испускаемого света 638 нм. Регистрацию сигнала флуоресценции красителя DyLight650 проводили с помощью детектора FL-6. Использовали средний показатель скорости подсчёта анализируемых клеток; число анализируемых событий — 5000. Порог по параметру FS составлял 20 при напряжении 50В. Напряжение в каналах SS и FL-6 было установлено на 300 и 720В, соответственно. Количество специфически флуоресцирующих клеток рассчитывали с помощью теста Колмогорова-Смирнова, включённого в программу FlowJo 10.0.8 («FlowJo LLC», США).
Оценка корреляции количественных показателей экспрессии ERCC1 с эффективностью I линии терапии проведена при сравнении больных, в опухолях которых показатели экспрессии ERCC1 (уровень, интенсивность или интегральный индекс) были ниже или выше медианы значений по всем
исследованным образцам опухолей. Соответственно, опухоли составили две группы сравнения — с низкой и высокой экспрессией БЯСС1.
По результатам анализа с помощью критерия Шапиро-Уилка распределение показателей экспрессии БЯСС1 во всех сравниваемых группах оказалось нормальным, поэтому для оценки различий между группами применяли параметрический критерий I Стьюдента. Анализ проводили с использованием статистического пакета 8ТАТ18Т1СА 7. Кривые продолжительности безрецидивного периода строили по методу Ка-плана-Майера. Различия между группами рассчитывали с помощью логарифмического рангового критерия. Различия признавались статистически значимыми при р<0,05.
Результаты исследования
Первый факт, который получен при анализе экспрессии БЯСС1 в ткани рака яичников — маркёр выявлен во всех исследованных образцах опухолей. Это не кажется удивительным, так как
важнейшей функцией БЯСС1 является поддержание стабильности клеточного генома и этот белок является облигатной составляющей любой живой клетки.
По уровню экспрессии маркера (количество клеток, экспрессирующих БЯСС1) опухоли отличались значительно (рис. 1). В целом, уровень экспрессии был достаточно высоким: минимальное значение составило 40%, максимальное — 77%, то есть различия достигали 2 раз. Медиана уровня экспрессии БЯСС1 составила 64,5%; среднее значение — 64,3±9,0% клеток, экспрес-сирующих маркер в исследованных образцах опухолей.
По интенсивности экспрессии БЯСС1 различия оказались более существенными, и показатель колебался от 2,4 до 14,5 усл. ед., то есть раз-
Рис. 1. Показатели экспрессии ERCC1 в ткани рака яичников
По оси абсцисс - номера исследованных образцов опухолей; по оси ординат - показатель экспрессии ЕКСС1: уровень экспрессии - количество клеток (%), специфически окрашенных моноклональными антителами (а); интенсивность экспрессии - отношение средней интенсивности специфической флуоресценции клеток к аналогичному показателю в контроле (б); индекс экспрессии - произведение уровня и интенсивности экспрессии ЕКСС1, деленное на 100 (в). Значения показателей экспрессии Е^С1 на всех рис. ранжированы от меньшего к большему. Номера образцов опухолей на рис. 1, би в соответствуют тем же опухолям на рис. 1, а. Горизонтальная линия на всех рис. указывает медиану каждого из показателей экспрессии ЕКСС1.
Показатели экспрессии Е^С1 в ткани рака яичников в группах с разной чувствительностью к I линии химиотерапии препаратами платины и таксанами
Исследованные опухоли Среднее значение показателя± Медиана Различия между
стандартное отклонение показателя группами, p
Уровень экспрессии ERCC1
Резистентные 54,5+6,6 54,5 1 vs 2: 0,07
Условно -чувствительные 63,2+9,1 63,5 2 vs 3: 0,12
Чувствительные 67,5+9,4 68,5 1 vs 3: 0,004*
Интенсивность экспрессии ERCC1
Резистентные 3,7+0,7 3,8 1 vs 2: 0,11
Условно-чувствительные 5,2+2,2 4,8 2 vs 3: 0,77
Чувствительные 6,4+3,1 5,7 1 vs 3: 0,09
Индекс экспрессии ERCC1
Резистентные 2,0+0,6 2,2 1 vs 2: 0,03*
Условно-чувствительные 3,5 + 1,9 3,0 2 vs 3: 0,30
Чувствительные 4,5+2,6 3,7 1 vs 3: 0,003*
Примечание. * - различия между показателями в группах сравнения статистически значимы (р<0,05).
