CC BY
191
УДК 634.8:581.177
КлонлльноЕ микроразмножение винограда
Л.Г. БРАТКОВА, кандидат биологических наук, зав. отделом
Н.Н. ЦАЦЕНКО, кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник
Ставропольский НИИСХ, ул. Никонова, 49, Михай-ловск, Шпаковский район, Ставропольский край, 356241, Россия
E-mail: sniish@mail.ru
Резюме. Цель исследований - изучить влияние различных питательных сред, а также отдельных их компонентов, на рост и развитие апикальных меристем ценных аборигенных и новых сортов винограда. Работа выполнена в 2010-2013 гг. Объектами послужили 10 сортов винограда разного направления использо -вания (4 столовых, 2 универсальных и 4 технических). Изучали 5 вариантов сред для культивирования апикальных меристем. Дальнейшее культивирование осуществляли на питательных средах изученных раннее. Развитие апикальных меристем испытуемых сортов на этапе ввода в культуру in vitro растений винограда протекало неодинаково. В среднем по опыту доля жизнеспособных меристем составила 35,5%. Самая низкая величина этого показателя выявлена на стандартной питательной среде - 21,6% и модифицированной среде МС11 мод - 23,6%. На остальных средах она была близкой и составляла: 44,1-45,2%. Наибольшая величина этого показателя на среде МС,„ со-
^ ^ 1-2 мод.
четалась с повышенной митотической активностью апекса, что способствовало формированию мощного конгломерата почек и боковых микропобегов. При культивировании меристем особенно ярко проявилась сортовая специфичность к среде МС1>ид, на которой приживаемость варьировала от 0 до 100%. Среди изучаемых генотипов наиболее активными в отношении индуцирования меристем оказались сорта Диамант, Шоколадный и Ли-вадийский черный, жизнеспособность которых составила 55,3, 48,4 и 46,2% соответственно. Самой низкой она была у сорта Первенец Магарача - 12,6%. Сортовые различия проявлялись как на стадии пролиферации, так и на этапе элонгации. При этом коэффициенты размножения отдельного сорта на обоих стадиях были близкими по значениям. Наиболее высокими они оказались у технических сортов Мускат Голодриги (1:7,2 и 1:5,6 соответственно) и Саперави (1:6,8 и 1: 7,5 соответственно). У столовых сортов их величины были значительно ниже. Установленные особенности необходимо учитывать при планировании производства посадочного материала. Ключевые слова: виноград, культура in vitro, клеточные структуры, питательные среды, аминокислоты, цитокинины, ауксины, экспланты, агрегаты.
Для цитирования: Браткова Л.Г., Цаценко Н.Н. Клональное микроразмножение винограда //Достижения науки и техники АПК. 2015. Т.29. №6. С. 49-52.
В последние годы в Российской Федерации отмечается тенденция к стабилизации развития отрасли виноградарства. После длительного периода спада производства сократились темпы уменьшения общей площади промышленных насаждений. Постепенно возрастают валовые сборы. Современное промышленное виноградарство стало более индустриальным и восприимчивым к ускоренному сортовому обновлению. Доминирующие факторы формирования современного облика виноградарства - подбор сортимента, который должен быть представлен широким набором сортов, и закладка виноградников высококачественными сертифицированными саженцами.
К сожалению, внедрение новых высокопродуктивных, устойчивых к болезням сортов винограда затягивается на десятилетия из-за низкой производительности существующих методов размножения.
Значительный экономический ущерб виноградарству постоянно наносят вирусные болезни, которые имеют хронический характер. Больные растения боль-
ше страдают от неблагоприятных условий внешней среды, снижают количество и качество урожая. Ослабленные кусты нередко преждевременно засыхают, вызывая раннюю изреженность насаждений [1].
Использование технологии микроклонального размножения in vitro позволяет сократить сроки внедрения новых сортов в производство, по сравнению с традиционными методами, в 4-5 раз, дает возможность размножать виноград круглый год, в том числе те сорта, которые плохо укореняются обычным способом. Микрочеренкование одиночного побега, полученного от введения в культуру меристемы, позволяет производить генетически стабильный материал без опасности повышения изменчивости и отклонения от сортовых признаков [2]. Кроме того, закладка промышленных виноградников сертифицированными саженцами дает возможность продлить продуктивную эксплуатацию таких насаждений и повысить их урожайность на 30,0-40,0% [3].
