CC BY
27
дискуссионный Каким должен быть
удк 6 9 е е 98 578 в 321 рациональный подход к
контролю вспышки гриппа НШ1 2009?
В.Р. Галлахер, Университет штата Луизиана (г. Новый Орлеан, США)
Ключевые слова: вирус гриппа, зооантропоноз, свинья, эпидемия, эпизоотия
Сокращения: ВГ — вирус гриппа
Введение
9 апреля 2009 г. появилось официальное сообщение о том, что в г. Мехико (Мексика) началась вспышка гриппа [1]. 17 апреля заболело 2 ребенка, проживающих вблизи от мексиканской границы в шт. Калифорния [2]. Возбудителем болезни оказался новый штамм ВГ типа А, относящийся к серо-типу H1N1. Предварительный анализ, проведенный специалистами Центра контроля и профилактики болезней (CDC, США), показал, что он появился в результате обмена (реас-сортации) генами между штаммами ВГ, циркулирующими среди свиней, птиц и людей.
Возбудитель гриппа — покрытый оболочкой вирус из сем. Orthomyxoviridae, представители которого весьма склонны к генетической изменчивости. Последняя определяет 2 важнейшие молекулярно-биологические особенности ВГ [12]. Первая заключается в высокой вариабельности поверхностных антигенов, играющих ключевую роль в инфекционном процессе: мутации могут затрагивать 50 % их аминокислотного состава. Вторая особенность состоит во фрагментированности генома, состоящего из 8 самостоятельных сегментов. При смешанной инфекции различных генотипов ВГ может происходить обмен этими сегментами, в результате чего появляются гибриды с генотипом, состоящим из сегментов разных штаммов.
Менее месяца тому назад началась вспышка гриппа, вызванная новым реассортантом ВГ, названным H1N1 2009. Ее первый итог — смерть 26 чел. в г.Мехико. Около 100 подозрительных случаев зарегистрировали в США (преимущественно в штатах Калифорния, Техас и Ныо-Иорк) [3] и несколько в странах Европы. ВОЗ сообщила о повышенной опасности возникновения пандемии гриппа [6|. Данная статья — это анализ происходящего и попытка определить, каким должны быть действия в сложившейся ситуации.
Общественный резонанс
Прежде всего не стоит поддаваться панике и истерии, нагнетаемым прессой и некоторыми политиками, а спокойно оценить происходящее, основываясь лишь на имеющихся научных данных. Перед тем как приостанавливать работу школ и других учреждений, mi должны быть уверены в необходимости и адекватности таких мер. Если сегодня начать бить во все колокола, возвещая о нависшей над миром угрозе, и тратить миллионы на производство и применение противогриппозных вакцин, а завтра сообщить о том, что тревога оказалась неоправданной, то единственными результатами этого будут неоправданные экономические затраты и потеря доверия населения к службам, занимающимся охраной его здоровья. Считаю, что карантинные мероприятия, торговые ограничения и другие подобные меры едва ли будут полезны. Можно попытаться изолировать Мексику от внешнего мира (хотя маловероятно, что это удастся), но поможет ли это, если инфекция уже вышла за ее пределы?
Природа новой вспышки гриппа
Любая вспышка гриппа уникальна и развивается своим собственным путем. Поэтому нет стандартных путей борьбы с ними, и каждый раз необходим выбор особой стратегии контроля инфекции [12]. Нельзя полагаться только на теоретические постулаты и исторические сведения.
Что можно сказать о новой вспышке гриппа? Вызвавший ее вирус представляет серьезную опасность, хотя его пока обнаружили лишь у ограниченного числа людей, что указывает на отсутствие у возбудителя способности к быстрому распространению среди населения. И это несмотря на то, что первичный очаг инфекции находится в одном из самых крупных городов мира — Мехико, в котором проживают около 22 млн. чел. «Банальные» штаммы ВГ едва ли не каждую зиму вызывают в США вспышки, при которых за несколько месяцев заболевает до 200 000 чел., а умирает 36 000 [5|. При пандемиях эти показатели несоизмеримо выше. Реассортант Н INI 2009 может передаваться от человека к человеку и преодолевать государственные границы, но во всех отношениях он явно уступает пандемийным штаммам В Г.
