CC BY
50
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80%
■ Ухудшение здоровья
Рис. 3. Самооценка состояния здоровья студентов.
стимым для медицинского вуза. Установлено что, число студентов, употребляющих пиво, неуклонно увеличивается от первого курса к третьему(г=0,45).
При самооценке состояния здоровья установлено, что 80% студентов третьего курса не считают своё здоровье «хорошим» и «отличным». Тогда как на втором и первом курсах этого мнения придерживались 44% и 31% соответственно. Низкий уровень самооценки здоровья оказывает негативное влияние на самооценку качества жизни большинства студентов. На 1 курсе отметили ухудшение своего здоровья каждый третий студент, к 3-му курсу отмечали ухудшение своего здоровья практически каждый второй студент (рис. 3).
На субъективную оценку состояния здоровья оказывает тот факт, что студенты третьих курсов в отличие от первокурсников оценивают свое здоровье более негативно, что обусловлено накоплением патологии за годы обучения в вузе. Показателями ухудшения здоровья от хорошего к плохому являются употребление спиртных напитков более 3-4-х раз в месяц и сочетание курения и употребления спиртных напитков (р<0,05).
Отмечена низкая медицинская активность студентов: за медицинской помощью при всех случаях заболеваний не об-
ЛИТЕРАТУРА
1. Акчурин Б.Г. Проблемы организации деятельности высшей школы по формированию физического здоровья студентов: Дис. ... канд. пед. наук. - Уфа, 1996. - 132 с.
2. Коваленко В.А. Физическая культура в обеспечении здоровья и профессиональной психофизической готовности студентов // Физическая культура и спорт в Российской
70% 75% 80% 85% 90%
■ Не обращаются
Рис. 4. Обращение за медицинской помощью в поликлинику.
ращаются 76% первокурсников, на втором - 88% и третьем курсе - 79% (рис. 4). Каждый третий студент занимается самолечением в случае заболевания. Ориентация на самолечение у мужчин преобладает в 1,4 раза в сравнении с женщинами.
Констатируя вышеизложенное можно заключить, что основными элементами, влияющими на образ жизни студентов, являются:
- увеличение продолжительности учебного времени обусловленного фактической академической нагрузкой и временим переездов;
- значительным снижением времени отдыха (свободного времени и продолжительности сна);
- низкая двигательная активность (снижение числа студентов занимающихся физкультурой и спортом);
- не рациональное питание (нарушение режима и качества питания);
- широкое распространение в студенческой среде вредных привычек (табакокурение, употребление алкогольных напитков).
Федерации (студенческий спорт). - М.: Полиграф-сервис, 2002. - С.43-66.
3. Куценко Г.И. Общественное здоровье и здравоохранение. - СПб., 2000. - 882 с.
4. Nanakorn S., Osaka R., Chusilp K. Gender differences in health-related practices among university students in northeast Thailand // Asia Pac. J Public Health. - 1999. - Vol. 11. №1. -P10-15.
Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, Карабинская Ольга Арнольдовна -ассистент; Изатулин Владимир Григорьевич - профессор, д.м.н.; Макаров Олег Александрович - профессор, д.м.н.; Колесникова Оксана Владимировна - ассистент, к.б.н.; Калягин Алексей Николаевич - проректор по лечебной работе и последипломному образованию, доцент, д.м.н.; Атаманюк Александр Болеславович - заведующий курсом, доцент, к.м.н.
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ
© ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.Б., ДАШИНАМЖИЛОВ Ж.Б., ГАРМАЕВА Е.Д., АЖУНОВА Т.А. - 2011 УДК 581.5:581.6:581.9
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В РАСТИТЕЛЬНОМ СРЕДСТВЕ «ЭРИТРОФИТ»
Пунцык-Нима Базыровна Лубсандоржиева, Жаргал Балдуевич Дашинамжилов,
Евгения Дандаржаповна Гармаева, Татьяна Александровна Ажунова
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. Разработана спектрофотометрическая методика определения содержания флавоноидов в растительном средстве «Эритрофит». Валидационная оценка методики показала, что методика определения флавоноидов в «Эритрофите» воспроизводима, линейна в области концентрации флавоноидов в аликвоте - 0,086-0,648 мг/мл, и относительная ошибка среднего результата составляет 1,86%.
