CC BY
29
С.И. Толмачевг, Л.А. Муковский1, Н.В. Лапина1, Р.И. Глухова1, Ю.А. Хрусталева1
КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОРАЖЕНИЙ ГЛАЗ flHBEH3HH[b,f] 1,4 ОКСАЗЕПИНОМ
1ФГУН Институт токсикологии ФМБА России, г. Санкт-Петербург
2 111 Главный государственный центр судебно-медицинских и криминалистических экспертиз Министерства обороны Российской Федерации, г. Москва
S.l. Tolmachyev2, L.A. Mukovskyl, N.V. Lapinai, R.I. Gluchoval, J.A. Kchrustaleval
THE CLINICAL-MORPHOLOGICAL CHARACTERISTIC OF DEFEATS OF EYES
DIBENZ[b,f]1,4 OXAZEPINE
1 Federal State Scientific Institution Institute of Toxicology, FMBA of Russia, St. Petersburg
2111 The Main Center of Forensic and Crininalistic Examination of the Ministry of Defense of the
Russian Federation, Moscow
Ключевые слова: дибенз(Ьф)- 1,4-оксазепин, газовое оружие самообороны, морфология. Keywords: dibenz(bj)- 1,4-oxazepine, gas-weapons of self-defense, morphology.
Цель: клинико-морфологическая оценка поражений глаз лабораторных животных дибенз[Ьф]~11,4] оксазепином.
Материалы и методы: Экспериментальные исследования проведены на половозрелых кроликах породы «Шиншилла» обоего пола, массой 2,4—3,3. кг. Входе эксперимента проводили инстилляцию 0,1 % раствора дибенз [Ь/]-[ 1,4] оксазепина (С Я) в этаноле в конъюнктивальную полость глаз животных. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 суток. Оценку раздражающего действия ирританта на оболочки глаза экспериментальных животных проводили в соответствии с «Методическими указаниями по медико-биологической оценке безопасности средств самообороны» (1998 г).
Микроскопическому исследованию подлежали энуклеированные глаза экспериментальных животных через 7 и 14 суток
Результаты: по результатам клинических наблюдений за животными установлено, что выраженность симптомов раздражения в группах в первые сутки практически не различается. Интенсивность симптомов поражения и их продолжительность зависит от количества вещества, содержащегося в инсталлируемом растворе.
Наибольшие различия в морфологической картине выявлены на 14 сутки в группе животных, получивших инстилляции 0.2 мг С К
Выводы: дибенз[Ьф]-1,4-оксазепин обладает выраженным раздражающим действием на слизистые оболочки глаз. Интенсивность и продолжительность симптомов поражения, а также гистологическая картина напрямую зависят от количества раздражающего агента, попавшего в конъюнктивальную полость.
Purpose: Estimation of a clinical-morphological picture of defeat of eyes.
Material and methods: Researches are carried out on rabbits of breed «Chinchilla» with initial weight 3000— 3400mg. As object of research was 0,1 % solution dibenz lbf]-1,4-oxazcpine (CR). Estimation of irritating action CR on conjunctiva of an eye of experimental animals carried out according to «Methodical instructions for medical and biologic estimation of safety self-defense means». Morphological researches were 7 and 14 days. Investigated cuts conjunctiva, corneas and crystalline lens. The period of the researches was 14 days. Results: By results ofclinical supervision over animals it is established, that expressiveness of symptoms of irritation in groups in the first day practically does not differ. Intensity of symptoms of defeat and their duration depends on quantity of the substance contained in a solution.
The greatest distinctions in a morphological picture are revealedfor 14 day in group of the animals who have received 0.2 mg CR.
Conclusion: CR possesses the expressed irritating action on mucous membranes of eyes. Intensity and duration of symptoms of defeat, and also a histological picture directly depend on quantity of the irritating agent who has got on eyes.
К слезоточивым или раздражающим веществам относятся химические соединения, называемые ирритантами, которые в незначительных концентрациях вызывают у человека временную (30-60 мин) потерю работоспособности (стоп - эффект), вследствие раздражения чувствительных рецепторов слизистых оболочек глаз, верхних дыхательных путей, а иногда и кожных покровов.
