CC BY
44
медико-биологические проблемы
Киназа Aurora A и поликистозная болезнь почек
О.В.Плотникова12, Р.В.Лацис1, Э.А.Големис2
1Российский государственный медицинский университет, кафедра молекулярной биологии и медицинской биотехнологии медико-биологического факультета, Москва (зав. кафедрой - проф. О.О.Фаворова);
2Фокс-Чейзовский онкологический центр, Филадельфия, США
Показано, что киназа Aurora A (AurA) экспрессируется в почечном эпителии, и выявлено увеличение уровня фосфори-лированной киназы AurA в эпителии, выстилающем кисты у больных ПБП. Мы также продемонстрировали, что AurA взаимодействует с С-терминальным концом полицистина-1 и фосфорилирует его, что свидетельствует о возможной роли AurA в регуляции функции этого белка. В целом, предоставленные данные свидетельствуют о вовлеченности киназы AurA в развитие ПБП.
Ключевые слова: поликистозная болезнь почек, PKD1, полицистин-1, киназа Aurora A, первичная ресничка
Aurora A-kinase and polycystic kidney disease
O.V.Plotnikova12, R.V.Lacis1, E.A.Golemis2
1Russian State Medical University, Department of Molecular Biology and Medical Biotechnology
of Medical Biological Faculty, Moscow
(Head of the Department - Prof. O.O.Favorova)
2Fox Chase Cancer Center, Philadelphia, USA
I There is demonstrated in this study that Aurora A (AurA) kinasa is abundant in human kidney tissues and the increasing level of phosphorylated AurA in those specimens in patients with PKD as well. AurA interacts with overexpressed PC1 in mammalian cells and phosphorylates PC2 in vitro that might suggest biological role for AurA in the regulation of PC2 function. Overall, the current data support the idea that AurA might be involved in the pathogenesis of PKD. Key words: polycystic kidney disease, PKD1, polycystin-1, Aurora A-kinasa, primary cilia
Поликистозная болезнь почек (ПБП) - врожденное заболевание человека, характеризующееся образованием и ростом множественных кист в обеих почках. Кисты могут располагаться в кортикальном или мозговом слое почек [1]. ПБП связана с нарушением дифференцировки и пролиферации эпителиальных клеток в собирающих канальцах почек [2]. Молекулярный механизм формирования кист до конца не изучен, и в настоящее время лечение ПБП остается только симптоматическим, заключающимся в коррекции проявлений болезни [3]. ПБП развивается в случаях появления инактивирующих мутаций в генах PKD1 или PKD2 [4, 5], кодирующих трансмембранные белки полицистин-1 и поли-цистин-2. Полицистин-1 является интегральным мембранным белком, который связывается с кальциевым каналом, сформированным из шести субъединиц белка полицисти-на-2, образуя комплекс, контролирующий дифференцировку и пролиферацию клеток почечного эпителия в сенсорном
Для корреспонденции:
Плотникова Ольга Викторовна, соискатель кафедры молекулярной биологии
и медицинской биотехнологии медико-биологического факультета
Российского государственного медицинского университета
Адрес: 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, 15А
Телефон: (495) 414-6717
E-mail: oliaplo@gmail.com
Статья поступила 27.05.2009 г., принята к печати 21.10.2009 г.
сигнальном пути [6]. Показано, что комплекс полицистина-1 и полицистина-2 локализуется в плазмолемме первичных ресничек [5, 7]. Неподвижная первичная ресничка представляет собой выдающуюся во внеклеточное пространство покрытую цитоплазматической мембраной органеллу, в основании которой находится базальное тело, из которого исходят девять дуплетов периферических микротрубочек [8]. Есть все основания полагать, что первичные реснички, присутствующие на поверхности почечных эпителиальных клеток, являются механосенсорными органеллами, которые инициируют широкий спектр передачи Са2+-опосредованных регуляторных сигналов, причем в данном случае реснички регулируют скорость тока мочи через канальцы и собирательные трубочки [8, 9]. Мутации полицистинов-1 или -2 приводят к повреждению механосенсорных функций реснички и развитию поликистоза почек [10].