личия между образцами опухолей были почти в 7 раз. Медиана интенсивности экспрессии ERCC1 составила 4,8; среднее значение — 5,7±2,8 усл. ед.
Сопоставление количественных значений уровня и интенсивности экспрессии маркёра у одних и тех же пациенток выявило неполное соответствие показателей. Данные, представленные на рис. 2, демонстрируют дискордантность показателей в 26% исследованных опухолей: высокий уровень экспрессии ERCC1 при низкой интенсивности экспрессии маркера, и наоборот (на рис. 2 квадраты II и III). Совпадение молекулярного диагноза по двум показателям, то есть высокий уровень экспрессии ERCC1 с высокой интенсивностью или низкий уровень — с низкой
интенсивностью экспрессии маркёра, отмечено в 76% случаев (на рис. 2 квадраты I и IV).
Учитывая это, проведено дополнительное разделение исследованных образцов опухолей на группы в соответствии с интегральным индексом, который включает в себя оба показателя — произведение уровня и интенсивности экспрессии БЯСС1. Такой индекс наиболее часто используется при оценке опухолевых маркёров методом иммуногистохимии. Различия интегрального индекса среди исследованных опухолей были ещё значительнее — до 10 раз (от 1 до 9,9: рис. 1, в). Медиана показателя составила 3,2 усл. ед., среднее значение — 3,8±2,3.
Для оценки корреляции экспрессии БЯСС1 с эффективностью I линии химиотерапии с включением препаратов платины и таксанов, образцы опухолей были разделены на три группы в соответствии с клиническими данными о продолжительности безрецидивного периода после окончания лечения: до 6 мес — резистентные опухоли; 6—12 мес — условно чувствительные, более 12 мес — чувствительные. Анализ проведён по всем показателям, характеризующим экспрессию БЯСС1, а именно, по уровню, интенсивности и интегральному индексу опухолевого маркёра. Полученные результаты представлены в таблице.
Первое, что обращает на себя внимание, — по всем группам сравнения средние значения и медианы показателей экспрессии БЯСС1 увеличиваются в ряду опухолей «резистентные ^ условно чувствительные ^ чувствительные». По показателю интенсивности экспрессии БЯСС1 различия между группами не достигли статистической значимости, по уровню экспрессии — различия статистически достоверны между чувствительными и резистентными опухолями (р=0,004), а по значению интегрального индекса экспрессии БЯСС1 статистически значимые различия выявлены не только между чувствительными и резистентными опухолями (р=0,003), но
Рис. 2. Дискордантность показателей уровня и интенсивности экспрессии Е^С1 в одном и том же образце рака яичников.
По оси абсцисс - уровень экспрессии ЕКСС1: количество клеток (%), специфически окрашенных моноклональны-ми антителами. По оси ординат - интенсивность экспрессии ЕКСС1: отношение средней интенсивности специфической флуоресценции клеток к аналогичному показателю в контроле. Вертикальная и горизонтальная линии на рисунке указывают медианы уровня и интенсивности экспрессии ЕКСС1.
юо
80-
бО-
40-
20-
ЮО
80-
бО-
40
20-
ЮО
и между резистентными и условно чувствительными (^=0,03). Последнее наблюдение указывает на то, что именно интегральный показатель экспрессии БЯСС1, характеризующий не только количество клеток, экспрессирую-щих маркёр, но интенсивность экспрессии БЯСС1 в каждой клетке, может быть наиболее информативным с точки зрения молекулярной диагностики.