Когда говорят о «тяжести» вспышек гриппа, то следует выделять 2 аспекта: последствия инфекции для чувствительных к нему хозяев и способность поражать определенную часть популяций последних. Часто инфекция слабовирулентных штаммов ВГ охватывает миллионы людей, но не вызывает массовых случаев тяжелой болезни и смерти. С другой стороны, еще не забыт высокопатогенный птичий грипп, при котором заболеваемость и смертность населении Юго-Восточной Азии были очень высокими. Реассортант H1N1 2009 не может похвастаться такими «успехами», однако анализ его генома показывает, что он представляет потенциальную пандемий-ную опасность. К нему наиболее восприимчивы молодые люди, что характерно для штаммов ВГ, вызывавших пандемии в прошлом. С тех пор, когда ВГ был выделен в 1930-х годах, стало аксиомой, что тяжесть эпидемий и пандемий этой инфекции зависит от относительного количества восприимчивых к инфекции людей в той или иной популяции. Последнее определяется склонностью циркулирующих штаммов ВГ менять свои поверхностные протеины — гемагглютинин (Н) и нейраминидазу (N) [11]. Чем значительнее такие изменения, тем меньше вероятность, что имеющиеся у населения антитела к ВГ могут нейтрализовать новый вариант возбудителя (т. е. тем ниже иммунитет популяции к инфекции). Небольшие изменения упомянутых вирусных белков в результате антигенного дрифта ведут к возникновению легких вспышек. Значительные антигенные изменения, называемые антигенным шифтом, становятся причинами пандемий. Последний антигенный шифт ВГ вызвал пандемию гриппа в 1968 г.
Изменения гемагглютинина
Основным компонентом ВГ, который определяет динамику эпидемий/эпизоотий, является расположенный на поверхности вириона гемагглютинин (Н). Его свойствами определяется способность вирусных частиц прикрепляться к клеткам различных видов млекопитающих. Он несет эпито-пы, индуцирующие образование у хозяина специфических
антител. Поэтому антиген Н служит основным компонентом противогриппозных вакцин, критерием эффективности которых считают способность индуцировать специфические антитела, препятствующие прикреплению вируса к клеткам.
В конце прошлого года в США изолировали штамм ВГ H1N1 2009. Специалисты Walter Reed Army Hospital (г. Вашингтон) секвениро-вали его ген Н. Применяемая в США в настоящее время противогриппозная вакцина изготавливается из штамма ВГ, имеющего идентичный аминокислотный состав (рисунок).
На рисунке для сравнения приведен состав Н-антигена штаммов A/USA/WRAMC-1154048/2008 и A/California/08/2009(H1N1). Все отличия состава их гемагглютинина обозначены буквой «X». Анализ этих данных показывает, что штамм H1N1 2009 является новым вариантом ВГ, имеющим 27,2 % отличий аминокислотного состава гемагглютинина от применяемого в настоящее время вакцинного штамма. Обратите внимание на наличие канонических сайтов N-гликозилирования этого белка (NxS/T мотив на рисунке подчеркнут), а также положение аминокислот, которые определяют специфичность антигена в 5 петлевых участках, обозначенных как сайты А...Е [10]. Основные аминокислотные изменения сосредоточены в этих участках гена Н. Один из них (сайт С) может быть блокирован новым гликозилированием (N277). Все 5 известных сайта белка уникальны, поэтому у населения планеты отсутствует популяционный иммунитет к новому штамму ВГ. Это является признаком значительного антигенного шифта, который в прошлом приводил к развитию пандемий. Однако анализ одного из участков гемагглютинина (на рисунке не показан) дает основания считать, что штамм II1N1 2009 не идентичен штаммам H1N1, вызвавшим пандемию гриппа у людей в 1918 г. (различия — 18 %) и эпизоотию гриппа свиней в штате Нью Джерси в 1976 г. (различия — 12 %). По всем аминокислотам, связанным со специфическим распознаванием клеточных рецепторов (на рисунке выделены звездочкой) 113], новый штамм ВГ идентичен циркулировавшим у населения в прошлом году штаммам ВГ H1N1. Это положительный признак, говорящий о низком уровне вирулентности агента.