Однако применение такого прогрессивного метода отстает от реальных потребностей виноградарства из-за отсутствия массового производства. Это объясняется, в первую очередь, генотипическими особенностями различных сортов, что требует модификации существующих методик.
В основе микроклонального размножения растений очень важен первый этап - введение апикальных меристем в культуру in vitro, который зависит от многих факторов, в том числе от состава питательной среды и генотипа.
С учетом таких обстоятельств возникла необходимость в разработке новых высокоэффективных приемов ускоренного выращивания посадочного материала винограда в культуре in vitro.
Цель исследований - изучение влияния различных питательных сред, а также отдельных их компонентов на рост и развитие апикальных меристем, размножение и укоренение микрочеренков ценных аборигенных и новых сортов винограда с учетом их генотипических особенностей.
Условия, материалы и методы. Исследования проводили в 2010-2013 гг. на базе отдела биотехнологии Ставропольского НИИСХ. В работе использовали донорные растения, выращенные в полевых условиях питомника СПК САК «Большевик» Благодарненского района Ставропольского края. Для исключения ошибок подбор сортов проводили с непосредственным участием агрономов-селекционеров в период созревания ягод. Объектами изучения послужили 10 сортов винограда разного направления использования (4 столовых, 2 универсальных и 4 технических): Августин, Аркадия, Надежда АЗОС, Шоколадный, Гурзуфский розовый, Мускат Голодриги, Диамант, Ливадийский черный, Первенец Магарача и Саперави. Вычленение и посадку эксплантов проводили в ламинарных боксах в стерильных условиях под бинокулярным микроскопом. Всего было высажено 1258 меристем.
Для культивирования апикальных меристем изучали 5 вариантов сред: в качестве контроля использовали питательную среду по прописи П.Я. Голодриги и др. [4] - МС17 Ялта, две - подготовленные в соответствии с прописями [3] -МС1/Крымск и [5] - МС1/жид, а также 2 модифицированные -МС1-1 мод (макро- и микроэлементы, а также хелат железа по Мурасиге и Скугу, мезоинозит 100 мг/л, сахароза 30 г/л, 6-БАП 0,5 мг/л, агар-агара 5 мг/л, рН 5,1) и МС1-2 мод (маточный состав микро- и макросолей по стандартной прописи Мурасиге-Скуга [6] с меньшей концентрацией - по
1 и 50 мл/л соответственно, со сниженным содержанием Fe-хелата - 1/2, агар-агара - 5 мг/л, с введением 0,1 мг/л ИУК и 1,5 мг/л БАП, рН 5,4).
Дальнейшее культивирование микрорастений осуществляли на питательных средах изученных и модифицированных в результате исследований прошлых лет [7]: для пролиферации почек и побегов использовали среду М2 по прописи Н.И. Медведевой [3], но с содержанием агар-агара уменьшенным до 5,0 г/л; элонгацию побегов проводили на среде М3 со 100 мл/л макроэлиментов и 5,0 мл/л микроэлиментов по Мурасиге и Скугу с введением 10,0 мл/л Fe-хелата, 100 мг/л мезоинозита, витаминов B1 и B6 по 5,5 и 5,7 мг/л соответственно, 1,0 -БАП, 0,1 - ИУК, Na2HPO4 - 170,0 мг/л, CaCl2 - 332 мг/л, сахароза - 30,0 г/л, агар-агар - 5,0 г/л; для укоренения микрочеренков использовали среду БН4.
