CC BY
29
Никоноров A.A., Гирина Л.В.
К ВОЗМОЖНОСТИ КОРРЕКЦИИ ХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ АПОПРОТЕИНОВ КРОВИ УЛИЦ С ДИСЛИПОПРОТЕИДЕМИЯМИ АДАПТАЦИЕЙ К ДЕЙСТВИЮ ПГГ ГОУВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Росздрава», г.Оренбург
Дислипидемии, связанные с нарушением транспорта холестерола в плазме крови, являются одним из ведущих факторов развития атеросклероза [А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева, 1995; В.З. Ланкин, М.О. Лисина и др., 2005]. Общепризнано, что интенсификация образования активных форм кислорода (АФК) и активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в составе липопротеидных частиц наблюдаются при различных видах сердечнососудистой патологии [Ю.А. Владимиров, 1997; В.З Ланкин, А.К. Тихазе, 2004]. В тоже время недостаточно данных о наличии в условиях оксидативного стресса
(ОК) свободнорадикальной модификации белковых компонентов липопротеидов (ЛП). Считается, что в состоянии ОС атаке АФК подвергаются в первую очередь не липиды, а белки, что приводит к изменению их конформации, и нарушению белок-липидных отношений, ведущих к формированию модифицированных липопротеидов (мЛП) [Титов В.Н., 1999; Е.Е. Дубинина, 1995; 2002]. Модификация ЛП происходит не только путем перекисного окисления, но и путем изменения числа связанных с апопротеинами сиаловых кислот. Вместе с тем, данных о взаимосвязи степени химической модификации апопротеинов липопротеидных частиц крови с выраженностью атерогенных дислипопротеинемий явно недостаточно. Отсутствуют сведения о путях влияния на химическую модификацию апопротеинов липопротеидных частиц крови. Не изучено воздействие влияния периодической гипобарической гипоксии на количественные и качественные характеристики апопротеинов различных классов липопротеидов крови.
В связи с этим изучение влияния периодической гипобарической гипоксии (ПГГ), прекрасно зарекомендовавшей себя в лечении и профилактике целого ряда неинфекционных заболеваний, в том числе и атерогенного генеза (В.П. Твердохлиб, Б.А. Фролов, 1989; А.Н. Тиньков, 1995), на выраженность химической модификации апопротеинов крови при атерогенных дислипопротеинемиях является актуальным.
Материалы и методы исследования
В исследовании приняли участие 45 мужчин 4045 лет. Опытную группу составили 32 человека, у которых в ходе предварительных исследований были выявлены атерогенные дислипидемии. Контрольную группу составили 10 человек без нарушения липидного обмена. Забор венозной крови с ЭДТА (1мг/мл) для проведения биохимических исследований осуществлялся в утренние часы, натощак. Все исследования проводили до и после курса ПГГ.
Уровень апопротеинов AI и В, CIII, Е (апоА1, апоВ, апоСШ, апоЕ) определен иммунно-
турбидиметрическим методом по реакции преципитации со специфической антисывороткой на биохимическом анализаторе “COBAS Integra” 400 plus (Швейцария - Германия).
Фракционное разделение липопротеидов осуществляли с помощью реакции преципитации по классической технологии, в модификации И.А. Волчегорского (2000).
Химическую модификацию липопротеидов оценивали по следующим показателям: в супернатанте, содержащем ЛВП и осадке, содержащем апоВ-липопротеиды (ЛОНП и ЛНП) определяли уровень альдегидфенилидразонов (АФГ) и
кетондинитрофенилгидразонов (КФГ). Содержание продуктов окислительной модификации белков выражали в единицах оптической плотности на 1мг белка. Степень окисления апопротеинов в составе ЛП оценивали по содержанию -SH-групп. Число
по-видимому, свидетельствует о возникновении компенсаторного механизма, связанного со снижением функциональной активности апопротеинов ЛП и, следовательно, нарушением процесса метаболизма липопротеидных частиц при данном виде патологии. Подтверждением этого положения служит дальнейшее увеличение этих апопротеинов как в опытной, так и в контрольной группе после курса ПГГ, по-видимому, в результате известной постадаптационной активации центральных и периферических стресс-лимитирующих систем. Итогом постадаптационной активации биосинтеза апопротеинов, по-видимому, стало более эффективная элиминация модифицированных ЛП из кровотока и, как следствие, снижению атерогенной ситуации.
