CC BY
266
ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ
УДК 66.094.943
О. Н. Григорьева, М. В. Харина
КИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗОСОДЕРЖАЩЕГО СЫРЬЯ
В ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЭТАНОЛА
Ключевые слова: лигноцеллюлоза, кислотный гидролиз, биоэтанол, моносахариды, растительные отходы сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности.
Биоэтанол является одним из перспективных направлений на рынке топлива. В настоящее время он производится из веществ, содержащих сахара и крахмал, но можно ожидать, что лигноцеллюлоза станет основным сырьем для производства этанола в будущем. Для преобразования лигноцеллюлозы в этанол в параллельно разрабатываются две технологии: на основе кислотного и ферментативного гидролиза. Данная статья посвящена обзору достижений в области кислотного гидролиза лигноцеллюлозы с целью получения биоэтанола.
Keywords: lignocellulose, acid hydrolysis, bioethanol, monosaccharides, agricultural and industrial wastes.
Bioethanol is one of the upcoming trends at the market of biofuels. Nowadays bioethanol is carried outfrom substances containing sugar and starch, but we can expect that lignocelluloses will be main raw material for ethanol production in the future. Two technologies: based on acid and enzymatic hydrolysis for convertion of lignocelluloses into ethanol are developing at the same time now. This article dedicated to review of achievements in field of acid hydrolysis for bioeth-anol production.
Введение
Этанол в настоящее время является важным продуктом на топливном рынке. Его продажи выросли с миллиарда литров в год в 1975 году до более чем 39 млрд литров в 2006 году и, как ожидается, достигнут 100 млрд литров в 2016 году [1]. Менее 4% этанола получают синтетическим методом из нефти, в то время как остальную часть получают путем ферментации биоресурсов. Этанол в настоящее время производится из двух основных групп сырья: сахаристых веществ и крахмалистых материалов. Между этими двумя видами сырья для производства топливного этанола существует конкуренция. В начале 2000-х годов более 60% топливного этанола производилось из сахарсодержащих веществ, к 2006 году его доля снизилась до 47%, тогда как на производство этанола из зерна приходится 53% [1].
Этанол потенциально может заменить весь топливный рынок бензина. Кроме того, из этанола можно получать также и полиэтилен. Тем не менее, количество сахара и зерна в мире ограничено. Они являются довольно дорогим сырьем для производства этанола и являются основными источниками человеческой пищи, что приводит к конкуренции, которая в будущем может привести к повышению цен на зерно и сахар.
Лигноцеллюлозосодержащее сырье является возобновляемым, почти не используемым, и очень для производства топливного этанола [2-4] (отходы деревообработки, твердые бытовые отходы, макулатура и растительные остатки) [5]. Эти материалы содержат сахара в полимерной форме в виде целлюлозы и гемицеллюлозы, которые могут быть использованы микроорганизмами для производства этанола [6].
Состав лигноцеллюлозосодержащего сырья и гидролизатов
Лигноцеллюлозосодержащее сырье, преимущественно состоит из углеводных полимеров (целлюлозы и гемицеллюлозы), лигнина, экстрактивных веществ и золы. Термин "холоцеллюлоза" часто используется для описания всех углеводов, содержащихся в растении или микробной клетке. Холоцел-люлоза состоит из целлюлозы и гемицеллюлозы.
Целлюлоза является неразветвленным линейным полимером. Длина молекулы целлюлозы определяется количеством глюкозных звеньев в полимере и определяет степень полимеризации. Степень полимеризации целлюлозы, зависит от типа растения и, как правило, по оценкам содержит от 2000 до 27000 глюкановых единиц. Гемицеллюлозы принадлежат к группе разнородных полисахаридов. Количество гемицеллюлозы обычно составляет от 11% до 37% от сухого веса лигноцеллюлозы. Гемицеллюлозы относительно легко гидролизуются кислотами до своих мономерных компонентов, состоящих из ксилозы, маннозы, глюкозы, галактозы, арабинозы и небольших количеств рамнозы, глюкуроновой и галактуроновой кислот [7, 8].
Лигнин является очень сложной молекулой построенной из фенилпропановых единиц, связанных в трехмерные структуры. Как правило, хвойные породы содержат больше лигнина, чем лиственные. Хотя основные структурные элементы лигнина в значительной степени уже известны, многие аспекты его химической структуры остаются неясными. Были детектированы химические связи между лигнином и гемицеллюлозой и даже целлюлозой. Лиг-нины чрезвычайно устойчивы к химической и ферментативной деградации [9, 10].