На рис. 3 представлены кривые Каплана-Майера, которые демонстрируют корреляцию уровня, интенсивности и интегрального индекса экспрессии БЯСС1 с продолжительностью безрецидивного периода после завершения I линии стандартной химиотерапии рака яичников препаратами платины и таксана-ми. Рассмотрена вероятность развития рецидива болезни в группах с высокой и низкой экспрессией БЯСС1 — при разных показателях экспрессии БЯСС1 ниже и выше медианы каждого из показателей по группе исследованных опухолей в целом.
Видно, что обратная зависимость между экспрессией БЯСС1 и продолжительностью безрецидивного периода после завершения I линии химиотерапии выявляется при оценке экспрессии маркёра по всем показателям. Так, в группах пациенток с низкими значениями уровня, интенсивности и интегрального индекса экспрессии БЯСС1 медиана безрецидивного периода в течение 40 мес наблюдения не достигнута, а во всех группах с высокими показателями экспрессии маркёра составила 9 мес. Различным было и количество рецидивов в группах с разной экспрессией БЯСС1 в опухоли. К 40 мес наблюдения возврат болезни диагностирован: при низком и высоком уровне экспрессии маркера — в 26% У8 79% случаев; при низкой и высокой интенсивности экспрессии БЯСС1 — в 47% У8 57% случаев; при высоких и низких значениях интегрального индекса — в 32% У8 74% опухолей. Во всех случаях разница между группами достигла высокой статистической значимости (указано на рис. 3).
Уровень экспрессии ЕЯСС1
Медиана: не достигнута Количество рецидивов: 26%
/?=0,0008*
Медиана: 9 мес. Количество рецидивов: 79%
Ю
20
ЗО
40
Интенсивность экспрессии Е1*СС1
Медиана: не достигнута Количество рецидивов: 47%
р=0,016*
, Медиана: 9 мес. Количество рецидивов: 57%
Ю
20
ЗО
—г 40
Индекс экспрессии ЕКСС1
80 -
60
40 -
20 -
Медиана: не достигнута Количество рецидивов: 32%
/?=0,005*
Медиана: 9 мес. Количество рецидивов: 74%
Ю
20
ЗО
—I
40
Рис. 3. Продолжительность безрецидивного периода после I линии химиотерапии препаратами платины и таксанами в зависимости от показателей экспрессии ERCC1.
По оси абсцисс - время наблюдения после окончания I линии химиотерапии препаратами платины и таксанами (мес). По оси ординат - вероятность возникновения рецидива ( %). «---» - опухоли с высокой экспрессией ЕКСС1 (> медианы каждого показателя экспрессии маркёра по всем исследованным образцам опухолей). «--» - опухоли с низкой экспрессией ЕКСС1 (< медианы для каждого показателя экспрессии маркёра по всем исследованным образцам опухолей). * - различия между группами с высокой и низкой экспрессией ЕКСС1 во всех случаях статистически значимы (р<0,05).
Обсуждение результатов
Препараты платины в настоящий момент широко используются при лечении злокачественных опухолей различных локализаций, в том числе рака яичников. В 75—80% случаев рака яичников регистрируется чувствительность к I линии химиотерапии, включающей препараты платины и таксаны [6, 7], тогда как остальные больные в те-
чение 6 мес после окончания лечения переживают рецидив заболевания. Таким образом, каждой четвертой—пятой пациентке проводится заведомо неэффективная токсичная терапия, которая ухудшает качество жизни и отодвигает адекватное лечение, эффективность которого в значительной степени зависит от начала его проведения. В такой ситуации важность молекулярной диагностики опухоли до начала проведения терапии очевидна.
