CC BY
5применение метаболической коррекции при моделировании адьювантного артрита
составили животные с экспериментально вызванным адъювантным артритом (АдАр), во 2-ю вошли животные с моделированным АдАр, при введении преднизолона, 3-ю составили животные, которые на фоне моделированного адъювантного артрита, получили метаболическую коррекцию препаратом «кардонат». В 4-ю вошли здоровые животные ин-тактной группы (ИГ).
Результаты: у животных 1-й группы с моделированным АдАр в кардиомиоцитах выявляли выраженные деструктивные изменения. Определяли множественные разрывы и нарушение целостности митохондриальных мембран, вакуолизация и фрагментация подавляющего числа митохондрий. Кристы митохондрий были укорочены, дезориентированы и фрагментированы, на них в большом числе наблюдали кристаллические высокой электронной плотности включения. В большинстве митохондрий не удавалось проследить двухкон-турность крист и мембран. При этом в матриксе подавляющего большинства митохондрий визуализировался хлопьевидный аморфный материал различной электронной плотности. Во второй группе глюкокортикоидной модели созданной на фоне введения преднизолона деструктивные изменения были выражены в гораздо меньшей степени, с сохранением явлений дезорганизации стромы миокарда и самих миокардиоцитов. Наблюдали вакуолизацию подавляющего числа митохондрий,
УДК: 618.3 - 008.6:616 - 053.1
а также дезориентацию, фрагментацию и укорочение крист митохондрий. В 3-й группе наблюдали положительные изменения в миокарде. В области интредигитаций и десмосом кардиомиоциты прочно соединены между собой. Отек миокардиаль-ной стромы не выражен, визуализируется лишь в виде незначительных очаговых просветлений. Митохондриальные мембраны и кристы сохраняли двухконтурность и направленность.
Обсуждение: обнаруженные изменения клеток и сосудов сердечной мышцы при адъювантном артрите свидетельствовали о преобладании дистрофических и деструктивных процессов, приводящих к необратимой структурной перестройке миокарда. Использование гормонального лечения при данной патологии несколько нивелировало указанные изменения. Но при этом все же выявляли признаки необратимых ультраструктурных изменений. Отмечена положительная динамика в группе с применением «кардоната», где определяли незначительные изменения кардиомиоцитов, а также обратимые процессы митохондрий и в меньшей степени сократительного аппарата клеток.
Обнаруженные морфологические изменения синцития миокарда при моделировании адъювантного артрита, а также недостаточное купирование воспалительного процесса преднизолоном выявило положительную динамику при применении метаболической терапии препаратом «кардонат».
КАРИОЛОГИЯ ЭКСФОЛИАТИВНЫХ КЛЕТОК У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ РАЗВИТИЯ ПЛОДА В РАННИЕ СРОКИ ГЕСТАЦИИ
Кучербаева Ж.А.
кыргызский научный центр репродукции человека г. Бишкек
Аннотация: В работе исследованы кариологические показатели эксфолиативных клеток, по данным микроядерного теста, у беременных с врожденными пороками развития плода в период 4-10 недель геста-ции, показывающие наличие хромосомных аберраций и цитогенетических нарушений.
Ключевые слова: беременные женщины, врожденные пороки развития, микроядра, кариологические показатели, буккальный эпителий.
Кош бойлуу аялдардын туйулдуктун есушунун жаш кезиндеги тубаса жетишпестик (кемчилдик) гестациясынын эксфолиативдик клеткаларынын кариологиясы.
Kucherbaeva Z. A.
Адамдын репродукциясынын Бишкектеги Кыргыз Илим Борбору
Кыскача мазмун: Бул иште микроядролук тесттин маалыматтарынын негизинде, кош бойлуу аялдардын тYЙYлдYктYн жаш кезиндеги тубаса кемчилдиги 4-10 жуманын аралыгындагы гестациясы, хромосомдук абер-рациялардын пайда болгонун жана цитогенетикалык бузулушту керсеткен эксфолиативдик клеткалардын кариологиялык керсеткYчтерY изилденди.
Негизги сездер: кош бойлуу аялдар, есYYHYн тубаса кемчилдиги, микроядралык, кариологиялык керсет^чтер, буккалдык эпителий.
Karyology of exfoliative cells in pregnant women with congenital anomalies of fetal development in
the early gestation term
ДЯ^ртЩИНД <ЕМЕСЯЧНЫЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ
Kucherbaeva Z.A.
Kyrghyz Scientific Center of the Person Reproduction, Bishkek The summary: In the article karyologic indicators of exfoliative cells, according to the micronuclear test, in pregnant women with congenital anomalies of fetal development at gestational age of 4-10 weeks, showing presence of chromosomal aberrations and cytogenetic disorders are investigated.
Keywords: pregnant women, congenital developmental anomalies, micronucleuses, karyologic indicators, buccal epithelium.
