CC BY
18
Классический вариант анапластической крупноклеточной лимфомы, иммуно-морфологическое исследование 48 случаев
Ш. Ш. Османов
Российский Онкологический Научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, г. Москва
Первичная системная анапластическая крупноклеточная лимфома составляет около 5% опухолей лимфоидной природы и наблюдается во всех возрастных группах, чаще у молодых людей и детей (4). Наряду с периферической лим-фоаденопатией, не редка экстронодальная локализация опухоли (кожа, мягкие ткани). Как следует из названия, характерным для этой лим-фомы являются крупные анаплазированные клетки. Однако, благодаря выраженному полиморфизму клеточных элементов, наличию реактивного клеточного компонента морфологический субстрат анапластической крупноклеточной лимфомы крайне гетерогенен. В последнее десятилетие появились сообщения о разнообразных морфологических проявлениях этой лимфо-мы: классический вариант (6), саркоматоидный (3), ходжкиноподобный (5), лимфогистиоцитарный (7, 8) и другие. В то же время, четкие морфологические критерии такой градации отсутствуют.
Диагностика анапластической крупноклеточной лимфомы осложняется тем, что при частичном поражении лимфоузлов опухолевые клетки локализуются в синусах, что вызывает необходимость дифференциальной диагностики с метастазами, прежде всего крупноклеточного рака и меланомы (2, 1).
Наличие в той или иной степени выраженного реактивного компонента наряду с возможным присутствием многоядерных опухолевых клеток, в частности, напоминающих клетки Рид-Штернберга, требует разграничения анапластичес-кой крупноклеточной лимфомы и лимфомы Ходж-кина. Перспективным в этом плане представляется иммуногистохимическое исследование протеина р80, возникающего в результате хромосомной аберрации 1(2,5), (р23, q35). Имеются сообщения о высоком уровне экспрессии этого белка в клетках при анапластической крупноклеточной лимфоме и отсутствие экспрессии в опухолевых элементах при лимфоме Ходжкина (6).
Детальная морфофункциональная характеристика анапластической крупноклеточной лим-фомы и дифференциальная диагностика с лим-фомой Ходжкина, гистиоцитарной саркомой, метастазами крупноклеточных опухолей актуальна в связи с различным клиническим течением, разной лечебной тактикой и прогнозом опухоле-
вых заболеваний. Точный морфологический диагноз имеет большое значение для клинициста, определяющего лечебную тактику.
Целью настоящего исследования является разработка на основе светового и иммунгисто-химического метода исследований морфо-функциональных критериев диагностики классического варианта анапластической крупноклеточной лимфомы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Работа выполнена на текущем биопсийном, операционном и архивном материале РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН за период с 1990 по 2002 годы. В данную работу было включено 48 наблюдений классического варианта анапластической крупноклеточной лимфомы.
Классический вариант АКЛ был диагностирован на материале 39 лимфатических узлов, 3 случаев кожи, 3 фрагментов мягких тканей, в 3 случаях исследовали внутренные органы:: желудок, яичко и щитовидную железу.
Материал обрабатывали с применением гистологического и иммуногистохимического методов.
Гистологическое исследование.
На светооптическом уровне определяли характер роста (диффузный, нодулярный, дискретный, синусный), цитологические признаки (размер и форма опухолевых клеток) и реактивный компонент (гистиоциты,I, плазмоциты/, мелкие лимфоциты). Фигуры! митозов подсчитывали в 10 случайных полях зрения микроскопа при увеличении 400 (п.з.м.) в срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Митотическую активность оценивали с указанием медианы,, среднего значения и стандартного отклонения.
Аля фенотипирования материала было проведено иммуногистохимическое исследование по стандартному методу. В иммуногистохимичес-ком исследовании использовали широкую панель первичных антител. Аля определения Т- антигенной структуры: - CD3, CD4, CD7, CD8 серия ICO (Медбиоспектр, Россия), CD45RO (Novocastra, Великобритания), для В антигенной структуры -CD19, CD20 ("Сорбент", Россия), CD79а (Novocastra, Великобритания). Аля дифференциальной диагностики были использованы общий лейкоцитарный анти-ген^45 (DAKO, USA), CD30 (Novocastra, Великобритания), p80 (Anaplastic Lymphoma Kinase: NCL-ALK, Novocastra, Великобритания).