Изменения нейраминидазы
На долю второго наружного протеина приходится 20...25 % поверхностных белков ВГ. Его называют нейрамини-дазой (N), поскольку он является ферментом и способен освобождать нейраминовую или сиаловую кислоты из таких соединений с углеводами как муцин. В процессе инфекции ней-раминидаза освобождает вновь образованные вирусные частицы от поверхностных рецепторов и переваривает слизистый секрет, что дает возможность вирусу распространяться по респираторному тракту и вступать в тесный контакт с поверхностью чувствительных к нему клеток. С помощью оселтамивира и занамивира можно ингибировать действие нейраминидазы.
Если популяции угрожает штамм ВГ, к гемагглютинину которого нет иммунитета, то ее может защитить иммунитет к ней-раминидазе возбудителя. Т.К. Эйкхоффу и Г. Мейклейджону [8] удалось снизить уровень инфицированности военнослужа-
DTLCIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDKHNGKLCKLRGVAPL 50 X XX X X X
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLENSHNGKLCLLKGIAPL
HLGKCNIAGWILGNPECESLSTASSWSYIVETPSSDNGTCYPGDFIDYEE 100 X X XX X ХХХХ X XXX X X
QLGNCSVAGWILGNPECELLISKESWSYIVEKPNPENGTCYPGHFADYEE
Сайт С Сайт Е
LREQLSSVSSFERFEIFPKTSSWPNHDSNKGVTAACPHAGAKSFYKNLIW 150 X ХХХХ X X X X XX X X
LREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHTVT-GVSASCSHNGESSFYRNLLW
Сайт А
LVKKGNSYPKLSKSYINDKGKEVLVLWGIHHPSTSADQQSLYQNADAYVF 200 XX XXX X X X X X ХХХХ XX ХХХХ X
LTGKNGLYPNLSKSYANNKEKEVLVLWGVHHPPNIGDQKALYHTENAYVS
Сайт В * Сайт В
VGSSRYSKKFKPEIAIRPKVRDQEGRMNYYWTLVEPGDKITFEATGNLVV 250 ХХХХХХХХХХХХ
VVSSHYSRKFTPEIAKRPKVRDQEGRINYYWTLLEPGDTIIFEANGNLIA
Сайт D ** *
PRYAFAMERNAGSGIIISDTPVHDCNTTCQTPKGAINTSLPFQNIHPITI 300 XX XX X XX XXX XXX ХХХХ
PRYAFALSRGFGSGIINSNAPMDKCDAKCQTPQGAINSSLPFQNVHPVTI
Сайт С
GKCPKYVKSTKLRLATGLRNIPSIQSR 327 XXX XX
GECPKYVRSAKLRMVTGLRNIPSIQSR
Структура антигенов Н1 штаммов A/USA/WRAMC-1 t"54048/2008(H1N1) и A/California/08/2009(H1N1)
щих ВГ подтипа H3N2 на 50 % с помощью вакцины из штамма ВГ подтипа H2N2, поскольку у обоих подтипов имеется общий антиген N. Если нейраминидаза N1 у штамма ВГ, появившегося в 2009 г., осталась такой же как у штаммов этого подтипа, циркулировавших в прошлом году, то следует ожидать, что применяемая в настоящее время в США вакцина обеспечит хотя бы частичную защиту населения. К сожалению, у штамма H1N1 2009 антиген N1 также обновлен — по аминокислотному составу он отличается от штамма A/USA/WRAMC-1154048/2008 на 18,2 %. Хотя антигенные сайты нейраминидазы ВГ изучены недостаточно полно [9], чтобы делать окончательные выводы, но при таком уровне изменения аминокислотного состава антигена N не следует ожидать, что существующая вакцина надежно защитит от штамма II INI 2009.
