CC BY
86
Приложение
ПОСТЕРНАЯ СЕССИЯ КОНГРЕССА ГЕМАТОЛОГОВ РОССИИ
Количественная оценка мутации V617F гена JAK2 при хронических миелопролиферативных заболеваниях
А. О. Абдуллаев, О. А. Глинщикова, Е. А. Степанова, А.Л. Меликян, Л. Ю. Колосова, Л. М. Мещерякова,
М.В. Вахрушева, А.Б. Судариков
ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Открытая в 2005 г. точечная мутация 1849G/T гена JAK2 выявляются у 95% пациентов с истинной полици-темией (ИП), у 50% с эссенциальной тромбоцитемией (ЭТ) и идиопатическим миелофиброзом (ИМФ). В 2009 г по инициативе European LeukemiaNet (ELN) с участием 16 исследовательских центров осуществлены первые попытки стандартизации молекулярных методов исследования аллельной нагрузки у больных с +JAK2V617F мутацией.
Материалы и методы. Предложены новые критерии молекулярного ответа на лечение ЭТ и ИП, согласно которым различают три типа молекулярного ответа (полный, частичный и отсутствие). Полный молекулярный ответ - снижение количества клеток с мутацией до недетектируемого уровня. Частичный молекулярный ответ: 1) уменьшение более чем на 50% количества клеток с мутантным аллелем при первоначальном уровне мутации более 50%; 2) уменьшение более чем на 25% количества клеток с мутантным аллелем при первоначальном уровне мутации менее 50%. Отсутствие молекулярного ответа - это любой ответ, не удовлетворяющий критериям частичного молекулярного ответа. Учитывая назревшую клинико-диагностическую необходимость количественной оценки мутации V617F гена JAK2 у наших больных, а также высокую стоимость импортных тест-систем для полимеразной цепной реакции (ПЦР) ("Ipsogen"), мы подобрали олигонуклеотидные праймеры и флюоресцентные пробы для количественной оценки мутации V617F гена JAK2 методом TaqMan ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ).
Результаты и обсуждение. На настоящий момент мы обследовали 244 пациента и у 75 (29 мужчин и 46 женщин). Мутации V617F гена JAK2 обнаружены у 18 из 31 пациентов с ИП (58%), у 31 из 59 (53%) с ИМФ, у 26 из 54 (48%) с ЭТ. Возрастной пик обнаружения мутации V617F гена JAK2 у заболевших находится между 40 и 70 годами с преобладанием заболеваемости у женщин после 60 лет. Более высокая доля аллельной нагрузки (более 80% клеток с мутацией) имели, в основном, больные ИП (п = 5) и ИМФ (п = 7).
Клиническое наблюдение. Пациентка П.С., 53 года обратилась в поликлиническое отделение с жалобами на постоянные головные боли и снижение остроты зрения с 21.11.09. Данные лабораторных исследований. Общий анализ крови: гемоглобин 184 г/л, эр. 6,13 х 1012/л, тр. 861 х 109/л, л. 12 х 109/л, п.я. 3%, с.я. 67%, э. 3%, б. 0%, лимф. 17%, мон. 10%; СОЭ 1 мм/ч. Биохимический анализ крови (10.12.09): общий белок 72 г/л, креатинин 101 мкмоль/л, общий билирубин 16 г/л, лактатдегидрогеназа 435 ЕД/л, железо 21 мкмоль/л. Ультра-
звуковое исследование органов брюшной полости (26.11.09): размер селезенки 136 х 80 мм. Гистологическое исследование костного мозга: деятельный костный мозг значительно преобладает над жировым; миелокариоциты лежат плотно; эри-тропоэз расширен, много молодых форм; количество мегака-риоцитов умеренно увеличено, они расположены поодиночке и группами возле синусов, наряду с клетками обычного вида много гигантских форм, много плеоморфных голо- и безъядерных; выявленные в трепанбиоптате изменения соответствует наблюдаемым при эритремии. Для подтверждения диагноза провели (10.12.09) количественный анализ с помощью ПЦР: копии V617F мутантного гена JAK2 составляют 81% из общего количества копий JAK2. Таким образом, на основании клинической картины заболевания (плеторический синдром, увеличение размера селезенки), двухростковой гиперплазии в гемограмме (повышения концентрации Hb, эритроцитов, тромбоцитов, нейтрофиллеза в лейкоформуле), увеличения эритроидного и мегакариоцитарного ростков, анаплазии мега-кариоцитов, а также положительного молекулярного маркера мутации V617F гена JAK2 (81%) у больной верифицирован диагноз эритремии IIA стадии. В дальнейщем больная получала следующее лечение: 3 сеанса эритроцитафереза (420, 720 и 690 мл) в течение 3 нед, на фоне приема дезагреган-тов. Учитывая сохраняющийся и даже нарастающий тромбо-цитоз (до 950х109/л) больной начали терапию препаратами интерферона-а (роферон по 3 000 000 ЕД 3 раза в день, подкожно). После 6 мес лечения у больной наблюдали полную гематологическую ремиссию (размер селезенки 111 х 71 мм, в анализе крови: Hb 136 г/л, эр. 4,2 х 1012/л, л. 6,3 х 109/л, тр. 336 х 109/л, Ht 45%; СОЭ 5 мм/ч). Для выяснения минимальной остаточной болезни (24.01.11) провели анализ ПЦР-РВ: копии V617F мутантного гена JAK2 составили 7% из общего количества исследованных копии генов. За время терапии (с 10.12.09 по 24.01.11) количество копии V617F мутантного гена JAK2 снизилось с 81 до 7%, что по критериям ELN соответствует частичному молекулярному ответу.
Заключение. Разработанная методика количественного определения V617F мутантного гена JAK2 с помощью ПЦР является высокоспецифичной, чувствительной и удачно дополняет морфологические, цитогенетические и биохимические исследования. Она позволяет более глубоко изучить динамику минимальной остаточной болезни на фоне лечения различными препаратами больных хроническими миелопро-лиферативными заболеваниями и количественно оценить эффективность специфической терапии.
Показатели клеток периферической крови доноров до и после кроводачи
М.Х. Азимова, Э.Г. Гемджян, В.В. Журавлев, А.В. Точенов, Г.И. Козинец ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. В работе представлены результаты мониториро-вания показателей цитометрии периферической крови доноров до и после кроводачи с целью выявления адаптационных механизмов в организме донора в ответ на умеренную кровопотерю.
Материалы и методы. Представлены результаты исследования показателей форменных элементов периферической крови доноров до и после донации, полученные на гематологическом анализаторе Sysmex-XE-2100. Обследовано 45 доноров (5 женщин и 40 мужчин) в возрасте от 25 до 57 лет (медиана возраста 27 лет), из них безвозмездных - 22 (49%),
кадровых - 23 (51%). Объем кроводачи 450 ± 50 мл. Измерения проводили непосредственно до забора крови и сразу после его завершения по следующим показателям: концентрация гемоглобина, число эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, величина гематокрита, эритроцитарные индексы (средние значения): объем эритроцитов, содержание гемоглобина в эритроците, концентрация гемоглобина в эритроците, а также количество ретикулоцитов, содержание фракции незрелых ретикулоцитов, содержание гемоглобина в ретику-лоците, разница содержания гемоглобина в эритроцитах и
29