Экстрактивные вещества это соединения древесины, которые растворяются в нейтральных органи-
ческих растворителях или воде. Экстрактивные вещества обычно составляют незначительную долю (1-5%) сырья. Они содержат большое количество как липофильных так и гидрофильных составляющих. Можно классифицировать четыре группы экстрактивных веществ: терпеноиды и стероиды, жиры и воски, фенольные составляющие, и неорганические вещества [8, 10].
Количество углеводных полимеров и лигнина зависит от типа материала. Гаррота [11] и Вайман с соавторами [5] в их публикациях собрали информацию о составе лигноцеллюлозы в различных лиственных и хвойных породах деревьев, а также в сельскохозяйственных отходах. Лиственные деревья, такие как белая береза, осина, красный клен, эвкалипт, тополь и дуб содержат 39-54% целлюлозы, 1437% гемицеллюлозы и 17-30% лигнина. Соответствующие значения для хвойных, например, сосны и ели, составляют 41-50% целлюлозы, 11-27% гемицеллюлозы и 20-30% лигнина. В различных сельскохозяйственных остатках состав колеблется в широких пределах. Например, рисовая солома состоит из 32-47% целлюлозы, 19-27% гемицеллюлозы и 524% лигнина.
Углеводные полимеры в лигноцеллюлозных материалах перед сбражтванием должны быть преобразованы в простые сахара посредством гидролиза. Тем не менее, в результате гидролиза могут возникнуть несколько продуктов. Есть несколько возможных способов гидролиза лигноцеллюлозы, два наиболее часто применяемых это химический гидролиз и ферментативный гидролиз. Целлюлозу и гемицел-люлозу можно преобразовать в этанол. При этом лигнин остается в качестве побочного продукта.
Целлюлоза ^ Гидролиз ^-Глюкоза ^-Ферментация ^ Этанол
Гемицеллюлоза ^ Гидролиз ^-Пентозы и Гексозы ^Брожение ^-Этанол
Кроме того, существуют еще несколько методов гидролиза, в которых не применяются никакие химические гидролизующие агенты или ферменты. Например, лигноцеллюлозу можно подвергнуть гидролизу путем облучения гамма-лучами или пучками электронов или микроволновому излучению. Тем не менее, эти процессы еще далеки от применения в промышленном масштабе [10].
Общий процесс производства этанола из лигноцеллюлозосодержащего сырья путем химического гидролиза
В процессе производства этанола из лигноцел-люлозосодержащего сырья путем химического гидролиза лигноцеллюлозное сырье измельчают до размеров в несколько миллиметров, затем его гид-ролизуют для получения сбраживаемых сахаров. Однако, на этом этапе могут образоваться некоторые побочные продукты. Если образуются гидроли-заты высокотоксичные для микроорганизмов, то перед ферментацией необходимо провести детокси-кацию. Затем в биореакторах гидролизаты фермен-
тируюся в этанол. Этанол дистиллируют до 90-95% путем перегонки. Для получения топливного этанола его желательно дополнительно обезвожить до 99% для того, чтобы его можно было смешать с бензином.
Гидролиз включает в себя расщепление полимеров целлюлозы и гемицеллюлозы до простых сахаров. Длительный гидролиз целлюлозы приводит к образованию глюкозы, в то время как гидролиз ге-мицеллюлоз приводит к образованию смеси пенто-занов и гексозанов. В то время как гемицеллюлоза хвойных растений в основном состоит из маннозы, доминирующим сахаром в гемицеллюлозах, полученных из твердых пород дерева и растительных остатков, как правило, является ксилоза [10, 12].
Химический гидролиз представляет собой обработку сырья химическими реагентами в течение определенного периода времени при определенной температуре и приводит к образованию мономеров сахара и полимеров гемицеллюлозы. В химическом гидролизе преимущественно применяются кислоты. Серная кислота является наиболее изученной [13], хотя используются и другие кислоты, такие как соляная [14]. Кислотный гидролиз можно разделить на две группы: (а) гидролиз концентрированной кислотой, и (б) разбавленной кислотой. Сравнение методов гидролиза концентрированной и разбавленной кислотой представлено в таблице 1.