Вклад БЯСС1 — белка эксцизионной репарации ДНК, в противоопухолевое действие препаратов платины доказан в многочисленных фундаментальных исследованиях [4]. Предположение о том, что БЯСС1 может играть роль предиктивно-го фактора резистентности клеток к препаратам платины, было высказано еще в 1990-х годах [8]. Однако результаты клинических исследований вплоть до настоящего времени противоречивы. В одних работах связь активности репарации ДНК с эффектом терапии выявляется, в других — нет [9, 10]. Причин противоречивости много, и некоторые из них удалось преодолеть в настоящем исследовании.
Важнейший фактор неточности анализа — субъективность полуколичественной визуальной оценки результатов и гетерогенность опухоли по уровню экспрессии опухолевых маркёров, учесть которую при исследовании локального участка опухоли невозможно. Необходимость использования для молекулярной диагностики интегрального показателя по всему опухолевому узлу убедительно продемонстрирована при иммуногис-тохимическом исследовании 15 участков одного и того же образца немелкоклеточного рака лёгкого. Дискордантность показателей экспрессии опухолевых маркёров БЯСС1, ЯЯМ1, ТиВВ-3 и К1-67 при повторных исследованиях гистологических препаратов одних и тех же образцов опухоли выявлена в 33—67% случаев [11]. В последнее время проблемы молекулярной диагностики опухоли в связи с внутриопухолевой гетерогенностью обсуждаются во многих работах [12—14].
К аналитическим ошибкам иммуногистохи-мического анализа, который рутинно используется в клинических лабораториях, приводит и многостадийная преаналитическая подготовка материала, включающая недостаточно стандартизованные условия фиксации, дегидратации и гидратации опухолевой ткани, ревитализации антигена, контроля активности антител и т.д.
Этих серьёзных недостатков позволяет избежать использованный в настоящем исследовании иммунофлуоресцентный метод, ассоциированный с проточной цитофлуориметрией, в котором, прежде всего, значительно упрощена преанали-тическая подготовка [15]. Анализ лишен субъективизма, позволяет строго количественно иссле-
довать более 10 тыс клеток из клеточных суспензий, которые получены из образцов опухолей большого размера (до 2 см и более в диаметре). Показатель экспрессии маркёра при этом становится интегральным по большому объёму опухоли, что в значительной степени нивелирует внут-риопухолевую гетерогенность.
Причиной разноречивости заключений о значимости БЯСС1 в предсказании резистентности к препаратам платины является также отсутствие стандарта дизайна и оценки результатов исследований. Разнообразны объекты и методы исследования, при этом отличия в информативности разных характеристик маркёра очевидны. Получено множество доказательств того, что оценка полиморфизмов гена БЯСС1 и уровень мРНК БЯСС1 не позволяют судить об уровне этого белка в клетке и об активности процесса эксцизионной репарации ДНК [9, 16, 17]. И это неудивительно, так как от экспрессии гена до синтеза белка большой путь, который может прерваться на разных его этапах.
И наконец, во многих работах заключение о значимости БЯСС1 в прогнозе эффективности I линии химиотерапии рака яичников с включением препаратов платины базируется на результатах оценки корреляции уровня экспрессии маркёра с показателем общей выживаемости, которая зависит не только от эффективности первой платино-содержащей терапии, но и последующего лечения — часто без препаратов платины.
В настоящем исследовании учтены перечисленные выше факторы, влияющие на точность определения клинической значимости БЯСС1, и проведена проспективная строго количественная оценка разных показателей экспрессии БЯСС1 в ткани серозного рака яичников. Группы сравнения сформированы с учётом клинического стандарта деления опухолей на резистентные, условно чувствительные и чувствительные в зависимости от времени диагностирования рецидива болезни, соответственно, — в течение 6 мес, в период от 6 до 12 мес и после 12 мес после завершения I линии терапии препаратами платины и таксанами.
Статистически значимые различия между группами выявлены по всем исследованным показателям экспрессии БЯСС1 — по уровню, интенсивности и интегральному индексу. При этом в ряду «резистентные опухоли ^ условно чувствительные ^ чувствительные» средние значения всех показателей экспрессии БЯСС1 изменялись от большего к меньшему. Такая же закономерность продемонстрирована и при оценке методом Каплана—Мейера корреляции продолжительности безрецидивного периода после завершения I линии химиотерапии с уровнем, интенсивностью и интегральным индексом экспрессии БЯСС1.