Ключевые слова: «Эритрофит», флавоноиды.
QUANTITATIVE DETERMINATION OF FLAVONOIDS IN VEGETABLE REMEDY «ERITHROPHYTE»
P.B. Lubsandorzhieva, Zh.B. Dazhinamzhilov, E.G. Garmaeva, T.A. Azhunova (Institute of General and Experimental Biology SD RAS, Ulan-Ude)
Summary. The spectrophotometric method for the quantitave determination of flavonoids in phytoremedy «Erythrophyte» has been developed. The validative evaluation of the proposed method showed that the method of quantitave determination of flavonoids in phytoremedy «Erythrophyte» is reproducible, linear in the range of flavonoids concentration 0,086-0,648 mg/ml in aliquot and relative standard deviation amounts to 1,86%.
Key words: «Erythrophyte», flavonoids.
Растительное средство (условное название «Эритрофит»), состоящее из экстрактов сухих листьев Urtica dioica L., травы Polygonum aviculare L., Achillea millefolium L., мелкоизмельчен-ных порошков Zingiber officinalis L., и Cinnamomum cassia проявляло в эксперименте антианемическое, гепатопротекторное и противовоспалительное действия [1,12]. Три вида сырья компонентов «Эритрофита» стандартизируются по содержанию эфирных масел: Z. officinalis, C. cassia - по методу Гинзбурга,
А. millefolium - по методу 3 с использованием декалина [3,4,5,6], и при содержании эфирных масел в траве А. millefolium не менее 0,1%, объем раствора эфирного масла в декалине получается на практике меньше объема самого декалина [7]. Также, при получении сухого экстракта из травы A. millefolium более летучая часть эфирных масел остается в растворителе, теряется при вакуумной сушке. Основными действующими веществами Z. officinalis L. и C. cassia являются эфирные масла [13,17], содержание которых должно составлять в Z. officinalis - не более 1,4%, C. cassia - не менее 0,5% [3,4]. В составе «Эритрофита» используются сухие порошки этих пряностей с низким содержанием эфирных масел, что затрудняет определение их содержания в испытуемом средстве методом Гинзбурга.
Для стандартизации листьев крапивы предусмотрена качественная реакция на витамин К, травы горца птичьего
- методика определения суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин [6]. Листья U. dioica признаны источником витамина К (2-метил-3-фитил-1,4-нафтохинон), который осуществляет коферментные функции при биосинтезе ряда белков, связывающих кальций (в частности, протромбина), участвующих в процессе свертывания крови. В эксперименте наиболее высокий антитромботический эффект показывали липофильные вещества из U. dioica, в том числе и флавонои-ды [15]. В клинических условиях в качестве кровоостанавливающих средств применяют отвары и настои из A. millefolium, P aviculare, U. dioica [8,9], в которые витамин К и другие гидрофобные вещества не извлекаются водой. Возможно, что наблюдаемые положительные эффекты от применения этих растений при анемии связаны с их этиотропным действием [9]. Кроме эфирных масел, широкий спектр фармакологических свойств A. millefolia во многом обусловливают фенольные соединения: флавоноиды - кровоостанавливающее, противовоспалительное [7, 14], дикофеоилхинные кислоты
- спазмолитическое, желчегонное [14].