Выводы, которые можно сделать с учетом характера изменений антигенов штамма H1N1 2009
В целом ясно, что у штамма H1N1 2009 произошел значительный антигенный шифт поверхностных антигенов. В последний раз столь значительные изменения антигенов Н и N выявили у штамма Asian H2N2, появившегося в 1957 г. Особенностью вызванной им пандемии было то, что устойчивыми оказались люди в возрасте 60 лет, которые перенесли заражение подтипом H2N2 до 1900 г. [14]. Сейчас такого не следует ожидать, т. к. за последние 100 лет не появлялся ВГс таким же антигенным профилем как у штамма H1N1 2009.
Не стоит предавать огню ни свиней, ни Мексику
Вспышка гриппа, напугавшая нас в 2009 г., вызвана штаммом, появившемся в результате рекомбинации сегментов генома ВГ свиньи, птиц и человека. Поскольку эти генетические изменения произошли одновременно, то нельзя считать свинью источником инфекции, что ставит под сомнение возможность заражения людей штаммом H1N1 2009 через продукты убоя этого вида животных. Сейчас большим-
ство вирусологов пришло к консенсусу относительно того, что наиболее значимым естественным хозяином ВГ и важнейшим источником инфекции для людей служат мигрирующие водоплавающие птицы [15]. На этом основании ничем не оправдан массовый упреждающий убой свиней в Египте или запреты на международную торговлю свининой.
Сопоставление результатов секвенс-анализа «мексиканского» ВГ с данными BLAST [14| говорит о том, что агент наиболее близок по гемагглютинину (95%-я идентичность) штамму A/S\vine/Indiana/P12439/00 (H1N2), выделенному от свиней в штате Индиана в 2000 г., а по нейраминидазе (94%-я идентичность) ВГ, который циркулировал в Европе в 1990-х годах, — например, штамму A/S\\ine/England/195852/92 (H1N1). Штаммы ВГ, ставшие генетическими донорами виновника наших сегодняшних переживаний, могли попасть в Мексику разными путями и в разное время, а их встреча носила абсолютно случайный характер. Родиной ВГ, ставшего причиной пандемии 1918 г. («испанки»), считают США [16], но прародители возбудителя могли попасть в эту страну из весьма отдаленных от нее регионов. Поиск страны, в которой появился опасный вариант ВГ, предание там всего «огню» и ее изоляция от остального мира может быть и принесли бы пользу при ряде других опасных инфекций, но при гриппе они просто бессмысленны. Чтобы защититься от него не надо уничтожать свиней и Мексику.
То, что мы узнали об этом вирусе, имеет 2 обнадеживающих аспекта. Во-первых, у большинства известных панде-мийных штаммов ВГбыли изменены только антигены Н и N, сердцевина вирионов оставалась такой же, как у ранее циркулировавших среди населения штаммов ВГ. У реассортанта H1N1 2009 имеется много компонентов, приобретенных у штаммов ВГ подтипов H2N2 и H3N2, циркулировавших среди животных в 1957 и 1968 гг. Это снижает эффективность его репликации в организме человека и опасность широкого распространения среди населения. Во-вторых, штамм H1N1 2009 чувствителен к ингибиторам нейраминидазы. Оба обстоятельства говорят о том, что мы столкнулись не с фактом биотерроризма, а с новым природным вариантом ВГ.
Анализ событий свидетельствует о том, что возникшая в Мексике вспышка гриппа не растет в логарифмической пропорции, что характерно для пандемий. Однако не следует забывать о характерной для гриппа (даже пандемийного) сезонности. Сейчас в Северном полушарии «гриппозный» сезон подходит к концу, а в Южном полушарии он еще не начался. Поэтому не исключено, что грипп начнет распространяться уже хотя бы потому, что в ряде регионов мира наступило подходящее для этого время. Можно допустить, что события будут развиваться по такому сценарию и в Северном полушарии, но с отсрочкой до октября—ноября 2009 г.