Во всех случаях различия достигли высокой статистической значимости, при этом выявлены различия и в числе рецидивов болезни, диагностированных к 40 мес наблюдения, то есть в агрессивности течения болезни.
Таким образом, в группе резистентных опухолей средние показатели экспрессии ERCC1 ниже по сравнению с группой условно чувствительных и чувствительных новообразований. Корреляция показателей экспрессии ERCC1 с прогнозом эффективности I линии терапии и агрессивностью течения болезни была аналогичной: чем ниже экспрессия ERCC1, тем ниже эффективность лечения и хуже прогноз болезни.
На первый взгляд, эти результаты не согласуются с фундаментальным представлением о вкладе ERCC1 в эффективность препаратов платины: при прочих равных условиях, чем активнее репарация повреждений ДНК, связанных с воздействием препаратов платины, тем их эффективность ниже. Однако в условиях клинического исследования именно «прочие равные условия» изменяются от пациентки к пациентке. В частности, важнейшим фактором, который снижает эффективность цисплатина, является анеуплоидия. В экспериментах на культуре клеток рака желудка и в опытах на животных с трансплантированной опухолью показано, что индукция в опухоли ДНК анеуплоидии вызывает выраженное снижение эффективности цисплатина по сравнению с исходным диплоидным вариантом опухоли [18]. Более того, анеуплоидия, выраженность которой контролируется репарацией ДНК, в том числе и с участием ERCC1, относится к прогностически неблагоприятным факторам прогноза большинства злокачественных новообразований, в том числе и в случае рака яичников [19].
Следовательно, в реальной клинической ситуации эффективность препаратов платины в связи с ERCC1 зависит не только от активности репарации повреждений ДНК, вызванных препаратом платины, но и от стабильности генома опухоли как такового. И эти биологические эффекты функционирования ERCC1 находятся в антагонистической позиции по отношению к эффективности препаратов платины.
Тем не менее, в настоящем исследовании получены чёткие корреляции, которые свидетельствуют о возможности прогнозировать продолжи-
ЛИТЕРАТУРА
1. Steffensen K. D, Waldstmm M, Jakobsen A. The relationship of platinum resistance and ERCC1 protein expression in epithelial ovarian cancer. Int J Gynecol Cancer 2009; 19: 5: 820-825.
2. Lee S. M, Falzon M, Blackhall F. et al. Randomized prospective bio-marker trial of ercc1 for comparing platinum and nonplatinum therapy in advanced non-small-cell lung cancer: ERCC1 trial (ET). J Clin Oncol 2017; 35: 4: 402-411.
3. Kang C. H, Jang B. G, Kim D. W. et al. The prognostic significance of ERCC1, BRCA1, XRCC1, and betaIII-tubulin expression in patients with non-small cell lung cancer treated by platinum- and taxane-based
тельности безрецидивного течения рака яичников после завершения I линии химиотерапии препаратами платины и таксанами по результатам строго количественной оценки экспрессии ERCC1. Тот факт, что неблагоприятным фактором прогноза является низкий уровень и интенсивность экспрессии ERCC1, на наш взгляд указывает на то, что генетическая стабильность — это одна из важнейших биологических характеристик рака яичников, определяющих эффективность платиносодержащей химиотерапии рака яичников и исход болезни.
С этим представлением согласуются результаты ряда исследований, выполненных в последнее время. Речь идет о сравнительной оценке выживаемости больных раком яичников с низким и высоким уровнем экспрессии ERCC1 по результатам полуколичественного иммуногистохими-ческого анализа опухолей. Выявлено статистически значимое увеличение общей выживаемости и продолжительности безрецидивного течения болезни в зависимости от уровня экспрессии в опухоли ERCC1 [3, 20]. Во всех случаях неблагоприятный прогноз был ассоциирован с низкой экспрессией ERCC1, и что очень важно — не зависел от проводимой химиотерапии, а следовательно, в большей степени зависел от биологических особенностей опухоли [21].