Таким образом, благоприятное влияние изучаемого средства на моделях анемии обусловлено содержанием не только витамина К, но и поливалентностью действия комплекса БАВ, в частности, флавоноидов. Антианемическое действие последних подтверждено исследованием флавоно-идных соединений (кверцетин, рутин, гесперидин и др.) на течение анемии в постинфекционный период, где наиболее активным антианемическим средством был кверцетин [16]. Представляется целесообразным проводить оценку качества «Эритрофита» по содержанию флавоноидов, как основных действующих веществ P. aviculare, A. millefolium, U. dioica.
Цель данной работы - разработка методики количественного определения флавоноидов в растительном средстве «Эритрофит».
Материалы и методы
Получены сухие экстракты из U. dioica, P. aviculare, A. millefolium, последовательной экстракцией спиртом высокой
и средней концентрации (80% и 40% этанол), и горячей водой. По описанным в литературе методикам определено содержание биологически активных веществ (БАВ) (табл. 1). Для определения фенолокислот извлечения предварительно очищали на колонке с окисью алюминия. Количественное
содержание витамина К [11] и каротиноидов определяли спектрофотометрическим методом в одной аналитической пробе гексанового извлечения. Квалификацию методики (валидацию) проводили с использованием опытов с добавками, определения линейности методики, воспроизводимости [2,5] c использованием программы «Statistica».
Результаты и обсуждение
В ультрафиолетовом (УФ) спектре спиртовых растворов отдельных экстрактов и «Эритрофита» наблюдается батохромный сдвиг при добавлении 2% раствора алюминия хлористого: при 397 нм (экстракт A. millefolium), 410 нм (экстракт P aviculare), плато при 410 нм (экстракт U. dioica), 410 нм (Эритрофит»). Полоса поглощения при 410 нм в УФ спектре извлечения «Эритрофита» совпадает с максимумом
Таблица 2
Результаты определения влияния условий экстракции
на выход флавоноидов из эритрофита
Испытуемый параметр Флавоноиды, %
I. Выбор концентрации спирта этилового
40% 1,21+0,02
60% 1,32+0,02
70% 1,41+0,02
80% 1,40+0,01
96% 1,38+0,01
II. Температура экстракции
100оС (кипящая водяная баня) 1,30+0,02
80-90оС 1,32+0,01
60-70оС 1,18+0,02
III. Время экстракции, мин
15 мин 1,28+0,01
30 мин 1,30+0,02
45 мин 1,35+0,03
IV. Кратность экстракции и соотношение сырьеэкстрагент
1) 1:100 1,28+0,01
2) 1:50; 1:50 (итого 1:100) 1,23+0,02
3) 1:50; 1:50; 1:50 (итого (1:150) 1,38+0,01
Таблица 1
Содержание биологически активных веществ в эритрофите и экстрактах
Наименование «Эритрофит» Экстракт U. dioica Экстракт P. aviculare Экстракт A. millefolium
Витамин К, % 0,15 + 0,01 0,04 + 0,01 0,18 + 0,01 0,25 + 0,01
Каротиноиды, мг% 3,98 + 0,02 2,54 + 0,01 5,04 + 0,01 4,36 + 0,02
Флавоноиды, % 1,51 + 0,01* 3,96 + 0,16* 7,20 + 0,05* 3,89 + 0,02**
Полифенолы, % 4,72 + 0,03 9,18 + 0.08 13,00 + 0,17 17,97 + 0,19
Фенолокислоты, % 0,96 + 0,05 1,17 + 0,05 1,20 + 0,05 1,09 + 0,05
Примечание: * - в пересчете на гиперозид, ** - в пересчете на лютеолин.
Таблица 3
Результаты опытов с добавками
Флавоноиды в «Эритрофите», мг Добавлено рутина, мг Должно быть, мг Найдено, мг Ошибка, %
8,187 4,0 12,187 12,208 100,17
12,102 99,30
12,314 101,04
8,187 6,0 14,187 14,066 99,14
14,013 98,77
14,066 99,14
8,187 8,0 16,187 16,080 99,33
16,135 99,68
16,243 100,34
Средний % восстановления: 99,83
поглощения спектров гиперозида и рутина с алюминия хлоридом.