Киназа Aurora A (AurA) хорошо изучена как митотическая киназа, которая располагается на полюсах веретена деления начиная с профазы и до окончания телофазы и является критическим фактором в сборке митотического веретена [11]. Недавно была показана ключевая роль киназы AurA в инициации разборки и последующей потери клеткой первичной реснички [12]. В результате изучения развития ПБП у экспериментальных животных было выявлено, что потеря
первичной реснички ведет к развитию кист [10]. Как следствие, нарушение интегральной функции полицистинов, участвующих в регуляции механосенсорных функций реснички, приводит к утрате контроля восприимчивости почечным эпителием потока мочи, что в свою очередь способствует нерегулируемой пролиферации эпителия и в конечном итоге приводит к формированию кист.
В данной работе впервые показано, что киназа AurA функционирует как в клетках нормального почечного эпителия, так и в клетках эпителия кист и может играть важную роль в развитии ПБК.
Материалы и методы
В исследовании использовались образцы тканей почек, полученных от 15 здоровых людей и от 15 больных с диагнозом «наследственная поликистозная болезнь почек» либо после смерти, либо при биопсии почек. Возраст пациентов варьировал от 20 до 40 лет.
В данной работе были использованы клеточные культуры HEK-293, НК2 и mPKC. HEK-293 - эмбриональные клетки печени человека (American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA 20108, USA) культивировали на пластиковых чашках Петри (Corning, США) в стандартной среде DMEM (Gibco, США), содержащей 10% бычьей сыворотки (Invitrogen, США). НК2 - почечные эпителиальные клетки человека, полученные из эпителия проксимальных канальцев (АТСС, США), культивировали в среде GIBCO Keratinocyte-SFM (Invitrogen, США). mPKC - первичные почечные эпителиальные клетки мыши культивировали в среде DMEM с пониженным содержанием кальция.
Использование в данном исследовании человеческих тканей и клеточных линий было одобрено Этическим комитетом по правам человека в Фокс-Чейзовском онкологическом центре. Использованная для дальнейшей полимеразной цепной реакции (ПЦР) кДНК полицистина-1 была любезно предоставлена доктором G.G.Germino [6]. Плазмидная конструкция для экспрессии киназы AurA была описана Е.Н.Пугачевой [12]. Амплификацию С-терминального (СТ) фрагмента полицистина-1 проводили методом ПЦР в конечном объеме 50 мкл в термоциклере Apply Biosystems (Apply Biosystems, США) с 1,25 ед полимеразы Pfu (New England Biolabs, США). Фрагмент кДНК, образующейся в результате ПЦР, был клонирован в вектор pcDNA3.1-Flag (Invitrogen, США) по сайтам EcoR1 и XhoI и в вектор pGex-6P1(Invitrogen, США) по сайтам Xho и EcoRI.
Трансфекцию клеток НЕК-293 проводили с использованием плазмидных векторов, несущих гены AurA и PKD1. Для этого клетки высевали на чашку Петри и выращивали до субконфлуентного монослоя. Трансфекция была выполнена при совместном использовании реагентов Lipofectamine и Reagent plus в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen, США).
Для исследования содержания белка AurA в клеточных лизатах методом иммуноблоттинга использовали клеточные лизаты, полученные после инкубации клеток на льду в течение 20 мин в лизирующем буфере: 10 мМ Трис-HCl, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,5% NP-40, 1% Тритон X-100, ингибиторы про-теаз (Sigma, США) с последующим центрифугированием.
Количество белка в пробах для электрофореза измеряли по методу Брэдфорд [13] и пробы уравнивали между собой по количеству белка. Затем отбирали 50 мкг лизата, добавляли буфер Лэммли (50 мМ Трис-HCl, pH 6,8, 100 мМ бета-меркаптоэтанол, 1% додецилсульфат натрия, 0,0025% бром-феноловый синий и 10% глицерин), кипятили 5 мин, наносили на полиакриламидный гель (ПААГ) и проводили электрофорез в денатурирующих условиях с использованием натрия додецилсульфата. Белки из геля переносили на нитро-целлюлозную мембрану (Millipore, США). В качестве первичных антител использовали антитела к киназе AurA (BD Bioscience, США), в качестве вторых - козьи антитела против иммуноглобулина мыши, конъюгированные с пероксида-зой хрена (Pierce Biotechnology, США). Белки выявляли методом усиленной хемилюминесценции (ECL, Pierce Biotechnology, США).