Подводя итог, необходимо отметить, что убедительность полученных в настоящем исследовании корреляций подчёркивает необходимость чёткой унификации изучения не только ERCC1, но и других молекулярных маркеров. Считаем, что строго количественный анализ должен проводиться по показателям экспрессии конечного продукта — белка. Оптимально — исследование должно быть проспективным. При оценке клинической значимости маркера в предсказании чувствительности к тому или иному противоопухолевому препарату — показатели эффективности терапии должны быть стандартизованы и общеприняты. В дальнейшем, для повышения точности прогноза эффективности I линии химиотерапии с включением препаратов платины, мы планируем оценить вклад в клинический молекулярный прогноз плоидности исследованных образцов рака яичников, а также экспрессии маркёров, ассоциированных с эффективностью таксанов.
neoadjuvant chemotherapy and surgical resection. Lung Cancer 2010; 68: 3: 478—483.
4. Богуш Т. А., Попова А. С., Дудко Е. А. и др. ERCC1 как маркер резистентности рака яичников к препаратам платины. Антибиотики и химиотер 2015; 60: 3—4: 42—50. / Bogush T. A, Popova A. S, Dudko E. A. i dr. ERCC1 kak marker rezistentnosti raka jaichnikov k preparatam platiny. Antibiotiki i khimioter 2015; 60: 3—4: 42—50. [in Russian]
5. Богуш Т. А., Шатурова А. С, Дудко Е. А. и др. Количественная им-мунофлуоресцентная оценка с использованием проточной цитоф-луориметрии экспрессии эстрогеновых рецепторов — в солидных опухолях человека. Вестн Моск ун-та Сер 2, Химия 2011; 52: 4: 305—312. / Bogush T. A., Shaturova A. S, Dudko E. A. i dr.
Kolichestvennaja immunofluorescentnaja ocenka s ispol'zovaniem pro-tochnoj citofluorimetrii jekspressii jestrogenovykh receptorov — v solid-nykh opukholjakh cheloveka. Vestn Mosk un-ta Ser 2, Khimija 2011; 52: 4: 305—312. [in Russian]
6. Deloia J. A., Bhagwat N. R., Darcy K. M. et al. Comparison of ERCC1/XPF genetic variation, mRNA and protein levels in women with advanced stage ovarian cancer treated with intraperitoneal platinum. Gynecol Oncol 2012; 126: 3: 448—454.
7. Syrios J., Banerjee S, Kaye S. B. Advanced epithelial ovarian cancer: from standard chemotherapy to promising molecular pathway targets — where are we now? Anticancer Res 2014; 34: 5: 2069—2077.
8. Lee K. B, Parker R. J., Bohr V. et al. Cisplatin sensitivity/resistance in UV repair-deficient Chinese hamster ovary cells of complementation groups 1 and 3. Carcinogenesis 1993; 14: 10: 2177—2180.
9. Bosmuller H, Haitchi-Petnehazy S, Webersinke G. et al. Intratumoral lymphocyte density in serous ovarian carcinoma is superior to ERCC1 expression for predicting response to platinum-based therapy. Virchows Arch 2011; 459: 2: 183—191.
10. Xie C, Yin R. T., Li Y. L. et al. The protein expression of ERCC1 and survivin in epithelial ovarian carcinoma and their clinical significance. Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 2011; 42: 1: 86—89.
11. Cepeda V., Fuertes M. A., Castilla J. et al. Biochemical mechanisms of cisplatin cytotoxicity. Anticancer Agents Med Chem 2007; 7: 1: 3—18.
12. Colombo P. E, Fabbro M, Theillet C. et al. Sensitivity and resistance to treatment in the primary management of epithelial ovarian cancer. Crit Rev Oncol Hematol 2014; 89: 2: 207—216.