Все данные заносились в разработанный нами кодификатор и проводился статистический анализ. Аля сравнительной оценки различных групп использовали параметрические (Т-тест, критерии Стюдента) и непараметрические (медианный
Таблица. Классический вариант АКЛ. Распределение больных по возрасту и полу
Возраст, годы Мужчины Женщины Абс. в%
1-10 8 1 9(18,8)
11-20 13 7 20(41,7)
21-30 3 2 5(10,4)
31-40 2 7 9(18,6)
41-50 4 - 4 (8,3)
51-60 - - -
61-70 - 1 1 (2,1)
Всего 30 (62,5) 18(37,5) 48(100)
тест, Манна-Уитни, Крускала-Уоллиса) тесты. Достоверным считали различия при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Этот вариант составил самую большую группу - 48 (69%) больных. Возраст больных варьировал от 1,5 мес. до 70 лет (Таблица). Медиана и средний возраст больных, входящих в состав классического варианта АКЛ, составил 17,5 и 21,8±14,6 лет, соответственно. При этом варианте преобладали лица мужского пола (30 человек), количество лица женского пола было 18 (соотношение 1,6:1). 21 больной (43,8%) были в детском возрасте.
При этом варианте субстрат опухоли преимущественно состоял из крупных опухолевых клеток, величина которых в несколько раз превышала размер малого лимфоцита (приблизительно в 5 и более раз).
В 30 наблюдениях (76,9%) строение лимфатических узлов полностью было стёрто за счет инфильтрата из опухолевых клеток. Только в 9 случаях (23,1%) поражение лимфатических узлов носило частичный характер, отдельные фолликулы и паракортикальная зона была сохранена.
Рост опухолевых клеток в 30 случаях (76,9%) был диффузным с формированием широких полей. Из них в 16 наблюдениях (53,3%) опухолевые клетки также определялись в синусах лимфатических узлов.
В 6 наблюдениях (15,4%) опухолевые клетки преимущественно располагались дискретно. Из них в 2 случаях наблюдали частичное сохранение строения лимфатических узлов. Также была обнаружена инфильтрация опухолевыми клетками лимфатических фолликулов.
Изолированный внутрисинусный рост наблюдали в 3 случаях (7,7%). Опухолевые клетки находились в краевых, промежуточных и мозговых синусах. Синусы были расширены за счет опухолевого инфильтрата. При этом рисунок строения лимфатических узлов сохранялся. Расширенные синусы сдавливали строму лимфатического узла.
В 3 наблюдениях опухоль поражала кожу и лимфатические узлы (первично-системная АКЛ). Из них в 2 случаях наблюдался эпидермотропизм опухолевых клеток, в 3 - эпидермис был инфильтрирован реактивными клетками. При поражении мягких тканей опухолевые клетки также располагались диффузно. В трех случаях опухолевые разрастания наблюдались в следующих органах: в
яичке, щитовидной железе и желудке. Опухолевые клетки располагались диффузно, сдавливая железистые структуры, вызывая их атрофию.
Опухолевые клетки классического варианта АКЛ в 29 наблюдениях (60,4%) были в 5-6 раз крупнее малого лимфоцита.
В 17 случаях (35,4%) размеры опухолевых клеток варьировали: наблюдались крупные, средние, а также мелкие клетки. Количество крупных клеток преобладало. Почти во всех наблюдениях в незначительном количестве встречались гигантские клетки с широким ободком цитоплазмы. Эти клетки имели одно или несколько крупных, уродливых ядер с выраженными ядрышками. Размер гигантских клеток в несколько раз превышал размеры крупных опухолевых клеток.
Ядра опухолевых клеток в основном были крупные, располагались, как правило, в центре. В некоторых клетках вблизи ядра имелось просветление, которое соответствовало месту расположения аппарата Гольджи.