Для снаряжения средств самообороны Министерством здравоохранения РФ разрешено пять веществ: хлорацетофенон (ХАФ, СТ'О, орто- хлорбензилиденмалонодинитрил (СБ), дибенз [6,/|-[1,4] оксазепин (СЯ), морфо- лид пеларгоновой кислоты (МПК) и олеорезин капсикум (ОС) [1].
С увеличением числа пострадавших от воздействия слезоточивых или раздражающих веществ, входящих в состав композиции газового оружия, были проведены экспериментальные исследования с целью оценки поражающего эффекта ирритан- тов [2, 3, 4, 5]. Выполненные ранее исследования по изучению дибенз \Ь/'\-[1,4] оксазепина (СЯ) показали, что ирритант длительно сохраняется в окружающей среде, не теряя при этом своей биологической активности [6, 7]. Вместе с тем, до настоящего времени в специальной литературе отсутствуют комплексные исследования
по клинико-морфологической оценке поражений СЯ.
Цель настоящего исследования — оценка клинико-морфологической картины поражений глаз лабораторных животных СЯ.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования
проведены на половозрелых кроликах породы «Шиншилла» обоего пола, массой 2,4—3,3 кг. В ходе эксперимента проводили инстилляцию 0,1% раствора СЯ в этаноле в конъюнктивальную полость глаз животных в объеме 0,1 и 0,2 мл, что составило 0,1 и 0,2 мг СЯ соответственно. При офтальмологическом осмотре оценивали следующие показатели: блефароспазм, слезотечение, гиперемию и отек конъюнктивы, роговичный и зрачковые рефлексы, светобоязнь. Наличие или отсутствие поражений роговицы определяли по результатам флуоресцеино- вой пробы. Оценку степени выраженности симптомов
раздражающего действия проводили в соответствии с Методическими указаниями «Медико-биологические и химико-
аналитические испытания безопасности и эффективности газового оружия самообороны» [8].
Микроскопическому исследованию
подлежали энуклеированные глаза экспериментальных животных через 7 и 14 суток, которые фиксировали в 10% нейтральном
растворе формалина. Затем для гистологического исследования глаза обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заключали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивали квасцовым гематоксилином Эрлиха и эозином. При морфологическом исследовании оценивали: характер повреждения и признаки регенерации эпителия, расстройства кровообращения, выраженность, глубину и распространенность воспалительной инфильтрации, наличие и характер грануляционной ткани.
Результаты исследований
Животные были разделены на две группы: I группа - 0,1 мг СЯ; II группа —
0. 2 мг СЯ.
Объективные данные по выраженности признаков поражения глаз в группах экспериментальных животных, выявленные при офтальмологическом осмотре в различные сроки представлены в Табл. 1.
Сразу после инстилляции исследуемых растворов в глаза экспериментальных животных отмечали блефароспазм продолжительностью 30 секунд (I группа) и
60 секунд (II группа). Затем в течение первых двух часов в обеих группах наблюдали обильное слезотечение, гиперемию конъюнктивы (рис.1), выраженный отек (хе- моз), серозное отделяемое. Роговица у 25% животных I группы и 75% II группы покрылась фибриновой пленкой, легко отделяющейся от подлежащих тканей. Роговичный и зрачковый рефлексы не изменены.
При осмотре животных через 24 часа и в последующие двое суток у 50% животных II группы выявлена положительная флуо-ресцеиновая проба (Рис. 2), что указывает на повреждение роговицы (эрозии, язвы).
У животных I группы стихание реактивных явлений регистрировали на 5 сутки. Полное исчезновение реактивных явлений отмечено к 7 суткам.
У кроликов II группы реактивные явления со стороны конъюнктивы глаз сохранялись до 14 суток.
Таким образом, по результатам клинических наблюдений за животными в течение 14 суток установлено, что выраженность симптомов раздражения в группах в первые сутки практически не различается.