Таблица 1 - Сравнение методов гидролиза концентрированной и разбавленной кислотой
Метод гидролиза Преимущества Недостатки
Концентри рованной кислотой - происходит при низкой температуре - Высокий выход сахара - высокое потребление кислоты - коррозия оборудова- ния - высокое потребление энергии для регенерации кислоты - более длительное вре- мя реакции (2-6ч)
Разбавленной кислотой - короткое время выдерживания - низкая концентрация кислоты - воздействие при высокой температуре - низкий выход сахара - коррозия оборудова- ния - образование нежелательных побочных продуктов
Гидролиз концентрированными кислотами
Гидролиз лигноцеллюлозы концентрированной серной или соляной кислотой является относительно старым процессом. Браконнот в 1819 году впервые обнаружил, что целлюлоза может быть преобразована в сбраживаемый сахар при помощи концентрированных кислот [15]. Они использовали одноступенчатый гидролиз концентрированной серной кислотой и гидролиз жидкой или паровой фазами концентрированной соляной кислотой.
Сообщалось, что использование концентрированной кислоты, приводит к более высокому выходу сахара (например, 90% от теоретического выхода глюкозы) и, следовательно, более высокому выходу этанола, по сравнению с процессами, где использовалась разбавленная кислота. Кроме того, процессы с использованием концентрированных кислот могут происходить при низкой температуре (например, 40°C), что является явным преимуществом. Тем не менее, в этом методе концентрация кислоты очень высока (30-70%), разбавление и нагревание концентрированной кислоты в процессе гидролиза приводят к высокой степени коррозии оборудования. Таким образом, процесс требует либо дорогих сплавов, либо специализированных неметаллических конструкций, таких как керамика или облицовка угольным кирпичом. Восстановление кислоты является энергоемким процессом. Кроме того, при использовании серной кислоты, в процессе нейтрализации образуется большое количество гипса. Более того, применение соляной кислоты сильно ограничивается вредным воздействием на окружающую среду. Высокие инвестиционные затраты и стоимость технического обслуживания значительно снижают потенциальную коммерческую заинтересованность в этом процессе [10, 16, 17].
Несмотря на недостатки, процесс обработки концентрированной кислотой все еще вызывает к себе интерес. Недавно голландская исследовательская группа стала использовать ее в процессе, называемом "Biosulfurol". В этом процессе, биомасса пропитывается 70% серной кислотой и затем гидро-лизуется с добавлением воды. Кислоту затем частично извлекают при помощи анионных мембран, а частично в виде H2S при анаэробной очистке сточных вод. Процесс, как утверждается, обладает низкой общей стоимостью [18]. Кроме того, два полномасштабных проекта превращения целлюлозы в этанол на основе гидролиза концентрированной кислотой находятся в стадии разработки в Северной Америке Arkenol Inc. (www.arkenol.com) и группы Masada Resource (www.masada.com).
Гидролиз разбавленными кислотами
Среди химических методов гидролиза, гидролиз разбавленными кислотами является, вероятно, наиболее широко применяемым. Это метод, который может быть использован либо как предварительная обработка, предшествующая ферментативному гидролизу, или в качестве фактического способа гидролиза лигноцеллюлозы для получения сахаров [19]. Первый процесс гидролиза разбавленной кислотой, вероятно, был проведен Шоллером [20]. Это периодический процесс, в котором древесный материал находился в 0,5% серной кислоте при давлении 1112 бар в течение примерно 45 минут. В настоящее время большинство процессов гидролиза разбавленной кислотой проводят в периодическом режиме с временем удерживания в несколько минут [12].
Реакторы периодического цикла являются наиболее широко используемыми для изучения кинетики гидролиза и для лабораторного и экспериментального исследования производства этанола из
лигноцеллюлозных материалов [12-20]. Примером кинетического исследования одноэтапного гидролиза разбавленной кислотой, является использование 0,5% серной кислоты при температуре 188-234°С и времени удерживания 7 минут [10]. Значительная часть гемицеллюлозы (более 80%) может быть гид-ролизована разбавленной кислотой при температуре ниже 200°С, а максимальный общий выход глюкозы при температуре выше, чем 220°С. Это связано с большей устойчивостью целлюлозы к гидролизу.