Во всех наблюдениях отмечался выраженный полиморфизм ядер. Последние были подковообразными, бобовидными, многолопастными, почко-образными, изрезанными и т.д. Опухолевый инфильтрат в 42 наблюдениях (87,5%) преимущественно был представлен одноядерными опухолевыми клетками. Среди них в небольшом количестве встречались многоядерные опухолевые клетки.
Ядерная мембрана в основном была утолщена и четко очерчена. Хроматин ядер был конденсированным и часто располагался преимущественно у ядерной мембраны, благодаря чему ядра выглядели светлыми. Ядра в основном содержали одно или несколько небольших ядрышек.
Ободок цитоплазмы опухолевых клеток был широким. При окраске гемотоксиллином и эозином цитоплазма опухолевых клеток в 14 наблюдениях (29,2%) была амфофильной, в 12 случаях (25,0%) цитоплазма выглядела оптически пустой. В 14 наблюдениях (29,3%) цитоплазма опухолевых клеток интенсивно окрашивалась эозином. Только в 8 случаях (16,7%) цитоплазма имела ба-зофильную окраску.
Митотическая активность имела широкий диапазон, от 10 до 128 фигур деления, среднее количество составило 49,1±32,1, медиана - 44,5 деления на 10 п.з.м. Эти цифры были выше в группе больных до 20 лет.
Реактивный компонент классического вари-
анта АКЛ чаще всего состоял из мелких лимфо-идных, гистиоцитарных (макрофагальных), плазматических клеток. Редко встречались эозино-филы, нейтрофилы.
Иммунофенотипирование.
В 37 случаях классического варианта АКЛ было проведено ИГХ исследование. Из них в 25 случаях (67,7%) на мембране опухолевых клеток экспресси-ровался ОЛА (CD45). В 17 случаях (46,0%) на мембране опухолевых клеток присутствовали Т-клеточные антигены ^3, CD4, CD8, CD45RO). Во всех случаях В-клеточные антигены (CD20, CD19, CD79а) отсутствовали на опухолевых клетках.
Таким образом, в 20 наблюдениях (54,0%) опухолевые клетки не могли быть отнесены ни к Т-клеточному, ни к В-клеточному фенотипу. Мы рассматривали их как клетки с нулевым фенотипом. Во всех 37 случаях (100%) в опухолевых клетках была выявлена цитоплазматическая экспрессия CD30 (КИ). Во всех случаях классического варианта АКЛ (48 наблюдений) ставили ИГХ реакцию с антителами к р80. В 28 наблюдениях (58,3%) ИГХ реакция была положительная. В 20 случаях (41,7%) опухолевые клетки не экспрессировали антиген р80.
Итак, при анализе результатов ИГХ реакции на антиген р80, в случаях классического варианта АКЛ были выявлены две группы: р80-позитив-ная и р80-негативная. При сравнительном анализе этих двух групп оказалось, что они отличаются по ряду признаков. Так в р80-позитивной группе (28 наблюдений) строма опухоли в основном (82,2%) была нежная, без признаков склероза. В 3 наблюдениях (10,7%) отмечался слабо выраженный склероз - тонкие коллагено-вые волокна располагались среди опухолевых клеток. Только в 2 случаях (7,1%) наблюдали грубый фиброз в строме опухоли.
Напротив, в р80-негативной группе (20 случаев) в 10 наблюдениях (50%) в строме опухоли имелись очаги грубого фиброза вокруг сосудов и опухолевых клеток. В 3 случаях (15%) из 20 наблюдений р80-негативной группы разрастания коллагеновых волокон былы выражены слабо, а в 7 (35%) - не отмечены. В р80-позитивной группе в 22 случаях (78,6%) ядра опухолевых клеток имели небольшие ядрышки, в 6 наблюдениях (21,%) в ядрах опухолевых клеток были отмечены крупные ядрышки.