Данные по влиянию ПГГ на интенсивность химической модификации белковых компонентов ЛП частиц представлены в таблице 2.
Показано, что у лиц опытной группы наблюдалось 1,5-кратное повышение АФГ во всех подфракциях ЛП частиц, которые являются ранними маркерами окислительной деструкции белов, что, несомненно, свидетельствует об активации свободно-радикальных процессов на фоне развития атерогенных дислипидемий. Подтверждением окислительной деструкции апопротеинов ЛВП и апоВ-содержащих ЛП служит и повышенное содержанию кетондинитро-фенилгидразонов (КФГ). Так уровень КФГ опытной группы в составе всех классов ЛП был практически в 2
Таблица 1
Показатели апоиротеинового спектра сыворотки крови у обследованных лиц до и после курса ПГГ
Показатели Опытная группа (п=44) Контрольная группа (п=12)
До курса После До курса После
апо А1, г/л 1,52 ± 0,04 1,60± 0,03 1,67± 0,1 1,65± 0,05
апо В, г/л 1,23± 0,03 1,15± 0,03 * 0,92± 0,06 0,92± 0,02
апо В / апо А1, у.е. 0,84± 0,03 0,73± 0,02 * 0,55±0,02 0,56±0,01
апо С-111, мг/дл 9,01± 0,17 10,04±0,16* 7,79± 0,67 8,99± 0,55
апо Е, мг/дл 3,40± 0,15 4,36± 0,08 * 2,20± 0,26 3,05± 0,24
* - достоверность отличия от контроля (р<0,05)
Таблица 2
Показатели химической модификации белков липопротеидных частиц сыворотки крови у обследованных
лиц до и после курса ПГГ
Контрольная группа (п=12) Опытная группа (п=44)
До курса После До После
АФГ ЛОНП + ЛНП. у.е. на 1мг б 3,33 ± 0,21 2,72 ± 0,09 4,36 ± 0,37 2,63 ± 0,01 *
ФГ ЛОНП + ЛНП, у.е. на 1мг б 0,29 ± 0,10 0,18 ± 0,12 0,56 ± 0,06 0,23 ± 0,05 *
АФГ ЛВП, у.е. на 1мг б 1,88 ± 0,17 1,39 ± 0,19 2,29 ± 0,22 1,61 ± 0,12 *
ФГ ЛВП, у.е. на 1мг б 0,24 ± 0,07 0,16 ± 0,02 0,47 ± 0,05 0,21± 0,02 *
8И-группы ЛВП, ммоль/л 0,31 ± 0,07 0,36 ± 0,16 0,28 ± 0,03 0,32 ± 0,01
8И-группы ЛНП, ммоль/л 0,10 ± 0,023 0,13 ± 0,03 0,06 ± 0,005 0,12 ± 0,02
СК ЛВП , ммоль/л 0,88 ± 0,03 0,80 ± 0,07 0,86 ± 0,08 0,97 ± 0,1
СК ЛНП, ммоль/л 0,46 ± 0,02 0,49 ± 0,05 0,40 ± 0,02 0,43 ± 0,03
СКлнп/апо В 0,63 ± 0,02 0,51 ± 0,11 0,36 ± 0,09 0,4 ± 0,04
* - достоверность отличия от контроля (р<0,05) 132
сульфгидрильных групп определяли с помощью реактива Эллмана по реакции тиол-дисульфидного обмена в щелочной среде колориметрическим методом. Расчет концентраций -8И-групп рассчитывали, используя коэффициент молярной экстинкции, равный 14000 М-1-см-1 при длине волны 412 нм.
О степени десиалирования аполипопротеинов судили по содержанию сиаловых кислот в подфракциях ЛП. Уровень сиаловых кислот определяли с помощью диагностического набора («Сиалотест», Россия). Содержание белка в ЛП определяли по методу Лоури.