Для исследования возможности коиммунопреципитации ки-назы AurA с СТ-доменом полицистина-1, несущим эпитоп Flag, который в процессе клонирования в вектор pcDNA3.1-Flag был присоединен к С-концу этого белка, клеточные экстракты (500-1000 мкг белка) инкубировали с антителами к киназе AurA (BD Bioscience, США) в течение 12 ч при 4°С; полученные комплексы осаждали, инкубируя с протеин А/М-сефарозой 60-120 мин при 4°С с последующим центрифугированием. Затем белки элюировали путем добавления буфера Лэммли с последующим кипячением в течение 5 мин и наносили на ПААГ для проведения иммуноблоттинга с анти-Flag антителами (Sigma, США), как было описано выше.
Для проведения киназной реакции рекомбинантный СТ домен полицистина-1, коньюгированный с глютатион S-трансферазой (GST) (Pd-CT-GST), выделяли из E. coli линии BL21. Клетки этой линии трансформировали вектором pGex-6P1, несущим ген PKD1 для экспрессии РС1-СТ-GST. Затем их инкубировали при 37°С до поздней логарифмической фазы, ^нтез GST^1 в клетках индуцировали добавлением 1 мМ изопропил-р^-галактопиранозида. Клетки инкубировали в течение 5 ч, собирали, лизировали; рекомбинантный белок выделяли методом аффинной хроматографии на глутатион-агарозном носителе (в соответствии с протоколом фирмы GE Healthcare, США).
Для проведения киназной реакции in vitro была использована рекомбинантная киназа AurA (Millipore, США) и в качестве субстрата - РС^СТ-GST. В качестве отрицательного контроля на специфичность фосфорилирования использовали белок GST. Фосфорилирование рекомбинантных белков in vitro проводили в течение 30 мин при 37°C в реакционной смеси объемом 50 мкл, содержащей реакционный буфер (20 мМ HEPES, pH 7,9, 20 мМ MgCl2, 2 мМ MnCl2, 1 мМ DTT, 25 мкМ немеченого АТФ), 37 кБк [y-32P] АТФ, 1 мкг киназы AurA (1711 ед/мг) и 1 мкг одного из двух субстратов. Реакцию останавливали добавлением буфера Лэммли. Пробы кипятили 5 мин, наносили на гель и после электрофореза в ПААГ гель экспонировали с рентгеновской пленкой.
Иммунохимическое окрашивание на выявление тотальной и фосфорилированной киназы AurA у больных ПБП и у здоровых индивидов проводили на парафиновых срезах (5 мкм) образцов тканей почек. Были использованы первичные моноклональные антитела против киназы AurA или
только против ее фосфорилированной формы (Bethyl, США), а также анти-IgG вторичных антител, меченные пероксида-зой. Микроскопическое исследование образцов проводили на микроскопе Nikon Eclipse E600 (Nikon, Япония).
Результаты исследования и их обсуждение
Присутствие киназы AurA в почечном эпителии.
Киназа AurA известна как киназа, участвующая в регуляции митоза и прохождения клеткой по клеточному циклу [11]. Было показано, что у пигментных клеток ретины человека киназа AurA сконцентрирована в базальном теле в основании первичной реснички и ее активация ведет к разборке первичной реснички [12]. Ранее не было известно о локализации киназы AurA в клетках почечного эпителия и тем более не была изучена роль этой киназы в ПБП.
Иммуногистохимические исследования показали наибольшую концентрацию киназы AurA в проксимальных и дистальных канальцах здоровых почек человека (рис. 1А, верхняя панель). В то же время уровень активированной путем аутофосфорилирования киназы AurA (P-AurA) (рис. 1А, нижняя панель) значительно снижен по сравнению с уровнем общего белка AurA. В качестве контроля специфичности антител к общей киназе AurA данные антитела инкубировали с блокирующим пептидом, который был использован для продукции антител против киназы AurA при иммунизации кролика, и наблюдали полное блокирование гистохимического окрашивания канальцев здоровых почек человека. Присутствие эндогенной киназы AurA в культуре эпителиальных почечных клеток человека (HK2) и мыши (mPKC) подтверждали с использованием иммуноблоттинга белков, полученных в результате лизиса данных клеток (рис. 1В, верхняя панель), в качестве контроля нанесения на nAAr использовали маркерный белок бета-актин (рис. 1В, нижняя панель). Иммуногистохимический анализ образцов почечных тканей, полученных от пациентов с ПБП (рис. 1Б, верхняя панель), показал, что киназа AurA присутствует в значительном количестве в видоизмененном эпителии почечных кист. Наблюдается также повышение количества активированной P-AurA в эпителии кист срезов, полученных от больных ПБП (рис. 1Б, нижняя панель).