13. Богуш Т. А., Попова А. С., Дудко E. A. u др. Дискордантность статуса эстрогеновых рецепторов между первичным и метастатическим раком молочной железы — возможные причины и прогностическая значимость. Антибиотики и химиотер 2013; 58: 7—8: 11—18. / Bogush T. A., Popova A. S, Dudko E. A. i dr. Diskordantnost' statusa jestrogenovykh receptorov mezhdu pervichnym i metastaticheskim
rakom molochnoj zhelezy — vozmozhnye prichiny i prognosticheskaja znachimost'. Antibiotiki i khimioter 2013; 58: 7—8: 11—18. [in Russian]
14. Tolles J., Bai Y, Baquero M. et al. Optimal tumor sampling for immunos-taining of biomarkers in breast carcinoma. Breast Cancer Res 2011; 13: 3: R51.
15. Богуш Т. А., Дудко E. А., Родионова M. B. u др. Анализ информативности методов иммуногистохимии и проточной цитофлуоримет-рии при оценке экспрессии эстрогеновых рецепторов альфа. ДАН 2015; 465: 2: 235—40. / Bogush T. A., Dudko E. A., Rodionova M. V. i dr. Analiz informativnosti metodov immunogistokhimii i protochnoj cito-fluorimetrii pri ocenke jekspressii jestrogenovykh receptorov al'fa. DAN 2015; 465: 2: 235—40. [in Russian]
16. Moxley K. M., Benbrook D. M., Queimado L. et al. The role of single nucleotide polymorphisms ofthe ERCC1 and MMS19 genes in predicting platinum-sensitivity, progression-free and overall survival in advanced epithelial ovarian cancer. Gynecol Oncol 2013; 130: 2: 377—382.
17. Marsh S., Paul J., King C. R., Gifford G et al. Pharmacogenetic assessment of toxicity and outcome after platinum plus taxane chemotherapy in ovarian cancer: the Scottish randomised trial in ovarian cancer. J Clin Oncol 2007; 25: 29: 4528—4535.
18. Tang X., Hu G., Xu C. et al. HZ08 reverse the aneuploidy-induced cis-platin-resistance in Gastric cancer by modulating the p53 pathway. Eur J Pharmacol 2013; 720: 1—3: 84—97.
19. Danielsen H. E, Pradhan M., Novelli M.Revisiting tumour aneuploidy — the place of ploidy assessment in the molecular era. Nat Rev Clin Oncol 2016; 13: 5: 291—304.
20. Klatte T., Seitz C, Rink M. et al. ERCC1 as a Prognostic and Predictive Biomarker for Urothelial Carcinoma of the Bladder following Radical Cystectomy. J Urol 2015; 194: 5: 1456—1462.
21. Wang J., Zhou X. Q., Li J. Y. et al. Prognostic significance of ERCC1 expression in postoperative patients with gastric cancer. Chin J Cancer Res 2014; 26: 3: 323—330.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Богуш Татьяна Анатольевна — д. б. н., профессор, заведующая лабораторией медицинской химии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва Стенина Марина Борисовна — д. м. н., ведущий научный сотрудник, отделение клинической фармакологии и химиотерапии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Богуш Елена Александровна — к. м. н., старший научный сотрудник, хирургическое отделение №2 (диагностика опухолей), ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Заркуа Варлам Тенгизович — аспирант, отделение клинической фармакологии и химиотерапии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Калюжный Сергей Андреевич — младший научный сотрудник, лаборатория медицинской химии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва Мамичев Иван Андреевич — младший научный сотрудник, лаборатория медицинской химии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва Тюляндина Александра Сергеевна — к. м. н., старший научный сотрудник отделения клинической фармакологии и химиотерапии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Тюляндин Сергей Алексеевич — д. м. н., профессор, заведующий отделением клинической фармакологии и химиотерапии, ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