Возможна дальнейшая эволюция вируса
Новый штамм ВГ наименее стабилен в период своего внедрения в популяцию людей, когда он подвергается интенсивным селективным воздействиям в респираторном тракте. Поскольку «гриппозный» сезон завершается в Северном полушарии, то вирус может в течение нескольких месяцев циркулировать совместно с прежними штаммами ВГ. Не исключено, что за это время он приобретет от других штаммов ВГ гены, которые позволят ему лучше адаптироваться к организму человека (быстрее размножаться в этом хозяине и распространяться среди населения). Вирус с новыми антигенами Н и N. покрывающими сердцевину пандемийных штаммов, может нанести такой урон человечеству, который будет значительно превосходить тот, который принесла «испанка» в 1918 г. Нет документальных подтверждений возможности обмена генами у штаммов ВГ в организме человека, но животные, в частности свинья [17], вполне пригодны для этого. Допускается и альтернативная возможность мутаций других генов у нового штамма ВГ, способная привести к тому же ре-
зультату даже без генетических рекомбинаций. Сейчас просто нет достаточной информации для достоверного прогноза пути дальнейшей эволюции штамма H1N1 2009.
Общий план наших действий на долгосрочный период
Предполагая, что циркуляция штамма H1N1 2009 у населения продолжится, надо создавать вакцины, содержащие его измененные антигены Н и N. С учетом фактора времени и того, что применяемые сейчас методы не позволяют ежегодно изготавливать более 500 млн. доз противогриппозных вакцин, следует рационально и контролируемо пользоваться имеющимися запасами вакцин и антивирусными препаратами. Необходимо предусмотреть риск дефицита этих средств во второй половине года, когда возрастет опасность второй волны эпидемии. Обычные меры гигиены, регулярный контроль здоровья детей и служащих в школьных и дошкольных учреждениях замедлят распространение ВГ и помогут выиграть время, которое необходимо для проведения массовой вакцинации населения и подготовке специалистов [7]. Последняя эпизоотия, вызванная подтипом H1N1 и сопровождавшаяся высокими заболеваемостью и смертностью, произошла в 1957 г., и видевшие ее врачи давно не работают.
Следует расширить исследования гриппа. Сейчас мы производим противогриппозные вакцины архаичными методами, разработанными в 1930...50-х годах. Они основаны на использовании куриных эмбрионов [ 18], причем на изготовление 1 дозы расходуют 1,2 эмбриона. Сколько же их потребуется для защиты 6,77-миллиардного населения планеты? В других областях вирусологии уже давно пользуются куль-туральными п генно-инженерными вакцинами, обладающими высокими качеством и эффективностью.
Заключение
Новый штамм Н INI 2009 значительно отличается от ранее циркулировавших среди людей штаммов ВГ этого подтипа. Аминокислотный состав его гемагтлютинина и нейраминидазы отличаются от таковых применяемого в настоящее время вакцинного штамма, что указывает на высокий пандемийный потенциал нового рекомбинанта. Однако характер развития его эпидемии дает основания надеяться, что он обладает умеренной вирулентностью для человека и медленно распространяется среди населения. Несмотря на столь обнадеживающие наблюдения, не следует исключать возможности дальнейшей эволюции данного штамма, что сделает его более опасным. Необходимо немедленно приступить к производству вакцин, способных защитить от штамма Н INI 2009, поскольку в условиях отсутствия популяционного иммунитета к данному реас-сортанту мы не сумеем остановить развитие пандемии.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Anon. Outbreak of Swine-Origin Influenza A (H1N1) Virus Infection. Mexico. March—April 2009. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2009, 58, 430.
2. Anon. Swine Influenza A (H1N1) Infection in Two Children. Southern California, March-April 2009. MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2009, 58, 400.