Основным недостатком процесса гидролиза разбавленной кислотой, особенно одноэтапного, является деградация сахаров в реакции гидролиза и образование нежелательных побочных продуктов. Это не только снижает выход сахара, но некоторые из побочных продуктов также сильно ингибируют образование этанола в ходе процесса ферментации. Возможные ингибиторы, которые могут быть сформированы во время гидролиза разбавленной кислотой - это фурфурол, 5-оКсиметилфурфурол , леву-линовая кислота, уксусная кислота, муравьиная кислота, уроновая кислота, 4-гидроксибензойная кислота, ванилиновая кислота, ванилин, фенол, коричный альдегид, формальдегид и т.д. [21]. Некоторые ингибиторы, такие как терпеновые соединения, первоначально присутствуют в древесине, но, по-видимому, большинство ингибиторов образуются в процессе гидролиза.
Для того, чтобы избежать деградации моносахаридов при высоких температурах и формировании ингибиторов, гидролиз разбавленной кислотой проводят в два (или более) этапа. На первом этапе, который должен быть проведен при относительно мягких условиях, гемицеллюлоза превращается в мономер сахара. Это как этап предварительной обработки разбавленной кислотой. На втором этапе, остаточное твердое вещество подвергают гидролизу в более жестких условиях [13]. Во время одноступенчатой предварительной обработки, поддерживается температура от 140 до 170°С, но также можно провести две обработки при примерно 120°С в течение более длительного времени [22].
При использовании разбавленный кислоты обычно предпочитают двухэтапный процесс одно-этапному, потому что:
а) поэтапный гидролиз целлюлозы и гемицеллю-лозы приводит к более высокому выходу сахара. Кроме того, на втором этапе гидролиза можно получить продукт с высоким содержанием гексоз, которые легко можно ферментировать в этанол. Смесь пентоз и гексоз, как правило, трудно поддается ферментации, из-за сложности ферментации пен-тоз.
б) потребление энергии должно быть минимизировано, так как жидкость удаляется перед вторым этапом гидролиза.
в) полученный раствор сахара должен быть более концентрированным.
г) в процессе двухэтапного гидролиза образуются меньше ингибиторов.
Как правило, максимальный выход пентоз и гек-соз, выделенных из гемицеллюлоз на первом этапе гидролиза довольно высок (80-95% от общего объе-
ма сахара), в то время как при гидролизе целлюлозы в глюкозу, выход, как правило, низкий (40 - 60%). Тем не менее, низкий выход глюкозы не является серьезной проблемой из-за низкой цены лигноцел-люлозных материалов, а также возможности сушки и сжигания остаточной целлюлозы и лигнина в энергетических комплексах для производства электроэнергии и тепла.
Эффективные параметры гидролиза лигноцеллюлозного сырья
Факторы, влияющие на уровень превращения лигноцеллюлозы в мономерные сахара и побочные продуктов следующие:
На гидролиз могут влиять следующие свойства сырья: нейтрализующая способность, соотношение легкогидролизуемой гемицел-люлозы и целлюлозы, количество и скорость гидролиза сложногидроли-зуемых материалов, длина макромолекул, степень полимеризации целлюлозы, конфигурация цепи целлюлозы и связь целлюлозы с другими защитными полимерными структурами внутри стенки растительной клетки, такими как лигнин, пектин, геми-целлюлоза, белок, минеральные элементы и т. д. Размер частиц также является одним из эффективных параметров [10].
Другим параметром, влияющим на эффективность гидролиза, является кислотность системы. Кислотность зависит от типа и концентрации используемой кислоты, количества количества кислоты (например, уксусной кислоты) освобождаемой из биомассы в процессе гидролиза, гидромодуля, нейтрализующей способности лигноцеллюлозы, и движения раствора при нагревании. Когда применяется гидролиз разбавленной кислотой, он требует сравнительно короткого времени. Таким образом, проникновение кислотного катализатора в биомассу, а также диффузия в реакторе, могут значительно влиять на общую реакцию, и, следовательно, производительность реактора. Коэффициент диффузии серной кислоты зависит от природы лигноцеллюлозных материалов. Было показано, что в сельскохозяйственных остатках коэффициент диффузии серной кислоты значительно выше, чем в древесине лиственных пород [23].
Скорость разложения продуктов в процессе гидролиза зависит от температуры, кислотности, времени реакции и концентрации сахаров. При условиях гидролиза, которые обеспечивают получения раствора, содержащего более 10 процентов глюкозы, явления реверсии считаются очень важными. Явление реверсии приводит к образованию большого количества глюкозы, присутствующей не в форме свободной глюкозы, но в виде димеров, олигоме-ров и ангидросахаров, которые недоступны для микроорганизмов, используемых в ферментации [13]. Недавно было сообщено, что металлы и / или ионы металлов, также могут катализировать разложение глюкозы во время кислотного гидролиза лиг-ноцеллюлозных материалов. Таким образом, надо тщательно подбирать материал, используемый при производстве реактора для гидролиза [24].