В р80-негативной группе (20 наблюдений) ядра опухолевых клеток в 11 случаях (55%) имели одно или несколько крупных ядрышек. В 9 наблюдениях (45%) ядрышки были мелкими.
В р80-позитивной группе митотическая активность была высокая и варьировала в широком диапазоне, от 35 до 128 фигур деления. Медиана и среднее количество фигур митотического деления составили 59,0 и 68,7±26,5, соответственно. Диапазон митотической активности в р80-негативной группе колебался от 10 до 66 фигур деления. Медиана и среднее количество митозов составили 16,0
и 21,6±14,5 деления, соответственно.
Экспрессия антигена p80 была более характерна для больных классического варианта АКЛ детского и молодого возраста. Медиана возраста больных составила 15,0. У этих же больных наблюдали высокую митотическую активность в опухоли. Медиана возраста больных при р80-негативных наблюдениях классического варианта АКЛ составила 25,5 лет.
Заключение: Несмотря на широкий диапазон возраста (от 1,5 месяцев до 70 лет), медиана возраста больных АКЛ была невысокая 17,5 лет. В этой группе 21 больной (43,8%) был в детском возрасте.
Установлено, что для классического варианта АКЛ характерны крупные опухолевые клетки с полиморфными ядрами.
Выявлено, что использование иммуногисто-химического маркера р80 в дифференциальной диагностике АКЛ значительно повышает достоверность диагноза.
Установлены иммуноморфологические различия между р80-позитивной и р80-негативной группами классического варианта АКЛ. В р80-позитивной группе достоверно ниже (p<0,05) медиана возраста больных, достоверно выше среднее количество фигур митозов (p<0,001).
ЛИТЕРАТУРА
1.Павловская А.И., Пробатова Н.А., Смирнова Е.А, с соавт. Морфологическая проявления крупноклеточной анаплазированной Ki-1 (CD30)-позитивной лимфомы у детей. - Архив патологии, 2000, N.5, с.34-39; 2.Пробатова Н.А., Тупицын Н.Н., Флейшман Е.Ф. Основные принципы и диагностические критерии "Пересмотра Европейско-Амерканской классификации лимфоидных опухолей". - Архив патологии, 1997, N.4, с.65-77; 3.Chan JK, Buchanan R., Fletcher C. Sarcomatoid variant of anaplastic large cell lymphoma. - Am J Surg Pathol., 1990, v.14, p.983; 4.Harris N.L., Jaffe E.S., Diebold J. et al. Conference Report: The World Health Organization classification of neo-plastic diseases of the haemotopoietic and lymphoid tissues: report of the Clinical Advisory Committee Meeting, Airlie House. - J Clin Oncol, 1997, v.17, p.3835-3849; 5.Kinney M.C., Collins R.D., Greer J.P. et al. Small-cell-predominant variant of primary Ki-1 (CD30)+ T-cell lymphoma. - Am J Surg Pathol., 1993, v.17, p.859-68; 6. Nakamura S., Takagi N., Kojima M. et al. Clinicopathologic study of large cell anaplastic lymphoma (Ki-1-positive large cell lymphoma) among Japanese. - Cancer, 1991, v.68, p.118; 7. Pileri S., Falini B., Delsol G. et al. Limphohistiocytic T-cell lymphoma (anaplastic large cell lymphoma CD30+/Ki-1+ with a high content of reactive histiocytes). - Histopathology, 1990, v.16, p.383-91; 8. Pileri S.A, Pulford K, Mori S, et al. Frequent Expression of the NPM-ALK Chimeric Fusion Protein in Anaplastic Large-Cell Lymphoma, Lympho-Histiocytic Type. - Am. J. Pathol, 1997, v.150, p.1207-1211.
SUMMARY
The common anaplastic large cell lymphoma, immunomorfological study in 48 cases Sh.Osmanov
We evaluated 48 cases of common large cell anaplastic lymphoma using morphological and immunological methods. Cells of this lymphoma are large and polymorphic. In 58,3% cases lymphoma cells are p80-positive, which is typical for translocation of NPM-ALK gene.
Поступила 13.05.2003