3. Anon, http://www.cdc.gov/swineflu.
4. Anon, http://www.who.int/csr/disease/swineflu/en/index.html.
5. Anon, http://www.cdc.gov/flu/about/disease/index.htm.
6. Anon. http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi.
7. Anon, http://www.cdc.gov/h1n1flu/mitigation.htm.
8. Eickhoff TC, Meiklejohn G: Protection against Hong Kong influenza by adjuvant vaccine containing A2-Ann Arbor-67. Bull WHO, 1969, 41, 562—563.
9. Gulati U., Hwang C.C., Venkatramani L. et al. Antibody Epitopes on the Neuraminidase of a Recent H3N2 Influenza Virus (A/Memphis/31/98). J Virol, 2002, 76, 12274—12280.
10. Gething M.J., Bye J., Skehel J., Waterfield M. Cloning and DNA sequence of double-stranded copies of haemagglutinin genes from H2 and H3 strains elucidates antigenic shift and drift in human influenza to assure that this and future threats of pandemic influenza can be met. Nature, 1980, 287, 301—306.
11. Kilbourne E.D. The severity of influenza as a reciprocal of host susceptibility. In: Ciba Foundation Study Group, No. 4. Virus virulence and pathogenicity. Boston: Little, Brown and Co., 1960, 55—77.
12. Kilbourne E.D. Influenza pandemics of the 20th century. Emerg Infect Dis, 2006, 12, 9—14.
13. Matrosovich M., Gambaryan A., Teneberg S. et al. Avian influenza A viruses differ from human viruses by recognition of sialyloigosaccharides and gangliosides and by a higher conservation of the HA receptor-binding site. Virology, 1997, 233, 224—234.
14. Schulman J.L., Kilbourne E.D. Independent variation in nature of the hemagglutinin and neuraminidase antigens of influenza virus: distinctiveness of the hemagglutinin antigen of Hong Kong-68 virus. Proc Natl Acad Sci USA., 1969, 63, 326—333.
15. Webster R.G., Bean W.J., Gorman O.T. et al. Evolution and ecology of influenza A viruses. Microbiological Reviews. 1992, 56, 152—179.
16. Taubenberger J.K., Morens D.M. 1918 influenza: the mother of all pandemics. Emerg Infect Dis, 2006, 12, 15—22.
17. Castrucci M.R., Donatelli I., Sidoli L. et al. Genetic reassortment between avian and human influenza A viruses in Italian pigs. Virology, 1993, 193, 1, 503—506.
18. Woodruff A.M., Goodpasture E.M. The susceptibility of the chorio-allantoic membrane of chick embryos to infection with the Fowl-Pox virus. Am J Pathol, 7, 209—222.
W.R. Gallaher. Towards a sane and rational approach to management of Influenza H1N1 2009. Virology J, 2009, 6:51 doi: 10.1186/1743-422X-6-51 (BMC OA).
удк 6 9 6 6 98 578 8 321 Изучение в экспериментальных условиях патогенности тайских изолятов вируса гриппа свиней для поросят-отъемышей
Д. Срета Р. Кедковид С. Туамсанг 2, П.Китикун Р.Танавонгнувех1
1 Университет Чулалонгкорн (г. Бангкок, Таиланд)
2 Национальный институт здоровья животных (г. Бангкок, Таиланд)
Ключевые слова: грипп, свинья
Сокращения: БАЖ — бронхо-апьвеолярная жидкость; ВГС — вирус гриппа свиней; дпз —дней после заражения; ОТ-ПЦР — обратнотранскриптазная полимеразная цепная реакция; ЦПД— цитопатическое действие
Введение
Грипп свиней — острое высококонтагиозное респираторное заболевание, вызываемое вирусом гриппа типа А. В настоящее время по гемагглютинину различают 16, а по нейра-минидазе — 9 вариантов этого агента. Из них превалируют 3 основных реасеортантных подтипа — H1N1, H3N2 и H1N2 [3]. Свинья играет чрезвычайно важную роль в экологии вируса гриппа А [4] — ее можно назвать «флаконом для смешивания» различных вариантов вируса гриппа. Смешанная инфекция вирусов гриппа человека, птиц и свиней служит почвой для появления новых антигенных реассортантов [22].