Промышленные процессы, основанные на кислотном гидролизе
Опытный завод и промышленное оборудование, предназначенное для преобразования лигноцеллю-лозной биомассы в этанол, путем химического гидролиза, существовали с начала 1900 годов. Одним из самых ранних коммерческих процессов гидролиза был гидролиз разбавленной серной кислотой, разработанный компанией EWEN and TOMLINSO во время первой мировой войны. В Соединенных Штатах работали два предприятия по производству сахара из древесины. По экономическим причинам оба завода были закрыты в конце первой мировой войны. Гидролиз древесины разбавленной серной кислотой был заново изучен в Лаборатории Продуктов Леса Министерства сельского хозяйства США, по просьбе комитета военно-промышленного производства в 1943 году.
В общей сложности, более двадцати заводов по производству спирта, использующие лигноцеллю-лозу, были открыты в Европе, России, Китае, Корее и США до или во время второй мировой войны. Эти заводы используют либо процесс Шоллера с разбавленной (0,2-1%) серной кислотой, или процесс Бер-гиуса с концентрированной (40-45%) соляной кислотой для гидролиза древесины. Процесс Шоллера является менее капиталоемким и поэтому предпочтительным по сравнению с процессом Бергиуса. В этом процессе, разбавленные кислоты 0,5-0,6% пропускают через уплотненный слой сырья с непрерывным удалением 5-6% раствора сахаров. После гидролиза, остаток лигнина фильтруется, отжимается до 50% влаги и сжигается [25]. После второй мировой войны многие из заводов были закрыты по экономическим причинам. Сегодня, лишь немногие из этих старых заводов работают до сих пор, практически все они в России.
Inventa AG (Швейцария) разработала процесс гидролиза разбавленной кислотой. Технология основывается на гидролизе древесины разбавленной кислотой. Они ежегодно производят 10 миллионов литров топливного этанола, используя местную хвойную древесину. Применяется гидролиз древесной щепы разбавленной кислотой (0,6%) при температуре 140-180°С. Твердый остаток, выходящий из реактора, используют в качестве топлива. Испаренный фурфурол собирают в секции регенерации. Охлажденный гидролизат нейтрализуют известняком и отделяют. Ферментация гидролизата происходит в нескольких биореакторах. Используется дрожжи, адаптированые к древесным гидролизатам. Культу-ральная жидкость с концентрацией этанола приблизительно в 2%, отделяется, и концентрированная дрожжевая суспензия перерабатывается в ферментере. Выход спирта составляет 240 литров на тонну древесного сухого вещества. Завод работал до 1956 года в Домат / ЭМС.
Международная корпорация (BCI) в Соединенных Штатах, и SEKAB в Швеции, запустили в промышленное производство технологии на основе новейших исследований и разработок двухстадий-ного гидролиза разбавленной кислотой. На первом этапе, гемицеллюлоза гидролизуется при более мяг-
ких условиях (например, 170-190°С), а затем целлюлоза подвергается гидролизу в более жестких условиях (200-230°C).
Заключение
Лигноцеллюлоза станет основным сырьем для производства этанола в ближайшем будущем. Тем не менее, процесс ее конверсии не так прост, как конверсия сахара и крахмалистых веществ. Гидролиз разбавленными кислотами является одним из перспективных способов для преобразования лиг-ноцеллюлозных материалов в ферментируемые сахара. Однако процесс гидролиза является очень сложным, и зависит от нескольких параметров, таких как свойства сырья, кислотность и скорость разложения продуктов в процессе гидролиза. Не вызывает больших сложностей преобразование гемицел-люлозы, присутствующей в лигноцеллюлозе, в простые сахара, при помощи гидролиза разбавленной кислотой. Однако довольно сложно получить высокий выход глюкозы из целлюлозы, содержащейся в растительном сырье путем гидролиза разбавленной кислотой. Может быть применена подходящая конструкция реактора для того, чтобы увеличить степень конверсии целлюлозы при использовании разбавленной кислоты. Ферментация смеси гексоз и пентоз и нескольких ингибиторов может привести к дополнительным проблемам. Для ферментации необходима подходящая стратегия, такая как адаптивный процесс с непрерывной или периодичной подпиткой, а также использование подходящих природных или созданных микроорганизмов, который могут преобразовывать и пентозы и гексозы. Также внимательно должно быть рассмотрено воздействие процесса получения этанола на окружающую среду. Остаточные твердые вещества и сточные воды должны быть дополнительно обработаны для получения других продуктов, в противном случае они могут создать экологические проблемы.