Реализация генетической программы, осуществляемая под влиянием многих факторов среды, в строго определенный период онтогенеза, когда в строго определенном месте начинается активация или регрессия строго определенных генов, ведущая к дифференцированию клеток и органогенезу. Врожденные пороки развития (ВПР) возникают при наличии генных мутаций, проявляющихся эмбриональным дисморфогенезом, хромосомных или геномных мутаций. Эндогенно обусловленные пороки возникают при действии тератогенных факторов на организм беременных женщин в эмбриональном периоде во время органогенеза [1].
Обнаружение клеток, имеющих в своем составе микроядра (МЯ), может позволить использовать их в качестве своеобразного маркера патологических изменений в организме, в том числе и у беременных женщин [2,3,4]. Образование МЯ свидетельствует об активации апаптоза, а также о наличии повреждения хромосом [5,6], потери части генетического материала [7].
Однако работ, посвященных изучению данных процессов у беременных с ВПР плода отсутствуют, что и обусловило необходимость настоящих исследований.
цель работы. Изучить формирование МЯ в аспекте кариологических показателей в буккаль-ных эпителиоцитах у беременных с ВПР плода в период 4-10 недель гестации.
материалы и методы исследования
В качестве объекта исследования явились 314 женщин репродуктивного возраста, из которых: 30 женщин с физиологически протекающей беременностью в период 4-10 недель гестации (контрольная группа); 284 беременных женщин с ВПР плода в период 4-10 недель гестации (клиническая группа).
Определение МЯ в буккальных эпителиоци-тах беременных женщин проводили по методу Р.Е.То1Ье|1 с соавт. [8]. МЯ идентифицировали как хроматиновые округлые тела с гладким непрерывным краем, размером не более 1/3 ядра, лежащие четко отдельно от основного ядра, не преломляющие свет, имеющие интенсивность окрашивания и рисунок хроматина, как у основного ядра, и находящиеся в одной плоскости с ядром. Кроме учета МЯ проводили регистрацию таких ядерных аномалий, как двуядерность, конденсированность хроматина, пикноз, кариорексис, протрузии, ядра с центральной круговой насечкой, ядра с перинуклеарными и ядерными вакуолями, ядра атипичной формы и клетки с апоптозными телами [9]. Частоту клеток с МЯ, протрузиями ядра, ядра атипичной формы, с
двумя ядрами, с круговой насечкой, перинуклеар-ными и ядерными вакуолями выражали в промилле (0/00). Остальные показатели выражали как число клеток, найденные сверх 1000.
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программы <^а^ка -6,0».
результаты и обсуждение
Как видно из данных таблицы 1, у беременных клинической группы, наблюдается достоверное увеличение частоты клеток с МЯ по сравнению с показателем в контрольной группе (Р<0,01). При этом частота клеток с протрузиями составила 4,6± 0,41 (Р<0,05) и соответственно величина частоты клеток с протрузиями и МЯ достоверно выше и составила 5,225±0,57 (Р<0,01). Показатель частоты с атипичной формой не достиг достоверных значений и составил 24,3± 1,21 (Р>0,05). Со стороны показателей пролиферации наблюдалось увеличение клеток с двумя ядрами (Р<0,05) и суммарной пролиферации (Р<0,05). Показатели ранней стадии деструкции ядра свидетельствовали об увеличении клеток с некрозом, а именно, наблюдалось значимое повышение (Р<0,05) клеток с перинук-леарной вакуолью и вакуолизацией ядра (Р<0,05). При этом частота клеток с конденсацией хроматина становится меньше (Р<0,05). При завершении деструкции ядра происходит увеличение клеток с кариопикнозом и апоптозными телами (Р<0,05), а частота клеток с кариолизисом существенно снижается (Р<0,01).