Тот факт, что в образцах почечной ткани, полученных от больных с ПБП, активированная киназа AurA представлена в большом количестве в эпителии, выстилающем просветы кист, указывает на ее возможную роль в индукции неуправляемой пролиферации эпителия и образовании кист. Действительно, киназа AurA активируется путем фосфорилирования по консервативному остатку в T-петле (тирозин 288) внутри ее каталитического домена, при этом фосфорилированная форма AurA обладает повышенной киназной активностью [11]. Интересно, что фосфорилиро-вание AurA в T-петле может быть устранено с помощью применения специфичных ингибиторов (PHA-680632, Nerviano Medical Sciences Srl [14]). Известно, что ген AurA расположен в области хромосомы 20q13 человека, которая амплифицируется при многих формах рака, и, кроме того, киназа AurA избыточно накапливается в некоторых солидных опухолях [15]. Более того, у млекопитающих повышение уровня фосфорилированной киназы AurA вызы-
вает увеличение количества центросом и анэуплоидию, что приводит к трансформации клеток [16]. Следует отметить, что одним из начальных этапов развития кист является как раз нарушение в регуляции нормальной пролиферации клеток с появлением мультицентросомных клеток с последующим изменением их структуры [17], что скорее всего может свидетельствовать о существенной роли киназы АигА в этих процессах.
Показано, что повышение киназной активности фосфорилированной киназы АигА делает возможным активацию
10x
40x
10x
40x
Pfc ■
ж
phAurA
AurA
В
р-актин
—50 —40
—40
Рис. 1. Иммуногистохимическое выявление киназы AurA и ее фосфорилированной формы (phAurA) в почечном эпителии человека. А, Б - срезы почечной ткани, полученные от здорового человека и больного ПБП соответственно. В - иммуноблоттинг киназы АигА в лизатах, полученных из почечных клеток НК2 и тРКС (верхняя панель); бета-актин (нижняя панель).
А
Б
КИП: PC1-CT
— 30
— 46
о
P
со о
Рис. 2. Коиммунопреципитация СТ домена полицистина-1 с кина-зой AurA. Верхняя панель - иммуноблоттинг СТ домена полицисти-на-1 (РС1-СТ), для экспрессии которого ген PKD1-CT клонировали в вектор pcDNA3-Flag (левая дорожка), или негативного контроля вектора pcDNA3-Flag (правая дорожка) после коиммунопреципита-ции (КИП) с киназой AurA. Нижняя панель - детекция киназы AurA в клеточных лизатах (КЛ) методом иммуноблоттинга. Указаны размеры маркера молекулярной массы в килодальтонах.
ряда других белков, таких как гистон-деацетилаза 6, что ведет к разборке первичной реснички и, как следствие, к нарушению механизма контроля скорости тока мочи в канальцах [12]. В свете этой работы можно предположить, что полученные нами данные о повышении уровня фосфорили-рованной киназы AurA у больных ПБП могут указывать на разборку первичной реснички при этом заболевании.
Связывание и фосфорилирование киназой AurA С-терминального (СТ) домена почечного белка полици-стина-1. Мы исследовали возможное участие киназы AurA в регуляции полицистина-1, мутации или нарушения функции которого, как указывалось выше, ведут к развитию ПБП. Полицистин-1 представляет собой большой трансмембранный белок, состоящий из внеклеточного N-терминального домена, 11 трансмембранных доменов и цитоплазматиче-ского СТ домена [18]. Поскольку киназа AurA является цито-плазматическим белком, мы решили изучить возможность связывания AurA с СТ доменом полицистина-1. С этой целью мы клонировали кДНК киназы AurA и СТ домена полицисти-на-1 в плазмидные векторы для экспрессии данных генов в клетках млекопитающих. Затем полученные конструкции были временно трансфицированы в культуру эмбриональных клеток человека НЕК-293. После проведения коиммуно-преципитации с антителами к AurA и последующего иммуноблоттинга белков преципитата с антителами против Flag-эпитопа, прикрепленного к СТ домену полицистина-1, мы наблюдали, что киназа AurA действительно образует комплекс c СТ доменом полицистина-1 (рис. 2).