Для стандартизации «Эритрофита» выбран спектрофотометрический метод с использованием реакции комплексо-образования флавоноидов с алюминия хлоридом. В качестве стандарта выбран рутин, вместо менее распространенного и доступного гиперозида. Подобраны оптимальные условия для проведения количественного анализа флавоноидов в «Эритрофите» (табл. 2).
Таблица 4
Результаты опытов для определения линейности методики
Концентрация флавоноидов (по отношению к декларированному содержанию суммы флавоноидов), % Объем аликвоты, мл Оптическая плотность растворов
25 0,5 0,081
50 1,0 0,166
75 1,5 0,239
100 2,0 0,335
125 2.5 0,408
150 3,0 0,472
175 3,5 0,550
200 4,0 0,610
Коэффициент корреляции, г 0,9985
Установлено, что оптимальными являются следующие параметры: экстрагент - 70% спирт этиловый, соотношение сырье:экстрагент - 1:100, кратность экстракции
- 1, температура экстракции - 90оС, время экстракции
- 30 мин. Валидационную оценку методики проводили с использованием опытов с добавками, определения линейности методики, воспроизводимости. Правильность методики подтверждена опытами с добавками раствора стандарта рутина к исследуемому раствору (табл. 3).
Критерием приемлемости является средний процент восстановления, средняя величина которого должна находиться в пределах (100±5)%. Установлено, что процент восстановления находится в пределах от 98,77 до 101,04%, относительная ошибка составляет 0,69%.
Определение линейности проводили на 7 уровнях концентраций от теоретического содержания флавоноидов в испытуемом средстве (табл. 4).
Установлено, что график зависимости имеет линейный характер в области концентрации флавоноидов в аликвоте 0,086-
0,648 мг/мл и описывается уравнением у=0,01504+0,1523х. Коэффициент корреляции составляет 0,9985 и близок к единице (0,98<г<1) (табл. 4). Воспроизводимость методики устанавливали методом независимых определений на 3 образцах в трех повторностях (исполнители - 2 аналитика) (табл. 5).
Критерием приемлемости является коэффициент вариации (СУ<10%), который составил 1,58%, что свидетельствует об удовлетворительной воспроизводимости методики. Метрологические характеристики методики определения флавоноидов в эритрофите приведены в таблице 6.
Установлено, что относительная ошибка среднего результата не превышает 1,86%, отдельного определения -4,93%. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин в «Эритрофите» составляет 1,38-2,04%. Показателем качества
Таблица 5
Результаты эксперимента методом независимых определений
Наименование Содержание флавоноидов в «Эритрос >ите», %
повторность образец №1 образец №2 образец №3
Аналитик 1 1 1,42 1,71 2,08
2 1,40 1,70 2,03
3 1,39 1,69 2,07
Аналитик II 1 1,38 1,73 2,01
2 1,41 1,72 2,05
3 1,40 1,70 2,00
Среднее значение 1,40 1,71 2,04
Коэффициент вариации CV,% 1,01 0,86 1,58
установлена следующая норма: содержание флавоноидов в пересчете на рутин в «Эритрофите» должно быть не менее 1,0%.
Таким образом, для проведения количественного анализа флавоноидов в «Эритрофите» оптимальными являются следующие параметры: экстрагент - 70% спирт этиловый, соотношение сырье:экстрагент - 1:100, кратность экстракции - 1, температура экстракции - 90оС, время экстракции
- 30 мин. Валидационная оценка методики показала, что избранная методика определения флавоноидов в пересчете на рутин в «Эритрофите» воспроизводима, линейна в области концентрации флавоноидов в аликвоте - 0,086-0,648 мг/мл, и относительная ошибка среднего результата не превышает 1,86%.