Основными механизмами образования МЯ являются фрагментация хромосом в результате повреждения ДНК, или хромосомами, отставшими в анафазе и не вошедшими в основное ядро [10]. Протрузии, подобно МЯ, могут быть образованы фрагментами хромосом или отставшими при нарушении веретена деления целыми хромосомами, ядерная оболочка вокруг которых соединена с оболочкой основного ядра. Оценка показателей пролиферации свидетельствует о нарушении процессов цитотомии и кариотомии. При анализе признаков ранней стадии деструкции ядра выявляется активация некротических процессов в ткани, определяемой по показателям перинуклеарной вакуоли и вакуолизацией ядра, что может быть признаком деструктивных изменений клеточных мембран и нарушение их барьерной и транспортной функции. Результаты частоты клеток с конденсацией хроматина и лизисом ядра показывают о снижении интенсивности обновления буккального эпителия у беременных при формировании пороков развития плода в ранние сроки гестации. Частота выявления апоптозных тел и пикнотичес-
кариология эксфолиативных клеток у беременных женщин с врожденными
Таблица 1 - Кариологические показатели эксфолиативных клеток у беременных женщин с ВПР плода
в период 4-10 недель гестации
Анализируемые показатели Группы женщин Уровень достоверности Р
Контрольная n=30 M ±m Клиническая N=284 M±m
Цитогенетические показатели клеток:
с МЯ 0,393±0,021 0,625±0,022 <0,01
с протрузиями 3,4±0,31 4,6±0,41 <0,05
с МЯ и протрузиями 3,83±0,36 5,225±0,57 <0,01
с ядром атипичной формы 22,6±1,85 24,3±1,21 >0,05
Показатели пролиферации клеток:
с двумя ядрами 3,12±0,29 3,85±0,24 <0,05
с круговой насечкой 4,7±0,41 4,87±0,29 >0,05
суммарная частота 6,05±0,42 8,72±0,33 <0,05
Показатели ранней дестр укции ядра:
с перинуклеарной вакуолью 30,3±2,64 36,1±2,7 <0,05
с конденсацией хроматина 225,0±13,71 172,4±11,7 <0,05
с вакуолизацией ядра 15,7±1,92 20,4±1,31 <0,05
Показатели завершения деструкции ядра:
с кариорексисом 5,4±0,71 5,7±0,4 >0,05
с кариопикнозом 12,1±1,05 16,0±0,92 <0,05
с кариолизисом 227,0±30,1 157,0±19,6 <0,01
с апоптозными телами 0,26±0,018 0,3±0,017 <0,05
ких ядер связано с нерепарируемыми или плохо репарируемыми повреждениями хромосом, такими как многочисленные разрывы ДНК, нарушение её конфигурации, сшивки между цепями, а также с неправильной сегрегацией хромосом.
Таким образом, регистрация структурно-функциональных изменений МЯ клеток представляет собой довольно информативный и вместе с тем простой в техническом отношении метод оценки влияние на организм беременной различного рода факторов. Морфологические признаки МЯ клеток дают возможность, хотя и косвенно, но при этом точно и объективно оценить целый комплекс явлений, индуцирующих их формирование. Выводы
Формирование пороков развития эмбриона и плода в ранние сроки беременности оказывает выраженное влияние на эксфолиативный эпителий ротовой полости матери, выражающееся в повышенной частоте выявления МЯ в клетках, ядерных протрузий, пролиферации клеток и клеток с некротическими и апоптозными телами, что отражает соответствие суммы цитогенетических нарушений и хромосомных аберраций.
Список литературы
1. Богнов Н.П. Клиническая генетика/Н.П.Богнов.-М.:Гэо-тар Медицина, 2001.-447с.
2. Калаев В.Н. Частота встречаемости клеток с микроядрами в плоском эпителии, полученном их соскобов с шейки матки женщин детородного возраста при различных физиологических состояниях, в норме и при воспалении/ В.Н.Калаев, А.К.Буторина, О.Л.Кудрявцева//Естествоз-нание и гуманизм.-2006.-Т.З.-№2.-с.22-23.
3. El-Zein R.A. Cytokinesis blocked micronucleus assay as a novel
biomarkerfor lung cancer risk/R.A. El-Zein, M.B.Schabath, C.J.Etzel et.al.//CancerRes-2006.-V.66.-№12.-P.6449-6456.
4. Nishikawa A.Trans-4-hydzoxy-2 nonenal, an aldehydic lipid peroxidation product lacks genotoxicity in lacl transgenic mice/A.Nishikawa, F.Fuzukawa, K.Kasohara et.al.//Cancer Lett.-2000.-V148.-№L -P.81-86.
5. Ильин О.Л. Аспекты формирования микроядер (обзор литературы)/Д.А.Ильин// Естествознание и гуманизм.-
2006.-T.3.-№3.-C.67-73.
6. Pawitan J.A.Sensitivity and Specificity of the mocronucleus test in hypotonic-swollen mononuclear leucocytes compared to the micronucleus test in binucleated lymphocytes to assess chromosomal breaks/J.A. Pawitan, I.A. Suryon//Anal.Quant. Cytol.Histol.-2006.-№3.-P. 175-180.
7. Moore F.R. An in vivo/in vitro method for assassing micronucleus and chromosome aberration induction in rat bone marrow and spleen. I.Studies with cyclophosphamide/ F.R. Moore, G.A.Urda, G.Krishna, L.C.Theiss//Mutat.Res.-1995.-V.335.-№2.-P.191-199.
8. Tolbert P.E. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development/P.E.Tolbert, C.M.Shy, J.M.Allen//Mut.res.-1992.-V.271.-P. 69-77.
9. Юрченко В.В. Использование микроядерного теста на эпителии слизистой оболочки щеки человека/В.В.Юрченко, Е.К.Уривцова, М.А.Подольская и др.//Гигиена и санита-рия.-2008.-№6.-С.53-56.
10. Сычева Л.Б. Биологическое значение, критерии определения и пределы варьирования полного спектра карио-логических показателей при оценке цитогенетического статуса человека/Л.Б.Сычева//Медицинская генетика.-
2007.-№11.-C.3-11.
Кучербаева Жанна Асанкуловна - научный сотрудник отдела научного обеспечения КНЦРЧ, Тел. 0555-92-10-48