В основу микроклонального размножения растений в культуре in vitro положено регулирование морфогенеза подбором питательной среды для культивирования, а также ряд других факторов, каждый из которых как в отдельности, так и в сочетании с остальными оказывает заметное влияние на развитие меристем in vitro. Кроме того, важную роль играют тип экспланта и генотип растений [2, 3, 4, 8]. Известно, что успех микроклонального размножения зависит от размера эксплантов: чем они меньше, тем выше вероятность получения свободных от вирусов мериклонов, при этом одновременно усложняется процесс морфогенеза [4, 5, 9]. Для повышения эффективности выделения апикальной меристемы и поддержания генетической стабильности мы использовали меристематические экспланты чрезвычайно малых размеров - от 100 до 75 микрон (0,1-0,075 мм). Меристемы вычленяли из глазков побегов вегетирующих кустов, взятых в период активного роста (май - июнь). Стерилизацию черенков выполняли по следующей схеме: промывка в проточной воде 90 мин.; в растворе с детергентом - 15 мин., в проточной воде - 30 мин., в слабом растворе марганцево-кислого калия - 7 мин., в проточной воде - 10 мин.; вымачивание в 2 %-ном растворе р-индолил-3-уксусной кислоты в течение 1,5 сут. Дальнейшие операции по стерилизации осуществляли в ламинарном боксе. Верхушки побегов, помещенные в марлевые узелки, сначала опускали на 45 сек. в стакан с 70 %-ным этанолом (для лучшего смачивания), затем перекладывали в стакан с 7 %-ным раствором гипох-лорида натрия на 8-12 мин., после чего промывали в пяти стаканах с автоклавированной водой, накрытых чашками Петри, по 5 мин. в каждом.
Основными компонентами питательных сред выступают минеральные соли макро- и микроэлементов, сахароза, витамины, ростовые вещества и различные органические добавки [2]. Успешность регенерации также
зависит от наличия регуляторов роста и их комбинаций в питательной среде. Согласно «модели Скуга-Миллера» преобладание ауксинов над цитокининами стимулирует образование корней, обратное соотношение приводит к появлению зачатков побегов [10]. При равном содержании этих веществ наблюдается активный неорганизованный рост клеток. Такая модель приемлема для большого числа растений, однако ее нельзя назвать универсальной, поскольку в зависимости от генотипа, экспланта и других факторов соотношение ауксинов и цитокининов широко варьирует и в каждом случае определяется эмпирически. Важный минеральный компонент среды - хеллат-комплекс как источник ионов двухвалентного железа. Роль железа и механизм его действия до конца неизвестны. Несмотря на это, на основе многолетних опытов установлено, что его присутствие необходимо для регенерации и развития растений. Формирование винограда в культуре апикальной меристемы проходило в 4 этапа: введение в культуру; пролиферация почек и побегов; элонгация побегов перед черенкованием; укоренение микрочеренков. Культивирование растительного материала осуществляли в 25 мл пробирках с 4 мл питательной среды при температуре 2326° С, освещении 2-4 тыс. люкс и 70 %-ной влажности.
результаты и обсуждение. Этап введения в культуру меристем наиболее ответственный в биотехнологическом цикле культивирования. При его реализации необходимо добиться хорошего роста меристемной культуры. В наших исследованиях индуцирование меристем было отмечено у всех изучаемых сортов.
Рост и развитие апикальных меристем у испытуемых сортов винограда протекали неодинаково (табл. 1). На этом этапе в среднем по всем сортам самая низкая жизнеспособность выявлена на твердой питательной среде МСм м°д - 23,6 и в контроле - 21,6%. Средние величины этого показатели у остальных сортов были близки и составили на среде МС1/крымск— ^^ МС1жид. - 44,1, с небольшим увеличением на среде МС1-2 м°д - 45,2%. Степень жизнеспособности меристемной ткани больше зависела от генотипических особенностей сорта, включаемых в среду регуляторов роста и содержания агар-агара. При культивировании апикальных меристем разных сортов с введением 0,1 мг/л ИУК, 1,5 мг/л БАП и уменьшенным содержанием агар-агара наблюдали более высокую митотическую активность апекса, что способствовало формированию мощного конгломерата почек и боковых микропобегов. При этом процесс ризогенеза отмечали у всех сортов, хоть и в разной степени. Среди изучаемых генотипов наиболее активными в плане индуцирования меристем оказались сорта Диамант, Шоколадный и Ли-вадийский черный, жизнеспособность которых составила
Таблица 1. влияние состава питательных сред на жизнеспособность меристем винограда, 2010-2012 гг.
Сорт Посажено, шт. В том числе на питательную среду Всего выжило
МС1/Ялта МС1/Крымс МС жид. МС1-1 мов. МС1-2 мов.