Таблица б
Метрологические характеристики методики (n = 7, р = 0,95, t(P, f) = 2,447)
Наименование X, % S S X лх Е, % Е, %
Серия 13.03.08. 1,38 0,02000 0,00755 0,01849 1,34 3,54
Серия 16.02.09. 1,65 0,03366 0,01272 0,03112 1,86 4,93
Серия 26.01.10. 1,87 0,03133 0,01184 0,02897 1,54 4,08
ЛИТЕРАТУРА
1. Гармаева Е.Д., Дашинамжилов Ж.Б., Ажунова Т.А., Лубсандоржиева П.Б. Влияние фитосредства «Эритрофит» на стадию альтерации воспалительного процесса // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2009. - Т. 67. №3. - С.316-317.
2. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений.
3. ГОСТ 29046-91. Пряности. Имбирь. Технические условия.
4. ГОСТ 29049-91. Пряности. Корица. Технические условия.
5. Государственная фармакопея СССР: вып. 1. Общие методы анализа. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина,
1987. - 337 с.
6. Государственная фармакопея СССР: вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. МЗ СССР.
- 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1990. - 400 с.
7. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2007. -№2. - С.155-160.
8. Коновалов Д.А., Коновалова О.А., Челомбитько В.А. Биологически активные вещества Achillea millefolium L.s.L. // Растит. ресурсы. - 1990. - Т. 26. Вып. 4. - С.598-608.
9. Круглов Д.С., Ханина М.А., Третьякова О.В. Исследование специфической активности некоторых растительных экстрактов // Успехи современного естествознания.
- 2006. - №5. - С.50-51.
10. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. - 4-е изд. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.
11. Струкова М.П., Федорова Г.А., Шведов Б.Л., Сарычева И.К. Спектрофотометрическое и полярографическое определение витамина К1 в синтетических образцах // Химикофармацевтический журнал. - 1973. - Т. 7. №10. - С.53-55.
12. Azhunova T.A., Lubsandorzhieva P.B., Garmaeva E.D. The influence of a complex plant remedy on the indices of rat peripherial blood in experimental anemia // Traditional medicine: a current situation and perspectives of development: Materials of the III International scientific conference. - Ulan-Ude, 2008. - P.90.
13. Badreldin H.A., Blunden G., Tanira M.O., Nemmar A. Some phytochemical, pharmacological and toxicological properties of ginger (Zingiber officinale Roscoe): A review of recent research //
Food and Chemical Toxicology. - 2008. - Vol. 43. - P.409-420.
14. Benedek B., Kopp B., MelzigM. Achillea millefolium L. s.l. -Is the anti-inflammatory activity mediated by protease inhibition? // J. Ethnopharmacology. - 2007. - Vol. 113. - P312-317.
15. Chrubasik .E., Roufogalis B.D., Wagner H., Chrubasik S.A. A comprehensive review on nettle effect and efficacy profiles, Part I: herba urticae // Phytomedicine. - 2007. - Vol. 14. - P423-435.
16. Sen G., Mandal S., Roy S.S., et al. Therapeutic use of quercetin in the control of infection and anemia associated with visceral leishmaniasis // Free Rad. Biol. & Med. - 2005. - Vol. 8.
- P1257-1264.
17. Tomaino A., Cimino F., Zimbalatti V., et al. Influence of heating on antioxidant activity and the chemical composition of some spice essential oils // Food Chemistry. - 2005. - Vol. 89. -P.549-554.
Информация об авторах: 670047, Улан-Удэ, ул. Сахъяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, тел. 89146300703, e-mail: bpunsic@mail.ru, Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна - с.н.с., к. фарм.н.; Дашинамжилов Жаргал Балдуевич - с.н.с., к.м.н.; Гармаева Евгения Дандаржаповна - аспирант; Ажунова Татьяна Александровна - в.н.с., д.б.н.