Таблица 1
Выраженность признаков поражения глаз у кроликов при инсталляции раствора дибенз
[Ь,/1-[1,4] оксазепина, (М±т, я=4)
Показатели / Сроки наблюдения Г иперемия конъюнктивы (баллы) Слезотечение (квадратов) Отек (баллы)
Г руппа животных Г руппа животных Группа животных
I II I II I II
5 мин 2,5+0,2 2,7+0,2 9,5+0,2 10,0+0,0 2,0+0,2 2,5±0,2
10 мин 2,7±0,2 2,7+0,2 10,5±0,5 11,0+0,0 2,0+0,2 2,7±0,2
30 мин 3,0±0,0 3,0+0,0 11,0±0,0 11,0+0,0 3,0+0,2 3,0±0,2
60 мин 3,0±0,0 3,0±0,0 8,5±0,5 9,0+0,0 3,0+0,2 3,0±0,2
120 мин 2,7+0,2 3,0±0,0 8,5±0,0 9,0+0,0 1 3,0±0,2 3,0±0,2
1 сутки 2,5+0,2 3,0+0,0 3,0+0,0 3,3±0,14 2,0±0,2 2,5±0,2
2 сутки 2,2±0,2 2,7±0,2 2,3+0,14 2,5±0,14 2,0+0,2 2,0+0,2
3 сутки 2,0±0,0 2,7+0,2 2,0±0,14 2,3+0,14 1,0±0,2 1,8+0,2
7 сутки 1,0±0,2 2,0±0,0 1,5+0,0 2,0+0,0 1,0±0,2 1,8±0,2
14 сутки 0 0 1,5±0,0 2,0+0,0 0 0
Рис. 1. Внешний вид глаза кролика через 30минут после инсти,ыяции 0.2 мг С Я. Выраженная гиперемия и отек конъюнктивы, ыезотечение.
Исключение составляет длительность бле-фароспазма. Вдальнейшем, интенсивность симптомов поражения и их продолжительность зависели от количества вещества, содержащегося в инсталлируемом растворе.
Для более детальной оценки поражающего эффекта СЯ в отставленные сроки была исследована гистологическая картина препаратов глаз.
Через 7 суток после инстилляции исследуемого раствора, была оценена гистологическая картина поражений, вызванных ирритантом СЯ в количестве 0,1 мг. Обращало на себя внимание незначительное количество некротизированного эпителия конъюнктивы глазного яблока, пласты эпителия имели незначительное количество вакуолизированных клеток, имелся выраженный отек эпителия, клетки гиперхромны, базолоидны. фиксировалось незначительное количество ней-трофилов в толще эпителия; регенераторные процессы и грануляционная ткань не выявлены; регистрировалось выраженное расширение кровеносных сосудов, пери- васкулярно — единичные нейтрофилы и лимфоциты; наблюдалась выраженная клеточность эпителия хрусталика (Рис.З).
Рис. 2. Внешний вид ааза кратка через 24 часа поае инспиа-,1яи,ии 0.2мг СЯ. Выраженная гиперемия и отек конъюнктивы флуоресцеиновая проба паюжипшъная (эрозия роговицы/.
Морфологическая картина после воздействия 0,2 мг вещества через 7 суток наблюдения была несколько отличной: незначительное количество некротизированного эпителия бульбарной конъюнктивы, клетки эпителия гиперхромны, уплощены, отмечается выраженная базолоидность их; зафиксировано незначительное количество нейтрофилов в эпителиальной оболочке; роговица с незначительным разволокне- нием
соединительной ткани; наблюдалась умеренная вакуолизация цитоплазмы клеток
эпителиальной оболочки хрусталика.
На 14 сутки у животных 1 группы микроскопическая картина изменений глаз была следующей: клетки эпителия гиперхромны, уплощены, некроз и дистрофические изменения не отмечаются; ткань роговицы нормального строения, незначительно утолщена, сосуды кровена- полненны; эпителий хрусталика гиперх- ромный. выражено базолоиден, определяется небольшое количество вакуолей в цитоплазме эпителиальных клеток.
Воздействие 0,2 мг С Я привело к отеку эпителия роговицы (увеличение межэпителиальных пространств), вакуолизации, некроза эпителия не наблюдается (рис.5);
• Гистологический препарат елазного яблока кроли-. " сутки после инсталляции 0.1 мг СР. Отек эпите-расширение кровеносных сосудов, отсутствие грану- ной ткани. Окраска гематоксилин и эозин, х400.