Литература
1. Licht, F. O. World ethanol markets: The outlook to 2015, Tunbridge Wells, Agra Europe special report, иКб 2006
2. А. Р Аблаев, И. А. Храмова, И. З. Гайфуллина, М. В.Харина, В. М.Емельянов. Вестник Казанского технологического университета. 2014. - №14. - С. 344-347.
3. М. В. Харина, И. В. Логинова, В. М. Емельянов. Вестник Казанского технологического университета. - 2013. Т.16.- № 13. - С. 199-202.
4. И. В. Логинова, Л.И. Клещевников, М. В.Харина,
B.М.Емельянов. Вестник Казанского технологического университета. - 2014. Т.17.- № 22. - С. 213-215.
5. Wyman, C. E. Handbook on Bioethanol: Production and utilization: Washington, DC: Taylor & Francis. 1996.179 р.
6. Millati R., Niklasson C., Taherzadeh M. J. Process Biochem. 2002. - 38(4). - 515-522 р.
7. Morohoshi, N. Chemical characterization of wood and its components, " in Wood and cellulosic chemistry, Hon DNS and Shiraishi N., (eds.), Marcel Dekker, Inc.: New York. 1991. 331-392.
8. Sjostrom, E. Wood Chemistry: Fundamentals and Applications. 2nd Ed. Academic Press. 1993
9. Palmqvist, E., Bioresource Technol. 2000. 74, 25-33.
10. Taherzadeh, M. J. Ind. Eng. Chem. Res. 1997, 36(11), 4659-4665
11. Garrote, G., Dominguez, H., and Parajo, J. C. Holz als Roh-und Werkst. 1999. 57(3), 191-202.
12. Karimi, K., Kheradmandinia, S., and Taherzadeh, M. J. Biomass Bioenergy 2006. 30(3), 247-253.
13. Harris, E., Beglinger, E., Hajny, G., and Sherrard, E. (1945). Ind. Eng. Chem. 37(1), 12-23
14. Hashem, A. M. and Rashad, M. M. Egypt Journal of Food Science. 1993. 21(2), 171-180.
15. Sherrard, E., and Kressman, F. Ind. Eng. Chem. 1945. 37(1), 5-8.
16. Jones, J., and Semrau, K. Biomass. 1984. 5, 109-135. 17. Katzen, R., Madson, P. W., and Monceaux, D. A. "Use of cellulosic feedstocks for alcohol production," in The Alcohols Textbook, Lyons, T. P., Murtagh, J. E., and Kelsall, D.R., (eds.), Nothingham University Press, 1995. 37-46.
18. Groenestijn, J., Hazewinkel, O., and Bakker, R. Zuckerindustrie. 2006. 131(9), 639-641
19. Qureshi, N., and Manderson, G. Energy Sources. 1995. 17, 241-265
20. Faith, W. Ind. Eng. 1945. Chem. 37(1), 9-11
21. Larsson, S., Palmqvist, E., Hahn-HAgerdal, B., Tengborg,
C., Stenberg, K., Zacchi, G., Nilvebrant, N. Enzyme Microb. Technol. 1999. 24, 151-159
22. Torget, R., and Hsu, T. A. Appl. Biochem. Biotechnol. 1994. 45-6, 5-22.
23. Kim, B. S., and Lee, Y. Y. Bioresource Technol. 2002. 83, 165-171.
24. Xiang, Q., Lee, Y. Y., and Torget, R. Appl. Biochem. Biotechnol. 2004. 113-116, 1127-1138
25. Maiorella, B. L., Biochemicals and Fuels., Vol. 3, Comprehensive Biotechnology, Young, M. (ed.), Pergamon Press, Oxford, 1983. 861-914
© О. Н. Григорьева - старший преподаватель кафедры ИЯПК КНИТУ, olganikgr@yandex.ru; М. В. Харина - к.т.н., доцент кафедры Химическая кибернетика КНИТУ, somariya@mail.ru.
© O. N. Grigorieva - assistant professor of the Department of Foreign Languages for Professional Communication of «KNRTU», olganikgr@yandex.ru; M. V. Kharina - PhD, associate professor of the Department of Chemical Cybernetics of «KNRTU», somariya@mail.ru.