AurA является серин-треониновой киназой, регулирующей белки путем их фосфорилирования [19]. С целью изучения возможности регуляции полицистина-1 киназой AurA путем фосфорилирования мы проанализировали аминокислотную последовательность СТ домена полицистина-1 и предсказали консенсусный мотив для фосфорилирования киназой AurA RRsSR, соответствующий сайту S4252. Найденный мотив соответствует стандартному мотиву фосфорилирования для AurA R/K/N-R-x -S/T-В (x - любая аминокислота, В - любая аминокислота за исключением пролина) [20]. С целью подтверждения предположения, что киназа AurA фосфорилиру-ет СТ домен полицистина-1, мы провели киназный анализ in vitro с использованием рекомбинантной киназы AurA и ре-комбинантного СТ домена полицистина-1 в качестве субстрата. Показано, что киназа AurA фосфорилирует in vitro СТ
КМ
AurA
30
— 46
— 26
— 46
— 26
— 46
Рис. 3. Фосфорилирование киназой AurA СТ домена полицисти-на-1 in vitro. Верхняя панель - радиоавтограф (32Р) после разделения в ПAAГ продуктов киназной реакции с использованием в качестве субстратов СТ домена полицистина-1 (РС1-СТ) (левая дорожка) или белка GST (негативный контроль) (правая дорожка). Средняя и нижняя панели - окрашивание белков реакционной смеси после разделения в ПAAГ кумаси синим (КМ) (маркеры см. рис. 2).
домен полицистина-1, но не белок GST, использованный в качестве негативного контроля на специфичность фосфори-лирования (рис. 3, верхняя панель). Присутствие данных белков в реакционной смеси подтверждали путем окрашивания ПAAГ кумаси синим (КМ) (рис. 3, средняя панель).
Таким образом, с помощью коиммунопреципитации и киназной реакции in vitro мы показали, что киназа AurA связывает и фосфорилирует полицистин-1 - белок, нарушение функции которого ведет к развитию ПБП. Полицистин-1, встроенный в плазмолемму первичной реснички, функционирует как механосенсор, который улавливает сигналы тока мочи, движущейся через канальцы и собирающие трубочки [21]. Взаимодействие между полицистином-1 и -2 важно для регуляции функции кальциевого канала полици-стина-2 [6]. Гиперактивация киназы AurA может увеличивать уровень фосфорилированного полицистина-1, что повлечет за собой изменение его функционирования и неспособность почечного эпителия реагировать на изменения потока мочи. Этот патологический процесс ведет к неконтролируемому усилению притока внутриклеточного Са2+, что способствует нерегулируемой пролиферации почечного эпителия и в конечном итоге приводит к формированию кист. Таким образом, наши результаты могут свидетельствовать о новой роли киназы AurA в регуляции активации полицистина-1 как возможного участника в нарушении механизма контроля клеточного цикла почечного эпителия.
Заключение
В данной работе впервые показано вовлечение киназы AurA в развитие ПБП. Мы выявили увеличение уровня фос-форилированной киназы AurA в эпителии, выстилающем кисты у больных ПБП. Получены также данные, указывающие на участие киназы AurA в регуляции полицистина-1 -белка, мутированного при ПБП. На данный момент медикаментозного лечения ПБП не существует и симптоматическое
32
P
лечение ПБП заключается в коррекции последствий заболевания. Прогноз всегда неблагоприятен, более чем у 50% больных развивается хроническая почечная недостаточность в течение двух лет после первых проявлений заболевания [2]. Изучение белков, взаимодействующих с полици-стином-1 - продуктом гена PKD1, в дальнейшем может открыть перспективы для генной терапии этого заболевания.
Литература
1. Вельтищев Ю.Е., Игнатова М.С. Наследственные и врожденные болезни почек и мочевыводящих путей. Наследственная патология человека. - М.: Медицина, 1992. - Т.2. - 407 с.
2. Igarashi P., Somlo S. Genetics and pathogenesis of polycystic kidney disease // J. Am. Soc. Nephrol. - 2002. - V.13. - №9. - P.2384-2398.