© НИКОЛАЕВ С.М., ШАНТАНОВА Л.Н., РАЗУВАЕВА Я.Г., МАНТАТОВ В.В. - 2011 УДК 615.322.03:616.613-003.7
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ФИТОПРОСТ» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПРОСТАТИТЕ
Сергей Матвеевич Николаев1'2, Лариса Николаевна Шантанова12, Янина Геннадьевна Разуваева1,
Владимир Вячеславович Мантатов2 ('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов;
2Бурятский государственный университет, г. Улан-Удэ, ректор - д.п.н., чл.-корр. РАО, проф. С.В. Калмыков)
Резюме. Курсовое введение белым крысам комплексного растительного средства «фитопрост» в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг на фоне экспериментального простатита оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние, характеризующееся уменьшением выраженности деструктивных изменений в предстательной железе, нормализацией показателей периферической крови, снижением содержания лейкоцитов в секрете предстательной железы и ингибированием свободнорадикальных процессов.
Ключевые слова: комплексное растительное средство «Фитопрост», экспериментальный простатит.
PHARMACOTHERAPEUTIC EFFICIENCY OF THE COMPLEX VEGETABLE REMEDY “PHYTOPROST" IN EXPERIMENTAL PROSTATITIS
S.M. Nikolaev12, L.N. Shantanova1-2, Ya.G. Razuvaeva1, V.V Mantatov2 (‘Institute of General and Experimental Biology SD RAS, 2Buryat State University, Ulan-Ude)
Summary. The course administration of the dry extract of the complex vegetable remedy “phytoprost” to white rats in experimental-therapeutic dose of 150 mg/kg on the background of chronic prostatitis has a marked pharmacotherapeutic effect, which is characterized by the decrease of destructive changes in prostate, normalization of peripheric blood indices, decrease of leukocyte content in the secret of the prostate and inhibition of free radical processes.
Key words: complex vegetable remedy “Phytoprost”, experimental prostatitis.
Одной из актуальных проблем современной медицины является профилактика и лечение хронического простатита
- одного из самых распространенных заболеваний, которым по данным отечественных и зарубежных источников страдают от 20 до 35% мужчин в возрасте от 20 до 50 лет. С возрастом частота встречаемости хроническим простатитом увеличивается и может достигать 73 % [3,5-7,13,14].
Высокий уровень заболеваемости хроническим простатитом обусловливает поиск эффективных средств его профилактики. Особый интерес в лечении хронического простатита вызывают препараты растительного происхождения, оказывающие комплексное простатопротекторное действие и не имеющие выраженных побочных эффектов [9].
В соответствии с вышеизложенным разработано новое многокомпонентное растительное средство в форме сухого экстракта, условно названное «Фитопрост», полученное из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.), листьев толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva ursi L.) и ортосифона тычиночного (Orthosiphon stamineus Benth.), цветков ноготков лекарственных (Calendula officinalis L.) и корней солодки уральской (Glycyrrhiza uralensa Fisch.).
Целью исследования явилось определение фармакотера-певтической эффективности «Фитопроста» при экспериментальном простатите.
Материалы и методы
Исследования проведены на 20 половозрелых белых крысах-самцах линии Wistar с исходной массой 200-220 г. Животные содержались в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Экспериментальный простатит вызывали интра-операционной аппликацией ортоксилола на заднюю поверхность предстательной железы предварительно кастрированных животных под барбамиловым наркозом (60 мг/кг) [1]. На следующие сутки после инициации экспериментального простатита, животным опытной группы вводили водный раствор «Фитопроста» в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг в объеме 1 мл на 100 г массы животного 1 раз в день в течение 21 суток. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. У животных интактной группы простатит не вызывали. В контрольной и опытной группе было по 7 животных, в интактной - 6 крыс. Исследования проводили на 7, 14 и 21 сутки после начала введения указанного средства. Для оценки фармакотерапевтической эффективности «Фитопроста» определяли содержание лейкоцитов в крови и СОЭ, содержание лейкоцитов в секрете предстательной железы [4]. Интенсивность процессов свободнорадикаль-