ВГС поражает у свиней эпителий респираторного тракта, вызывая кашель, лихорадку, сонливость и анорексию. Многочисленные хорошо отграниченные фиолетово-красные очаги делают легкие похожими на шахматную доску. При гистологическом исследовании органов дыхания отмечают разрушение эпителиальных клеток, спадение стенок бронхиол, которые с течением времени подвергаются гиперплазии и закупориваются (при интенсивном воспалении), а также легкую или умеренно тяжелую перибронхиолярную и перивас-кулярную инфильтрацию тканей респираторного тракта. Иммуногистохимическими методами вирусный антиген выявляют в эпителиальных клетках воздухоносных путей [17].
В Таиланде подтип H1N1 ВГС впервые изолировали от свиней с симптомами острого поражения органов дыхания в 1990 г. [10]. Проведенные в последнее время исследования показали, что в популяции тайских свиней широко распространен еще и подтип H3N2 [2]. В 2005 г. в провинции Сарабу-ри также обнаружили подтип I IIN2 ВГС [2].
С. Ванг и соавт. [211 сообщали о том, что гемагглютинин Н1 более резистентен к спонтанному расщеплению на субъединицы НА1 и НА2, чем антиген НЗ. Возможно, это определяет большую способность инфицировать клетки штаммов ВГС с гемагглютинином НЗ по сравнению со штаммами, обладающими антигеном HI B реакции ингибиции гемагглю-
тинации установили, что подтип H3N2 индуцирует у людей более интенсивный антительный ответ, чем подтип H1N1 116]. Кроме того, К. ван Рит и соавт. [20] показали, что у свиней, зараженных европейскими штаммами подтипа H3N2 ВГС, титр специфических сывороточных антител выше, чем при инфекции европейских штаммов подтипа H1N1. В Таиланде ранее не изучали патогенность упомянутых подтипов ВГС, что и послужило причиной проведения данной работы.
Материалы и методы
Штаммы вируса. Штаммы ВГС подтипов H1N1 (А/ swine/Thailand/HF/05) и H3N2 (A/swine/ThaiIand/S/05) изолировали от больных острым респираторным заболеванием поросят-отъемышей из одного и того же хозяйства в провинции Чонбури в 2005 г. После трех пассажей в куриных эмбрионах определили титр вирусов, который составил ЮТТЩэд/мл, и в дальнейшем хранили их при - 80 °С.
Схема эксперимента, помесных СПВ-поросят 22-дневного возраста, не имевших антител к вирусам болезни Ауески, репродуктивного и респираторного синдрома свиней, ВГС и М. hyopneumoniae, разделили на 3 группы. Животным двух опытных групп интратрахеально инокулировали по 5 мл суспензии штаммов ВГС подтипов H1N1 и H3N2 соответственно. Трем поросятам контрольной группы тем же способом ввели стерильную среду МЕМ. По одному контрольному поросенку и по два животных каждой опытной группы подвергли убою через 2,4 и 12 дн после заражения. Носовые смывы брали у животных до заражения, а затем спустя 1, 2, 3,4, 5,7,10 и 12 дпз. Взятые пробы сразу же помещали в среду МЕМ с 5 % бычьего сывороточного альбумина, 300 ЕД/мл пенициллина 300 мкг/мл стрептомицина и 1...2 мкг/мл трипсина и хранили при - 80 °С. При убое у каждого животного брали образцы крови и БАЖ для вирусологического анализа, а также пробы органов и тканей для гистологического исследования. Кроме того, делали смывы из трахеи для бактериологического исследования.
Клиническое обследование. Находившихся в опыте свиней ежедневно обследовали, регистрируя все случаи появления клинических признаков поражения органов дыхания, в т. ч. кашля, чихания, учащенного дыхания, истечений из носа и конъюнктивита. Тяжесть перечисленных симптомов оценивали в баллах (от 0 до 5) по описанной ранее методике |8|. Также ежедневно определяли ректальную температуру животных, регистрируя случаи лихорадки (> 40 °С).