3. Watson T. L. Polycystic Kidney Disease. - Oxford University Press, 2006. - 560 р.
4. Xu C., Rossetti S., Jiang L. et al. Human ADPKD primary cyst epithelial cells with a novel, single codon deletion in the PKD1 gene exhibit defective ciliary polycystin localization and loss of flow-induced Ca2+ signaling // Am. J. Physiol. Renal Physiol. - 2007. - V.292. - №3. - P.F930-945.
5. Mochizuki T., Wu G., Hayashi T. et al. PKD2, a gene for polycystic kidney disease that encodes an integral membrane protein // Science. - 1996. - V.272. - №5266.
- P.1339-1342.
6. Hanaoka K., Qian F., Boletta A. et al. Co-assembly of polycystin-1 and -2 produces unique cation-permeable currents // Nature. - 2000. - V.408. - N?6815. - P.990-994.
7. Bae Y.K., Qin H., Knobel K.M. et al. General and cell-type specific mechanisms target TRPP2/PKD-2 to cilia // Development. - 2006. - V.133. - №19. - P.3859-3870.
8. Жажан П.М. Первичная ресничка как механосенсор // Сенсорные системы.
- 2008. - Т. 22. - №2. - С.99-111.
9. Pan J., Wang Q., Snell W.J. Cilium-generated signaling and cilia-related disorders // Lab. Invest. - 2005. - V.85. - №4. - P.452-463.
10. Smith L.A., Bukanov N.O., Husson H. et al. Development of polycystic kidney disease in juvenile cystic kidney mice: insights into pathogenesis, ciliary abnormalities, and common features with human disease // J. Am. Soc. Nephrol.
- 2006. - V.17. - №10. - P.2821-2831.
11. Andrews P.D., Knatko E., Moore W.J., Swedlow J.R. Mitotic mechanics: the auroras come into view // Curr. Opin. Cell Biol. - 2003. - V.15. - №6. - P.672-683.
12. Pugacheva E.N., Jablonski S.A., Hartman T.R. et al. HEFI-dependent Aurora A activation induces disassembly of the primary cilium // Cell. - 2007. - V.129. -№7. - P.1351-1363.
13. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. - 1976. - V.72. - P.248-254.
14. Soncini C., Carpinelli P., Gianellini L. et al. PHA-680632, a novel Aurora kinase inhibitor with potent antitumoral activity // Clin. Cancer Res. - 2006. - V.12. -№13. - P.4080-4089.
15. Katayama H., Brinkley W.R., Sen S. The Aurora kinases: role in cell transformation and tumorigenesis // Cancer Metastasis Rev. - 2003. - V.22. - №4. - P.451-464.
16. Meraldi P., Honda R., Nigg E.A. Aurora-A overexpression reveals tetraploidization as a major route to centrosome amplification in p53-/-cells // EMBO J. - 2002. -V.21. - №4. - P.483-492.
17. Burtey S., Riera M., Ribe E. et al. Centrosome overduplication and mitotic instability in PKD2 transgenic lines // Cell Biol. Int. - 2008. - V.32. - №10. -P.1193-1198.
18. Hughes J., Ward C.J., Peral B. et al. The polycystic kidney disease 1 (PKD1) gene encodes a novel protein with multiple cell recognition domains // Nat. Genet. -1995. - V.10. - №2. - P.151-160.
19. Carmena M., Earnshaw W.C. The cellular geography of aurora kinases // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2003. - V.4. - №11. - P.842-854.
20. Ferrari S., Marin O., Pagano M.A. et al. Aurora-A site specificity: a study with synthetic peptide substrates // Biochem. J. - 2005. - V.390. - №Pt 1. - P.293-302.
21. Nauli S. M., Kawanabe Y., Kaminski J. J. et al. Endothelial cilia are fluid shear sensors that regulate calcium signaling and nitric oxide production through polycystin-1 // Circulation. - 2008. - V.117. - №9. - P.1161-1171.
Информация об авторах
Лацис Рихард Вольдемарович, кандидат биологических наук, доцент кафедры молекулярной биологии и медицинской биотехнологии медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, 15А Телефон: (495) 414-6717 E-mail: mol-biol@cardio.ru
Големис Эрика A., профессор Фокс-Чейзовского онкологического центра Адрес: 333, Cottman Ave, Fox Chase Cancer Center, 19111, Philadelphia, PA, USA Телефон: (215) 728-3885 E-mail: Erica.Golemis@fccc.edu