посажено, шт. выжило, % посажено, шт. выжило, % посажено, шт. выжило, % посажено, шт. выжило, % посажено, шт. выжило, % шт. %
Августин 150 30 6,7 24 50,0 30 3,3 30 3,3 36 58,3 37 24,7
Аркадия 104 26 15,4 18 27,8 30 33,3 - - 30 63,3 93 36,5
Надежда АЗОС 130 35 34,3 19 26,3 16 43,8 30 13,3 30 56,7 48 34,6
Шоколадный 225 17 47,1 27 48,2 25 96,0 63 47,6 93 45,2 137 48,4
Гурзуфский розовый 164 78 11,5 25 44,0 10 100 26 11,5 25 44,0 44 26,8
Мускат Голодриги 113 27 18,5 30 56,7 - - 14 42,9 42 42,8 117 40,7
Диамант 103 21 42,9 21 100 20 75,0 20 15,0 21 42,9 81 55,3
Ливадийский черный 52 21 71,4 12 25,0 - - - - 19 31,6 60 46,2
Первенец Магарача 111 30 6,7 30 23,3 10 0,00 20 5,0 21 19,0 119 12,6
Саперави 106 30 6,7 26 34,6 20 20,0 - - 30 33,3 110 23,6
Всего посажено 1258 315 232 161 203 347
Всего прижилось 447 68 21,6 103 44,4 71 44,1 48 23,6 157 45,2 846 35,5
Таблица 2. индукция пролиферации почек и побегов; элонгация и укоренение микропобегов винограда
Сорт Пролиферация почек (М2) Элонгация побегов (М3) Укоренение черенков (БН4)
пересажено агрегатов, шт. выжило, % пересажено почек и побегов, шт. коэффициент размножения выжило, % пересажено черенков, шт. коэффициент размножения укорененных растений, %
Августин 37 100 85 1
Аркадия 93 91,4 153 1
Надежда АЗОС 48 100 144 1
Шоколадный 137 97,1 492 1
Гурзуфский розовый 44 100 66 1
Мускат Голодриги 117 99,2 835 1
Диамант 81 100 154 1
Ливадийский черный 60 93,2 144 1
Первенец Магарача 119 100 377 1
Саперави 110 99,2 618 1
Всего_846 96,1 3068_1
2.3 1,8 3,0
3.7 1,5 7,2 1,9
2.4 3,2
6.8 38
57.6
80.4 83,3 76,8 100
69.7
30.5 52,1
91.8
77.8
73.9
142 307 360 2608 363 3259 305 360 1661 3607 12972
2,9 2,5 3,0 6,9
5.5
5.6 6,5 4,8 4,8 7,5
_5,7_
51.4
36.2
62.5
56.5 95,9 74,8
42.3
58.6 44,0 60,8 61,2
55,3, 48,4 и 46,2% соответственно. Самую низкую величину этого показателя наблюдали у сорта Первенец Магарача - 12,6%. В среднем по опыту доля жизнеспособных меристем составила 35,5%. Прирост тканей визуально был больше у технических сортов Первенец Магарача и Саперави, а также у столового - Надежда АЗОС. При культивировании меристем особенно ярко проявилась сортовая специфичность к среде МС1 жид, на которой приживаемость варьировала от 0 до 100%.
рис. 1. Пролиферация почек и побегов винограда.
Через 6-8 недель разросшиеся меристемные ткани (конгломерат из почек) пересаживали на среду М2 [3] с целью пролиферации почек и побегов. Их приживаемость оказалась высокой у всех сортов - от 91,4 до 100% (табл. 2).
Через 2-3 недели конгломераты из почек и микропобегов (рис. 1) извлекали из пробирок, разделяли на 2-8 частей и пересаживали на среду М3 для элонгации побегов (рис. 2). Способность к размножению винограда на этом этапе была не одинаковой. Самый высокий коэффициент размножения среди изучаемых сортов отмечен у образцов Мускат Голодриги - 7,2, Саперави - 6,8, Шоколадный - 3,7, Первенец Магарача - 3,2 и Надежда АЗОС - 3,0. Слабее других размножались сорта Гурзуфский розовый, Аркадия и Диамант - 1,5; 1,8 и 1,9 соответственно. Число пассажей эксплантов на среде для индукции пролиферации почек и побегов зависит от способности сорта к размножению и от нужного количества посадочного материала, при этом, на наш взгляд, оно не должно превышать трех.