Результаты и их обсуждение
В результате проведенного исследования были установлены изменения в апопротеиновом спектре у лиц с дислипопротеидемиями (табл. 1), проявляющиеся 25% повышением уровня апоВ и 10% снижением апо А1. При этом индекс атерогенности апоВ/апоА1 у лиц с атерогенными дислипидемиями превышал уровень контроля на 34,5%. Курс гипокситерапии сопровождался повышение апоА1 как в контрольной, так и в опытной группе. Важно отметить, что уровень апоВ в опытной группе, в отличие от контрольной, понизился на 7%, что привело к уменьшению индекса апоВ/апоА1 на 15%, и, следовательно, снижению вероятности атерогенеза
Отмеченный более высокий уровень апоЕ и апоСШ в опытной группе по сравнению с контролем,
раза выше значений контроля, что позволяет судить о боле выфаженном повреждении белковых молекул и нарушении их физиологических функций. О степени деструкции различных классов апопротеинов судили по содержанию 8И-групп: так в опытной группе этот показатель для апопротеинов апоВ-содержащих ЛП оказался сниженным в 2 раза по сравнению с контролем, и подтверждает мнение, что из всех классов ЛП окисление затрагивает в первую очередь ЛОНП и ЛНП (апоВ-содержащие ЛП). Таким образом, зафиксированное нами снижение сульфгидрильных групп в составе апопротеинов ЛВП опытной группы, подтверждает мнение о важной роли ЛВП в перекисной концепции атерогенеза [Павлинский С.Л., 1999].
Месячный курс ПГГ сопровождался достоверным снижение АФГ и КФГ, а также увеличением концентрации 8И-групп во всех классах ЛП опытной группы. Это, по-видимому, является как отражением ускоренного катаболизма окислительно-модифицированных ЛП, так и известного факта постадаптационной активации системы антиоксидантной защиты.
Важно отметить, что уровень сиаловых кислот ЛВП опытной группы практически не отличался от значений контроля, но повышался после курса ПГГ, по нашему мнению за счет увеличения концентрации апоСШ, главного апопротеина ЛВП, имеющего в своем составе сиаловые кислоты. У лиц опытной группы, у которых в апоВ-содержащих ЛП уровень сиаловых кислот был ниже контроля, после действия ПГГ, незначительно повышался, но отношение СК /апоВ
7 лнп
увеличивалось, что свидетельствует о восстановлении функциональных свойств апоВ-содержащих ЛП и снижении их атерогенной активности.
В целом результаты проведенного исследования позволяют сделать следующие выводы:
В основе атерогенных дислипидемий лежит интенсификации СРО, приводящая, в первую очередь, к качественным изменениям апопротеинов ЛП частиц, что приводит к снижению их функциональной активности и увеличивает их атерогенный потенциал.
Нарушение функциональной активности ЛП приводит к количественным изменениям как в составе липидного, так и апопротеинового спектра ЛП частиц, снижая эффективность их метаболизма. Наиболее ярко эта связь прослеживается для ЛНП, модифицированных продуктами окисления белков, и сниженным содержанием в них сиаловых кислот, что приводит к снижению функциональной активности апопротеина В, и как следствие к низкой скорости удаления ЛНП через апоВ/Е путь.
Под влиянием ПГГ происходит увеличение скорости метаболических процессов, за счет активации биосинтеза белков и нуклеиновых кислот, формирование, таким образом, в органах и системах целого комплекса структурных изменений, так называемого системного структурного следа [Ф.З Меерсон, 1993]. В результате этих структурных
изменений в печени активируются детоксикационные системы, увеличивается синтез апоЕ, апоСШ, возможно и апоВ/Е рецепторов, которые способствуют удалению ЛНП из кровотока, что характеризует антиатерогенный потенциал гипокситерапии.
Под действием ПГГ увеличивается скорость катаболизма химически модифицированных ЛП из кровотока, в результате уменьшается концентрация продуктов АФГ и КФГ, повышается уровень сульфгидрильных групп во всех классах ЛП частиц.
Таким образом, ПГГ может служить эффективным способом коррекции
дислипидемических расстройств, в том числе и за счет снижения уровня химически модифицированных ЛП, уменьшая тем самым их атерогенный потенциал.