Рис. 4. Гчстаюгический препарат бульбарной конъюнктивы на 7сутки после инстилляции 0.2мг СИ Некроз эпителия. Окраска гематоксилин и эозин. х400.
Рис. 5. Гистомкичеасий препарат роговицы г/юза кролика на 14 сутки после инстилляции 0.2мг СИ. Отек эпителия роговицы (увеличение межэпитыиальных пространств). Окраска гематоксилин и эозин, х400.
I с клере зафиксированы регенераторные -роцессы, выраженная васкуляризация, 1ысокая клеточность за счет присутствия ; нбробластов; отмечается незначительное количество сегментоядерных нейтрофи- юв.
соединительнотканный матрикс оча- гово разволокнен; эпителий хрусталика умеренно полиморфен, незначительно ва- « олизирован, с тенденций к увеличению годности (регенераторные изменения).
Гистологические исследования, проведенные на 14 сутки, выявили более выраженные структурные нарушения во II группе, в первую очередь касающиеся структуры роговицы. Так же как и при оценке клинической картины, наблюдавшиеся гистологические изменения позволяют зафиксировать наибольший поражающий эффект от воздействия вещества СЯ в количестве 0,2 мг, по сравнению с 0,1 мг.
Выводы
Таким образом, дибенз [Ь, /|-1,4- оксазепин обладает выраженным раздражающим действием на слизистые оболочки глаз. Несмотря на то, что клиническая картина раздражающего действия в первые сутки практически не отличалась в обеих группах, в дальнейшем интенсивность и
продолжительность симптомов поражения зависела от количества вещества, попавшего на слизистые оболочки глаз. Это необходимо учитывать врачам клиницистам, токсикологам, судебно- медицинским экспертам при оценке симптомов поражения глаз при воздействии ирританта дибенз [Ь,Г]-[ 1,4] оксазепина.
Литература
1. Колкутин В.В., Исаков В.Д., Бабаханян Л.А., Муковский Л.А. и др. Судебно- медицинская диагностика поражений глаз из газового оружия. Методические рекомендации. МО РФ,- Москва. - 2001. — 62 с.
2. Бинат Г.Н. Судебно-медицинская характеристика поражений средствами самообороны в аэрозольных упаковках, содержащих капсаиценоиды. Дис. канд. мед. наук. — СПб, 1999. — 140 с.
3. Лапина Н.В. Токсикологическая характеристика морфолида пеларгоновой кислоты. Дис. канд. мед. наук.-. СПб., 2006 — 112 с.
4. Панчишена В.М. Особенности поражений глаз аэрозольным газовым оружием и их лечение: Дис. канд. мед. наук. — СПб., 2007134 с.
5. Хрусталева Ю.А. Судебно-медицинская характеристика поражений, причиняемых из средства самообороны в аэрозольной упаковке «Черемуха 04»: Дис. канд. мед. наук. — СПб., 1998. — 150 с.
6. Лапина Н.В., Муковский Л.А., Глухова Р.И., Бабаина Е.В., Толмачёв С.П., Хру- сталёва Ю.А. Сохраняемость дибензок- сазепина (СЯ) на объектах окружающей среды // 3-й съезд токсикологов России 2-5 декабря 2008 г. Тезисы докладов. Под редакцией акад. РАМН Г.Г. Онищенко и член-корр. РАМН Б.А. Курляндского.- Москва: 2008.-С. 171173.
7. Лапина Н.В., Муковский Л.А., Глухова Р.И., Толмачёв С.И., Хрусталёва Ю.А. Оценка биологической активности ди-бензоксазепина (С К)// 3-й съезд токсикологов России 2-5 декабря 2008 г. Тезисы докладов. Под редакцией акад. РАМН Г.Г. Онищенко и член-корр. РАМН Б.А. Курляндского.- Москва: 2008.-С.170-171.
8. Медико-биологические и химико-аналитические испытания безопасности и эффективности газового оружия самообороны. Методические указания. -Утверждены первым Зам. Министра здравоохранения РФ 23.12. 1998 г. - М. -71 с.