Приживаемость эксплантов на среде М3 была ниже, чем у меристемных почек в предыдущем пассаже на М2, - в среднем 73,9%. При этом средний коэффициент размножения микрочеренков составил 5,7 шт. на одну пробирку. Среди сортов лучшими по величине этого показателя были Саперави, Шоколадный и Диамант - 7,5; 6,9 и 6,5. Средний коэффициент размножения черенков у технических сортов (Мускат Голодриги, Диамант, Ливадийский черный, Первенец Магарача, Саперави) оказался выше, чем у столовых (Августин, Аркадия, Надежда АЗОС, Шоколадный), - 5,8 и 3,8 соответственно. У сорта универсального направления Гурзуфский розовый величина этого показателя была равна 5,5.
Следующий этап микроклонального размножения -укоренение микрочеренков в условиях in vitro. Для достижения ризогенеза микропобеги винограда размером 2-3 см с тремя хорошо выполненными листочками высаживали на обедненную питательную среду БН4.
Наиболее интенсивно процесс протекал у сорта универсального направления Гурзуфский розовый и технического Мускат Голодриги с частотой соответственно - 95,9 и 74,8 % (см. табл. 2). Первые корешки у них появились уже через 10-12 дн., тогда как у остальных сортов их наблюдали на 5-7 дн. позже. Даль-
рис. 2. Развитие побегов винограда на среде для элонгации побегов.
нейшая реализация морфогенетического потенциала проходила активнее у сортов Шоколадный, Ливадийский черный, Саперави, что проявилось в формировании большего числа узлов хорошо развитых корней - 4,2 шт., против среднего показателя 2,1 шт.
Через 7-9 недель после пересадки микрочеренков на среду для укоренения они были готовы для адаптации ex vitro.
выводы. В среднем по опыту доля жизнеспособных апикальных меристем на этапе ввода в культуру in vitro растений винограда составила 35,5%. Самой низкой она была на твердой питательной среде МС1-1 мод - 23,6 и на стандартной - 21,6%. Величины этого показателя на остальных изучавшихся средах были близки (44,1-45,2%). Наилучшие результаты обеспечило использование среды МС1-2 мод, на которой также отмечена более высокая митотическая активность апекса, что способствовало формированию мощного конгломерата почек и боковых микропобегов. При культивировании меристем особенно ярко проявилась сортовая специфичность к среде МС1 жид, на которой приживаемость варьировала от 0 до 100%. Среди изучаемых генотипов наиболее активными в отношении индуцирования меристем оказались сорта Диамант, Шоколадный и Ливадийский черный, жизнеспособность которых в среднем составила 55,3, 48,4 и 46,2% соответственно. Самую низкую величину этого показателя наблюдали у сорта Первенец Магарача - 12,6%. Приживаемость меристемных агрегатов на среде М2 была высокой у всех сортов - от 91,4 до 100%. Средний коэффициент размножения почек и побегов на этой среде со-
ставил 1:3,8, наибольший - у сортов Мускат Голодриги и Саперави (1:7,2 и 1:6,8 соответственно), самый низкий - у Гурзуфского розового, Аркадии и Диаманта (1,5; 1,8 и 1,9 соответственно). Приживаемость эксплантов на среде М3 была ниже, чем в предыдущем пассаже (М2) - в среднем 73,9. При этом средний коэффициент размножения микрочеренков был равен 5,7 шт. на одну пробирку, а лучшими по величине этого показателя оказались Саперави, Шоколадный и Диамант - 7,5; 6,9 и 6,5 соответственно. В целом средний коэффициент размножения черенков у технических сортов (Мускат Голодриги, Диамант, Ливадийский черный, Первенец Магарача, Саперави) был выше, чем у столовых (Августин, Аркадия, Надежда АЗОС, Шоколадный), - 5,8, против 3,8. Лучшие биометрические показатели (прирост побегов, число узлов, количество и длина корней) отмечены у сортов Шоколадный, Ливадийский черный, Саперави. Коэффициент размножения на этапе пролиферации почек и побегов в среднем оказался больше у универсальных сортов винограда, а на этапе черенкования - утехнических сортов.
В целом эффективность микроразмножения растений на стадиях пролиферации и элонгации зависела от генотипа и была обусловлена их разной регенерационной способностью. Одинаково высокий коэффициент размножения на обеих названных стадиях отмечен у технических сортов Мускат Голодриги (1:7,2 и 1:5,6) и Саперави (1:6,8 и 1: 7,5). У столовых сортов он был значительно ниже. При этом коэффициенты размножения отдельного сорта винограда на этих стадиях оказались близки по величине.
Литература.
1. Мулокина Н.А. Вирусные болезни винограда и их влияние на виноградеое растение // Виноградарство i виноробство. 2004. Вып. 41. С. 45-53.
2. Бутенко Р.А. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.
3. Медведева Н.И., Поливара Н.В., ТрошинЛ.П. Методические рекомендации по микроклональному размножению винограда in vitro // Науч. журн. Куб ГАУ. 2010. № 62 (08).
4. Голодрига П.Я., Зленко В.А., Чекмарёв Л.А и др. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда. Ялта: Магарач, 1986. 56 с.
5. Зленко В.А., Трошин Л.П., Левенко Б.А. Методические указания по регенерации растений винограда in vitro в жидкой среде / ВАСХНИЛ, ВНИИВиПП «Магарач». М., 1990. 40 с.
6. Murashige T., Skoog F.A. A revised medium for rapid grofth and bioassadys with tobacco tissue culture // Phus. Plant. 1962. 15. P. 473-497.
7. Куценко А.А., Кулинцев В.В., Браткова Л.Г. и др. Научно-обоснованное получение оздоровленного посадочного материала ценных аборигенных и перспективных сортов винограда с использованием современных биотехнологий: методические рекомендации. Михайловск, 2011. 20 с.
8. Lloyd G., McCown B. Commercially feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia by use of shoot-tip culture // Proc. Int. Plant Prop. Soc. 1981. Vol. 30. P. 421-437.
9. Дорошенко Н.П. Повышение регенерационной способности меристем при оздоровлении винограда от вирусной инфекции // Перспективы внедрения современных биотехнологических разработок для повышения эффективности сельскохозяйственного производства: мат. регион. конференции. Ставрополь, 2000. 72 с.
10. Зленко В.А., Котиков И В., Трошин Л.П. Определение потребности в содержании минеральных элементов в почве у генотипов винограда по особенности растений образовывать корневые волоски in vitro // Сельскохозяйственная биология. 2008. №3. С. 88-95.
CLONAL MICROPROPAGATION OF VINE
L.G. Bratkova, N.N. Cacenko
Stavropol Research linstitute of Agriculture, Nikonova str., 49, Mikhailovsk, Stavropol territory, 356241, Russia Summary. The aim of the research was to study the effect of different nutrient media, as well as their individual components, on growth and development of apical meristem of local and new grape varieties. The work was carried out in 2010-2013. The study subject was 10 grape varieties of different applications (4 table varieties, 2 universal and 4 technical ones). Five mediums were tested for cultivation of apical meristem. Further cultivation was carried out on nutrient media studied early. Development of apical meristem of test varieties at introduction in vitro was different. The fraction of viable meristem was on average 35.5 %. The lowest value of this indicator was identified on the standard solid medium, it was 21.6 %. For other media it was similar: MS 1/Krymsk - 44.4 %, MS 1 liq. - 44.1 %, and it was little bit higher on medium MS 1-2 mod. - 45.2 %. On this medium the mitotic activity of apex was higher, that contributed to the formation of a powerful conglomerate of buds and side shoots. During cultivation of meristem the varietal specificity to the medium MS 1 liq. strongly appeared, the survival rate ranged from 0 to 100 %. Among studied genotypes varieties Diamant, Shokoladny and Livadiisky Cherny were the most successful in induction of meristem. Their viability was 55.3, 48.4 and 46.2 %, correspondingly. The lowest value of this index, 12.6 %, was observed for variety Pervenets Magaracha. Varietal differences were apparent both at the stage of proliferation and elongation. The multiplication factor of the separate variety was similar at both stages. It was the highest for technical varieties Muscat Golodrigi (1:7.2 and 1:5.6) and Saperavi (1:6.8 and 1:7.5). The value of multiplication factor of table varieties was much lower. These special features should be considered when planning the production of planting stock. Keywords: vine, in vitro culture, cell structures, nutrition media, amino acids, cytokinins, auxins, explants, aggregates. Author Details: L.G. Bratkova, Сand. Sc. (Biol.), Head of Division (e-mail: sniish@mail.ru); N.N. Cacenko, Сand. Sc. (Agr.), Leading Researcher
For citation: Bratkova L.G., Cacenko N.N. Clonal micropropagation of vine. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2015. V29. №6. pp. 49-52 (In Russ)
